鞘内注射ω-芋螺毒素S03对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG细胞内Ca~(2+)含量的影响

目的ω-芋螺毒素SO3是通过分子生物学手段从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。观察鞘内注射(it)ω-芋螺毒素SO3对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CC I模型)所致神经痛的镇痛作用,以及对背根神经节(DRG)细胞内Ca2+含量的影响。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组,即正常对照组(N组)、CC I后14 d组(C组)、CC I 14 d it生理盐水组(CN组)、CC I 14 d it SO3 600 ng组(CS 1组)和CC I 7 d后连续鞘内注射SO3 30 ng.h-1共7 d组(CS 7组)。观察各组动物热痛觉过敏及机械刺激痛觉异常的反应阈值,并测定DRG细胞内Ca2+含量。结果CC I 14 d时结扎侧与非结扎侧热及机械刺激痛阈值均下降,同时DRG细胞内Ca2+含量也升高。it SO3后,结扎侧及非结扎侧痛阈值均升高,而DRG细胞内Ca2+含量降低。结论it SO3对慢性神经痛有镇痛作用,同时可以抑制CC I引起的DRG细胞内Ca2+含量增加,提示DRG细胞N型Ca2+电流在此伤害性信息传递中起作用。     

新型镇痛药ω-芋螺毒素的合成等效物Ziconotide

ω-芋螺毒素的合成等效物Ziconotide作为一种新型非吗啡类镇痛剂,是首个应用于临床的具有神经元特异性的N-型电压敏感型性钙通道阻滞剂.大量临床前和临床资料证明,通过鞘内注射Ziconotide治疗严重慢性疼痛,可缓解其他治疗手段包括鞘内注射吗啡无效的疼痛;且长时间使用该药物不会产生耐受性和成瘾性.     

鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对神经病理痛大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响

目的:观察脊髓水平GABA转运体-1(γ-aminobutyric acid transporter-1,GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(chronic constriction injury,CCI)大鼠机械痛敏和热痛敏以及Fos蛋白表达的影响,探讨NO-711抗伤害性的可能机制。方法:雄性SD大鼠84只,随机分为4组(n=21):假手术生理盐水组、假手术抑制剂组、神经损伤生理盐水组和神经损伤抑制剂组。各组大鼠CCI前5 d进行鞘内置管,在术前测定基础机械性缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal laten-cy,TWL)及Fos蛋白的表达,CCI后5 d鞘内注射100μg NO-711或生理盐水,测定节扎前、给药前、给药后0.5,1,2,4和8 h大鼠MWL和TWL及Fos蛋白的表达。结果:与给药前和神经损伤生理盐水组相比,神经损伤抑制剂组大鼠在给药后机械痛敏和热痛敏以及Fos蛋白的表达均逐渐降低,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平,在给药后1 h时作用最明显,并一直持续到给药后4 h...     

GABA_A受体部分介导丙泊酚在大鼠脊髓水平的抗伤害作用

目的研究丙泊酚在脊髓水平对大鼠伤害性感受的影响及GABAA受体在其中可能的作用。方法Sprague-Daw-ley(SD)♀大鼠随机分组,丙泊酚(Propofol,Pro)和荷包牡丹碱(B icucu lline,B ic)采用鞘内注射(ith)。行为学实验采用热板法和福尔马林实验,分别以舔后爪潜伏时间(Hot-p latelatency,HPL)和疼痛(累计)评分为指标。免疫组化方法观察丙泊酚鞘内给药对福尔马林单侧足底皮下注射诱发的脊髓背角Fos蛋白表达的影响。结果行为学部分:在两种疼痛模型中,鞘内注射丙泊酚(10 g.L-1)产生镇痛作用(P<0.01)。在热板法实验中,鞘内注射丙泊酚(10 g.L-1)产生的镇痛作用在10、20、30和40 min时间点可被鞘内给予Bic(0.01 g.L-1)分别拮抗81%、55%、81%和97%(均P<0.01)。在福尔马林实验中,鞘内注射丙泊酚(10 g.L-1)减少的福尔马林疼痛评分在30 min时间点可被Bic(0.01 g.L-1)相同部位注射拮抗67%(P<0.01)。免疫组化部分:鞘内注射丙泊酚(10 g.L-1)明显减少福尔马林单侧足底皮下注射引起的大鼠同侧腰段脊髓背角各层Fos免疫反应样神经元(Fos-like immunoreactivity,FLI)阳性细胞数(P<0.01);鞘内注射丙泊酚(10 g.L-1)产生的效应可被鞘内注射Bic(0.01 g.L-1)部分拮抗(P<0.01)。结论鞘内注射丙泊酚在大鼠可产生镇痛作用;GABAA受体部分介导了丙泊酚的以上作用。     

鞘内注射P物质拮抗氯胺酮的抗伤害作用

目的观察脊髓P物质对氯胺酮抗伤害作用的影响。方法在小鼠福尔马林实验中,结合行为学和Fos蛋白表达,观察鞘内注射(it)不同剂量的P物质对氯胺酮抗伤害作用的影响。结果氯胺酮20、30mg·kg-1ip可剂量依赖性地减少小鼠舔足时间(P<0.05)。P物质0.25、0.5ngit可增加注射氯胺酮小鼠舔足时间(P<0.05)。小鼠注射福尔马林后,注射侧脊髓背角Fos免疫样(Foslikeimmunoreactive,FLI)阳性神经元数量明显增加(P<0.01),预先给于氯胺酮30mg.kg-1ip可以明显减少脊髓背角FLI阳性神经元数量(P<0.01),而P物质0.5ngit能明显削弱氯胺酮对脊髓背角Fos表达的抑制(P<0.01)。结论鞘内注射P物质能拮抗脊髓水平氯胺酮抗伤害作用。     

芋螺毒素ω-SO3单次及连续给药对福尔马林致大鼠炎性疼痛的镇痛作用

目的评价单次及连续鞘内给药ω-SO3对福尔马林致大鼠炎性疼痛的镇痛作用。方法采用福尔马林致大鼠炎性疼痛模型,通过大鼠鞘内置管术分别单次及多次鞘内给药,观察ω-SO3对炎性疼痛急性期和持续期的镇痛强度和有效时间以及连续给药对其镇痛作用可能的影响;通过大鼠自发活动实验评价ω-SO3单次鞘内给药可能引起的中枢副反应。结果在大鼠福尔马林炎性疼痛模型上,单次鞘内给药ω-SO3产生剂量及时间依赖性的镇痛作用,其抑制炎性疼痛急性期和持续期的ED50值分别为1.79和0.41ng.g-1,比吗啡的镇痛作用强并且有效时间长;以ED80剂量每日鞘内给药2次连续5d后,ω-SO3仍然产生与单次给药类似的镇痛强度,而吗啡的镇痛作用降低,说明产生镇痛耐受,更有意义的是ω-SO3对吗啡镇痛耐受大鼠仍具有镇痛作用。在上述镇痛剂量范围内,ω-SO3单次鞘内给药对大鼠自发活动没有明显的影响。结论ω-SO3对福尔马林致炎性疼痛的急性期和持续期均具良好的镇痛作用,其镇痛作用强,有效时间长,连续给药不产生自身镇痛耐受,并且对吗啡不产生交叉耐受。     

BoNT-A对慢性坐骨神经结扎大鼠疼痛行为学及脊髓中Fos蛋白的影响

目的 探讨肉毒毒素A(BoNT-A)对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为学及脊髓背角Fos蛋白表达的影响.方法 建立雄性SD大鼠慢性坐骨神经结扎(CCI)疼痛模型,CCI术后第3天开始,同侧肢体足底皮下注射BoNT-A 30 U/kg和等容积生理盐水,给药前、给药后1、3、5、7、14 d,采用von-Frey纤维细丝机械刺激法和热辐射刺激法评定大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL),观察大鼠疼痛行为学变化,根据变化结果,给药后第5天取相应脊髓节段标本,运用免疫组织化学法观察脊髓背角Fos蛋白表达.结果 CCI神经病理性疼痛模型大鼠建立后,CCI组同侧MWT和TWL均明显降低,且脊髓水平Fos蛋白表达明显增多;同侧足底注射BoNT-A 30 U/kg后,其MWT和TWL,均显著增加,脊髓水平Fos蛋白表达明显减少.结论 足底注射BoNT-A抑制脊髓水平Fos蛋白的表达,能减轻神经病理性疼痛模型大鼠的机械性触诱发痛和热痛觉过敏.     

中缝背核注射L-NAME抑制炎性痛大鼠脊髓Fos的表达

目的 观察中缝背核(DRN)内一氧化氮合酶(NOS)对炎性痛大鼠脊髓伤害性信息传递的调控作用.方法 建立大鼠单侧足底甲醛炎性痛模型,采用行为学、c-Fos免疫组织化学及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学技术,观察甲醛诱发炎性痛后大鼠DRN内NADPH-d、NADPH-d/Fos双标阳性神经元数量的变化;同时观察DRN内预先给予NOS抑制剂L-NAME对甲醛致痛大鼠疼痛评分及脊髓Fos蛋白表达的影响.结果 单侧足底注射甲醛后,DRN内NADPH-d、NADPH-d/Fos双标阳性神经元的数量增加.DRN内预先注射L-NAME降低炎性痛大鼠的疼痛学评分及脊髓Fos阳性神经元的数量.结论 DRN内NOS可能促进甲醛炎性痛大鼠脊髓伤害性信息的传递.     

甲氨蝶呤鞘内注射相关脊髓病变的国外文献回顾

目的:分析鞘内注射甲氨蝶呤引起患者脊髓病变的风险因素.方法:检索1969年至2007年有关国外鞘内注射甲氨蝶呤文献,引起患者脊髓病变共36例,对患者的年龄、原发病、鞘内注射剂量及注射次数,联合用药、发生脊髓病变情况及转归进行统计分析.结果:患者年龄＜18岁30例(83.3%);34例注明甲氨蝶呤单次剂量,其中≤15 mg者28例(77.8%),其他均＜50mg;鞘内注射＞5次者27例;截瘫发生第1次鞘内注射者仅2例.甲氨蝶呤单独应用11例,同阿糖胞苷及/或激素联合注射者25例;11例脊髓病变发生时间为鞘内注射后24 h内,35例表现为双下肢或四肢弛缓性瘫痪,经大剂量甲泼尼龙及叶酸治疗,其中21例(58.3%)肢体运动及感觉功能完全或部分恢复,11例死亡(30.6%).结论:甲氨蝶呤鞘内注射致脊髓病变可能和甲氨蝶呤注射次数较频、剂量较大以及多药联用有关.     

鞘内注射促皮质素抑制甲醛痛敏大鼠脊髓NOS阳性神经元增多

目的:研究鞘内注射促皮质素(Cor)对甲醛痛敏大鼠脊髓背角一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元增多的影响。方法:采用痛级均数(PIR)测定、NADPH-d组织化学法、Fos免疫组织化学法染色,观察鞘内注射(ith)Cor对甲醛痛敏大鼠脊髓背角NOS阳性神经元、Fos免疫反应神经元、NOS/Fos双标记神经元及痛敏的影响。结果:ith Cor(0.5-1.5U)均能显著抑制甲醛引起的大鼠脊髓背角NOS、Fos、NOS/Fos阳性神经元的增多和痛敏反应,其作用为ith NOS底物左旋精氨酸(Arg,5-15nmol)部分翻转。结论:Cor通过抑制大鼠脊髓背角NOS阳性神经元的增多抑制痛敏。     

鞘内和侧脑室内注射米贝地尔对慢性坐骨神经松结扎大鼠痛阈的影响

目的观察鞘内和侧脑室内注射T型钙通道阻断剂对慢性坐骨神经结扎大鼠痛阈的影响,探讨脊髓和脊髓上水平T型钙通道在神经病理性疼痛中的作用。方法建立慢性坐骨神经结扎(CC I)神经病理痛模型,运用鞘内和侧脑室给药技术,用von Frey纤维细丝和热辐射仪测定脊髓和脊髓上水平不同剂量的米贝地尔在对CC I大鼠机械缩是阈值(MWT)和热缩是潜伏期(TWL)的影响。结果CC I大鼠从术后3 d开始到本实验观察的21 d表现出明显的热痛敏和机械痛敏,鞘内注射各个剂量的米贝地尔能明显减轻热痛敏和机械痛敏;侧脑室注射米贝地尔100、200μg组却增强大鼠的机械和热痛敏。结论阻断脊髓水平T型钙通道具有镇痛作用,阻断脊髓上水平T型钙通道有致痛作用。     

FDA批准齐考诺肽鞘内注射治疗严重慢性疼痛

2004年12月，FDA批准Elan公司的齐考诺肽(zicoriotide，Prialt)鞘内注射治疗因鞘内注射或其它疗法(服用镇痛药、吗啡鞘内注射等)引起的严重慢性疼痛。本品为非阿片样镇痛药，为N型钙拮抗剂，通过靶向阻断神经中传输疼痛信号的N型钙通道来发挥作用。     

鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓P物质表达的影响

目的研究鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓P物质表达的影响。方法12只Wistar大鼠,体质量220~260 g,制备坐骨神经结扎模型并鞘内置管,随机分为4组(n=3):B组为空白对照组;C组鞘内注射生理盐水10μL;M组鞘内注射吗啡20μg;KM组鞘内注射吗啡10μg和氯胺酮25μg。坐骨神经结扎术后第4天开始鞘内给药,1次/d,连续7 d。用药7 d后处死大鼠,取腰段脊髓,免疫组化法测定脊髓P物质的含量。结果C组P物质表达明显低于B组(P<0.05)和KM组(P<0.01);KM组P物质表达明显高于M组(P<0.05)。结论鞘内联合应用吗啡和氯胺酮的抗伤害性作用,可能与其增加脊髓背角P物质的含量有关;脊髓背角P物质含量减少,可能介导慢性坐骨神经损伤后的痛敏持续状态。     

抑制小胶质细胞激活对骨癌痛小鼠疼痛维持的影响

目的研究鞘内注射小胶质细胞特异性抑制剂米诺环素(minocycline,MC)抑制脊髓小胶质细胞的激活对骨癌痛维持的影响。方法采用小鼠跟骨癌痛模型,♂C3H/He小鼠42只,随机分为3组(n=14),sarcoma+PBS(phosphatebuffered saline)组和sarcoma+MC组行小鼠跟骨癌痛模型制作,跟骨内注射肿瘤细胞;sham+PBS组行假手术,跟骨内注射PBS。造模后11天(post-implantation day11,PID11),每组随机取10只小鼠,sham+PBS组和sarcoma+PBS组单次鞘内注射MC溶媒(PBS 5μl),sarcoma+MC组单次鞘内注射MC(1 nmol,5μl)。各组分别在鞘内注射前、注射后0.5、1、2、4、8、24 h测定机械性痛觉超敏、冷痛觉过敏。各组剩余4只小鼠在PID12鞘内注射后1 h行非伤害性触摸右侧足底90min,分析脊髓背角c-fos蛋白的表达。结果骨癌痛导致小鼠机械性痛阈和冷痛阈降低,脊髓背角c-fos蛋白的表达上调;单次鞘内注射MC能暂时提高小鼠疼痛阈值,并抑制脊髓背角c-fos蛋白的表达。结论小胶质细胞的激活对骨癌痛的维持具有重要作用。     

鞘内应用布托啡诺对神经痛大鼠脊髓NMDAR1、MoR mRNA表达的影响

目的：观察鞘内注射布托啡诺对神经源性疼痛大鼠脊髓NMDAR1、MOR mRNA表达的影响,进而探讨布托啡诺治疗神经源性疼痛的可能机制。方法：健康雄性SD大鼠24只,体重（250±20）g,随机分为3组（n=8）,对照组（B组）、生理盐水组（C组）和布托啡诺组（T组）。B组不给予任何干预处理;C组和T组进行鞘内置管并建立大鼠神经病理性疼痛模型（CCI）,C组鞘内每天给予10μl生理盐水,T组鞘内每天输注布托啡诺12μg/10μl（生理盐水稀释）。持续7d后,断头处死大鼠,取出脊髓标本,RT—PCR测定NMDAR1和MORmRNA的表达水平。结果：NMDAR1 mRNA表达,C组与B组相比,NMDAR1 mRNA表达水平显著升高,P〈0．01,T组与C组比较表达水平降低．P〈0．05。MOR mRNA表达,B组、C组、T组各组间相比,差异无统计学意义。结论：鞘内注射布托啡诺可降低CCI模型引起的大鼠脊髓NMDAR1 mRNA表达水平上调,对MOR mRNA表达水平无影响;CCI模型后12d内MOR mRNA的表达水平恢复萨常．     

鞘内注射米诺四环素对慢性坐骨神经结扎大鼠机械痛敏和热痛敏的影响

目的观察鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺四环素对慢性坐骨神经结扎大鼠机械痛敏和热痛敏的影响。方法所有大鼠术前8d鞘内置管,用机械缩足反射阈值和热缩足潜伏期来分别评价大鼠机械痛敏和热痛敏。前给药组:生理盐水10μl或米诺四环素50μg,于坐骨神经结扎前1d开始持续到术后1d(每天2次)鞘内注射,机械缩足反射阈值和热缩足潜伏期分别于术前2d,术后1,3,5,7,14d测定;后给药组:坐骨神经结扎后7d,鞘内注射1次生理盐水10μl或米诺四环素50μg,其对机械缩足反射阈值和热缩足潜伏期的影响分别于给药后0.5、1、2、4、8h测定。结果CCI大鼠从术后1d形成稳定的热痛敏和机械痛敏,前鞘内注射米诺四环素明显增加CCI大鼠MWT和TWL(P<0.05,P<0.01),相反,后鞘内注射米诺四环素对CCI大鼠MWT和TWL无明显影响。结论前鞘内注射米诺四环素明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏,提示小胶质细胞的活化参与慢性坐骨神经结扎引发神经病理痛的形成。     

鞘内注射益赛普对神经病理性疼痛大鼠痛敏的影响

目的观察鞘内注射益赛普对神经病理性疼痛大鼠痛敏的影响。方法成年雄性SD大鼠鞘内成功置管后,随机分为3组(n=10),分别为假手术组、慢性坐骨神经损伤(CCI)组(CCI+生理盐水)和益赛普组(CCI+益赛普)。于术后30min、第2、3d予鞘内注射益赛普或生理盐水。于术前1d,术后1、3、7、10、14d测定机械性痛觉阈值(MWT)、热痛觉阈值(TWL)。结果与术前1d比较,CCI组大鼠术后的MWT和TWL均明显下降(P<0.05);益赛普组仅在术后3、7d的MWT及1、3、7、10d的TWL下降的差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,CCI组和益赛普组(除术后14d)术后各时点MWT和TWL均明显降低(P<0.05)。与CCI组比较,益赛普组术后各时点MWT和TWL均明显升高(P<0.05)。结论鞘内注射益赛普能够抑制CCI引起的神经病理性疼痛。     

α-芋螺毒素TxIB抗药物依赖的初步探索

目的 探究作用于α6/α3β2β3烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的α-芋螺毒素TxIB对吗啡/尼古丁诱导条件性位置偏爱(CPP)的影响,为进一步设计筛选抗药物依赖的芋螺毒素提供理论和实验依据。方法 选用SPF级雄性C57BL/6小鼠,采用皮下注射吗啡(5 mg/kg)或尼古丁(0.5 mg/kg)建立CPP模型。侧脑室注射不同剂量的α-芋螺毒素TxIB,记录小鼠在伴药箱的停留时间。结果 皮下注射吗啡(5 mg/kg)或尼古丁(0.5 mg/kg)均可成功建立CPP模型,经侧脑室注射不同剂量的TxIB后测值,发现TxIB能显著性抑制吗啡/尼古丁诱导小鼠CPP的表达(P<0.05),且存在剂量依赖性效果。侧脑室注射最高剂量TxIB(10 nmol)对生理盐水对照组小鼠在伴药箱停留时间无影响(P>0.05)。结论 α-芋螺毒素TxIB可以抑制吗啡/尼古丁诱导小鼠CPP的表达,有望进一步开发成为戒烟戒毒的候选新药。     

鞘内注射美洛昔康对神经损伤大鼠背根神经节内GAP-43和NGF表达影响

目的研究鞘内注射美洛昔康(Mel)对CCI模型疼痛治疗效果和背根神经节(DRG)内生长相关蛋白-43(GAP-43)、神经生长因子(NGF)表达的影响。方法成年SD雄性大鼠随机分成四组:正常对照(C)组不做处理,CCI组不予注药,生理盐水(NS)治疗组予注射生理盐水,美洛昔康治疗(Mel)组予注射不同剂量美洛昔康(Mel组100μg,qd、Mel2组200μg,qd、Mel3组100μg,bid、Mel4组200μg,bid);每(亚)组均为5只大鼠。35只大鼠分别于术前及术后3d、7d测试机械性缩足反射阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL)。术后7d取材大鼠DRG,检测其GAP-43、NGF表达水平。结果MWT、TWL方面CCI组、NS组和Mel组较正常组显著下降(P0.05);美洛昔康组比CCI、NS组下降幅度小(P0.05),且剂量越大MWT、TWL下降幅度越小(P0.05)。GAP-43、NGF表达方面CCI组、NS组Mel组C组(P0.05),且美洛昔康剂量越大,表达越少。结论鞘内注射美洛昔康能明显减轻大鼠CCI模型的机械痛敏和热痛敏,并降低DRG内GAP-43、NGF的表达水平。     

脊髓以上多巴胺D_2受体介导左旋四氢巴马汀的镇痛作用

目的:研究DA受体与左旋四氢巴马汀(l-THP)镇痛作用的关系,以阐明l-THP的镇痛机制。方法:腹腔(ip)与鞘内(ith)给药,以大鼠甩尾反应观测热伤害性致痛阈。结果:ip l-THP或D_2受体拮抗剂螺哌隆产生剂量依赖性镇痛效应,并能被D_2受体激动剂喹吡罗翻转,但不被纳洛酮翻转。而ithl-THP或螺哌隆无镇痛效应,但它们能拮抗ith喹吡罗引起的镇痛效应。结论:激动脊髓D_2受体或阻滞脊髓以上水平D_2受体均产生镇痛效应;l-THP镇痛作用通过阻滞脊髓以上D_2受体实现。