现代分子生物学在医学检验中的应用进展

分子生物学是一门发展日新月异的现代边缘性学科,以核酸蛋白质等生物大分子作为主要研究对象,是现代基因检测及遗传病、肿瘤等疾病诊断行之有效的检测技术和辅助诊断方法,推动医学检验技术的突飞猛进。本文将概述PCR技术、生物纳米技术等现代分子生物学技术发展现状,分析临床医学检验中的应用进展并提出展望。     

PCR技术在DNA片段扩增的应用与意义

1985年,Mullis等人发明了PCR技术,短短十余年间,这一技术得到迅速发展和应用,由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。1985年,美国PE2cetus公司人类遗传研究室的Mullis等人发明了体外无限扩增核酸片段的聚合酶链式反应,即PCR技术。目前,PCR技术已在众多的研究领域得到广泛应用,如在基因克隆、基因定点突变、c DNA文库构建、基因测序、载体构建以及人类基因组计划等方面发挥着重要作用。在今天的"基因大战"中,新基因的发现与克隆已成为研究的热点。而扩增未知序列的PCR技术格外引人注目,许多新方法应运而生,本文旨在介绍这方面的研究进展。     

聚合酶链反应—单链构型多态性研究进展

随着DNA重组、核酸分子杂交、分子克隆和DNA序列测定等分子生物学技术的相继问世,生命科学也全面深入到探索基因结构和功能及相互关系作用方法,借以解释生命活动的规律,尤其在医学领域基因突变在人类疾病的作用得到空前重视,众多基因的突变与疾病的关系得到确定,尤为显著的是与遗传性和肿瘤性疾患相关的基因。因此,检测基因突变的工作已在基础及临床医学中得到广泛开展和应用。     

聚合酶链式反应的原理及法医学的应用

聚合酶链式反应(polymerase chain re-action,简称PCR)是近年来分子生物学领域一项革命性技术突破。其内容是进行DNA的体外扩增。利用PCR技术,在数小时内便可把需要检测的某个靶DNA片段扩增上万倍,使对该片段的检测,分离和结构分析等过程大大简化。因此,PCR技术自1985年建立以来,立即引起分子生物学领域的极大兴趣和关注。由于其方法不断完善和改进,短短几年时间,就已广泛应用于基础和应用研究等领域。应用PCR进行的基因扩增与应用研究,已成为九十年代生     

多重PCR技术在实验动物病原检测中的应用

多重PCR作为一种新型的分子生物学检测技术,具有高效、快捷、特异性和灵敏度高等优点,能够同时扩增出多个核酸片段,克服了普通PCR缺点,实现了对多种病原微生物的同时检测,为临床病原鉴别诊断、基因分型、耐药基因等领域的研究提供了新思路,具有较大的发展前景。笔者对多重PCR的原理及技术特点,多重PCR技术在实验动物病毒、细菌、寄生虫病原体和微生物耐药等方面进行综述,旨在为多重PCR技术应用在实验动物疫病病原体的检测提供参考依据。     

分子生物学技术在肝癌研究中应用

肝癌的发生是有其分子生物学基础的。自80年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子生物学研究,并取得了显著的成效。一类主要用于基因组DNA的检测,如肝癌基因和抑癌基因的定位克隆,比较基因组杂交,代表性差异分析;用于cD-NA或mRNA或mRNA水平的技术包括消减杂交、差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、DNA芯片及探针微列阵等。这些技术的应用为肝癌的分子生物学研究开拓了一个崭新的领域。一、DNA水平的研究 1.定位克隆癌基因和抑癌基因:利用各种DNA多态性标记对癌基因或抑癌基因进行染色体定     

用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫

目的：用cox1基因片段的PCR技术对亚洲带绦虫和牛带绦虫的快速鉴别。方法：用亚洲带绦虫和牛带绦虫线粒体cox1基因片段的特异性引物以及带绦虫cox1基因片段的通用引物,对贵州省都匀地区和从江地区的带绦虫虫卵和节片DNA进行常规PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测和核酸序列测定,并用NC-BI Blast对扩增产物的核酸序列与NCBI数据库中带绦虫的cox1基因进行比对。结果：5株都匀带绦虫DNA样品经亚洲带绦虫cox1基因片段的特异性引物PCR,均扩增出约260 bp的产物,PCR产物的核酸序列与NCBI数据库中亚洲带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为100%;2株从江带绦虫的DNA样品用亚洲带绦虫特异性引物和牛带绦虫特异性引物的PCR均未见扩增产物,而通用引物PCR则扩增出约1 000 bp的产物,核酸序列与NCBI数据库中牛带绦虫线粒体cox1基因片段的同源性为99%,在牛带绦虫特异性引物的结合位点存在一个碱基差异。结论：常规PCR扩增特异性的cox1基因片段可快速鉴定亚洲带绦虫;从江牛带绦虫株的cox1基因特异性片段部分存在变异,导致与特异性引物结合能力的差异,可采用cox1基因通用引物PCR结合测序进行鉴定。     

DNA体外扩增新技术—PCR法及其在疾病诊断上的应用(综述)

自1985年由美国 Cetus 公司人类遗传部的 Mulllis 小组研究发展起来的 DNA 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称 PCR)问世,到1987年耐高温 DNA 聚合酶的应用,使 DNA 扩增技术有了突破性进展。PCR 技术被逐渐应用于分子生物学的研究和临床医学的疾病诊断。1 PCR 技术的原理及方法以往进行基因扩增,多借助于微生物即体内扩增系统。特别是用 E.Coli 的质粒的     

聚合酶链反应及其在乙型肝炎研究中的应用

<正> 聚合酶链反立(Polymerase Chain Reaction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系。是在体外摸拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术。1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR。同年Saiki等首次报导应用PCR技术扩增3-球蛋白。现PCR方法已广泛应用于分子生物学研究、遗传性疾病诊断、传染病源检测、法医、考古等方面。并且有     

分子生物学技术在小儿细菌感染中的应用

分子生物学技术已用于临床医学的主要有:质粒分析、限制性核酸内切酶(简称限制酶)分析及 DNA 杂交。质粒分析(plasmid analysis)是一种比较简单的鉴定同一细菌不同菌株的快速方法,由于不同菌株常含有数目,大小不等的质粒,故在流行病学上追踪流行株及传染源很有价值。限制酶分析(restriction analysis)则更加精细,因限制酶能识别 DNA 上碱基排列的特殊顺序,可将DNA 切断成特异长度的若干片段,故可鉴别 DNA     

反义核酸技术及其在卵巢恶性肿瘤治疗中的应用

随着分子生物学及基因工程的发展 ,基因治疗已成为研究热点。反义核酸技术的概念是根据碱基互补原理 ,使用与目标靶的遗传物质 (DNA或mRNA)特定互补的短核苷酸片段封闭基因表达的方法。由于反义核酸技术是从生命的最根本点核酸角度着眼 ,对疾病的治疗有突破性的进展。1　反义核     

试论医院PCR实验室质量控制的若干问题

目的聚合酶链反应技术(PCR),自20世纪80年代中期以来已引起医学界的极大兴趣,经过许多学者多年的努力,将极微量的DNA片段特异地扩增至几十万倍,大大提高了对DNA分子样品的检测能力,其特异性好,灵敏度高,可靠性强,现已被广泛用于分子生物学及临床医学等领域.本文介绍了PCR技术的基本原理、特点及在临床医学检验工作中的应用情况与质量控制对策.     

聚合酶链反应的定量检测研究现状

随着分子生物学的发展与进步,聚合酶链反应(PCR)技术已成为该领域研究中不可缺少的工具。近年来,PCR特异性核酸定量的研究有了很大发展。 以往的核酸定量(QPCR)技术包括Southern、Northern和印迹杂交,因敏感性低无法检出基因剂量的微小变异,而PCR技术能够克服以上方法学的缺点。用PCR分析极微量的DNA,无论以何种标本为模板均可扩增并定量     

3个鼠源性肿瘤线粒体DNA编码区基因RFLP分析

目的了解线粒体DNA突变在肿瘤发生发展中的作用.方法应用PCR-限制性片段长度多态性分析技术对LA795、CT26和SCC891等3个肿瘤细胞系mtDNA编码区基因片段进行了分析.结果 mtDNA编码区的tRNAMet Glu Ⅰle及NDI基因核酸片段经HaeⅢ等16种内切酶消化后,这些肿瘤细胞系表现出完全相同的酶切图谱,其酶切格局及酶切片段大小完全相同.结论本组肿瘤细胞系mtDNA编码区基因结构相对稳定.     

母体血浆游离DNA分子浓度和片段完整性分析

目的应用荧光定量PCR技术研究母体血浆游离DNA分子的浓度和片段的完整性的分子生物学特性。方法提取本院2011年8月42例门诊16～20周妊娠女性和40例进行体检的非妊娠女性的血浆游离DNA,靶基因为lep-tin基因和SRY基因,用荧光定量PCR技术分别对其不同片段进行特异性扩增。leptin基因的扩增片段长度为80、202 bp,SRY基因为83、206 bp,观察其片段完整性和DNA浓度的变化。结果妊娠组和对照组leptin基因80 bp片段长度的DNA浓度平均值分别为681、439拷贝/ml(P<0.01);在片段长度为202 bp的DNA浓度平均值分别为157、91拷贝/ml,中位数为134、85拷贝/ml,表明均有显著性差异(P<0.01)。妊娠组胎儿SRY基因83 bp和206 bp的DNA浓度的平均值为94(38～369)拷贝/ml、80(71～88)拷贝/ml,与妊娠组leptin基因比较,有显著性差异。结论妊娠女性血浆DNA分子浓度明显高于非妊娠正常女性和胎儿游离DNA分子浓度。     

纳米技术—DNA操作

PCR的发现为生物学的研究开辟了一个崭新的领域 ,在分子生物学及其相关的领域取得了巨大进步。分子的生物学技术已成功应用于生物学、生物科技、医学、诊断学等 ,利用PCR扩增技术设计新的实验方法和分析扩增的DNA片段 ,根据DNA分子的性质、结构和潜在性的可计算方法 ,研究模拟活生物 ,构造人工纳米装置 ,如生物分子感应器和人造细胞     

Level and different segments of free DNA molecules in maternal plasma

目的 应用荧光定量PCR技术研究母体血浆游离DNA分子的浓度和片段的完整性的分子生物学特性.方法 提取本院2011年8月42例门诊16 ～20周妊娠女性和40例进行体检的非妊娠女性的血浆游离DNA,靶基因为lep-tin基因和SRY基因,用荧光定量PCR技术分别对其不同片段进行特异性扩增.leptin基因的扩增片段长度为80、202bp,SRY基因为83、206 bp,观察其片段完整性和DNA浓度的变化.结果 妊娠组和对照组leptin基因80 bp片段长度的DNA浓度平均值分别为681、439拷贝/ml(P＜0.01);在片段长度为202bp的DNA浓度平均值分别为157、91拷贝/ml,中位数为134、85拷贝/ml,表明均有显著性差异(P＜0.01).妊娠组胎儿SRY基因83 bp和206 bp的DNA浓度的平均值为94(38 ～369)拷贝/ml、80(71～88)拷贝/ml,与妊娠组leptin基因比较,有显著性差异.结论 妊娠女性血浆DNA分子浓度明显高于非妊娠正常女性和胎儿游离DNA分子浓度.     

从琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA方法的总结

<正>在分子生物学实验的操作中,许多情况下要利用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳观察、纯化和回收DNA片段。DNA片段回收是其中的重要步骤,根据实验的目的不同,回收的DNA可用于载体连接、基因重组、序列分析、探针制备等后续工作。DNA回收技术操作简单而迅速,并且能分离用其他方法(如密度梯度离心等)不能满意分离的DNA片段。在实际工作中,根据实验需求,准确、简便、快速、经济的DNA片段     

分子生物学技术在微生物检验中应用

在现代社会分子生物学被广泛的采用,微生物检验和分类逐渐提高到了一个新的水平。本文简要介绍了分子生物学技术在微生物检验和分类中的应用,包括DNA(G+C)mol%值、核酸杂交技术、核酸序列分析以及DNA分子标记技术等,以期为相关研究提供一定的理论参考。     

PCR技术在血液病诊断中的应用

多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术是一种快速、敏感的DNA体外扩增技术。能在几小时内将单个分子的核酸扩增几百万倍,对于遗传性疾病的分子诊断和分子病理学研究是一项重大的革命。这种方法所需的组织样本只需少量的RNA或DNA,甚至在单根头发丝,漱口液或一滴干血中进行分析。应用PCR技术可将基因组DNA进行扩增,亦适应于RNA的扩增,还可进行细胞内特异的核酸片段的扩增(原位PCR)。PCR技术在临床诊断中的应用已经深入到各个学科和领域。