PCR及其相关技术进展

ＰＣＲ及其相关技术进展北京医科大学临床肿瘤学院田竟生首都医学院神经科学研究所徐群渊多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，简称ＰＣＲ）是分子生物学领域中的新技术。它的价值可与限制性内切酶、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹相比拟。尽管人们对于...     

PCR及其相关技术在感染性疾病诊断中的应用

聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是上世纪八十年代由Mullis等[1]首次公开发表的一种DNA体外扩增技术。其发表后激发起了人们对这项技术的兴趣,并且由此翻开了分子生物学飞速发展的新篇章。然而刚开始时,人们对PCR技术并不看好。因为它不仅操作复杂,而且成本非常高,并不能得到普遍应用。     

PCR在检测人类发干性别中的应用

从1～2cm人发干中提取基因组DNA，以寡核苷酸yaxy4为引物，经过聚合酶链反应，扩增Y染色体特异的片段(446bp)。根据有无该片段的存在来确定发干的性别。这种方法取材方便，灵敏度高、易于推广。本还报道了利用本方法检测某案例中5根发干的性别，为侦破工作提供了线索。     

PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

PCR技术在检验医学中的应用

聚合酶链反应（Polymerase chaim rection，PCR）作为一项较新的科学技术检测方法，在检验医学领域中的发展及临床应用是有广阔前景的。为适应不同项目研究开发目的、不同的临床诊断对象需求，通过改变组成和反应条件及与其它先进技术相结合，PCR技术越来越被临床所重视。目前已有多种PCR技术，如多重PCR、不对称PCR、莹光标记PCR、[第一段]     

重组PCR快速基因定点突变的技术方法

聚合酶链式反应(PCR)是由Mullis等联合研制的一种在体外快速对特定DNA序列扩增的技术[1]。本研究通过重组PCR技术对growth associated protein-43(GAP-43)基因Ser41(丝氨酸)AGC定点突变为Ala41(甘氨酸)GCC,此方法比传统的体外基因突变技术更简单、快速而且经济。1材料和方法1.1     

RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展

随机扩增多态性DNA（random amplified pclymorphic DNA，RAPD）技术是1990年由Williams等发展起来的一项DNA分子标记技术。RAPD技术是建立在PCR技术的基础上．用一系列（通常数百个）不同的随机排列碱基序列的寡核苷酸单链（一般为10bp）作为引物，对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。     

PCR诊断的若干进展

建立在PCR技术基础上的基因检测,在微生物感染诊断中具有不可替代的重要作用,但因其存在操作复杂及产物污染易造成假阳性问题,阻碍了该技术在临床上的广泛应用。PCR检测主要有3个问题要解决:特异性问题——未感染者检测结果不应呈阳性;敏感性问题——感染者检测结果不应呈阴性;产物污染问     

PCR检测技术在尖锐湿疣诊断中的应用

探讨在尖锐湿疣临床诊断检测中的更灵敏的方法。免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。     

免疫PCR技术的研究进展

PCR技术是一种基因扩增技术，它具有快速、灵敏、特异的特点，已成为分子生物学和基因工程中的一个强有力的工具。1992年美国加州大学分子生物学家Sano等将免疫反应与PCR相结合建立了免疫PCR技术。该技术比ELISA的敏感度至少提高几个数量级，实现了免疫分析方法的一大突破，显示了良好的应用前景。现就免疫PCR技术的研究进展作一综述。     

重组PCR—一种快速体外基因重组技术

重组PCR是一种用于体外进行基因重组的简单、高效、快速技术,在基因重组过程中,不受载体和待连接DNA片段内部自身酶切位点的制约,连接时不依赖于限制性内切酶和连接酶,具有传统的DNA重组技术无法比拟的优势。     

新型原位PCR技术在HBVcccDNA检测中的应用

目的 通过利用环扩增方法检测在HBVcccDNA肝组织中的表达,明确HBVcccDNA在肝组织中的分布状况,为进一步研究HBVcccDNA在乙型肝炎的致病机制及探讨乙肝治疗的新途径提供分子病理学基础.方法 采用PSAD酶消化、滚环扩增方法及使用根据HBVcccDNA与HBVrcDNA结构上的差异而设计的地高辛标记的原位跨缺口引物进行原位PCR,然后用免疫组织化学方法进行显色,显微镜下观察HBVcccDNA在肝组织中表达分布,并对结果进行评价分析.结论 滚环扩增方法用来检测肝组织中HBVcccDNA的表达,具有敏感性高、特异性强的特点,对研究乙型肝炎致病机制和评价抗病毒药物的疗效及新药的研发等方面其有重要的意义.     

聚合酶链反应及其应用

聚合酶链反应(POlymerase chain reactioln,PCR),又称体外基因放大技术,是用耐热DNA多聚酶在体外系统中诱发一对引物间的DNA双链合成过程。即PCR产生的分子数在每一周期后增加一倍,这与体内DNA复制方式相似。经过20～30次循环后,可使目的基因片段成百万倍的扩增,使得对该基因片段的分析研究更为便利。     

DNA体外扩增诊断乙肝病毒X基因的研究

应用本室建立的聚合酶链反应（PCR）系统，利用20bp与21bp的一对特异寡核苷酸引物介导，扩增HBV-X基因区400bp片断，经凝胶电泳，紫外分析以及Southern印迹杂交表明，扩增产物正确，效果满意。     

采用PCR技术从高GC含量绿脓杆菌模板中扩增长片段外毒素A全基因

从高GC含量的模板中用PCR方法扩增长片段DNA序列是相当困难的。本室通过对PCR反应体系和条件的优化 ,成功地从绿脓杆菌高GC含量的染色体模板中扩增到了 1966bp的外毒素A(PseudomoneasaeruginosaexotoxinA ,PEA)全长结构基因 ,为实现PEA的高效表达奠定了基础。1　材料与方法1 1　绿脓杆菌PA10 3菌株染色体DNA和PCR引物的制备　　按常规方法提取绿脓杆菌PA10 3染色体DNA。参照Gray等公布的序列设计一对分别位于PEA结构基因两侧的引物。5′引物 :5′ GATCAGCCTCATCCTTCAC 3′(Tm =66) ;3′引物 :5′ GGTCGCGGCAGT…     

DMSO对PCR扩增反应的影响

为解决扩增δ－受体基因屡次失败的问题,观察了在PCR体系加入不同浓度DMSO时对DNA扩增反应的影响。结果表明：一定浓度在DMSO可显著提高PCR扩增的特异性和扩增效率。     

罗氏诊断与PCR技术

罗氏诊断拥有PCR(聚合酶链反应 )技术的全球专利权。它的发明在 1993年获得了诺贝尔化学奖。目前已经广泛应用于病毒学、妇女健康、微生物学、血液筛查、肿瘤学、基因组学等方面。CobasAmplicor是全球首个完全实现PCR扩增与检测自动化的桌面平台。它主要应用于疾病诊断、病毒载     

原位PCR及其在病理学中的应用

原位PCR(In situ PCR)技术是继PCR技术之后又发展起来的一门新技术。是将PCR的高效扩增与原位杂交技术的细胞定位相结合,在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行高效扩增再用特异性的探针作原位杂交检测。既能检出细胞内单拷贝及低拷贝的核酸序列,又能对含靶序列的组织细胞进行形态学分析。