青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

青蒿素诱导非小细胞肺癌细胞凋亡及其可能的机制

目的：研究青蒿素（Artemisinin）对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer cell,NSCLC）细胞（ASTC-a-1和A549细胞）凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：CCK-8法检测0~150 μg/ml的青蒿素处理24 h和100 μg/ml青蒿素处理0、6、12、24、48 h对ASTC-a-1和A549细胞活性的影响;激光共聚焦显微镜观察1 μmol/L STS、100 μg/ml青蒿素单独或联合5 mmol/L 活性氧簇（reactive oxygen species,ROS)清除剂NAC（N-乙酰半胱氨酸）处理细胞24 h对细胞核形态的影响,并用流式细胞术检测青蒿素单独或联合NAC对细胞凋亡的影响;通过RNA干扰技术沉默Bax和Bak基因后,观察青蒿素对细胞活性的影响。结果：青蒿素能够以浓度和时间依赖的方式抑制ASTC-a-1和A549细胞的活性,IC50值约为100 μg/ml;经NAC预处理后,青蒿素导致的细胞活性下降程度明显低于未经预处理的细胞,差异有统计学意义（均P<0.01）。STS、青蒿素单独或联合NAC均能引起ASTC-a-1和A549细胞核固缩及细胞凋亡。经NAC预处理后,青蒿素诱导的ASTC-a-1和A549细胞凋亡率分别为（20.4±2.1）%和（17.9±3.8）%,明显低于STS组\[（48.2±2.6）%,（39.8±4.9）%\]和细胞未经预处理组\[（59.6±3.4）%,（50.7±3.8）%\]青蒿素引起的凋亡率（均P<0.01）。青蒿素只能引起Bak沉默细胞活性的上升（P<0.01）,而对Bax沉默细胞活性没有明显影响（P>0.05）。结论：青蒿素能诱导两种非小细胞肺癌细胞（ASTC-a-1和A549细胞）ROS介导的细胞凋亡,促凋亡因子Bak而不是Bax参与了凋亡过程。     

细胞凋亡与乳腺癌

细胞凋亡与乳腺癌吴炅综述邵志敏沈镇宙审校（上海医科大学附属肿瘤医院，上海２０００３２）１３７一、概述细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），最早由Ｋｅｒ等［１］根据形态表现而命名的。它是细胞死亡方式之一，具有特殊形态改变的程序性死亡方式［２］。编程性细胞死亡...     

青蒿素类药物抗肿瘤机制及特点

青蒿素（artemisinin）及其衍生物是一类抗疟药。研究表明，青蒿素还可通过抑制细胞增殖，诱导肿瘤细胞、血管内皮细胞凋亡以及产生自由基等发挥抗肿瘤作用。其抗肿瘤作用还与亚铁离子（Fe^2＋）的参与及青蒿素类药物的构象有关，并能克服肿瘤细胞的多药耐药。     

二氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用

目的 研究二氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法 用MTT法检测DHA对SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪（FCM）测其凋亡率,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax的表达。结果 双氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制效应,呈明显的时间-剂量依赖性。DHA处理SKOV3细胞后,24、28、72 h的IC50值分别为117、35.677、23.382 μmol/L。二氢青蒿素可以抑制SKOV3细胞增殖,促进其凋亡,下调Bcl-2基因的表达,增加Bax基因的表达,并有时间、浓度依赖性。结论 二氢青蒿素对人卵巢癌SKOV3细胞有体外抑制作用, 可能通过下调Bcl-2、增加Bax基因的表达来促进细胞的凋亡。     

Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡分子机制的实验研究

目的：观察Ｒａｊｉ细胞抵抗职霉素诱导细胞凋亡的分子机制，从细胞凋亡的角度探讨肿瘤细胞耐药机制。方法：ＭＴＴ方法测定阿霉素和肽素诱导的细胞毒实验，碘化丙啶染色ＦＡＣＳ和ＤＮＡ降解断裂法分析阿霉素诱导的细胞凋亡，ＦＡＣＳ分析Ｒａｊｉ细胞ｂｃｌ－２的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔ观察Ｒａｊｉ细胞ｐ５３、ｂａｘ分子的表达，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＤＲ１、ＭＲＰ和ＧＳＴπ的表达水平。结果：Ｒａｊｉ细胞对阿霉素和肽     

青蒿素类药物抗肿瘤机制及特点

青蒿素(artemisinin)及其衍生物是一类抗疟药。研究表明,青蒿素还可通过抑制细胞增殖,诱导肿瘤细胞、血管内皮细胞凋亡以及产生自由基等发挥抗肿瘤作用。其抗肿瘤作用还与亚铁离子(Fe2+)的参与及青蒿素类药物的构象有关,并能克服肿瘤细胞的多药耐药。     

Apogossypolone抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导细胞凋亡

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)对人乳腺癌细胞系MCF-7体外的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法:采用MTT法和平板克隆形成实验检测ApoG2作用于MCF-7细胞后,对其体外增殖和细胞克隆形成能力的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察ApoG2(20μmol/L)作用48 h后,细胞凋亡的形态学变化;FCM检测ApoG2作用于MCF-7细胞后的细胞凋亡率以及细胞周期的变化.结果:ApoG2药物在浓度为5μmol/L、作用14 d后就能对MCF-7细胞增殖起到明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;平板克隆实验表明,经不同浓度(5、10和20 μmol/L)ApoG2作用14 d后,对MCF-7细胞克隆形成能力呈现明显的抑制作用,且同样呈剂量和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色结果显示,ApoG2与MCF-7细胞共培养72 h后,细胞呈现明显的核固缩和碎裂、染色质凝集和凋亡小体形成等细胞凋亡现象.FCM检测结果显示,20 μmol/LApoG2作用72 h后,细胞凋亡率较对照组升高,而且S期和G2/M期细胞比例较对照组升高(P＜0.05).结论:ApoG2能够抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和克隆形成,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡.     

miR-15a诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用机制

目的 探讨miR-15a在诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 采用定量聚合酶链反应检测人乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7中miR-15a的表达水平.采用软件预测miR-15a的靶点,并通过荧光素酶报告基因系统验证.将miR-15a经脂质体法转染MCF-7细胞,采用Western blot法检测Bcl-2蛋白的表达,并采用流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 miR-15a在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达明显低于乳腺上皮细胞株MCF-10A (0.253∶1,P＜0.0001).miR-15a可显著抑制抗凋亡基因Bcl-2 3′-UTR荧光素酶报告基因的表达(P＜0.05).与未转染组(对照组)相比,miR-15a转染组MCF-7细胞中Bcl-2的表达水平显著下降,凋亡明显增加(P＜0.05).结论 miR-15a 作为一个潜在的抑癌基因,可通过靶向于Bcl-2诱导乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡,其可为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点和理论依据.     

乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受的分子机制

0引言 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用.1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员,这个成员就是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),由于TRAIL具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡能力而对大部分正常细胞毒性非常低,因而使用TRAIL进行肿瘤治疗引起广泛的关注.     

SR140333 counteracts NK-1 mediated cell proliferation in human breast cancer cell line T47D

Background

It has been demonstrated that certain NK-1 antagonists could reduce proliferation of several cancer cell lines, however, it is unknown whether SR140333 exerts proliferation inhibition in breast cancer cell line.

Methods

Immunohistochemical staining was carried out to investigate the immunolocation of NK-1 in breast cancer tissues and T47D cell line, thereafter, various concentrations of [Sar9, Met(O2)11]substance P and SR140333 were applied alone or combined. MTT assay was applied to detect cytoactivation and coulter counter was to detect growth curve. The Hoechst33258 staining was performed to detect apoptosis.

Results

We found that breast cancer and T47D cells bear positive expression of NK-1. SR140333 inhibited cell growth in a dose dependent manner. Furthermore, SR140333 could counteract [Sar9, Met(O2)11]substance P induced proliferation. Hoechst33258 staining revealed the presence of apoptosis after SR140333 treatment.

Conclusions

Our study demonstrated SR140333 exert proliferation inhibition in breast cancer cell line T47D and indicates NK-1 play a central role in the substance P related cell proliferation in breast cancer.     

MST1 基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨 MST1 ( mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响.方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western 印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48 h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入5-溴-2'脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入顺铂,作用14 h后通过Annexin Ⅴ检测其对细胞凋亡的影响.结果:成功构建 pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后 MCF 7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高.结论:在乳腺癌细胞MCF 7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡.     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究褐藻糖胶（fucoidan）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法：应用MTT法检测细胞的增殖；Hoechst33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡；RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞中bcl-2和bax的mRNA及其蛋白的表达。结果：不同浓度的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P〈0．01），并随其浓度增加，抑制率逐渐增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下。bcl-2基因的mRNA和蛋白表达减少，bax基因的mRNA和蛋白表达增加，bcl-2／bax比值下降（P〈0．05）。结论：褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制可能与下调bcl-2和上调bax基因的表达有关。     

汉防已甲素对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖抑制和诱导凋亡的机制研究

目的　探讨汉防已甲素（Ｔｅｔ）对人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９增殖和凋亡的影响。方法　将人食管癌细胞株Ｅｃａ-１０９设不同浓度Ｔｅｔ处理组,并设立空白对照组。采用ＭＴＴ法观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞体外生长的抑制作用;采用透射电镜、流式细胞术观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ １０９细胞凋亡的影响;采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、ＲＴ-ＰＣＲ观察Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞凋亡相关蛋白和ｍＲＮＡ表达的影响。结果　Ｔｅｔ对Ｅｃａ-１０９细胞的抑制作用呈时间 剂量依赖性（Ｐ＜０.０５）,Ｔｅｔ干预４８、７２ｈＥｃａ-１０９细胞的ＩＣ５０分别为（２０.８８６±０.２１５）μｍｏｌ／Ｌ和（１４.３５２±０.１０２）μｍｏｌ／Ｌ。３０μｍｏｌ／ＬＴｅｔ处理细胞４８ｈ后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成。分别以２０、３０、４０μｍｏｌ／Ｌ的Ｔｅｔ干预Ｅｃａ-１０９细胞４８ｈ后,流式细胞术显示早期凋亡率依次为０.１２％、０.３４％和０.３１％,中晚期凋亡率依次为４.０２％、７.４３％和７７.４２％;ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ显示,Ｂｃｌ-２蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度的增加而逐渐下调（Ｐ＜０.０５）,Ｂａｘ蛋白和ｍＲＮＡ表达均随Ｔｅｔ浓度增加而逐渐上调（Ｐ＜０.０５）,而ｐ５３蛋白水平在处理前后无明显变化。结论　Ｔｅｔ可以抑制食管癌Ｅｃａ-１０９细胞生长,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Ｂｃｌ-２表达,上调Ｂａｘ表达有关。     

Thymidine phosphorylase is regulated by tamoxifen in T47D breast cancer cell line

BACKGROUND: Thymidine phosphorylase (TP) has diverse functions within cells, including increasing the sensitivity of cancer cells to cytotoxic drugs including 5-fluorouracil (5-FU) and methotrexate. However, the regulators of TP still remains largely unknown. METHOD: In this study, we examined whether tamoxifen has specific effects on TP expression in the T47D breast cancer cell line. We studied the TP expression in the T47D cell line before and after tamoxifen treatment using Western blot analysis and ELISA. RESULTS: We found that TP expression is significantly up-regulated in tamoxifen-treated cells compared with control. CONCLUSIONS: Our findings suggest that tamoxifen may increase chemotherapy sensitivity through TP up-regulation for treatment regimens including doxifluridine, capecitabine, and/or methotrexate.     

手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法：用不同浓度的手霉素（10、20、40、80、120txmol／L）处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果：不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol／L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4．520％±1．035％、14．490％±1．707％、28．883％±4．299％、35．107％±2．276％、47．940％±8．126％,与对照组凋亡率（1．370％±0．028％）相比,差异均具有统计学意义（p均〈0．05）;且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2／M期细胞显著增多。结论：手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。     

Effects of manumycin on proliferation and apoptosis of human esophageal carcinoma cell line Eca109

目的:探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制.方法:用不同浓度的手霉素(10、20、40、80、120μmol/L)处理Eca109细胞24、48和72 h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响.结果:不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol/L的手霉素作用Eca109细胞48 h后的细胞凋亡率分别为4.520％±1.035％、14.490％±1.707％、28.883％±4.299％、35.107％±2.276％、47.940％±8.126％,与对照组凋亡率(1.370％±0.028％)相比,差异均具有统计学意义(P均＜0.05);且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2/M期细胞显著增多.结论:手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径.     

Progestin regulation of alkaline phosphatase in the human breast cancer cell line T47D

In T47D breast cancer cell line, progestin (R5020) induces de novo synthesis of an alkaline phosphatase enzyme. Based on inhibitor profiles and antigenic specificity, it is apparent that this enzyme belongs to the class of membrane-associated tissue-unspecific alkaline phosphatases. Enzyme induction was uniquely specific to progestins and not altered by other steroid hormones or synthetic analogues. The progestin induction of the tissue-unspecific alkaline phosphatase was time and dose dependent. The protein synthesis inhibitor cycloheximide blocks the enzyme synthesis and tunicamycin blocks the enzyme activity, showing that the induction was new synthesis of protein in its complete glycosylated form and not activation of a preexisting enzyme. To our knowledge this is the first report of progesterone-induced expression of a tissue-unspecific alkaline phosphatase gene of such magnitude (about 30- to 100-fold) in a progesterone-responsive tissue.