干扰LOX表达对MDA-MB-231细胞侵袭迁移影响及其机制的探讨

目的:研究干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测LOX mRNA和侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9和HIF-1α的mRNA表达,蛋白质印迹法检测LOX蛋白表达,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁移能力。结果:转染LOX-RNAi-LV后,乳腺癌MDA-MB-231细胞LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,与空白组相比,抑制率分别为89.2%和82.97%。MMP-2(F=225.271,P=0.0000)、MMP-9(F=35.373,P=0.000 01)和低氧诱导因子HIF-1α(F=341.081,P=0.0000)的mRNA表达均明显降低。细胞侵袭迁移实验显示,干扰组穿过Transwell小室滤过膜的细胞数明显少于对照组(侵袭实验F=269.557,P=0.000 5;迁移实验F=164.321,P=0.000 3)。结论:转染LOX-RNAi-LV能有效地干扰LOX在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9和HIF-1α表达有关。     

siRNA 抑制Sema4C 基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响*

目的:研究小干扰RNA（small interf ering RNA,siRNA ）抑制轴突导向蛋白分子（Semaphorin 4C,Sema4C）基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C 基因设计序列特异性的siRNA（Sema4C-siRNA ）,在脂质体介导下转染MDA-MB-231 细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Tran ?swell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT（p-AKT ）在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231 细胞株（MDA-MB-231/Si）Sema4C 蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231 相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT 表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA 转染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞可下调细胞中Sema4C 蛋白表达水平,Sema4C-SiRNA 对MDA-MB-231 细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用,这可能与p-AKT 的下调有关。      

TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

P65基因对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭的影响

目的:观察miRNA靶向沉默P65基因对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-231细胞体外黏附和侵袭的影响及其可能机制。方法:设计3对针对P65基因的特异性miRNA(P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65miRNA-3),转染MDA-MB-231细胞,Western blotting检测P65蛋白的表达,筛选沉默效果最好的miRNA进行后续实验。体外黏附实验和Transwell小室实验检测P65miRNA转染前后MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭。RT-PCR检测MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9 mRNA的表达水平,明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞中MMP-2、MMP-9的酶活性。结果:成功构建重组质粒P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65miRNA-3,前两者转染MDA-MB-231细胞后抑制P65蛋白表达80%以上。P65miRNA-1和P65miRNA-2转染对MDA-MB-231细胞的黏附无明显影响(P>0.05),但显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭(0.371±0.039、0.309±0.046 vs 0.698±0.065,P<0.05)。P65miRNA-1和P65miRNA-2转染沉默P65表达后,MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA(0.281±0.018、0.478±0.023 vs 1.056±0.072、1.128±0.059,P<0.05)和MMP-9 mRNA表达(0.193±0.013、0.371±0.035 vs 1.206±0.069、1.089±0.057,P<0.05)及其活性均显著下调。结论:miRNA靶向沉默P65的表达能抑制人TNBC MDA-MB-231细胞的体外侵袭,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

人源电压门控质子通道对乳腺癌细胞迁移与侵袭的影响

  目的  明确人源电压门控质子通道蛋白（human voltage-gated proton channel 1,Hv1）对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。   方法  检测Hv1在不同转移能力的人乳腺癌细胞系中的表达,利用小RNA干扰（siRNA）技术下调Hv1在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,通过细胞划痕和体外侵袭实验方法,观察Hv1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响并初步探讨相关分子机制。   结果  Hv1在高转移的乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达较高,Hv1基因的siRNA干扰片段能够抑制Hv1基因及蛋白的表达;细胞划痕和体外侵袭实验表明Hv1降表达的MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力较弱;明胶酶谱和免疫印迹实验证明下调Hv1基因在MDA-MB-231细胞中的表达明显抑制了MMP-2的活性。   结论  Hv1能够促进乳腺癌细胞迁移及侵袭。      

塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响

背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)由于其高侵袭和高转移特性,是目前乳腺癌中预后最差的一种亚型.大量研究表明塞来昔布(celecoxib)具有很好的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤生长、减少肿瘤血管发生,防止肿瘤的早期转移.为了进一步明确塞来昔布与TNBC细胞侵袭活性之间的关系,本实验研究塞来昔布作用下人TNBC细胞MDA-MB-231黏附、迁移及体外侵袭能力的变化,并初步探讨其可能的机制.方法:以不同浓度的塞来昔布(0、40、80、120 μmol/L)作用MDA-MB-231细胞24 h后,采用细胞基质黏附实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用细胞划痕实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞平面迁移能力的影响;采用Transwell侵袭小室实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR检测塞来昔布作用前后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况.结果:经80、120 μmol/L塞来昔布作用24 h后,MDA-MB-231细胞与基质的黏附能力分别为(50.2±7.3)%和(31.5±2.2)%,与对照组(96.8±10.9)%相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭小室实验结果显示,经80、120 μmol/L塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞趋化运动明显减少,穿过人工基底膜的细胞较对照组显著降低(P<0.05).划痕实验结果显示,经塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞平面迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05).RT-PCR结果显示,经塞来昔布作用MDA-MB-231细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05).结论:塞来昔布能显著地抑制MDA-MB-231细胞黏附、细胞体外的迁移和侵袭能力,该作用可能与抑制MMP-2和MMP-9 mRNA的表达有关.     

CKIs对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的利用CKI肽类似物抑制CDK激酶活性,以明确CKI对人乳腺癌细胞的作用,探讨其对乳腺癌细胞体外侵袭转移的影响。方法利用作用于CDK4／CDK6的CKI肽类似物p20和p21,分别干预人乳腺癌MDA-MB-231细胞株24h。然后应用细胞与纤维连结蛋白黏附实验测定肿瘤细胞黏附率,通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果人乳腺癌MDA-MB-231细胞株经CKI肽类似物p20和p21分别干预后,细胞黏附、迁移及侵袭能力明显减弱。结论 CDK4/CDK6激酶对乳腺癌侵袭转移过程具有重要的作用。CKI肽类似物可以抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移。因此CKI肽类似物可能阻抑肿瘤细胞的转移,显示此类细胞穿膜肽在恶性肿瘤治疗上的潜在作用。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA,miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4）和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究

目的 探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物（miR-34a mimic）和标记FAM（绿色荧光）的阴性对照(negative control ,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P＜0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P＜0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01),凋亡增加(P＜0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期（P＜0.01）。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。     

沉默环状RNA hsa_circ_0001785表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:探究环状RNA（circRNA）hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和细胞中的表达变化及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的相对表达水平；CCK-8和克隆形成实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞活性和克隆形成能力的影响；划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织，hsa_circ_0001785在MDA-MB-231和SK-BP-3细胞中的相对表达水平明显高于人乳腺上皮细胞MCF10A。在MDA-MB-231细胞沉默hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力明显降低，迁移距离显著减少，侵袭能力也明显下降。而在MDA-MB-231细胞中上调表达hsa_circ_0001785，MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力显著升高，迁移距离明显升高，侵袭能力也明显升高。结论:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞（MDA-MB-231和SK-BP-3）中的表达水平明显升高；沉默hsa_circ_0001785显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而上调表达hsa_circ_0001785明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

Cathepsin B反义RNA抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移

摘 要　目的：探讨人cathepsin B(CatB)反义RNA在乳腺癌细胞侵袭与迁移中的作用。方法: 构建携CatB反义RNA的重组质粒pBudCE4.1-antiCatB,采用脂质体法将重组质粒瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中CatB蛋白的表达, MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖,细胞-基质黏附实验检测反义CatB对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响,体外侵袭、迁移实验分析反义CatB表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭和迁移能力的影响。结果:成功构建pBudCE4.1-antiCatB表达载体。转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组细胞和转染空载体组细胞相比,转染组MDA-MB-231细胞的CatB蛋白表达水平明显降低[(0.96±0.02) vs(1.98±0.23),(1.84±0.08),P<0.05];转染组细胞的增殖受到明显抑制[(0.255±0.017) vs(0.458±0.033),(0.421±0.022),P<0.01];转染组细胞的黏附（基质胶或纤维黏连蛋白）能力明显下降[(0.054±0.017) vs(0.111±0.018),(0.107±0.017), P<0.01;或(0.052±0.008) vs(0.120±0.014),(0.113±0.009), P<0.01];转染组细胞的侵袭和迁移能力也明显降低[(52.80±7.76) vs(124.00±44.54),(116.80±32.87), P<0.01;(60.25±8.73) vs(132.50±12.15),(119.20±25.13), P<0.01]。结论:CatB反义RNA可抑制乳腺癌细胞体外生长、黏附、迁移和侵袭能力。     

华蟾素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学特性的影响

目的:探讨华蟾素(cinobufacini)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、细胞周期和体外侵袭的影响及其可能机制.方法:用CCK-8试剂盒测定并绘制华蟾素作用后MDA-MB-231细胞的生长曲线,FCM法分析细胞周期分布,Transwell小室检测MDA-MB-231细胞的体外侵袭能力, RT-PCR检测细胞周期素(cyclin)及p21 mRNA的表达变化.结果:华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力,其半数抑制浓度(half inhibition concentration, IC50)为 0.31 mg/mL,抑制作用随着华蟾素作用时间的延长而增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Transwell小室检测表明,华蟾素作用后细胞的侵袭能力比对照组明显下降(P<0.05);FCM分析可见,随着华蟾素浓度的增加,停滞于S期的细胞比率比对照组明显增加(P<0.000 1);华蟾素作用后,MDA-MB-231细胞cyclin A1、cyclin D1和cyclin E1 mRNA的表达水平下降, p21 mRNA的表达水平上升,但cyclin B1 mRNA的表达无明显改变.结论:华蟾素通过调控cyclin A1、cyclin D1、cyclin E1和p21的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,并影响其细胞周期的分布.     

结缔组织生长因子转染对人乳腺癌细胞系生物学行为的影响

背景与目的:结缔组织生长因子(CTGF)是CCN家族成员之一,参与体内多种生理和病理生理过程。本研究探讨CTGF对人乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建含有CTGF开放读码框的真核表达质粒,通过脂质体介导的方法将正义质粒转染MCF-7细胞,反义质粒转染MDA-MB-231细胞。观察CTGF不同表达水平与乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期分布和体外侵袭等生物学行为的关系。结果:转染正义质粒使MCF-7细胞CTGF表达上调,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,细胞发生G0G1期阻滞,体外侵袭能力下降。转染反义质粒使MDA-MB-231细胞CTGF表达下调,促进细胞增殖,减少细胞凋亡,增强细胞体外侵袭能力,但对细胞周期无影响。结论:CTGF具有抑制乳腺癌细胞生长和侵袭的功能。促进细胞凋亡是CTGF抑制乳腺癌细胞体外生长的机制之一。CTGF可能对细胞周期有一定的影响。     

miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的： 探讨miRNA-210（miR-210）在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。 方法： 收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用LipofectamineTM 2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。 结果： miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞（P<0.01）。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为（88.29±2.98）%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱（P<0.05）,被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多\[（64.23±3.12）% vs （55.53±0.96）%,P<0.01\],凋亡细胞比例也显著增加\[（31.90±3.05）% vs （15.98±0.63）%,P<0.01\],细胞的迁移\[（291.00±43.12） vs （1137.38±83.49）个,P<001\]、侵袭\[（131.63±32.01） vs （647.88±31.20）个,P<0.01\]均受到明显抑制。 结论： miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。     

5-氮杂脱氧胞苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α表达和增殖侵袭的影响

目的：检测5-氮杂脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对乳腺癌细胞MDA-MB-231雌激素受体α（estrogen receptor alpha,ERα）的表达和增殖侵袭的影响。方法：利用细胞生长曲线、MTT法及FCM法检测使用去甲基化药物5-Aza-CdR处理MDA-MB-231细胞后,对MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响。通过RT-PCR和免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对ERα阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-231ERα及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）表达的影响。通过Boyden小室侵袭实验检测该细胞的浸润能力。结果：5-Aza-CdR能使MDA-MB-231细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期。5-Aza-CdR能部分恢复ERα阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的ERα表达,并能使MDA-MB-231细胞中MMP-2基因表达下降,细胞的侵袭能力降低。结论：5-Aza-CdR可有效抑制乳腺癌细胞生长并导致细胞周期的阻滞,明显降低乳腺癌细胞的侵袭能力。利用5-Aza-CdR可部分恢复ERα的表达及降低MMP-2的表达,这可能是其引起乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为改变的机制之一。     

外泌体介导的Let-7a 通过下调MYC表达抑制三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨外泌体(EXO)传输Let-7a 调控MYC基因在三阴性乳腺癌（TNBC）细胞恶性生物学行为中的作用及其机制。方法：TNBC细胞MDA-MB-231 培养完成后,qPCR实验检测TNBC组织和细胞中MYC与Let-7a mRNA的表达水平,WB实验检测MYC与Let-7a 蛋白的表达水平。携Let-7a 重组慢病毒和敲除MYC的Crisper/Cas-9 系统分别转染MDA-MB-231 细胞,MTT、Transwell、划痕愈合实验检测MDA-MB-231 细胞增殖、侵袭和迁移能力。荧光素酶活性实验验证MYC和Let-7a 的作用靶点。分别在野生型和过表达Let-7a 的MDA-MB-231 细胞中分离EXO,并以透射电镜和WB实验鉴定。qPCR、WB、MTT、Transwell等实验检测两种EXO分别和MDA-MB-231 细胞共孵育后Let-7a 通过EXO影响MDA-MB-231 细胞的生物学功能。结果：Let-7a 与MYC在TNBC组织和细胞系中表达呈负相关（P<0.05）;MYC促进MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭,Let-7a 可以抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭（均P<0.01）。Let-7a 通过作用于MYC基因的3''UTR 使其沉默,从而减少MYC蛋白的表达（P＜0.05）。Let-7a 由EXO包裹运输至肿瘤细胞,进而抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭能力（P<0.05）。结论：EXO介导的Let-7a通过作用于MYC基因3’UTR区使得MYC基因沉默,从而抑制MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移与侵袭。     

骨桥蛋白下调对乳腺癌细胞生物学行为及MMP-2表达的影响

目的:研究下调骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:采用重组的OPN mRNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞,建立稳定转染细胞株。RT-PCR和Western印迹法检测细胞中OPN和MMP-2的表达,MTT法、流式细胞仪检测和软琼脂生长实验观察OPN下调对细胞生长、细胞周期分布和瘤细胞恶性表型的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中MMP-2的分泌水平。结果:与MDA-MB-231细胞相比,建立的转染细胞株M-OPNS1和M-OPNS2细胞的OPN mRNA及其蛋白表达均显著下调,细胞生长受到抑制,在细胞周期上表现为S期阻滞;OPN下调的细胞在软琼脂上的生长能力明显下降,MMP-2表达也明显降低。结论:RNA干扰介导的OPN下调能抑制MDA-MB-231细胞增殖、下调细胞恶性程度和MMP-2的表达,这可能为将来乳腺癌治疗提供新的方法。     

MRP-1/CD9与高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性行为相关性的体外研究

目的:观察MRP-1/CD9对高转移人乳腺癌细胞系MDA-MB-231体外增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其作用机制。方法:应用MRP-1/CD9特异性扩增引物,借助RT-PCR获得MRP-1/CD9全长cDNA片段,正向插入pcDNA3.1表达载体中,并将重组质粒导入MDA-MB-231细胞中,G418稳定筛选;应用CFSE-流式细胞仪检测,单层伤口愈合实验,软琼脂克隆形成实验等方法观察了MDA-MB-231细胞转染前后,细胞体外增殖及侵袭能力等指标的变化。Western blot检测AKT、p-AKT和SRC在转染前后的细胞中的表达变化。结果:成功构建全长MRP-1/CD9真核表达载体,将其转染入MDA-MB-231细胞后获得稳定表达MRP-1/CD9的MDA-MB-231克隆株(MDA-MB-231/CD9)。与空质粒转染后的MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/CD9细胞运动能力明显减弱,侵袭能力降低;p-AKT和SRC在MDA-MB-231/CD9细胞中表达明显降低。结论:MRP-1/CD9对细胞的运动和侵袭有抑制作用,这种作用与p-AKT和SRC的下调引起E-cadherin介导的粘附增强有关。     

长链非编码RNA RAD51-AS1通过ERK信号通路对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨RAD51反义RNA 1(RAD51-AS1)通过抑制细胞外信号调节激酶(ERK)信号调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的潜在机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测55对乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织以及乳腺癌细胞(BT549、MCF7、SK-BR-3、BT474、MDA-MB-231)和正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中RAD51-AS1的表达情况。培养MDA-MB-231细胞并分为NC组(转染pcDNA3.1)、RAD51-AS1组(转染pcDNA3.1-RAD51-AS1以过表达RAD51-AS1)和RAD51-AS1+ERK激动剂组(同时转染pcDNA3.1-RAD51-AS1和ERK激动剂以过表达RAD51-AS1并激活ERK信号)。通过CCK-8法、划痕实验和Transwell实验分别评估细胞的增殖、迁移和侵袭能力。利用qPCR和Western blot检测细胞中ERK、p-ERK和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。结果 乳腺癌组织的RAD51-AS1表达量低于癌旁组织(0.419±0.039 vs. 1.000±0.063,P<...