糖基化终产物对人肾系膜细胞Fractalkine分泌的影响

目的 既往实验已观察到糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)可增加人肾系膜细胞(human renal mesangial cell,HRMC) Fractalkine (FKN) mRNA和蛋白的表达,现进一步探讨AGEs对HRMC FKN的趋化功能及分泌的影响.方法 运用体外制备的糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumin,AGE- BSA)干预HRMC,用Transwall小室装置检测HRMC趋化单核细胞的功能,用ELISA法检测HRMC上清液中FKN的蛋白含量.结果 1. AGE-BSA组HRMC趋化单核细胞数显著高于对照组,FKN中和抗体组HRMC趋化单核细胞数较AGE-BSA组显著减少;2. 随着AGE-BSA浓度的增高及干预时间的延长,细胞的FKN蛋白分泌水平随之增高,且显著高于对照组(P<0.01).结论 AGE-BSA可增强HRMC趋化单核细胞的功能,此效应可被FKN中和抗体部分抑制,且AGE-BSA呈时间和浓度依赖性增加HRMC FKN的蛋白分泌,提示AGEs可能部分通过FKN途径参与糖尿病肾病的发生发展.     

糖基化终产物通过其受体诱导人肾小球系膜细胞表达CTGF和FN

目的： 探讨体外培养条件下糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞(HRMCs）中结缔组织生长因子（CTGF）及纤维连接蛋白（FN）基因表达的影响及其可能的作用机制。方法: 将HRMCs与不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）和牛血清白蛋白（BSA）共同培养,或与同一质量浓度的AGE-BSA和BSA共同培养不同时间,以中和性抗RAGE抗体封闭细胞膜上糖基化终末产物受体（RAGE）;采用免疫印迹法（Western blotting）观察AGEs对HRMCs中RAGE表达的影响,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测CTGF、FN mRNA的表达。结果: 在HRMCs中存在少量RAGE的表达,AGE-BSA能够诱导HRMCs中RAGE的表达增加,并以时间和剂量依赖方式促进HRMCs中CTGF和FN的表达上调;CTGF、FN的表达水平在加入不同浓度（50、100、200、400 mg/L）的AGE-BSA 作用48 h后以及加入质量浓度为200 mg/L的 AGE-BSA 作用不同时间（12、24、48、72h）后,较相应质量浓度或时间的BSA组和空白对照组均明显升高（P＜0.05）;抗RAGE抗体干预后能够部分抑制AGE-BSA诱导CTGF及FN的表达,而人IgG没有这种作用。结论: AGEs可能通过RAGE诱导CTGF及FN的表达上调,是糖尿病肾病肾脏纤维化的可能机制。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1表达韵影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）表达的影响及其与细胞外基质（ECM）成分含量的关系。方法：体外培养正常大鼠肾系膜细胞，分别用糖化牛血清白蛋白（AGEs）及未经糖化的牛血清白蛋白（BSA）处理，以常规培养的肾系膜细胞作为对照，检测不同时间、不同浓度AGEs对纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原、PAI-1表达的影响。MTT法检测AGEs对系膜细胞增殖的作用，ELISA测定条件培养基中FN、Ⅳ型胶原及PAI-1蛋白含量，逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测系膜细胞PAI-1 mRNA的表达。结果：与相应浓度的BSA比较，AGEs（0—200mg／L）对系膜细胞增殖无明显影响，但可不同程度地刺激系膜细胞FN、Ⅳ型胶原、PAI-1蛋白的产生。RT—PCR检测显示，给予AGEs（100mg／L）的系膜细胞PAI-1 mRNA的表达明显增加（P〈0．01）。结论：AGEs促进系膜细胞PAI—1的表达，提示AGEs通过上调PAI-1的表达而减少细胞外基质降解，可能是糖尿病肾病细胞外基质积聚的原因之一。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1表达的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响及其与细胞外基质(ECM)成分含量的关系。方法:体外培养正常大鼠肾系膜细胞,分别用糖化牛血清白蛋白(AGEs)及未经糖化的牛血清白蛋白(BSA)处理,以常规培养的肾系膜细胞作为对照,检测不同时间、不同浓度AGEs对纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、PAI-1表达的影响。MTT法检测AGEs对系膜细胞增殖的作用,ELISA测定条件培养基中FN、Ⅳ型胶原及PAI-1蛋白含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测系膜细胞PAI-1mRNA的表达。结果:与相应浓度的BSA比较,AGEs(0-200mg/L)对系膜细胞增殖无明显影响,但可不同程度地刺激系膜细胞FN、Ⅳ型胶原、PAI-1蛋白的产生。RT-PCR检测显示,给予AGEs(100mg/L)的系膜细胞PAI-1mRNA的表达明显增加(P<0.01)。结论:AGEs促进系膜细胞PAI-1的表达,提示AGEs通过上调PAI-1的表达而减少细胞外基质降解,可能是糖尿病肾病细胞外基质积聚的原因之一。     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的：探讨糖基化终产物 (AGEs）)对人单核细胞源树突状细胞（MDCs）糖基化终产物受体（RAGE） 表达的影响。 方法： 用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞，经含rhGM-CSF（100 μg/L）和rhIL-4（50 μg/L）的RPMI-1640培养，使其分化为MDCs，采用RT-PCR和Western blotting法，观察糖基化-白蛋白（AGE-BSA）对MDCs RAGE mRNA和蛋白表达的影响，同时检测培养液上清中IFN-γ和IL-12的浓度。 结果： AGE-BSA诱导DCs RAGE mRNA和蛋白的表达（P＜0.05），高于空白对照组，并且明显促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌（P＜0.05）。BSA干预组与空白对照组相比差异无显著（P＞0.05）。 结论： AGEs能够上调DCs RAGE的表达，并且促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌，这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

糖基化终产物在糖尿病大鼠心肌病变中的作用

目的观察糖尿病心肌病变过程中心肌组织糖基化终产物（advanced glycosylation endproducts,AGEs）的变化,探讨AGEs对糖尿病大鼠心肌的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,随机分为对照组（CON）、糖尿病组（DM）和氨基胍治疗组（AG）,饲养12周。分别测定各组大鼠血糖、血清LDH、CK活性、心脏重量指数、血清果糖胺（FMN）及AGEs含量、电镜观察心肌超微结构。结果DM组大鼠血糖、血清LDH、CK活性、心脏重量指数、血清果糖胺（FMN）及AGEs含量明显高于CON组。超微结构显示心肌肌原纤维排列紊乱,间质胶原增生,微血管基底膜增厚,管腔狭窄。AG组大鼠血清LDH、CK活性、心脏重量指数、血清果糖胺（FMN）及AGEs含量明显降低。微血管基底膜增厚减轻,问质胶原减少,心肌细胞超微结构异常减轻。结论AGEs在糖尿病心肌改变的发生中起重要作用。     

糖基化终产物与心脑肾疾病的关系

８０年代初Ｇｅｒａｍｉ和Ｂｒｏｗｌｅｅ等首先报道糖尿病患者持久的高血糖状态会导致许多结构功能蛋白和核酸蛋白非酶糖基化，这在糖尿病慢性并发症的发生中占有重要地位，且与衰老过程密切相关。近两年来的研究表明,其病理意义比原来预计的更广泛。不仅与衰老、尿毒症与透析相关疾病和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ病密切相关,且与胞浆及核蛋白如转录因子、原癌基因和肿瘤抑制因子的糖基化有关,很可能是一种以前未发现的类似于蛋白质磷酸化的重要调控方式。本文就这一领域的国际研究动态并结合我们的初步研究结果作一报告。１糖基化终产物及其…     

糖基化终产物对糖尿病微血管病变的作用

糖尿病不仅是一种慢性终身性疾病,它又是多脏器疾病并累及多数脏器,已成为仅次于脑血管和肿瘤之后,第三位的常见病、多发病和慢性非传染性疾病.根据流行病学调查,糖尿病的发病率呈逐年上升的趋势.     

糖基化终产物与糖尿病血管并发症

糖尿病时糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)生成与蓄积不仅加速糖尿病本身的发展,还与糖尿病肾病、视网膜病、神经性疾病和心血管疾病等慢性并发症密切相关。AGEs与糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)相互作用诱导氧化应激,促进炎症反应,影响凝血系统,在糖尿病及其并发症的病理生理过程中起重要作用。抑制AGEs生成、交联结构及阻断AGEs与RAGE相互作用为寻找治疗糖尿病血管并发症的药物提供了新的途径。     

糖基化终产物与糖尿病血管并发症关系的研究进展

糖尿病是临床上一种常见病和多发病 ,血管并发症是糖尿病的主要致残及致死原因。流行病学调查资料表明 ,糖尿病患者发生动脉粥样硬化及危及生命的心血管并发症的危险性较常人增加 3- 4倍 ,而高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化对糖尿病血管并发症起了重要作用。大量的资料已证明 ,糖尿病患者体内存在着一种重要的毒性产物———糖基化终产物 (ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄ ｕｃｔｓ,ＡＧＥｓ)。本文对有关ＡＧＥｓ在糖尿病血管病变中致病作用的研究进展综述如下 :一、ＡＧＥｓ的生物化学特性及结构早在 1 91 …     

百令对慢性肾衰竭模型大鼠肾脏保护和肾结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察百令对5/6肾切除大鼠的肾脏保护作用及对肾结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨其延缓肾衰竭进展及抗纤维化的相关机制. 方法 50只SD大鼠随机取8只为假手术组,其余行5/6肾切除术.根据术后3周血肌酐(Scr)值分为模型组、天然虫草组(2.0 g·kg-1·d-1)、百令治疗组(2.0 g·kg-1·d-1)和百令高剂量组(3.0 g·kg-1·d-1).术后4周给药.治疗1个月后检测Scr、尿素氮(BUN)浓度;光镜下观察肾脏病理改变,免疫组化方法检测肾组织CTGF、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,采用图像分析系统进行定量分析. 结果 治疗后模型组大鼠Scr、BUN明显高于假手术组(P<0.01),肾小球与肾小管间质均有明显病理改变,CTGF、α-SMA的表达明显上调;而药物治疗组的Scr、BUN明显低于模型组(P<0.05),肾脏病理损伤减轻,CTGF、α-SMA的表达降低(P<0.05). 结论 百令能改善5/6肾切除大鼠的肾功能,减轻肾脏病理损害,其机制可能与下调肾组织CTGF的表达有关.     

低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化

目的：观察低氧对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法： 单侧输尿管结扎（UUO）9 d大鼠动物模型，用RT-PCR方法检测肾组织中低氧标记分子-低氧诱导因子（HIF-1α）的mRNA水平，免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF-1α和CTGF的表达及部位，Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验，正常大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）分别置于低氧（1%O2）和正常氧条件下培养6 h，应用RT-PCR和Western蛋白印迹检测CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果： 对照组肾组织未能检测到HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白表达；模型组肾组织有高水平HIF-1α mRNA，并出现HIF-1α蛋白表达，主要分布在小管-间质细胞；CTGF蛋白与HIF-1α蛋白表达部位及程度一致；低氧（1% O2）培养刺激NRK-49F细胞表达CTGF mRNA和蛋白。结论： 低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。     

结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及其调控

CTGF, a member of the CCN family of immediate early genes, is a recently discovered profibrotic growth factor, which is involved in many pathophysiologic procedures. CTGF acts as a downstreame ffector of TGF-β acting on interstitial ceils to enhance the progression of fibrotic renal diseases. It has been shown that CTGF gene expression can be induced or blocked by some kinds of cytokine and drugs. It is an interesting candidate target for future intervention strategies of renal interstitial fibrosis.     

糖基化终产物刺激大鼠骨髓内皮细胞表达细胞间粘附分子-1的机制探讨

目的:探讨糖基化终产物(AGEs)致内皮细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)与自由基产生之间的关系。方法:内皮细胞(EC)用抗AGEs抗体、抗IL-1多抗、N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理1 h后AGEs作用6 h,测定IL-1、超氧化物歧化酶(SOD)、ICAM-1、内皮细胞-中性粒细胞粘附率。结果:AGEs刺激后ICAM-1表达增加[吸光度(A)为0.65-0.14 vs 0.11-0.02]的内皮细胞SOD活性降低[(0.69-0.19)10³U/L vs(1.71-0.42)10³U/L]。ICAM-1的增加可被抗AGEs抗体[吸光度(A)为(0.12-0.01)]、NAC[吸光度(A)为(0.11-0.05)]和抗ICAM-1抗体[吸光度(A)为(0.10-0.04)]抑制。外源性IL-1也可刺激内皮细胞表达ICAM-1[吸光度(A)为(0.72-0.23)]。结论:AGEs刺激内皮细胞表达ICAM-1可能与其导致细胞自由基的产生有关;AGEs还可通过刺激其他细胞产生细胞因子间接作用于EC,参与促进ICAM-1表达。     

结缔组织生长因子在转化生长因子β诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的可能作用。方法： 将NRK52E肾小管上皮细胞分组处理，光镜、扫描电镜、透射电镜观察细胞形态的改变，细胞免疫组化检测ɑ-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和细胞角蛋白-18的表达，RT-PCR和Western blot检测Ⅰ型胶原的表达。 结果：TGF-β1 10 μg/L作用3 d，NRK52E小管上皮细胞失去正常的椭圆形，变得肥大，胞体拉长，扫描电镜下，见成纤维细胞状，失去上皮细胞特有的顶端-基底极性和表面的微绒毛结构，透射电镜下胞浆中见到微丝和致密体结构，骨架标志上肾小管上皮细胞较具特征性的细胞角蛋白-18表达减少,肌成纤维细胞标志性的α-SMA表达增多，Ⅰ型胶原分泌增多；加入TGF-β1中和抗体和CTGF反义寡核苷酸可以大部分阻断TGF-β的作用，而正义的CTGF寡核苷酸不能阻断TGF-β的作用。 结论： NRK52E细胞中，CTGF作为TGF-β的下游效应因子，介导了TGF-β诱导的肾小管上皮细胞转分化。