肺纤维化动物模型肺组织形态定量分析

目的：采用光镜组织病理学检查及电子计算机图像分析仪形态定量分析，更客观地评价肺纤维化形成的过程。方法：气管内一次注入博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）制成肺纤维化动物模型，于第７、１４、２８、４３、５６天分批处死动物，光镜下依据Ｓｚａｐｉｅｌ等的方法测定肺泡炎和肺纤维化程度，同时采用电子计算机图像分析仪测算肺泡腔、肺泡炎及肺纤维化所占面积。结果：注入ＢＬＭＡ５第７天肺泡炎最重，第２８天肺纤维化最明显。结论：组织学定量与电子计算机图像分析仪所测得结果有良好的相关性。采用本方法可以客观地评价各种药物治疗肺纤维化的疗效。     

抗纤合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路调控的研究

目的:观察益气养阴法中药组方——抗纤合剂对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织中Smad3和Smad7蛋白质表达的影响,探讨抗纤合剂治疗肺纤维化的可能分子作用机制。方法:将健康雄性Wistar大鼠120只随机分为正常对照组、模型组、强的松组、抗纤合剂组。每组30只。除正常对照组,其他3组采用Szapiel SV经典博莱霉素致肺纤维化模型。模型建成后,强的松组以6.25 mg·kg~(-1)的强的松溶液灌胃,抗纤合剂组以5 g·kg~(-1)灌胃。正常对照组与模型组以等溶生理盐水灌胃,每组每只大鼠每日灌胃给药2次,观察大鼠一般行为状态,分别于7、14、28 d 3个时间点处死大鼠,取肺组织固定。每个时间点每组大鼠10只。分别观察3个时间点Smad3 mRNA、Smad7mRNA的蛋白表达的变化。结果:模型组在14 d时,Smad3的mRNA表达水平达到峰值,Smad7的mRNA表达水平达到低点。到28 d时,Smad3的mRNA表达水平有下降,Smad7的mRNA表达水平有上升。强的松组和抗纤合剂组大鼠肺组织中Smad3 mRNA表达水平随着时间的推移,逐渐下降,Smad7 mRNA表达水平逐渐升高。且从总体上与模型组相比,Smad3 mRNA表达水平显著降低,Smad7 mRNA表达水平显著升高,差异明显(P0.05)。结论:抗纤合剂可以对TGF-β/Smad信号通路中Smad3、Smad7 mRNA的表达进行有效调控,通过下调BLM致肺纤维化大鼠Smad3的表达,促进Smad7表达的升高,抑制大鼠肺纤维化的形成,对肺纤维化起到一定的治疗作用。     

肺纤维化动物模型肺组织形态定量分析

目的：采用光镜组织病理学检查及电子计算机图像分析仪形态定量分析，更客观地评价肺纤维化形成的过程。方法：气管内一次注入博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）制成肺纤维化动物模型，于第７、１４、２８、４２、５６天分批处死动物，光镜下依据Ｓｚａｐｉｅｌ等的方法测定肺泡炎和肺纤维化程度，同时采用电子计算机图像分析仪测算肺泡腔、肺泡炎及肺纤维化所占面积。结果：注入ＢＬＭ Ａ５第７天肺泡炎最重，第２８天肺纤维化最明显。结     

764—3对大鼠实验性肺纤维化的保护作用

给大鼠气管内一次滴注博莱霉素,观察肺部炎症及其修复形成肺纤维化的过程.滴注后第7、21天,可见肺系数及肺组胺含量显著升高。第21天时还有血清丙二醛含量显著升高,而此时肺羟脯氨酸含量无明显改变。提示为亚急性炎症阶段。第60天时,肺羟脯氨酸含量显著升高,表明有肺纤维化形成。764-3治疗可显著缓解博莱霉素所致的上述指标的变化。提示764-3可防止博莱霉素所致肺炎症及其随后发展成肺纤维化。这一作用除直接与其对抗早期的炎症过程有关外,尚不能排除直接地抗纤维化作用。     

三七总皂甙对实验性肺纤维化大鼠病理变化和转化生长因子-β1表达的影响

目的研究博莱霉素（BLM）所致大鼠肺纤维化的病理形态学变化和三七总皂甙（PNS）的干预作用及其机制。方法通过气管内注入BLM复制动物肺纤维化模型,于造模后第2天各治疗组开始每天给药,于给药后第7,14,28天分别随机处死一批大鼠,取肺组织行HE染色,用免疫组织化学方法检测肺组织中TGF-β1的表达,并测定肺组织中羟脯氨酸（HYP）含量。结果PNS能抑制实验性肺纤维化大鼠肺组织中胶原沉积及TGF-β1的异常升高,减轻其肺部的病理损害。结论PNS对BLM诱导产生的肺纤维化有一定的抑制作用。     

干扰素γ对实验性肺纤维化大鼠血清IL-4、SP-A含量的影响

目的观察干扰素γ(IFN-γ)对实验大鼠肺纤维化的治疗作用,初步探讨其抗纤维化的作用机制.方法大鼠随机分为正常对照组、模型组、IFN-γ治疗组.气管内注入博莱霉素造模后,于当天开始每日给药,分别于1、3、7、14、28d处死,取肺组织和血清,行电镜观察及HE染色,ELISA测定血清IL-4含量及Western Blotting测定表面活性蛋白A(SP-A)含量.结果 IFN-γ组与模型组比较,肺纤维化程度明显减轻,血清IL-4、SP-A含量显著减低(P<0.01).结论 IFN-γ对博莱霉素所引起的肺纤维化具有明显的治疗作用,可能通过调节失衡的Th细胞及减轻肺组织损伤发挥抗纤维化作用.     

白及提取物对博莱霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用

目的：探究白及提取物中抗大鼠肺纤维化（PE）的活性部位,并对活性部位的化学性质进行分析。方法采用95%乙醇提取白及得到白及醇提物,药渣水提醇沉法提取得到白及多糖。雄性SD大鼠气管内一次性注射博莱霉素（5 mg/kg）诱导PF模型,灌胃给予白及醇提物（300 mg/kg）或白及多糖（300 mg/kg）,14 d和28 d观察肺组织病理学及胶原沉积变化,计算肺系数,并检测羟脯氨酸含量。采用苯酚-硫酸法测定白及多糖部分糖含量,高效凝胶色谱法测定其相对分子质量大小,高效液相色谱方法研究其单糖组成。结果与PE模型组比较,白及多糖治疗组的大鼠肺组织病理改变明显改善,且肺系数及羟脯氨酸含量明显降低（P＜0.05,P＜0.01）,而白及醇提物组无显著性改善作用。白及多糖糖含量81.41%,数均分子质量（Mn）约为2.23×105,由甘露糖和葡萄糖组成。结论白及多糖能显著降低肺组织羟脯氨酸的产生及胶原的沉积,并延缓PE的发展进程。     

杏花雨注射液对大鼠肺纤维化抑制作用的研究

目的本项目研究杏花雨注射液对大鼠实验性肺纤维化的作用。方法105只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、杏花雨注射液3个剂量组。除正常对照组外,各实验组均采用博莱霉素（BLM）经气管注射建立大鼠肺纤维化模型,造模24h后,分别腹腔注射杏花雨注射液、金纳多注射液。于第7、14和28天取各组肺组织进行羟脯氨酸含量测定及形态学检测。结果高纯度银杏黄酮各组大鼠肺组织羟脯氨酸含量明显低于模型组,p〈0.05;光镜下肺组织纤维化程度较模型组明显减轻。结论银杏黄酮对博莱霉素致大鼠的肺损伤具有一定保护作用。     

番茄红素对实验性肺纤维化大鼠血浆TNF-α、NO、MDA含量及SOD活性的影响

目的　考察番茄红素对实验性肺纤维化大鼠血浆 TNF-α、NO、MDA含量及 SOD活性的影响。方法　 6 0只 SD大鼠随机分为正常对照组 (C组 )、模型组 (M组 )和番茄红素干预组 (L组 ) ,每组各 2 0只。 M组和 L组采用博莱霉素 (BL M)经气管注射建立大鼠肺纤维化模型 ,造模当日起 L组每天用番茄红素油树脂灌胃 ,3、7、14和 2 8d处死大鼠采集血浆 ,测定 TNF-α、NO、MDA含量及 SOD活性。结果　与 M组相比 ,L组各时间段 TNF-α、NO、MDA含量降低 (7、14、2 8d,TNF-α:P<0 .0 1;3d,NO、MDA:P<0 .0 5 ) ,SOD活性增高 (2 8d,P<0 .0 5 )。结论　番茄红素能够降低实验性肺纤维化大鼠血浆 TNF-α、NO、MDA含量 ,提高 SOD活性 ,对博莱霉素致大鼠的肺损伤具有一定保护作用     

肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中碱性磷酸酶的动态变化及其意义

目的 :探讨碱性磷酸酶在肺纤维化中的作用。方法 :采用博莱霉素致肺纤维化大鼠模型 ,应用酶学方法对支气管肺泡灌洗液中碱性磷酸酶 (ALP)进行动态观察。结果 :(1)博莱霉素 (BLM )组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、中性粒细胞第 1d即开始增加 ,第 3d达高峰 ,14d后逐渐恢复正常 ;淋巴细胞在第 7d达高峰。 (2 )BLM组BALF中ALP的绝对值增加 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;总蛋白第 3d达到高峰 (P <0 .0 1) ,第 14～ 2 8d逐渐恢复正常 ;ALP和总蛋白比率第 7d开始增加 (P >0 .0 5 ) ,第 14～ 2 8d逐渐达到高峰 (P <0 .0 5 )。血清中ALP两组无统计学差异。 (3)BALF中ALP绝对值与炎症细胞总分数以及总蛋白无明显相关 ,BALF中ALP和总蛋白比率与炎症细胞总分数也无明显相关。结论 :博莱霉素致肺纤维化大鼠BALF中ALP明显增加 ,ALP和总蛋白比率随着肺纤维化进展而增加 ,其比率的增加可以作为反映肺纤维化进展的一项指标     

当归注射液对大鼠肺纤维化胶原蛋白含量的影响

目的　探讨当归对肺间质纤维化胶原蛋白代谢的影响。方法　雄性SD大鼠 6 0只随机分成模型、当归、激素及对照组 ,前 3组经气管内灌注博来霉素后当天开始分别腹腔注射生理盐水、当归、琥珀酸氢化可的松 ,对照组气管内灌入及腹腔注射相应体积的生理盐水 ,于第 7、14、2 8d分别处死各组大鼠 5只 ,右肺进行HE染色及应用免疫组织化学方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量。结果　模型组出现典型肺间质纤维化改变 ,当归组及激素组明显轻于模型组 ,第 7、14d各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量无显著差别 ,第 2 8d当归组及激素组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量明显低于模型组 (P <0 .0 1)。结论　当归能有效地减少模型大鼠肺间质中胶原蛋白的含量 ,有防治肺纤维化的作用     

酸吸入致大鼠肺纤维化初步探索

目的研究实验性酸吸入与大鼠肺间质纤维化的相关性及其机制并与博来霉素致纤维化比较。方法雄性SD大鼠120只,随机分为正常对照组、博来霉素组、高浓度盐酸组、中浓度盐酸组和低浓度盐酸组,每组24只。博来霉素组气管内一次性注入博来霉素诱导纤维化,盐酸组每周气管内滴注不同浓度盐酸1次,正常对照组每周气管内滴注生理盐水1次。各组分别于造模后第7、14、28及42天随机处死6只,取肺组织行HE、Masson染色评价肺组织病理变化,用RT-PCR方法测定肺组织转化生长因子β1（TGF—β1）的mRNA表达,用免疫组化的方法半定量测定结缔组织生长因子（CTGF）的表达。结果盐酸组肺泡炎程度始终显著高于对照组（P〈0．01）,28d达到或者超过博来霉素组水平。盐酸组纤维化程度随时间逐渐增强,显著高于对照组沪〈0．01或0．05）,但始终未超过博来霉素组（P〉0．05）。盐酸组肺组织的TGFβ1 mRNA在28d时达到博来霉素组水平,至42d时全面超过博来霉素组水平。高、中浓度盐酸组CTGF表达高于正常阴性对照组（P〈0．05）,且随滴注次数增加及时间延长而增强。结论本实验反映经常性胃食管酸反流引起的酸吸入与肺纤维化相关。     

浓当归注射液对博莱霉素致鼠肺纤维化治疗作用的研究

为观察当归对博莱霉素致鼠肺纤维化后的治疗作用,对用博莱霉素气管内灌注30d后的SD大鼠,治疗组给予25%当归注射液每日注射共15d,对照组注射生理盐水,结果显示：治疗组肺组织学检查,纤维化明显轻于对照组;肺间质所占面积百分比显著低于对照组;肺匀浆羟脯氨酸含量显著减少（P＜0.01)。结果表明,当归能延缓博莱霉素诱导的肺纤维化进程,缓解其所致的肺纤维化病变。     

肺纤维化大鼠模型中细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达

目的探讨细胞凋亡及Fas/FasL mRNA的表达在肺纤维化过程中的作用。方法通过博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,同时设立正常对照组,采用TUNEL法、RT-PCR法检测肺组织细胞凋亡以及Fas/FasL mR-NA表达。结果肺纤维化模型复制成功。模型组肺组织细胞凋亡上调可持续至第28d,于第14d前后达高峰。Fas/FasL mRNA表达与细胞凋亡呈同步改变。结论细胞凋亡及Fas/FasL mRNA表达的上调可能是博来霉素致大鼠肺纤维化发生、发展的重要原因。     

益气化纤汤对博来霉素A5诱导的大鼠肺纤维化的影响

目的：研究益气化纤汤对博莱霉素A5（BLMA5）诱导的大鼠肺间质纤维化的治疗作用。方法：利用博莱霉素气管内注射制作大鼠肺纤维化模型。90只健康雄性SD大鼠被随机分为正常组、模型组、强的松组和小、大剂量益气化纤汤组。在同样条件下，药物灌胃饲养28d后，断颈处死。取双肺标本进行病理切片、测定转化生长因子（TGF-β1）表达和羟脯氨酸（HYP）含量。结果：从病理切片、肺组织中TGF-β1表达和肺组织匀浆中羟脯氨酸的含量方面来看，药物治疗各组的肺纤维化均比模型组轻。结论：益气化纤汤对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化有一定的治疗作用，其作用机制可能通过抑制TGF-β1生成实现。     

川芎嗪对肺纤维化大鼠CTGF表达及胶原沉积的影响

目的通过观察川芎嗪对肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）表达及胶原沉积的影响,探讨川芎嗪对肺纤维化的治疗作用。方法将72只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、肺纤维化模型组（B组）、川芎嗪治疗组（C组）各24只,采用大鼠气管内一次性滴注博莱霉素造模,Masson染色观察胶原沉积情况及SABC免疫组化法检测CTGF表达变化。结果B组肺内有大量胶原沉积;C组胶原沉积明显轻于B组;A组胶原沉积不明显。免疫组化发现B组CTGF表达最强,C组较弱,A组微弱表达。结论川芎嗪可抑制哮喘大鼠肺组织的胶原沉积。其作用机制可能是通过抑制CTGF的表达来实现。     

LT受体拮抗剂对大鼠肺纤维化LTB_4及血F_n的影响

45只大鼠随机分为 3组 ,对照组、模型组、治疗组各 15只。治疗组气管内单次灌注博莱霉素 (5 mg)后每日以安可来 (ACL,10 mg/ kg)灌胃 ;模型组气管内灌注同治疗组 ,灌胃以生理盐水代替。 3组动物在气管内灌注后分别于第 7、14、2 8d随机处死 5只 ,取左肺下叶 1g匀浆测 L TB4,心腔血测纤维联结蛋白 (Fn)。模型组和治疗组在气管内灌注后白三烯 B4(L TB4)迅速上升 ,第 7d达高峰 ,第 2 8d模型组 L TB4仍较高 ,治疗组 L TB4明显下降 ;Fn浓度模型组在第 7d明显升高 ,治疗组及对照组较低。结论 :在鼠实验性肺间质化过程中 L TB4明显增高 ,白三烯对肺间质纤维化的发生发展起一定作用     

格列卫对肺纤维化小鼠的干预机制

目的 探讨格列卫对小鼠肺纤维化的干预机制.方法 120只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和格列卫组,每组30只.采用气管内注射博莱霉素构建肺纤维化小鼠模型,分别于7、14、21 d随机处死10只动物.免疫组化检测各组肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TGF-β1mRNA含量.结果 模型组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较对照组显著增加,地塞米松和格列卫处理组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较模型组显著降低,而地塞米松组和格列卫组的表达水平无显著差异.TGF-β1,与α-SMA表达水平呈直线正相关(r=0.251,P<0.05).结论 格列卫对博莱霉素诱导肺纤维化的抑制作用与其抑制TGF-β1和α-SMA的表达有关.     

博来霉素致肺纤维化大鼠形态学变化的实验研究

目的　观察博来霉素 (Bleomycin ,BLM)致大鼠肺纤维化模型的形态学及胶原含量的变化 ,探讨其发生机制。方法　健康SD大鼠 ,BLM 5mg (kg·bw)复制大鼠肺纤维化模型 ,于 1、3、7、14、2 8d ,观察肺纤维化形成的病理变化和肺匀浆羟脯氨酸 (HYP)的含量变化。结果　光镜所见 :给予BLM后 1- 7d肺部病变以肺泡炎为主 ,14d以后则进入慢性纤维化阶段。电镜所见 :模型组 3- 7dⅠ型细胞受损 ;Ⅱ型细胞增生 ,其内板层小体明显增多 ,线粒体嵴消失甚至出现空泡样变 ;14 - 2 8dⅡ型细胞数目减少 ,纤维组织增生。模型组肺组织匀浆HYP含量于 7d开始明显增加 ,2 8d达高峰。结论　博来霉素诱发大鼠肺纤维化早期以肺泡炎为主 ,7d开始出现肺纤维化 ,2 8d肺纤维化为主要病变