FR/CL体外干预人胃癌细胞株SGC-7901及人肺癌细胞株A549生长

目的 研究金荞麦提取物FR联合刺梨提取物CL对人胃癌细胞株SGC-7901及人肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测FR、CL对SGC-7901、A549细胞的增殖抑制率;流式细胞术分析早期凋亡细胞比; RT-PCR、Western blot分析Ki-67及Bax、Bcl-2表达的变化.结果 FR、CL单药均可明显抑制SGC-7901、A549细胞的生长,呈剂量依赖性;两药IC_(30) 浓度联合呈增效效应; IC_(30) 浓度FR、CL单药和1/2 IC_(30) (FR)+1/2 IC_(30) (CL)联合对SGC-7901细胞的抑制率分别为(33.89±0.22)%、(30.86±1.17)%和(44.25±0.50)%,对A549细胞的抑制率分别为(30.91±1.72)%、(29.07±1.41)%和(43.62±2.15)%.流式细胞术结果表明,对照组、FR组、CL组、联合组细胞早期凋亡比例依次增加,两单药组及联合组与对照组之间、联合组分别与两单药组之间的差异均具统计学意义(P<0.05);与单药组比较,联合组Ki-67、Bcl-2 mRNA/蛋白表达率有显著降低,而Bax mRNA/蛋白表达显著增高.结论 FR、CL均可抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞、人肺癌细胞株A549的增殖和诱导其凋亡,且联合应用存在增效效应.     

恩度联合化疗治疗恶性肿瘤20例报告

探讨重组人血管内皮抑素注射液(恩度,YH-16)联合化疗治疗多种晚期恶性肿瘤的疗效及不良反应。20例经病理或细胞学检查确诊的恶性肿瘤患者,采用恩度联合化疗治疗,将恩度15mg加入NS250mL或500mL中匀速静脉滴入,d1～d14,同时联合化疗。每21d为1个周期。20例患者中,仅1例肺癌患者因经济受限仅完成1个周期的联合治疗,其余19例均完成2～6个周期的治疗,周期数为48个,平均2.5个。19例可评价患者中,PR3例,SD14例,PD2例,RR15.8%(3/19),疾病控制率89.5%(17/19)。生活质量改善13例,稳定3例,下降3例。G3/4毒副反应,主要有3例骨髓抑制,恶心呕吐及腹泻各1例。初步研究结果提示,恩度与化疗联合可以显著提高患者生活质量,并可提高疗效,毒副反应没有增加。     

冰茶栓含药血清诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

[目的]观察冰茶栓含药血清对体外培养的胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用。[方法]通过血清药理学的方法制备冰茶栓含药血清。将冰茶栓含药血清与体外培养的人胃癌SGC-7901细胞共同培养48h后,应用光学显微镜观察细胞形态的变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的梯状条带;用流式细胞术检测凋亡峰(亚G1峰)来分析研究冰茶栓含药血清诱导的细胞凋亡。[结果]经过冰茶栓含药血清作用后,SGC-7901细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳有特异性梯状条带出现;流式细胞仪检测出现凋亡峰,并显示凋亡率为27.44%,而空白血清组凋亡率仅为4.71%。[结论]冰茶栓含药血清可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡,为冰茶栓临床抗胃癌治疗提供实验依据。     

姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制

 目的 探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用及其相关机制。方法 以不同浓度的姜黄素作用于胃癌SGC-7901细胞，利用倒置相差显微镜观察细胞生长形态变化，通过MTT检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot 检测胃癌细胞中Fas及survivin的表达情况。结果 姜黄素能显著抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长并呈量-效和时-效关系，流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰，细胞凋亡率增加，Western blot结果提示经姜黄素作用后Fas表达率上升，survivin表达率下降。结论 姜黄素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡，姜黄素可能通过上调Fas及下调survivin的表达而诱导凋亡。     

胃癌细胞原代培养药敏检测的临床应用研究

目的 :探讨胃癌对不同化疗药物的敏感性差异 ,从而对围手术期辅助化疗及晚期患者化疗起指导作用。方法 :应用MTT比色法测定了 15 1例体外原代胃癌细胞对化疗药物的敏感性。结果 :无论是单药组间比较 ,还是联合药物组间比较 ,其敏感性的差异均有极显著意义 ,P <0 0 1;其中 ,单药以羟基喜树碱 (HCPT)和丝裂霉素 (MMC)的敏感性为好 ,其敏感率分别为 6 2 91%、5 2 98% ;联合药物以 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)加HCPT和 5 FU加MMC的敏感性为好 ,其敏感率分别为 76 82 %、6 0 93%。各单药分别与其对应的联合药物比较 ,除MMC与 5 FU加MMC、多柔比星 (ADM )与 5 FU加ADM及斑蝥酸钠(奇宁 )与 5 FU加奇宁的敏感性差异无显著意义外P >0 0 5 ,其余药物的敏感性差异均有显著意义 ,P<0 0 5。结论 :体外肿瘤细胞药敏试验对临床肿瘤化疗用药有很强的预见性 ,且能发现耐药病例 ;胃癌对联合药物的敏感性明显优于单药     

二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性

目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;倒置光学显微镜下观察细胞的形态;FCM法检测细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况;RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用;细胞形态观察发现死细胞明显增多;细胞凋亡率显著增加;细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍;细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.     

多西紫杉醇对人胃癌细胞BGC-823 hTERT启动子转录活性及其调控基因c-myc表达的研究

目的:探讨多西紫杉醇对人胃癌细胞BGC-823端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达、hTERT启动子转录活性及其转录调控基因c-myc蛋白表达的影响。方法:加药多西紫杉醇24、48和72h后收集细胞,MTT比色法测定IC50值;分别采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性和RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达;Luciferase法检测hTERT启动子活性;Western blot技术检测c-myc蛋白的表达。结果:多西紫杉醇可以明显抑制胃癌细胞BGC-823的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,呈一定的时效、量效关系;进一步研究发现,多西紫杉醇对胃癌细胞端粒酶活性的影响抑制了hTERT启动子转录活性的表达,同时对启动子转录活性调控蛋白c-myc表达的研究也证实了这一点。结论:hTERT mRNA的表达与胃癌的发生和演进有关,癌基因c-myc可能通过参与hTERT启动子转录活性的表达调控而调控hTERT mRNA表达。多西紫杉醇抑制胃癌细胞BGC-823的增殖可能与其抑制BGC-823细胞hTERT启动子转录活性和c-myc蛋白表达相关。     

青蒿素对人胃癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制的研究

目的:研究青蒿素对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及其机制.方法:建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为实验组即青蒿素低剂量组、青蒿素中剂量组和青蒿素高剂量组、空白对照生理盐水组及阳性对照5-FU组,每组5只,分剐灌胃连续给药10 d,停药后24 h处死裸鼠,称取瘤质量.计算抑瘤率,流式细胞仪检测凋亡率,酶标仪检测Caspase-3的活性变化.结果:高、中、低剂量青蒿素组及5一FU组抑瘤率分别为 71.4%、47.7%、31.3%及45.2%,与生理盐水组比较差异均有统计学意义P<0.05,青蒿素各实验组抑瘤率与5-FU组相比,高、中剂量组明显比5-FU组强,差异有统计学意义,P<0.05.高、中、低剂量青蒿素组及5-FU组流式细胞仪检测时均出现明显的凋亡分布,凋亡率分别为78.0%、65.9%、45.9%和57.9%,酶标仪检测Caspase-3活性发现随着青蒿素剂量的增加Caspase-3活性逐渐增加,其中高剂量青蒿素活性增加最显著.结论:青蒿素对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,在体内可通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

二甲胂酸诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的研究

目的探讨二甲胂酸（DMAA）诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡作用。方法用不同浓度的二甲胂酸与人的胃癌细胞SGC-7901共育一段时间后观察细胞的存活、形态学改变及生物学变化。结果其中以0．5～5．0mmol／L浓度的DMAA诱导其凋亡的作用最明显。主要形态学表现为细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳结果上则显示明显的梯形凋亡条带。而当DMAA浓度≥10mmol／L时细胞核和细胞质中的荧光减弱，细胞呈坏死趋势；同时，MTT结果显示随着DMAA浓度的升高，细胞的活性明显降低。结论DMAA在低浓度时能有效诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡，而高浓度时主要导致其坏死。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞株杀伤作用的实验研究

目的探讨氧化苦参碱（OM）对于人胃癌SGC-7901细胞株的杀伤作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测OM对人胃癌SGC-7901细胞株的杀伤作用。结果证实OM在浓度〉2mg／mL时对人胃癌SGC-7901细胞株具有杀伤作用,而当浓度〈1mg／mL则无明显的细胞毒性作用。结论OM对人胃癌SGC-7901细胞株具有剂量依赖性杀伤作用。     

siRNA靶向沉默hyrdC基因对胃癌细胞SGC-7901生长作用的研究

目的:观察RNA干扰靶向沉默hyrdC基因对胃癌SGC-7901细胞生长的影响.方法:将已成功构建的携带hyrdC基因以及沉默hyrdC基因的重组腺病毒Ad-hyrdC、Ad-shyrdC分别转染胃癌SGC-7901细胞,台盼蓝细胞计数和MTT法观察各组胃癌细胞生长情况,将胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型观察各组胃癌瘤体的生长情况.结果:Ad-shyrdC组细胞生长明显慢于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,差异有统计学意义,P=0.02;Ad-shyrdC组细胞的MTT值明显低于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,P=0.03;Ad-shyrdC组胃癌瘤体生长率较Ad-hyrdC、Ad-null组以及正常对照组明显减慢,P=0.02.结论:hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而沉默hyrdC基因可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.     

Effect of hexamethylene bisacetamide on human gastric cancer cell line SGC-7901

After the human gastric cancer cells SGC-7901 were cultured with 5 mM hexamethylene bisacetamide (HMBA) for 120 hr, cell growth was inhibited. The doubling time increased from 48 hr in untreated cells to 99.6 hr in HMBA-treated cells. The maximal increase in growth was 2.4-fold as compared to 6.4-fold in the untreated control. 3H-thymidine incorporation was inhibited by HMBA and the colony formation rate was reduced. There was concomitant decrease in carcino-embryonic antigen and beta-2 microglobulin as determined by radioimmuno-assay. Lactic dehydrogenase (LDH) and its isoenzyme assay revealed a marked increase in H-type LDH but the total enzyme activity was reduced. These results indicate that HMBA inhibits proliferation of SGC-7901 cells in vitro.     

HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭

目的：探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法：构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果：成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论：RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。     

白藜芦醇对人胃癌SGC7901细胞的抑制及其可能的机制

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人胃癌SGC7901细胞的抑制及其可能的作用机制.方法:以Res(10、20、40 μg/ml)作用人胃癌SGC7901细胞,同时设溶剂二甲亚砜(DMSO)和培养液作用为对照组;采用MTT法检测Res对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制情况,相差显微镜观察细胞形态变化,比色法检测Res对SGC7901细胞Caspase-3活性的影响,流式细胞术检测Res对SGC7901细胞周期的影响.结果:Res对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且有剂量和时间依赖性,最大抑制率达(53.39±5.32)%;Res作用于SGC7901细胞后可见悬浮细胞增多,细胞胞体缩小、变圆、碎裂,细胞内出现颗粒样物质,在40 μg/ml作用48 h变化最明显;Res能明显上调SGC7901细胞Caspase-3活性,这种作用呈时间与浓度依赖性;流式细胞术发现,Res通过阻滞SGC7901于S期而抑制细胞分裂.结论:Res明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,其机制可能是与激活Caspase-3从而诱导细胞凋亡、以及影响肿瘤细胞周期有关.     

马钱子碱对SGC-7901裸鼠移植瘤模型抑瘤作用的研究

目的:研究马钱子碱(brucine)对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤模型的抗肿瘤作用.方法:选取BALB/cnu裸小鼠,建立人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤模型.以不同剂量马钱子碱(1、2和4 mg/kg)作用于模型动物,通过观察肿瘤体积和质量的变化来研究马钱子的抗肿瘤作用.结果:在实验终点,马钱子碱各剂量组(1、2和4 mg/kg)的平均体质量均高于生理盐水组,差异有统计学意义,P值分别为0.024 6、0.041 8和0.036 2.马钱子碱2和4mg/kg剂量组肿瘤体积与生理盐水组相比差异均有统计学毒义(P=0.048 6;P=0.012 1),抑瘤率(肿瘤体积)分别为33.8％和49.8％.马钱子碱2和4 mg/kg剂量组肿瘤质量与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P=0.013 2;P=0.011 3),抑瘤率(肿瘤质量)分别为37.9％和40.7％.结论:马钱于碱能够改善移植瘤裸鼠体质量剧减状况,抑制人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤的生长.     

Construction of the human miRNA-451 expression vector and its expression in gastric carcinoma cell line SGC-7901

Objective

The aim of the study was to construct miRNA-451 expression vector pLMP-miRNA-451 which could help identify the functions of miRNA-451 in SGC-7901 cell.

Methods

Total RNA was extracted from SGC-7901 cells to synthesized cDNA. The synthesized cDNA encoding pre-miRNA-451 was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was separated by electrophoresis on 1% agarose gel and then recovered and purified. The purified cDNA fragments of miRNA-451 precursor sequence was then ligated with vector pLMP for 1 h by using DNA ligase to form pLMPmiRNA-451 plasmid. After that, the pLMP-miRNA-451 plasmid was transformed into E. coli DH5α strain expression system to clone and amplificate. The purified pLMP-miRNA-451 extracted from E. coli DH5α via transformation and clone screening was identificatied with restriction enzyme digestion and DNA sequencing. At last, pLMP-miRNA-451 was transfected into SGC-7901 cells with lip2000. Real-time PCR was used for detection of the miRNA-451, the transfection efficiency was observed under fluorescence microscopy and cell counting kit-8 assay was conduced to evaluate the effect of miRNA-451 on SGC-7901 cell proliferation.

Results

Our results showed that pLMP-miRNA-451 expression vector was not only constructed successfully and effectively infected SGC-7901 cells, but also could repress the SGC-7901 cell proliferation.

Conclusion

The constructed plasmid pLMP-miRNA-451 could used for further studies of miRNA-451 in SGC-7901 cell lines.     

Src激酶抑制剂PP2对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.方法:通过Western印迹法检测PP2作用对SGC-7901细胞中Src激酶活化的影响;分别采用MTT法、划痕实验、Transwell小室法和体外诱导血管形成分析实验观察PP2对SGC-7901细胞生长、迁移、基质侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.结果:MTT法检测结果提示,15 μmol/L PP2作用人胃癌SGC-7901细胞12 h时能明显抑制细胞的增殖;5和10 μmol/L PP2均能抑制SGC-7901细胞的迁移、侵袭和诱导血管的形成,且其抑制能力随PP2浓度的增加而逐渐增强.结论:Src激酶抑制剂PP2具有抑制人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成的能力,可能对胃癌具有一定的治疗效果.     

岩舒注射液诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制

目的：探讨岩舒注射液（复方苦参注射液）对体外培养人胃癌细胞株SGC7901的生长抑制和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测岩舒注射液对SGC-7901细胞的生长押制作用；Annexin V-FITC＋PI双参双数检测细胞凋亡；流式细胞仪测定经不同浓度岩舒注射液处理后SGC-7901细胞周期、Fas、Bcl-2蛋白表达及其线粒体膜电位。结果：岩舒注射液对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系，P〈0．01。其48h IC50值为7／200原液稀释浓度；SGC-7901细胞经岩舒注射液处理后可发生凋亡；岩舒注射液使细胞周期阻滞于G0／G1期（P〈O．01），但对于Fas、Bcl-2蛋白表达无影响；可降低线粒体膜电位（P〈0．01）。结论：岩舒注射液对人胃癌SGC-7901细胞有生长抑制和诱导凋亡作用，其诱导凋亡机制可能与细胞周期阻滞、抑制肿瘤细胞增殖、线粒体膜电位降低有关。