乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关研究

目的探讨乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对155例慢性HBVC基因感染者,包括78例肝细胞癌(HCC)、36例肝硬化(LC)和41例慢性肝炎(CH)血清样本进行C基因亚型和病毒基本核心启动子(BCP)以及前C区(PC)变异检测。结果在HCC、LC和CH研究组中C1的分布均高于C2,同时C1亚型有较高的BCP变异,C2亚型有较高的PC变异(P<0.030)。结论慢性HBVC基因型患者HCC的高发生率和有较严重的肝脏损害可能与其中C1分布较多有关,因此HBVC基因型患者进行亚型鉴定能更好地评估HBV基因型系列对慢性HBV感染疾病进展和临床结局的影响。     

乙型肝炎病毒 B、C 基因型与临床表现

目的：研究广东地区乙型肝炎病毒基因型分布情况,B、C 基因型与乙型肝炎患者临床表现之间的关系。方法：回顾性分析172例慢性乙型肝炎病毒患者[慢性乙型病毒性肝炎（CHB）、乙型肝炎后肝硬化（LC）、原发性肝癌（HCC）]的乙型肝炎病毒基因分型结果,并根据基因分型结果进行分组,比较 B、C基因型患者的临床表现、HBeAg 定性、HBV-DNA 定量、ALT 及 AST 结果。结果：172例患者的乙肝病毒型分别为 B 型94例（54.7％）、C 型69例（40.1％）、D 型3例（1.7％）、未分型6例（3.5％）;C 型在 LC 组、HCC组中的比例与 CHB 组比较,差异有统计学意义（P﹤0.05）;C 型的 HBeAg 阳性率高于 B 型（P﹤0.05）;B、C型两组的 ALT、AST 差异有显著统计学意义（P﹤0.01）;两组基因型间 HBV-DNA 水平的差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论：广东地区 HBV 感染以 B、C 基因型为主,以 B 型居高;C 基因型肝功能损害更严重,发展为肝硬化、肝癌的可能性更大,感染不同 HBV 基因型与 HBV-DNA 水平无明显相关。     

四川省自贡市159例慢性HBV感染者的HBV基因型分布及其与疾病进展关联研究

目的 了解四川省自贡市慢性HBV感染者的HBV基因型分布情况,并探讨其与慢性乙肝患者病情进展的关系。方法 收集2015年9月—2018年6月159例经本院确诊的慢性HBV感染者,且HBV-DNA水平含量在 10³ IU/mL以上,根据疾病诊断将慢性HBV感染者分为三组：慢性乙型肝炎组（CHB）、乙肝相关性肝硬化组（LC）、乙肝相关性肝癌组（HCC）。采用多通道实时荧光探针PCR法检测乙肝病毒的3种基因型（B、C、D型）,同时检测HBV-DNA及HBV的五项标记物。采用SPSS17.0软件对数据进行统计分析。结果 本文研究显示B基因型115例（72.3%）,C基因型43例（27.0%）,B/C混合型1例（0.6%）,D基因型0例;B基因型的HBV-DNA水平高于C基因型（P<0.05）;慢性HBV感染患者中,男、女组均以B基因型为主,B基因型和C基因型分布在年龄、性别、HBeAg阳性率方面比较差异无统计学意义（P>0.05）;乙肝相关性肝癌组（HCC）的C基因型比例明显高于CHB组和LC组（P<0.05）。结论 自贡市HBV主要流行B基因型,其次是C基因型;B基因型和C基因型的慢性HBV感染患者进展为肝硬化或肝癌可能存在一定的差异。     

不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型

目的 探讨不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型情况。方法 A组选择15个家系中54份HBV感染者血清,其中HBV携带者（ASC）30例,慢性乙型肝炎（CHB）7例,肝硬化（LC）13例,肝细胞癌（HCC）4例。B组选择非家族聚集性乙肝感染者60份血清,其中HBV携带者（ASC）36例,慢性乙型肝炎（CHB）10例,肝硬化（LC）9例,肝细胞癌（HCC）5例;应用HBV基因型特异性引物进行聚合酶链反应,经琼脂糖凝胶电泳分析其基因型并进行HBVDNA定量检测。结果 114份血清标本中109份HBVDNA阳性,A组有5份血清HBVDNA检测失败,余49份血清标本中,HBV基因型为C型46例,B/C混合型3例,未检测到其他基因型。B组60份血清标本中,HBV基因型为C型44例,B/C混合型5例,B型11例。两组相比在不同临床类型分布方面均无显著差异。但在肝硬化及肝细胞癌患者中,C型所占比例高,分别为80%和100%。结论 不良结局家族聚集性乙肝感染者,以C型为主,基因型与乙肝病情发展有一定关系。     

乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的 进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者.包括112例HCC患者(HCC组),129例无症状携带者(ASC组),70例肝硬化患者(LC组)和90例慢性肝炎患者(CH组)进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测.结果 401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染,220例发生C型感染.HCC组中C型分布高于其他3个疾病组;C基因型感染者BCP变异多于B基因型;B基因型感染者PC变异多于C基因型;同时BCP变异发生率随着病程进展而递增:在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22.4%、35.0%、50.0%、74.1%.C1与C2亚型相比,C1有较高BCP变异阳性率,而C2有较高PC变异发生率.结论 BCP变异与肝病进程存在依从关系,因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义.     

慢性乙型肝炎病毒感染者血清TNF-α和IFN-γ水平分析

目的：分析不同临床阶段的慢性HBV感染者血清TNF-α和IFN-γ水平差异,探讨其水平差异与慢性HBV感染结局的关系。方法：选择慢性乙型肝炎（CHB）87例,乙型肝炎肝硬化（LC）38例,HBV相关肝细胞癌（HCC）34例,应用ELISA法分别检测其血清IFN-γ和TNF-α水平。结果：在所观察的3组中,TNF-α水平均有明显升高,其中LC组和HCC组均显著高于CHB组（P〈0.001）,但LC组和HCC组间无显著性差异;而CHB、LC和HCC3组间血清IFN-γ水平无显著性差异（P=0.208）。结论：血清TNF-α水平可能与慢性HBV感染的结局相关,而IFN-γ水平与慢性HBV感染结局无明显相关性。     

新疆331例HBV感染患者基因型及临床特征分析

目的探讨新疆慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者基因型分布情况和临床特征。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法,分析2007年在新疆医科大学第一附属医院就诊的331例慢性HBV感染者基因型与临床特点。结果 331例慢性HBV感染者中,HBV B基因型占14.8%（49/331）,C基因型占72.8%（241/331）,C/D重组体占9.7%（32/331）,D基因型占2.7%（9/331）。4种基因型中,C基因型所占比例明显高于B基因型、C/D重组体和D基因型。C基因型在乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性、慢性乙型肝炎（CH）、乙肝肝硬化（LC）、乙肝肝癌（HCC）患者中所占比例明显高于B基因型、C/D重组体、D基因型,差异均有统计学意义（P〈0.05）。4种基因型在性别、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、血清白蛋白（ALB）等方面比较,差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论新疆地区HBV感染者,HBV基因型以C基因型为主,慢性乙型肝炎C基因型病情重,预后差。     

青岛地区乙型肝炎病毒基因型分布及其与肝细胞癌的相关性

目的了解青岛地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布特征,探讨其与肝细胞癌的相关性。方法选取HBVDNA阳性患者共112例,其中慢性乙型肝炎（CHB）患者40例、肝硬化（LC）患者38例、肝细胞癌（HCC）患者34例,应用荧光PCR（探针）法检测HBV基因型。结果112例患者中,HBV基因型B型1例（0.9%）,C型95例（84.8%）,非B非C型16例（14.3%）,HBV基因型B型、C型的分布频率在3组之间的差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论青岛地区HBV基因型以C型为主,未发现HBV基因型B型、C型与肝细胞癌的发生存在相关性。     

乙型肝炎病毒感染临床结局与HLA-DR基因的相关性研究

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染临床结局与人类白细胞抗原DR（HLA-DR）基因间的相关性。方法：选择急性乙型肝炎（AHB）76例,慢性乙型肝炎（CHB）102例,乙肝后肝硬化（LC）38例,肝细胞癌（HCC）34例,用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）检测HLA-DR基因型。结果：HLA-DR1基因型频率在LC和HCC组显著高于AHB组（χ^2=8.495,P=0.004）,较CHB组也显著升高（χ^2=5.667,P=0.017）;HLA-DR8基因型发生频率在CHB、LC和HCC三个HBV慢性感染组间无显著差异（P=0.034）,而在AHB组显著低于HBV慢性感染组（χ^2=8.830,P=0.003）;HLA-DR13基因型频率在AHB组显著高于CHB组（χ^2=26.876,P=0.000）及LC和HCC组（χ^2=6.413,P=0.011）,而LC和HCC组又高于CHB组（χc^2=6.479,Pc=0.011）。结论：HLA-DR1基因型可能与HBV相关的肝硬化和肝细胞癌的发生有关,而HLA-DR8基因型则对HBV感染的慢性化有促进作用,HLA-DR13基因型可有助于HBV的清除,但在HLA-DR13阳性的HBV慢性感染者发生肝硬化和肝细胞癌的风险增加。     

HBV C基因启动子变异及基因型与肝硬化及原发性肝癌的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒C基因启动子(CP)和前C区基因变异及HBV基因型与肝硬化及原发性肝癌(HCC)的关系.方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH),39例活动性肝硬化(LC),34例HCC患者血清HBV S基因序列,确定其基因型,测定HBV CP和前C区序列,确定其变异状况.结果 HCC、LC患者CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)发生率(82.4%、71.8%)显著高于CH患者(45.5%)(P＜0.01、P＜0.01);HCC、LC患者C基因型检出率(70.6%、69.2%)显著高于CH患者(43.2%)(P值均＜0.05).结论 乙型肝炎病毒CP双变异、C基因型与HCC、LC密切相关.     

氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响

目的：研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用,并初步探讨其作用机制。方法：以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ＩＣＲ－ＴｇＮ（ＨＢＶａｄｒ１．２）ＳＭＭＵ 为动物模型,运用ＥＬＩＳＡ和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果：分别予氧化苦参碱１００, ２００, ３００ ｍ ｇ／ｋｇ 腹腔注射,１次／ｄ,３０ ｄ 后,乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较空白对照组（予等体积生理盐水腹腔注射）均有明显的下降,且对两者作用一致;进一步的研究表明氧化苦参碱２００ ｍ ｇ／ｋｇ 作用１０ ｄ,２０ ｄ 时小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较治疗前有明显的下降。结论：氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量,有抗乙型肝炎病毒作用。     

乙肝母婴阻断中婴幼儿隐匿性 HBV 感染研究

目的：研究乙肝母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染情况和影响因素。方法通过深圳市疫苗监测和接种网络,收集223对乙肝母婴阻断人群的血清样本,进行HBV血清学和分子生物学检测,分析隐匿性感染对传统HBV母婴阻断效果评价标准的影响;并分析母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染的因素。结果血清学结果显示223例婴幼儿接受乙肝母婴阻断后,212例HBbAg （＋）,传统血清学结果计算HBV母婴阻断成功率为95.1％（212／223）;分子生物学筛查显示,183例HBV－DNA（－）,40例HBV－DNA（＋）,该方法计算HBV母婴阻断成功率为82.1％（183／223）,两者差异有统计学意义（P＜0.05）。孕产妇血清HBV－DNA水平与所产婴幼儿隐匿性感染相关性分析显示,孕产妇血清HBV－DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关;31例隐匿性感染的婴幼儿中有12例病毒S区“a”抗原决定簇出现点突变;而6例血清型HBsAg（＋）的病例S区“a”抗原决定簇没有发生突变,病毒突变对血清学漏检差异有统计学意义（礸2＝7.025,P＝0.020）。结论隐匿性感染在HBV母婴阻断婴幼儿群体中存在一定的流行趋势,并对HBV母婴阻断成功构成了威胁;病毒突变和孕产妇血清HBV－DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关。     

HBV基因型在HBV感染性肝癌及慢性HBV感染自然史不同阶段的分布

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型在HBV相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及慢性HBV感染自然史不同阶段的分布。方法选择广西桂北地区46例HBV感染相关性HCC患者,慢性HBV感染自然史不同阶段者共90例,通过实时荧光定量PCR鉴定HBV基因型。临床实验室检查结果和病理资料摘抄自患者病案。结果本地区慢性HBV感染者中基因型B占77.8%,基因型C占18.9%,非B非C占3.3%;HCC中基因型B占78.3%,基因型C占21.7%,慢性HBV感染者和HCC之间的基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。慢性HBV感染不同阶段者之间的基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。慢性HBV感染者中基因型B、C比较,临床资料差异无统计学意义(P>0.05),HCC中基因型B、C间HBV-DNA比较差异有统计学意义(P<0.01)。慢性HBV感染不同阶段组和HCC组比较,ALT、AST、TBIL、ALB、年龄,性别差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广西桂北地区的慢性HBV感染者和HBV相关性HCC以基因型B为主,基因型在HBV感染自然史不同阶段和HCC对比分布无差别。基因型C的HBV-DNA水平更高。     

乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ　ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ　Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。     

HBV-DNA与其病毒免疫标志物的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV-DNA与病毒免疫标志物的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对568份HBV感染者血清中HBV-DNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果:HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组HBV-DNA阳性率约为98.9%;HBsAg、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为65.4%;HBsAb、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为13.9%;三组间HBV-DNA阳性率有明显差异(P<0.01)。HBeAg阳性标本中HBV-DNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBV-DNA的符合率最高,为77.6%。结论:检测HBV-DNA含量结合血清病毒标志物对乙型肝炎的临床诊断治疗以及病情判断有重要意义。     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

乙肝DNA聚合酶在187例乙型肝炎病毒感染的各类肝病中的检测

采用免疫沉淀法对187例乙肝病毒感染患者作了DNA聚合酶(DNA--P)的测定。在各类肝炎中DNA—P的阳性检出率以慢活肝最高为66.6％,依次为急性肝炎45％,携带者33.5％,慢迁肝31.5％。本文分析了乙肝的抗原抗体系统与DNA—P检出率的关系。经统计学处理,DNA—P检出率与HBsAg滴度增高呈正相关γs=0.99,P<0.01。HBeAg阳性组DNA—P检出率为62.4％,抗—HBe阳性组DNA—P检出率为29.5％,抗—HBs阳性8例、DNA—P均为阴性。抗—HBc—IgM强阳性组DNA—P检出率为86.4％。作者认为1/3无症状携带者DNA—P活力增高表明病毒在复制,因此携带者在流行病学上的意义不可忽视。又鉴于18例抗—HBe阳性血清DNA—P活力增高,因此在判断HBeAg~-/抗—HBe~+患者病毒复制情况时,应予慎重。     

乙肝病毒携带者羊水穿刺后羊水中HBV-DNA拷贝数分析

目的 研究乙肝病毒携带者外周血HBV-DNA阳性与羊水HBV-DNA阳性的关系,以及是否经过胎盘穿刺对羊水HBV-DNA拷贝数的影响.方法 2011年10月~2012年10月有产前诊断指征需要进行羊水穿刺的乙肝病毒携带者孕妇,在离心取细胞沉淀培养后的羊水上清,测量羊水上清的HBV-DNA拷贝数;并与其外周血乙肝DNA拷贝数做统计学对比.以及比较是否经过胎盘对羊水乙肝DNA拷贝数的影响.结果 外周血HBV-DNA阳性的孕妇,其羊水HBV-DNA阳性率明显高于外周血HBV-DNA阴性的孕妇.结论 经过胎盘穿刺对羊水HBV-DNA阳性率的影响无统计学意义.