姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响

目的研究姜黄素（Cur）衍生物对K562细胞酪氨酸酶激活性的影响,从中筛选酪氨酸激酶（PTKs）抑制剂。方法以PGT[聚谷氨酸钠∶酪氨酸（4∶1）]为激酶反应底物包被96孔酶标板,以磷酸化酪氨酸特异性单克隆抗体为第一抗体,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测反应体系中加入的K562细胞裂解液PTKs对反应底物PGT的酪氨酸残基磷酸化的程度,以此测定K562细胞裂解液中的PTKs活性。在此反应体系中加入不同浓度的Cur衍生物,观察对PTKs活性的影响。结果对Cur衍生物进行筛选,得到4种PTKs抑制剂,分别为Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824。4个Cur衍生物对PTKs活性的抑制均明显强于Cur,且呈量效、时效关系。结论 Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824具有显著的PTKs活性抑制作用。     

苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

抗ABL胞内抗体对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响

目的:观察人慢性粒细胞白血病(CML)细胞转导抗ABL胞内抗体基因后,对其酪氨酸激酶活性的影响。方法:构建逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP,转导K562细胞,分选eGFP 的细胞,用RT-PCR检测胞内抗体mRNA的表达,观察细胞内BCR/ABL、c-ABL酪氨酸激酶活性及细胞总蛋白酪氨酸激酶活性的变化。结果:获得表达胞内抗体的K562细胞:K562-ib-eGFP。RT-PCR证实胞内抗体mRNA在K562-ib-eGFP细胞内表达。与对照组相比,K562-ib-eGFP细胞内BCR/ABL和c-ABL蛋白酪氨酸激酶活性及总蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑制。结论:转导抗ABL胞内抗体能有效降低CML细胞内ABL酪氨酸激酶活性,为进一步研究打下基础。     

cDNA表达点阵研究苦参碱诱导K562细胞凋亡基因表达的改变

1　材料和方法1.1　材料　 Atlas Human Apotosis Array kit (Clontech产品 )由美国加州希望城国家医学中心 Dr. L i惠赠 ,[α- 32 P]d ATP购自北京亚辉公司 ,苦参碱购自陕西天奇植物化学有限公司 ,K5 6 2细胞购自本校免疫学教研室 .1.2　方法　将生长状态良好细胞分为实验组和对照组 ,实验组用 0 .2 g· L- 1 苦参碱溶液处理 ,对照组细胞不做任何处理 ,3d换液 1次 .分别收集对照组及苦参碱作用 7d实验组细胞 ,提取总 RNA,紫外分光光度仪检测纯度、RNA甲醛变性凝胶电泳检测完整性后 ,冻存于 - 70℃备用 .按说明书富集两组总 RNA中…     

苦参碱作用K562细胞表面分化抗原表型的改变

近年来 ,肿瘤诱导分化剂的研究日渐增多 ,从中药和天然药物中寻找和提取诱导分化剂是一种新途径。苦参碱是传统中药苦参的有效成分 ,文献报道具有抗癌活性[1] ,对白血病细胞有抑制生长和诱导分化作用 [2 ]。本课题组在前期研究的基础上 [3,4 ]通过流式细胞仪检测进一步表明 :一定浓度的苦参碱可诱导 K5 62细胞向成熟方向分化 ,并具有多向诱导分化作用。1　材料与方法1 .1　苦参碱 :纯度 99% ,由实验室自备。1 .2　细胞培养 :K5 62细胞在含 1 0 %新生小牛血清的 RMPI- 1 640培养液中传代培养。1 .3　苦参碱对 K5 62细胞的作用 :收集对数生…     

基因芯片研究苦参碱诱导K562细胞基因表达谱变化

0 引言苦参碱可影响白血病K562细胞增殖周期达到抑制肿瘤细胞增殖的作用[1],但具体机制不详. 我们拟用cDNA表达点阵研究苦参碱作用下的K562细胞周期基因表达变化情况,明确苦参碱导致K562细胞增殖周期变化的内部机制.     

苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡

目的 体外研究苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随的细胞凋亡改变.方法 体外培养K562细胞,采用不同浓度的苦参碱诱导K562细胞4 d.分别采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察诱导前后细胞的形态学和超微结构改变,进一步采用免疫细胞化学方法检测细胞周期调控蛋白p27kipl表达变化.结果 与阴性对照组K562细胞相比,0.10/gL浓度的苦参碱诱导后K562细胞形态学和超微结构均显示有凋亡特征,同时细胞内p27kipl蛋向表达明显增加.结论 苦参碱在体外诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡.可能与p27kipl蛋白表达增加相关.     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

苦参碱诱导K562细胞分化与STAT3基因表达水平研究

目的:观察苦参碱对人慢性粒细胞白血病K562细胞的体外增值情况,探索潜在的分子机制。方法:显微镜下查看苦参碱对K562细胞的影响,联苯胺染色测定K562细胞的分化趋向,采用MTT法测定K562细胞在用药后的增殖抑制效应,通过流式细胞术以及双标记法测定K562细胞的周期变化和凋亡作用。结果:相较于阴性对照组,当苦参碱为0.05、0.10和0.20 mg/mL,K562细胞均呈现红系分化趋势,以0.05 mg/mL最为突出。MTT结果表明0.2、0.5和1.0 mg/mL对K562细胞表现出的生长抑制率依次为26.15%、45.90%和63.52%(P0.01),有效浓度0.6 mg/mL。苦参碱能够将K562细胞定格于S期,抑制有丝分裂,诱导K562细胞快速地凋亡,0.2、0.5和1.0 mg/mL,对K562细胞的凋亡率依次为5.30%、62.13%与56.73%,明显高于对照组细胞的1.67%(P0.01)。结论:针对体外增殖的人慢粒K562细胞,苦参碱有明显的抑制效果,可诱导细胞红系分化,促进早期凋亡。     

苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl-6表达上调

0　引言　自 2 0世纪 80年代即发现苦参碱具有抗鼠肿瘤的活性[1 ] .最近 ,有人发现它能抑制人红白血病 K5 6 2细胞增殖 [2 ] ,未见有关引起细胞凋亡及其机制的报道 .我们研究发现 ,苦参碱可诱导 K5 6 2细胞凋亡相关基因 bcl- 6表达上调、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达受抑 .1　材料和方法1.1　细胞培养　人红白血病细胞株 K5 6 2接种于含 10 0m L· L- 1胎牛血清的 RPMI16 40培养液中 ,置于 37℃、饱和湿度、5 0 m L·L- 1 CO2 孵箱内培养 ,3d换液、传代 1次 .1.2　药品和试剂　苦参碱 (matrine)购自西安市天其植物化学药品公司 (纯度 >…     

苦参碱对K562细胞骨架的作用观察

目的：从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法：采用微管吮吸技术和基因芯片技术分析苦参碱处理前后K562细胞粘弹系数和细胞骨架蛋白基因表达的改变。结果：0.1mg/ml苦参碱作用K562细胞24h后粘弹系数下降，细胞骨架类基因prefoldin 与ezrin 的mRNA表达增强。结论：苦参碱能够导致K562细胞的细胞骨架发生变化。     

抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体抑制K562细胞体外生长

目的:观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其体外生长的影响。方法:通过表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的模型:K562-ibE-eGFP细胞,观察该细胞与对照细胞在有血清培养条件下的细胞生长和无血清培养条件下细胞活力,并观察无血清培养24h细胞形态学变化。结果:与对照组相比,K562-ibE-eGFP细胞在有血清培养条件下生长受抑制,在无血清培养条件下细胞活力显著下降,并且无血清培养24h细胞出现早期凋亡形态变化。结论:通过转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体的方法能抑制慢性粒细胞白血病细胞体外生长,并促进其在无血清条件诱导下凋亡,这可能是细胞内酪氨酸激酶活性降低,BCR/ABL信号途径被阻断,逆转了BCR/ABL对细胞生长和凋亡的影响作用。     

细胞外信号调解激酶对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡影响的研究

目的:探讨细胞外信号调解激酶(ERK)对蟾蜍灵诱导白血病细胞凋亡的影响.方法:形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:0.5μmol/L蟾蜍灵作用K562细胞24h诱导典型的细胞凋亡,预先用ERK抑制剂PD98059处理细胞1 h,明显增加蟾蜍灵诱导的细胞凋亡率(P＜0.05);而用佛波酯预先处理后,明显拮抗蟾蜍灵的作用(P＜0.05).结论:ERK负向调节蟾蜍灵诱导的K562细胞凋亡过程.     

CGI-100基因在苦参碱诱导K562细胞分化和凋亡中的作用研究

目的了解功能未知的CGI-100基因在苦参碱诱导K562细胞分化和凋亡中的作用研究。方法利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测苦参碱作用前后K562细胞中CGI-100基因的表达情况。结果在苦参碱作用K562细胞后CGI-100基因表达下调。结论不同浓度不同作用时间下苦参碱能使K562细胞中CGI-100基因表达下降。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨酪氨酸激酶(TPK)抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响. 方法:取对数生长期K562细胞,分4组培养.Ⅰ组不加任何药物,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别加0.5 μmol/L、1 μmol/L和2 μmol/L 的STI571,继续培养5 d.每d行细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,连测5 d.培养36 h时,取细胞,双缩脲法检测细胞蛋白含量,采取蛋白免疫印迹法进行Procaspase-3及Bcl-xL检测.结果:Ⅱ组、Ⅲ组细胞数低于同-时间段Ⅰ组细胞数(P＜0.05),但高于Ⅳ组细胞数(P＜0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组Procaspase-3和Bcl-xL蛋白表达降低(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比,Ⅳ组2者表达量更低(P＜0.01).结论:STI571通过下调Bcl-xL,激活Procaspase-3,诱导K562细胞凋亡,从而抑制K562细胞的生长.