不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。     

银屑病患者单核细胞诱生的郎汉斯细胞特征分析

目的 从郎汉斯细胞（ＬＣ）的分化发育过程探讨其在银屑病患者体内异常的原因。方法 将外周血单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦ－β１联合培养５ｄ,分别通过流式细胞仪、混合淋巴细胞反应分析其表型及其抗原提呈功能,并通过ＥＬＩＳＡ法检测其分泌功能。结果银悄病患者单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４＋ＴＧＦ－β１联合培养后能分化发育为具有ＬＣ相对特征性抗原标志ＣＤｌａ的细胞,其比例、表型特征、胞内合成及分泌ＩＬ－     

人外周血树突状细胞的诱导及其生物学特性的研究

目的：建立体外诱导和扩增人外周血树突状细胞（ＤＣ） 的方法,并分析其生物学特性。方法：造血动员后外周血单个核细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子（ＩＬ－４、ＧＭ－ ＣＳＦ和ＴＮＦ－α）培养８ 天。用流式细胞仪分析细胞的表型,经ＥＬＩＳＡ法测定其培养上清中的ＩＬ－ １２ ,并将诱导的树突状细胞与脐带血原始Ｔ（ｎａｉｖｅ Ｔ） 细胞混合培养,用３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法测定细胞的增殖指数。结果：贴壁的造血动员后外周血单个核细胞在体外经细胞因子诱导培养后,高表达人树突状细胞分化抗原ＣＤ１ａ（８９ ．１％ ）、ＣＤ４０（９９ ．８％ ）、ＣＤ８０（９５ ．１％ ）、ＣＤ８３（４５ ．７％ ）、ＨＬＡ－ ＤＲ（９７．６％ ）,同时所获的ＤＣ能分泌ＩＬ－１２ 和可有效地激活脐带血原始Ｔ细胞并促其增殖（ＳＩ＝ ６．９２） 。结论：采用造血动员的外周血经体外贴壁去除非粘附细胞,再经过细胞因子序贯培养,无需纯化ＣＤ３４ ＋ 细胞,能获得高纯度（ ＞８０％ ）和具有功能性的ＤＣ细胞。     

人外周血树突状细胞的诱导及其生物学特性的研究

目的：建立体外诱导和扩增人外周血树突状细胞（ＤＣ）的方法,并分析其生物学特性。方法：造血动员后外周血单个核细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子（ＩＬ－４,ＧＭ－ＣＳＦ和ＴＮＦ＿α）培养８８天。用流式细胞仪分析细胞的表型,经ＥＬＩＳＡ法测定其培养上清中的ＩＬ－１２,并将诱导的树突状细胞与脐带血原始Ｔ细胞混合培养,用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定细胞的增殖指数。结果：贴壁的造血动员后外周血单个核细胞在体外经     

异基因外周血干细胞的动员,检测及临床移植的应用研究

目的：探讨异基因外周血干细胞移植（ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ）供者经Ｇ－ＣＳＦ或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ动员后,采集的外周血干细胞（ＰＢＳＣ）移植物中的幼稚粒细胞与单个核细胞（ＭＮＣ）、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ之间的相关性和移植的剂量标准及临床应用效果。方法：对１１例ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ供者用Ｇ－ＣＳＦ（９例）或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ（２例）进行动员,于动员前及动员后,分别对外周血及ＭＮＣ惧物中的幼稚粒细胞、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ进行检测计数,预处理方法主要用大剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）＋全身照射（ＴＢＩ）。结果：动员后外周血中的幼稚粒细胞与ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ同步增加,外周血ＭＮＣ中的幼稚粒细胞数与ＣＤ３４＾＋细胞数及ＣＦＵ－ＧＭ有较好的相关性。１１例患者全部植活和恢复造血功能,并为染色体核型     

DC细胞刺激γδ T细胞的抗白血病作用

目的：研究γδT细胞的体外生存期和抗白血病活性。方法：对外周血采集物用GM－CSF＋IL－4进行培养，使其分化和扩增为树突状细胞（dendritic cells,DC)，然后用DC和细胞因子IL－2刺激其CD4^ T细胞扩增后，协同DC共同刺激γδT细胞扩增，再与多种白血病细胞株进行混合培养，进而用MTT比色法研究抗白血病能力。结果：γδT细胞能在体外长期大量扩增，扩增的γδT细胞对多种白血病细胞株具有杀伤作用。结论：γδT细胞可望用于白血病的临床免疫治疗。     

膀胱癌TIL的体外培养及细胞表型分析

目的：探讨膀胱癌ＴＩＬ的体外培养方法并进行表型分析。方法：采用Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ等提供的方法分离１例手术切除膀胱癌组织中的ＴＩＬ并进行培养扩增,并用Ｔ细胞亚群单抗试剂分析ＴＩＬ部分膜抗原的表型。结果：该ＴＩＬ体外扩增倍数达到１３５倍,免疫组化分析表明：经ＩＬ－２激活的ＴＩＬ体外培养一定时期后,其ＣＤ＋３细胞数及ＣＤ＋４细胞数／ＣＤ＋８细胞数比值明显上升。结论：膀胱癌ＴＩＬ在体外经ＩＬ－２培养后能大量扩增,ＴＩＬ中以成熟Ｔ细胞（ＣＤ＋３）为主,辅助性Ｔ细胞（ＣＤ＋４）略占优势。     

自体脾移植术后T细胞亚群、sIL-2R、TNF变化研究

目的：探讨自体脾移植术对免疫学指标的影响。方法：将４０ 例外伤性脾破裂分为脾移植术和全脾切除术组,各２０ 例。对照组１０ 例。结果：术后１ 周,全脾切除术组和自体脾移植组,与对照组相比,ＣＤ＋３ 、ＣＤ＋４ 、ＣＤ＋８ 、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 降低,ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦ皆升高（Ｐ＜ ０．０５）。术后３ 个月,自体脾移植组ＣＤ＋３ 、ＣＤ＋４ 、ＣＤ＋８ 、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８升高,ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦ降低（Ｐ＞０．０５） 。而脾切除组,术后ＣＤ＋３ 、ＣＤ＋４ 、ＣＤ＋８ 、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 持续下降,ｓＩＬ－ ２Ｒ、ＴＮＦ持续升高（ Ｐ＜ ０．０５）。结论：自体脾移植对维持机体的Ｔ细胞水平和增强机体的抗感染能力有益。     

胚胎胸腺细胞移植对恶性淋巴瘤患者T细胞亚群的影响

为探讨胚胎胸腺细胞（ＦＴＣ）移植的作用机理，采用单克隆抗体免疫荧光法检测了１９例淋巴细胞癌变患者ＦＴＣ移植前后Ｔ淋巴细胞亚群分布，结果表明：ＦＴＣ移植前患者ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＋４，ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８低于正常对照组（Ｐ〈０．０１），ＣＤ＾＋８高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＦＴＣ移植后ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＋，较移植前明业增高（Ｐ〈０．０１），ＣＤ＾＋８显著降低（Ｐ〈０．０１），ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８,     

雷公藤多甙和IL—10对人DC内IL—12p40和DC—CK1mRNA转录的影响

目的：研究雷公藤多甙和ＩＬ－１０对ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０和ＤＣ－ＣＫ１转录的影响。方法：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体外培养体系,从人外周血单个核细胞中诱导ＤＣ,ＩＬ－１２０ｐ４０和ＤＣ衍生的趋化因子１（ＤＣ－ＣＫ１）转录采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。结果：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体培养体系可以获得成熟功能性ＤＣ,雷公藤多甙和ＩＬ－１０能抑制ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０     

小鼠骨髓和脾来源树突状细胞的分离与扩增培养

目的：探索树突状细胞（ＤＣ）及其前体的分离纯化及其体外扩增的方法。方法：无菌制备ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓和脾细胞；先后用红细胞裂解液、抗鼠ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ细胞单抗（ＭｃＡｂ）和补体溶液，依次去除红细胞，Ｔ、Ｂ细胞，粒细胞和单核巨噬细胞等混杂细胞而获得纯化的ＤＣ及其前体；又在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）和白细胞介素（ＩＬ４）协同诱导下培育，ＤＣ前体分化发育成ＤＣ或郎罕细胞（ＬＣ）并扩增，同时阻抑巨噬细胞发育生长。结果：ＤＣ／ＬＣ细胞数增加，其形态在光镜下多为特征性星形，也有梭形和多角形；扫描电镜下观察其绝大多数为特征性星形，且有１～４级不等的树突状突起，其纯度高达９５％以上。ＤＣ／ＬＣ在功能上明显刺激同种异体混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）。结论：①结果所得细胞的形态和功能符合ＤＣ／ＬＣ；②建立连续排异结合ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ４联合诱生培育的方法，可获得大量高纯度的ＤＣ／ＬＣ。     

T—AK细胞在体外和裸鼠体内抗人膀胱癌细胞株（Fen）的实？…

用可溶性肿瘤抗原和抗ＣＤ３单克隆抗体共同刺激外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＣＤ８＾＋Ｔ细胞为主的杀瘤细胞,称为＾－ＡＫ细胞。与ＬＡＫ细胞、ＣＤ３＝ＡＫ细胞比较,Ｔ－ＡＫ细胞扩增快、低依赖ＩＬ－２,培养１４天细胞数扩增２４倍,比ＣＤ３＝ＡＫ细胞中,比ＬＡＫ细胞高１５天,并能给持生长２１天。Ｔ－ＡＫ细胞中含ＣＤ３＾＋８９％,ＣＤ４＾＋２１％,ＣＤ８＾＋９５％,ＣＤ３１６＾１６２２％,ＣＤ２５＾＋４１％     

白血病患者血T淋巴细胞亚群和sIL-2R水平的变化

目的：探讨白血病患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的变化。方法：分别应用单克隆抗体技术和酶联吸附试验检测３１例白血病患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群和ｓＩＬ－２Ｒ水平,并以３５名正常人作对照。结果：白血病患者外周血ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋细胞数低于正常人,ＣＤ８＾＋细胞数高于正常人（Ｐ〈０．０１）,ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值下降（Ｐ〈０．０１）。血清ｓＩＬ－２Ｒ活性明显高于正     

脐血CD34+造血细胞体外扩增

目的：探讨造血细胞生长因子（细胞因子）的不同组合对脐血ＣＤ３４＋造血干（祖）细胞的扩增作用。方法：应用吸附单克隆抗体———磁珠分离系统分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞,在液体培养体系中经３组不同组合的细胞因子扩增３周。结果：３组不同组合的细胞因子对ＣＤ３４＋细胞均有明显的扩增作用。其中由ＦＬＴ３配基（ＦＬ）＋干细胞因子（ＳＣＦ）＋白细胞介素（ＩＬ）１＋ＩＬ３的组合扩增效果最好,其细胞总数扩增９０４６７±１３２２３倍,ＣＤ３４＋细胞扩增３７９９±１３２１倍,粒单造血祖细胞（ＣＦＵＧＭ）扩增７２７３±３５９８倍,多向祖细胞（ＣＦＵＧＥＭＭ）扩增３７７６±２３０３倍,总造血集落形成细胞（ＣＦＣｓ）扩增５７９５±２７９６倍。ＣＤ３４＋细胞扩增在第２周达最高值,ＣＦＣｓ在第３周达最高值。结论：由ＦＬ、ＳＣＦ、ＩＬ１及ＩＬ３联合扩增效果最好。ＣＤ３４＋细胞和ＣＦＣｓ分别在第２周、第３周达最高峰,说明其时仍保持造血活性。本实验结果对临床脐血造血干细胞移植选择最佳扩增方案和最佳移植时间有一定的参考价值。     

转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移？…

目的 观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突关细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法 从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＧＣ１）并转导Ａｄ－ＬａｃＺ（Ｄｃ２）或Ａｄ－ＴＧＦβ１（ＤＣ３）,每组５×１０＾５个细胞注入Ｇ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别     

流式细胞术检测细胞内细胞因子方法的建立

目的建立流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法。方法运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗及抗细胞因子单抗，结合固定、破膜处理技术，检测产生ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４的ＣＤ４＋、ＣＤ8＋细胞以及产生IＬ－１０的ＣＤ３＋细胞。同时以相应同种型ＩｇＧ染色细胞作为阴性对照，以确定细胞团于染色的特异性。结果产生ＩＦＮ－γ的ＣＤ４＋及ＣＤ８＋细胞明显多于产生ＩＬ－４的细胞，并且产生ＩＦＮ－γ的ＣＤ８＋细胞百分比较ＣＤ４＋细胞相对增多；同时产生ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋细胞以及产生ＩＬ－１０的ＣＤ３＋细胞都较少。结论该方法可从单个细胞水平直接检测全血标本中Ｔ细胞亚群和单核细胞等细胞因子的分泌。     

T-AK细胞在体外和裸鼠体内抗人膀胱癌细胞株(Fen)的实验研究

用可溶性肿瘤抗原和抗ＣＤ３ 单克隆抗体共同刺激外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＣＤ＋８ Ｔ 细胞为主的杀瘤细胞,称为Ｔ－ ＡＫ 细胞。与ＬＡＫ细胞、ＣＤ３ － ＡＫ 细胞比较,Ｔ－ ＡＫ细胞扩增快、低依赖ＩＬ－ ２,培养１４ 天细胞数扩增２４ 倍,比ＣＤ３ － ＡＫ细胞高８ 倍,比ＬＡＫ细胞高１５ 倍,并能维持生长２１ 天。Ｔ－ ＡＫ细胞中含ＣＤ＋３ ８９％ ,ＣＤ＋４ ２１ ％ ,ＣＤ＋８ ９５％ ,ＣＤ＋１６ ２２％ ,ＣＤ＋２５ ４１％ ,ＣＤ＋５６ ４７ ％ ,ＣＤ＋３８ ９０ ％ ,它们是ＣＤ＋８ Ｔ细胞为主的异质性细胞群。体外实验结果表明,Ｔ－ ＡＫ细胞对Ｆｅｎ 的明显的杀伤作用,与ＬＡＫ、ＣＤ３ － ＡＫ细胞比较,差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０．００１） 。裸鼠体内试验结果显示,对照组及ＬＡＫ组全部、ＣＤ３ － ＡＫ 组１ 只裸鼠长出瘤结节,而Ｔ－ ＡＫ组无一例长出瘤结节且生存期明显长     

ATG和抗CD_3McAb对再障患者CFU－GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）和抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对１８例再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数（Ｐ＜０．０５），两者的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。２．ＡＴＧ和抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＡＡ患者干细胞缺乏型和免疫介导型的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。用此项技术对ＡＡ患者作药敏试验，并加测外周血ＣＤ８＋、ＤＲ＋细胞比值，可作为选择免疫抑制疗法的参考。     

快速分离肝癌患者外周血树突状细胞

目的探讨从肝癌患者外周血中大量快速分离树突状细胞（ＤＣ）有效方法。方法自肝癌患者外周血中分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ）;ＰＢＭＣ与Ｇｍ－ＣＳＦ及ＩＬ－４共培养;检测培养前后ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７－２表达水平及ＤＣ诱导Ｔ细胞增殖能力。结果ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４联合刺激选择性使ＰＢＭＣ中ＤＣ大量增殖,并通过增强ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达［从（１２．８±１．１）、（１５．１±１．０）增至１９．１±１．７）、（２１．６±１．５）,Ｐ＜０．０１］进一步增强ＤＣ免疫功能［由（６８２０±１４０）增至（１４０９０±１８０）ｍｉｎ－１,Ｐ＜０．０１］。结论联合应用ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４能够从肝癌患者血中制备出大量高免疫活力ＤＣ。     

GM—CSF诱导红白血病细胞向树突状细胞分化及其抗原提呈功能的研究

目的探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）诱导小鼠红白血病细胞分化过程中，树突状细胞的产生及其抗原提呈功能的变化。方法采用流式细胞仪分析、电镜技术和４小时５１Ｃｒ释放法等，进一步观察了ＧＭ－ＣＳＦ的诱导分化作用。结果１００ｎｇ／ｍｌＧＭ－ＣＳＦ处理３天后的ＦＢＬ－３细胞，树突状细胞的特异性标志３３Ｄ１和ＮＬＤＣ１４５的表达阳性率显著升高；同时，ＭＨＣ－Ⅱ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｉ－ＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１和ＣＤ４０表达水平均增加；扫描电镜显示ＧＭ－ＣＳＦ处理的ＦＢＬ－３细胞，表面出现许多树突状突起，透射电镜下可见细胞浆内有丰富的线粒体，核呈分叶状。同时，能够显著刺激同种异体Ｔ淋巴细胞增殖，促进ＩＬ－２的产生；可显著提高细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）细胞对ＦＢＬ－３细胞的特异性杀伤活性。结论ＧＭ－ＣＳＦ诱导的红白血病细胞可向树突状细胞分化，本身具有抗原提呈功能。