遗传性癫痫大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调

目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GAT-1mR-NA和蛋白表达均高于正常Wistar大鼠(P<0.01);GAT-3mRNA表达高于正常Wistar大鼠(P<0.05);GAT-3蛋白表达亦高于正常Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GAT-1在TRM和Wistar大鼠海马的CA1、CA3和DG区均有明显分布,且在TRM鼠海马的CA1、CA3和DG区中均比在正常Wistar鼠中明显;而GAT-3蛋白只在TRM和Wistar大鼠海马的CA1区中表达丰富,同时,和正常Wistar鼠比较,TRM鼠海马CA1区中GAT-3蛋白的表达明显增加。结论TRM大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调可能促进了癫痫的发生,可能是癫痫治疗的靶点。     

氧化槐定碱对福尔马林致痛小鼠大脑GAT-1表达的影响

目的观察小鼠大脑GABA转运体1(GABA transporter-1,GAT-1)的变化对氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)镇痛作用的影响。方法采用福尔马林舔足法观察小鼠静脉(intravenous injection,iv)给药后OSR的镇痛效果,免疫组织化学方法(SABC法)观察OSR对小鼠大脑皮层和丘脑GAT-1免疫阳性细胞的影响,Real time RT-PCR方法检测OSR对福尔马林致痛小鼠大脑GAT-1 mRNA表达的影响。结果 iv OSR 500、250、125 mg·kg~(-1)可延长福尔马林所致小鼠的舔足潜伏期(P<0.05,P<0.01);腹腔注射(intraperitoneal,ip)OSR 500 mg·kg~(-1)可使小鼠丘脑和大脑皮层的GAT-1免疫阳性细胞表达明显减少(P<0.01),对小鼠大脑的GAT-1mRNA的表达也有明显的抑制作用(P<0.05)。结论 OSR有明显的镇痛作用,其镇痛作用机制与中枢GAT-1表达的下调相关。     

托吡酯对电点燃癫痫大鼠海马Caspase-3 mRNA表达的影响

目的观察托吡酯(TPM)对杏仁基底外侧核电点燃癫痫大鼠海马半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)mRNA表达的影响。方法将双极电极插入大鼠左侧杏仁基底外侧核,给予慢性电刺激使大鼠达到点燃状态,观察其发作过程并记录脑电图。采用半定量RT-PCR法检测托吡酯治疗组和对照组电点燃大鼠海马组织的Caspase-3 mRNA表达。结果大鼠平均(13.50±3.99)次刺激达到点燃,记录到后发放时程在21 450~119 720 ms之间。电点燃大鼠海马Caspase-3 mRNA表达明显升高,托吡酯治疗组的Caspase-3 mRNA表达下调。结论在大鼠电点燃癫痫模型中,Caspase-3可能参与了点燃过程,托吡酯可抑制癫痫过程中神经元的凋亡。     

托吡酯对大鼠认知功能及海马5-羟色胺、乙酰胆碱酯酶的影响

目的:探讨托吡酯(TPM)对正常大鼠认知功能及海马组织5-羟色胺(5-HT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响.方法:28日龄Wistar 大鼠,对照分组,TPM连用4周后,各组进行Y-型迷宫检试,免疫组化方法检测海马组织5-HT阳性神经元的表达,化学比色法检测AChE活性的变化.结果:TPM 对照A、B组与空白组相比,TPM对照B组与TPM对照A组相比,大鼠Y-型迷宫分辨学习能力及24h记忆保持率明显降低(P＜0.01),5-HT免疫阳性神经元数量明显减少(P＜0.01),AChE活性明显增加(P＜0.01,P＜0.05).结论:TPM可引起正常大鼠认知功能障碍,其机制可能与大鼠海马内5-HT含量降低和AChE活性增加有关,其损害程度与TPM的使用剂量有关.     

microRNA-132和Mecp2在甲基苯丙胺依赖中的作用

目的探讨miRNA-132及相关蛋白Mecp2、CREB在甲基苯丙胺(methamphetamine, MA)神经毒性中的作用。方法大鼠腹腔注射MA(10 mg·kg^-1·d^-1)建立1、2、4周3个不同依赖时程的MA依赖模型。取额叶皮质、海马,RT-qPCR检测miRNA-132、Mecp2 mRNA,Western blot检测Mecp2、p-Mecp2、CREB和p-CREB。结果在额叶皮质,miRNA-132、Mecp2 mRNA在MA依赖1、2、4周组表达均升高(P<0.05和P<0.01),Mecp2表达明显降低(P<0.01),Mecp2磷酸化水平则明显升高。在海马,miRNA-132呈降低趋势,在2、4周组明显降低(P<0.01);Mecp2 mRNA表达则明显升高(P<0.01);Mecp2在1周组表达升高(P<0.05),之后呈降低趋势,在4周组表达明显降低(P<0.05);Mecp2磷酸化水平在1周组降低(P<0.01),之后呈升高趋势,在2周组明显升高(P<0.01)。结论 MA可诱导miRNA-132异常表达。在额叶皮质,miRNA-132可能通过抑制mRNA的翻译,致Mecp2表达降低而发挥作用;但在海马,miRNA-132与Mecp2表达趋势未呈现反向对应关系,miRNA-132调节并不依赖于Mecp2。     

雷公藤内酯醇对糖尿病大鼠脑内葡萄糖转运蛋白表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对糖尿病大鼠脑内葡萄糖转运蛋白(Glut-1、Glut-3)表达的影响。方法大鼠45只,分为正常对照组13只和糖尿病(DM)模型组32只。模型组每天一次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)52 mg·kg-1,连续5 d;正常对照组仅腹腔注射等体积0.1 mol·L-1枸橼酸。将造模成功的28只大鼠随机分为模型对照组和雷公藤内酯醇组各14只。雷公藤内酯醇组灌胃给予雷公藤内酯醇混悬液1.8 g·kg-1,正常对照组和模型对照组则灌服等体积饮用水,每日上午1次,3组均连续给药8周。结果正常对照组Glut-1和Glut-3的表达海马部位多于皮质部位。模型对照组皮质部位及海马部位Glut-1、Glut-3变化不明显(P>0.05)。雷公藤内酯醇组皮质部位及海马部位Glut-1表达分别为(1.31±0.34)%,(1.03±0.25)%,均明显降低(P<0.01);海马部位Glut-3表达有所增加(P<0.01)。结论雷公藤内酯醇能明显降低糖尿病大鼠脑内的Glut-1含量。     

自发性癫痫大鼠海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基表达上调

目的通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠(SER)与野生型正常大鼠(WTC)海马Ⅰ型和Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基mRNA与蛋白的表达情况。方法发现SER癫痫大发作后即刻提取海马组织总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)表达α1与α3亚基mRNA;应用免疫荧光与免疫组化定位与表达α1亚基蛋白与α3亚基ⅢN蛋白。结果SER海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基mRNA表达高于WTC(P<0·01);SER海马Ⅰ型钠通道α亚基蛋白表达高于WTC(P<0·01);α3亚基ⅢN型蛋白在SER成鼠有表达,而WTC成鼠无表达。结论SER脑内海马Ⅰ型与Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基表达上调,可能是神经元高兴奋性的原因或癫痫发作的继发表现。     

黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质表达的影响

目的探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白质表达水平的影响。方法♂Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质的表达。结果①RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的COX-2 mRNA表达明显增加(P<0.01);而Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2mRNA表达明显降低(P<0.01);②免疫组化结果显示,糖尿病大鼠海马COX-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2的蛋白质表达明显降低(P<0.01)。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马的COX-2mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠海马的保护作用。     

自发性癫痫大鼠皮质和海马中GLT-1、EAAC1表达异常

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)皮质和海马中GLT-1、EAAC1 mRNA与蛋白的表达情况。方法应用RT-PCR技术检测GLT-1、EAAC1 mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GLT-1、EAAC1蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GLT-1、EAAC1蛋白。结果SER皮质中GLT-1蛋白表达低于正常Wistar大鼠(P<0.05);EAAC1 mRNA及蛋白表达均低于正常Wistar大鼠(P<0.01);SER海马中GLT-1蛋白表达高于Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GLT-1、EAAC1在SER、Wistar大鼠皮质和海马中均有表达,且位于细胞膜上。结论SER皮质中GLT-1、EAAC1表达下调可能促进了癫痫的发生;海马中GLT-1蛋白表达上调可能是一种代偿性神经保护机制。     

遗传性癫痫大鼠海马组织Ca~(2+)/Ca_V1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路的异常变化

目的研究遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马组织电压门控性L型钙离子通道α1C亚单位(CaV1.2)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化情况。方法应用West-ern blot法与免疫荧光双标法检测TRM海马CA1、CA3和DG区CaV1.2、CaM和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的蛋白表达及分布;激光共聚焦显微镜检测TRM海马组织中[Ca2+]i。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM海马组织中CaV1.2和CaM的蛋白表达明显升高(P<0.01),而p-CaMKⅡ的蛋白表达明显下降(P<0.01);免疫荧光双标法结果显示:CaV1.2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG区的颗粒细胞群表达丰富,同时CaV1.2与CaM、p-CaMKⅡ与CaM在海马各区域均存在共定位;激光共聚焦显微镜检测TRM海马细胞[Ca2+]i明显增强(P<0.01)。结论Ca2+/CaV1.2/CaM/CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展。     

GABA transporter type 1 (GAT-1) uptake inhibition reduces stimulated aspartate and glutamate release in the dorsal spinal cord in vivo via different GABAergic mechanisms

Mechanisms through which the reported antinociceptive activity of GABA re-uptake inhibitors is mediated (and where on the sensory neuraxis) have not been defined. Here, microdialysis in the anaesthetised rat was used to examine the effect of selective GABA transporter type 1 (GAT-1) inhibition on basal and evoked amino acid release in the dorsal spinal cord. Reverse dialysis of the selective GAT-1 inhibitor NO-711 (10–300 μM) induced a concentration-related increase in extracellular GABA (maximal threefold of basal levels) without affecting other amino acids. Employing an S2/S1 paradigm, release evoked by brief high (45 mM) K⁺-induced depolarisation of aspartate and glutamate, but not GABA or glycine, was found to be significantly reduced by reverse dialysis of NO-711 (300 μM). Co-administration of selective antagonists for GABA_A or GABA_B receptors ((+)-bicuculline (100 μM) or SCH 50911 (100 μM), respectively) prevented the GAT-1 inhibition-induced reduction of evoked aspartate. In contrast, while (+)-bicuculline also antagonised the reduction of evoked glutamate, SCH 50911 (up to 1 mM) was without effect. Inhibition of GAT-1 re-uptake was further found to play a permissive role in autoinhibitory effects on GABA release mediated through GABA_A and GABA_B receptors. These data demonstrate that augmentation of GABAergic neurotransmission by re-uptake inhibition activates pharmacologically distinguishable inhibitory influences on aspartate and glutamate release in the dorsal spinal cord. Thus, inhibition of spinal pro-nociceptive neurotransmitter release may contribute to the analgesic action of this drug class.     

托吡酯对原代培养海马神经元癫痫样放电的抑制效应

目的:探讨托吡酯对原代培养海马神经元癫痫样放电的抑制作用及其特点。方法:分离原代培养 1日龄SD大鼠海马神经元,d9~15采用膜片钳全细胞模式记录托吡酯 ( 20, 100μmol·L-1 )和苯妥英 (10μmol·L-1 )对电流刺激及谷氨酸诱导神经元癫痫样放电的抑制效应。结果:苯妥英(10μmol·L-1 )、托吡酯(20, 100μmol·L-1 )抑制电流刺激诱导神经元动作电位,分别减少 100 %,(38±25) %和 ( 70±19 ) %。苯妥英 ( 10μmol·L-1 )及托吡酯(100μmol·L-1 )分别完全或部分抑制谷氨酸诱导海马神经元的癫痫样放电。结论:托吡酯抑制原代培养海马神经元的癫痫样放电,并与其浓度及作用时间有关。     

Adenosine A2A receptor stimulation decreases GAT-1-mediated GABA uptake in the globus pallidus of the rat

We examined modulation of [(3)H]GABA uptake in slices of the rat globus pallidus because stimulation of adenosine A(2A) receptors increases extracellular GABA in this structure. Pharmacological analysis showed that GAT-1 is the main transporter present in these slices. Both adenosine and the A(2A) agonist CGS 21680 reduced GABA uptake. Antagonist ZM 241385 prevented these effects. Agents that increase protein kinase A activity like forskolin and 8-bromo-cAMP also inhibited GABA uptake. The inhibition of uptake produced by these substances and by CGS 21680 was prevented by the protein kinase A blocker H-89. The protein phosphatase blocker okadaic acid reduced uptake; this effect and the response to CGS 21680 were not additive. The effective concentrations of adenosine (EC(50)=15.2microM) are within the range measured in the interstitial fluid under some physiological conditions. Thus, inhibition of uptake may be important in increasing interstitial GABA during endogenous adenosine release.     

黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2表达的影响

目的探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1和2(HO-1和HO-2)表达的影响。方法♂Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马HO-1和HO-2 mR-NA和蛋白质的表达。结果①RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA表达水平明显增加(P<0.01);而Clau(50,25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),表明Clau可明显抑制糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2 mRNA的表达水平;②免疫组化结果表明,糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),表明HO-1和HO-2蛋白质的异常表达参与了糖尿病障碍的过程,而Clau通过抑制HO-1和HO-2的蛋白质表达对糖尿病大鼠起到保护作用的。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马的HO-1和HO-2 mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠的海马保护作用的。     

2-脱氧葡萄糖对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78及天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-12的影响研究

目的:探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)对脑缺血再灌注(IR)模型大鼠脑组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的影响。方法:取大鼠随机分为假手术组、模型组和2-DG组(2-DG100mg·kg-1),每组60只,后2组建立局灶性脑IR模型,假手术组行手术但不插入线栓。建模前7d开始给药,每天1次,连续7d,考察建模后3、6、12、24、48h各组大鼠海马CA1区细胞凋亡情况(阳性细胞率)、GRP78和caspase-12蛋白及其mRNA的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组和2-DG组阳性细胞率、GRP78和caspase-12蛋白及其mRNA表达均明显升高(P均<0.01);与模型组比较,2-DG组阳性细胞率、cas-pase-12蛋白及其mRNA表达明显降低,GRP78蛋白及其mRNA表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:2-DG可能通过上调GRP78和下调caspase-12的表达来预防脑IR损伤。     

银杏叶提取物对缓激肽诱导的大鼠记忆能力减退的改善作用

目的观察银杏叶提取物(GBE)对缓激肽诱导的大鼠记忆能力减退的改善作用,并探索其作用机制。方法大鼠经Morris水迷宫训练合格后,分别灌胃给予GBE(40,80和160mg.kg-1,每日1次)3周,于给药1周时海马内注射20mmol.L-1缓激肽5μL,给药结束后用Morris水迷宫检测大鼠的空间记忆能力,RT-PCR法测定海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3及caspase8mRNA的表达。结果海马内注射缓激肽后,大鼠在水迷宫中的逃避潜伏期和寻台搜索距离明显延长,且海马caspase3和caspase8mRNA表达增加;GBE对缓激肽诱导的空间记忆能力减退有改善作用,且降低海马caspase3及caspase8mRNA表达。结论GBE可改善缓激肽诱导的大鼠记忆能力减退,其机制可能与降低海马caspase3和caspase8mRNA表达有关。     

单用不同剂量托吡酯与卡马西平治疗老年癫痫发作的疗效比较

目的:观察单用不同剂量托吡酯及卡马西平治疗老年癫痫病人的临床疗效和不良反应,探讨单用托吡酯更安全、更有效的给药方法。方法:老年癫痫病人120例,分为卡马西平组,31例,服用卡马西平(200～ 600 mg·d~(-1));单用托吡酯组,89例病人按服药剂量不同又分为,低剂量组47例(托_1组,100～200 mg·d~(-1)),高剂量组42例(托_2组,300～400 mg·d~(-1)):结果:托_1,组总有效率81％,托_2组总有效率74％;卡马西平组总有效率77％,3组比较无显著差异(P>0．05)。托_2组不良反应发生率(57％)高于托_1组(34％)(P<0．05)。托吡酯组主要不良反应为感觉异常、胃纳差、头痛、嗜睡头晕和体重减轻。结论:单用较小剂量托吡酯(100～ 200 mg·d~(-1))治疗老年癫痫发怍,疗效好,不良反应少而且轻。