TNF-α通过JNK和AP-1途径调节乳腺癌MCF-7细胞VEGF的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorα, TNFα）诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的机制。方法：以20 ng/ml TNFα处理MCF7细胞,用Western blotting检测MAPK(JNK,p38,ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平的变化以及AP1家族(cJun,JunB,cFos,Fra1,Fra2,JunD)的蛋白表达及磷酸化水平的变化;以免疫共沉淀法检测激活后的AP1存在形式;以RTPCR以及Western blotting检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;以MAPK抑制剂预处理后,检测VEGF蛋白表达水平;运用ChIP的方法验证pcJun结合在VEGF启动子区。结果： TNFα通过激活JNK信号转导通路活化AP1;被TNFα激活后AP1以pcJuncJun和pcJunJunB同源二聚体形式存在;TNFα通过激活转录因子AP1促进VEGF的转录,并增强VEGF的蛋白表达水平;pcjun通过与VEGF启动子AP1结合参与对VEGF转录的调控。结论：在TNFα作用下,AP1通过pcjun同源二聚体结合在VEGF启动子的AP1结合位点上,直接对VEGF转录进行调控     

TIM-3 配体galectin-9 诱导NK/T细胞淋巴瘤细胞的凋亡及其机制

目的：观察TIM-3 在NK/T细胞淋巴瘤（natural killer/T cell lymphoma, NK/TCL）细胞株中的表达及其配体galectin-9（GAL-9）诱导瘤细胞凋亡的作用及其部分机制。方法：Western blotting 测定NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6、SNT-8 和健康人外周血NK细胞中TIM-3 的表达;采用不同质量浓度重组人GAL-9（rhGAL-9）作用于NK/TCL细胞株24 h 后,通过CCK-8 法检测细胞增殖活性;流式细胞术Annexin-V/PI 双染法检测瘤细胞凋亡;Western blotting 检测caspase-3、PARP及其剪接体和MAPK信号通路蛋白磷酸化表达水平变化。结果：NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6 和SNT-8 的TIM-3 表达较健康人外周血NK细胞显著增高,其中SNK-1、SNK-6 细胞株与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;CCK-8 检测结果显示,rhGAL-9 对NK/TCL细胞增殖活力具有明显抑制作用,并有浓度依赖性;流式细胞术检测显示,rhGAL-9 可诱导3 种NK/TCL细胞株凋亡;Western blotting 结果显示,cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量增高,MAPK通路中JNK蛋白磷酸化水平升高。结论：TIM-3 在NK/TCL细胞株中异常高表达,其配体GAL-9可诱导细胞凋亡,其机制可能与JNK磷酸化水平升高相关。     

食管癌细胞ezrin基因启动子TPA反应性的研究

背景与目的:研究食管癌细胞eznn基因启动子的TPA反应性以及TPA诱导ezrin基因转录的MAPK信号转导途径. 材料与方法:应用转录因子数据库分析预测ezrin基因-87/+134序列的潜在转录因子结合位点和TPA反应元件;采用双荧光素酶报告基因分析系统,检测ezrin基因-87/+134序列的启动子活性和TPA反应性,TPA反应元件结合蛋白Spl和AP-1对ezrin基因的转录激活作用,以及MAPK抑制剂对TPA诱导激活的ezrin基因转录的抑制作用.结果:ezrin基因-87/+134序列存在潜在TPA反应元件,具有启动子活性;5 ng/ml 11PA显著增强ezrin/n基因启动子活性[P<0.01);Sp1和AP-1对ezrin基因具有转录激活作用;MEK1/2特异性抑制剂U0126和PD98059降低TPA诱导的ezrin基因转录激活作用. 结论:食管癌细胞中,ezrin基因启动子具有TPA反应性;TPA可能通过MEK/ERK1/2磷酸化Sp1/AP-1途径调控ezrin基因转录.     

EGCG干预LMPl激活的AP-1信号转导通路

目的 探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白1(AP-1)信号转导通路的干预作用，阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白1(LMPl)活化的AP-1信号转导通路中靶分子的机制。方法 采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1-LMP1细胞。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1-LMP1细胞的生存率的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP-1活性的作用。利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响，再分别提取CNE1和CNE1-LMP1的胞浆及胞核蛋白，Western blot分析EGCG抑制JNK的核移位后，胞浆及胞核蛋白中JNK的变化。采用Western blot分析EGCG对c-Jun的磷酸化水平的影响。采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响，并用Western blot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用。结果 EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性，并可抑制AP-1的活性。EGCG能抑制JNK的核移位，并抑制c-Jun的磷酸化。EGCG对AP-1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用。结论 EGCG对信号转导通路上的AP-1、JNK、c-Jtm、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用。LMP1是EB病毒这种编码的蛋白，因此，EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路，可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一。     

茶多酚干预信号转导通路的研究进展

芬多酚可干预以激活蛋白质-1(AP-1)和核转录因子-κB(NF-κB)为主的信号转导通路.茶多酚通过JNK通路抑制促癌物诱导的AP-1活性;通过降低抑制蛋白IκB磷酸化来调节NF-κB的活性.荼多酚选择性地阻断肿瘤细胞信号转导通路,从而破坏肿瘤控制性生长调节机制,为其抗癌机制研究开拓新的思路.     

NSP-1、NSP-2和NSP-3在乳腺癌细胞中信号途径的异同

目的 通过比较NSP-2与其同源异构体NSP-1和NSP-3在乳腺癌细胞中诱导抗雌激素耐药和信号途径的异同,揭示NSP-2诱导乳腺癌抗雌激素耐药的分子机制。方法 利用细胞计数器计数细胞来检测乳腺癌的ICI 182,780耐药性;以Western blot检测Phospho-AKT、Phospho-JNK、Phospho-ERK 和Phospho-p38的表达;以荧光素酶活性实验检测cyclin D1启动子活性和TCF/LEF的转录活性。结果 与同源异构体NSP-1和NSP-3相比,只有NSP-2能激活cyclin D1启动子,诱导乳腺癌细胞的抗雌激素耐药。NSP-1、NSP-2和NSP-3都能激活磷酸化Akt,NSP-1、NSP-2和NSP-3都不能激活磷酸化形式的JNK、ERK 和p38。只有NSP-2能诱导乳腺癌细胞TCF/LEF的转录活性。结论 NSP-2可能通过激活乳腺癌细胞中TCF/LEF的转录活性,来发挥其诱导cyclin D1启动子活性和抗雌激素耐药。     

鼻咽癌细胞中大蒜素抑制MAPK信号通路的作用机制研究

目的:探讨大蒜素导致鼻咽癌细胞G1/S期阻滞的分子机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性;激酶活性分析测定MAPK激酶的活性;报道基因分析检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot法检测细胞周期蛋白CyclinD1的表达水平。结果:大蒜素呈浓度依赖性抑制鼻咽癌细胞增殖,细胞的存活率从100%降为52.8%(50μg/mL),P=0.0068;检测50μg/mL大蒜素处理时MAPK激酶的活性,发现其活性仅为未处理组的42.92%,说明大蒜素抑制了MAPK激酶活性;基因分析显示在大蒜素作用下,转录因子AP-1的转录活性也呈浓度依赖性的降低,从6.3×103U降低到3.8×103U(50μg/mL),P=0.0089,受AP-1调节的G1/S期调节蛋白CyclinD1的相对表达水平也从100%下降为32.2%。结论:大蒜素通过抑制MAPK信号通路而抑制转录因子AP-1的活性,从而下调CyclinD1表达,导致细胞G1/S期阻滞。     

TNF-ɑ调控LRG1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究TNF-α对乳腺癌MCF-7细胞中LRG1蛋白表达的调控及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及相关分子机制。方法:MTT实验检测不同浓度TNF-α处理后MCF-7细胞活力;EdU实验、Transwell实验和划痕实验分别检测抑制LRG1表达后细胞增殖、侵袭以及迁移能力;Western blot检测细胞内MAPK信号通路中p-p38蛋白表达。结果:低浓度TNF-α处理乳腺癌MCF-7细胞,细胞活力增强;抑制LRG1表达后细胞增殖能力下降,侵袭细胞数、细胞迁移率以及p-p38蛋白表达均下降。结论:TNF-ɑ通过调控LRG1的表达促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,这一过程可能通过激活p38MAPK信号通路来实现。     

肿瘤坏死因子-α对乳腺癌细胞CD44表达调控及其影响细胞迁徙机制的探讨

目的:检测肿瘤坏死因子(TNF-α)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231中CD44s、CD44V3和CD44V6表达的调控及其对细胞迁徒力的影响,并探讨TNF-α调节CD44可能存在的信号途径.方法:用RT-PCR和蛋白质印迹法检测TNF-α(0、2、20和200 ng/mL)作用乳腺癌细胞后其CD44 mRNA和蛋白的表达情况,Transwell方法检测TNF-α作用后细胞迁徒能力的改变;以浓度为20 ng/mL的TNF-α处理MCF-7和MDA-MB-231后,用蛋白质印迹法检测MAPK(JNK、p38和ERK)信号通路中蛋白磷酸化水平变化,对磷酸化水平增加的蛋白用特异性抑制剂预处理后检测CD44的表达及细胞迁徙能力的改变.结果:TNF-α作用后MDA-MB-231细胞CD44s、CD44V3、CD44V6mRNA和蛋白表达水平均上调;迁徙力增加了22%～90%;TNF-α作用MDA-MB-231细胞后p38磷酸化水平升高;用p38的特异性抑制剂预处理后可以逆转CD44表达和细胞迁徒力的改变.结论:TNF-α通过p38途径对MDA-MB-231细胞CD44表达进行调控,CD44的表达可以增强肿瘤细胞的迁徙力.     

乙型肝炎病毒X蛋白对人肝癌细胞hsp90α基因表达调控机制研究

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)参与人肝癌细胞hsp90α基因表达的调控机制。方法:采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法及荧光素酶活性检测技术,检测不同剂量HBx表达载体转染的HepG2细胞中hsp90α基因mRNA和蛋白表达及启动子活性的变化,并观察转录因子c-Myc阻断剂10058-F4对上述效应的影响。采用启动子实验分析c-Myc对hsp90α基因启动子的激活作用。RT-PCR和蛋白质印迹法检测表达HBx的HepG2细胞中c-Myc mRNA和蛋白表达情况;蛋白质印迹法及ELISA分析细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平及内源性ERK的活性。结果:HBx基因转染HepG2细胞中hsp90α基因的mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性呈剂量-依赖性增强,P=0.006 1;c-Myc阻断剂抑制了HBx对hsp90α基因表达的上调效应。c-Myc通过与c-Myc位点(-1094/-1088)结合转录激活hsp90α基因启动子活性。HBx使HepG2细胞中c-Myc mRNA和蛋白表达增强,并伴有ERK1/2蛋白磷酸化水平增加,ERK活性明显提高,P=0.032。结论:HBx通过ERK信号通路反式激活肝癌细胞c-Myc介导的hsp90α基因启动子活性,从而上调hsp90α基因表达。     

蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药

目的: 探讨蛋白酶体抑制剂MG132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制。方法：在MG132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平。结果：MG132联合TRAIL蛋白处理DLD1TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降（P<0.01）,而细胞凋亡率则明显增加（P<0.01）。Western blotting检测显示,联合处理后DLD1TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase8、caspase9、caspase3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Western blotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、BclXL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1TRAIL/R细胞的致凋亡效应（P<0.05）。结论：蛋白酶体抑制剂MG132能逆转人结肠癌细胞DLD1TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关。     

乙肝病毒x蛋白激活缺氧诱导因子-1通路促进血管内皮生长因子表达的研究

目的:探讨乙肝病毒x蛋白(HBx)是否可以通过激活缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路促进血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法：将pIRES-EGFP-HBx和pTK-Hyg质粒共同转染人肝癌细胞系SMMC-7721,筛选出荧光阳性和阴性的抗性克隆,检测两种克隆中VEGF和加HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达。结果：荧光阳性细胞有HBx的稳定整合和表达,并有HIF-1α和VEGF的上调表达;荧光阴性细胞无HBx的表达,HIF-1α和VEGF的表达亦为阴性。结论：HBx可以通过激活HIF-1通路促进VEGF的表达。     

EGF和TGF-α促进子宫内膜癌细胞增殖信号转导通路的研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α (TGF-α)促进子宫内膜癌细胞增殖的信号转导通路.方法:应用不同浓度的EGF和TGF-α分别处理子宫内膜癌细胞Ishikawa, MTT法检测细胞增殖,Western blot分析EGF和TGF-α处理后,不同时间MAPK通路关键分子ERK1/2的磷酸化水平和调控增殖的重要分子Survivin蛋白的表达.然后应用特异性的MAPK通路阻断剂U0126预处理细胞,观察EGF和TGF-α对细胞增殖和Survivin蛋白表达的影响.结果:不同浓度的EGF和TGF-α均促进了Ishikawa细胞增殖.与对照组相比,0.1、1、10和100 ng/mL的EGF处理组细胞增殖率分别为(112.12±10.23)%、(138.39±6.85)%、(165.50±15.20)%和(162.86±15.17)%;0.1、1、10和100 ng/mL的TGF-α处理组细胞增殖率分别为(102.87±6.44)%、(121.97±3.51)%、(144.42±11.60)%和(141.12±13.50)%.EGF和TGF-α还迅速诱导了ERK1/2的磷酸化,并使Survivin蛋白水平增加了8.35和9.42倍.MAPK通路阻断剂U0126则完全抑制了EGF和TGF-α诱导的ERK1/2磷酸化,阻断了MAPK通路的激活.阻断MAPK通路还明显抑制了EGF和TGF-α诱导的细胞增殖和Survivin蛋白表达的上调.结论:EGF和TGF-α能够促进子宫内膜癌细胞增殖,其机制是通过激活MAPK通路引起Survivin蛋白表达的增加,从而引发增殖的生物学效应.     

舒尼替尼通过NF-кB旁路途径诱导人肝癌HepG2细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨舒尼替尼通过NF-κB信号通路诱导肝癌HepG2细胞表达自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs)的分子机制。方法： 常规体外培养HepG2细胞,单细胞凝胶电泳检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后DNA损伤情况,实时荧光定量PCR检测药物处理前后细胞DNA损伤修复分子mRNA的表达,Western blotting 检测分别以NF-κB激动剂和抑制剂处理HepG2细胞前后NKG2DLs蛋白表达及IKKα和IκBα表达情况。结果： 舒尼替尼药物处理后,HepG2细胞均发生不同程度DNA损伤;且AP-1、ATM、ATR mRNA表达水平明显升高,而CHK1、CHK2、GSK3β mRNA表达水平明显降低;不同处理组间DNA损伤修复相关信号分子mRNA表达有显著差异（F=61.242,P=0.000）。NF-κB转录活性抑制剂JSH-23可降低HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量,而NF-κB转录活性激动剂TNF-α、PMA均可增加HepG2细胞NKG2DLs蛋白表达量（F=15.043,P=0000）;舒尼替尼处理肿瘤细胞后NF-κB的抑制分子IKKα被抑制,而激活分子IκBα被激活。结论： 舒尼替尼可通过DNA损伤修复分子激活NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

苦参碱通过bcr-abl介导的MEK-ERK通路抑制人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖

目的：探讨MEK-ERK通路在苦参碱抑制人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖中的分子机制。方法采用Western blot法检测K562细胞内MEK-ERK通路关键分子MEK1、ERK1／2及其上游接头分子Shc、SHP2的总蛋白和磷酸化蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测bcr-abl及有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）下游靶蛋白bcl-xL、Cyclin D1、c-myc及p27在转录及蛋白水平的表达。结果苦参碱可明显抑制K562细胞内MEK1、ERK1／2及Shc、SHP2的磷酸化表达,并可在转录及蛋白水平抑制bcr-abl分子表达。同时,RT-PCR和Western blot实验证实,苦参碱处理后,K562细胞内bcl-xL、Cyclin D1、c-myc表达均明显抑制,细胞周期负调控蛋白p27的表达增加。结论苦参碱对K562细胞的抑制效应与bcr-abl介导的MEK-ERK信号通路活性抑制有关,对信号通路中磷酸化蛋白或激酶分子活性的调控可能是其调控MEK-ERK通路活性的重要分子机制。     

一类新的AP-2α转录共激活物Ku 70蛋白的鉴定

 目的 鉴定新的AP-2α转录共激活物,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。 方法 以AP 2α为诱饵采用酵母双杂交技术寻找新的AP-2α结合蛋白,免疫共沉淀证实AP-2α与其结合蛋白的相互作用,免疫荧光技术检测AP-2α与其结合蛋白的亚细胞共定位。荧光素酶报导基因检测AP-2α结合蛋白对AP-2α转录活性的影响。 结果 酵母双杂交技术鉴定出Ku 70蛋白为新的AP-2α结合蛋白。免疫共沉淀证实了AP-2α和Ku 70蛋白在细胞内的相互作用。亚细胞共定位研究显示AP-2α和Ku 70蛋白都定位于细胞核内。在功能上发现Ku70可以增强AP-2α的转录活性。 结论 本研究首次揭示Ku70可以结合AP-2α并促进其转录活性,证明Ku70是一类新的AP-2α的转录共激活物,提示Ku70有望成为治疗AP-2α高表达乳腺癌的新靶点。     

组蛋白H3(Ser10)磷酸化在维持肿瘤细胞恶性表型中的作用

目的：探讨组蛋白H3（Ser10）磷酸化在维持肿瘤细胞恶性表型中的作用。方法：采用蛋白质印迹法检测肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC-7721及人正常肝细胞L02株中H3（Ser10）的磷酸化水平,构建H3（Ser10）低磷酸化修饰突变型细胞株,通过软琼脂克隆形成试验检测下调H3（Ser10）磷酸化对肿瘤细胞恶性表型的影响。采用蛋白印迹检测改变H3（Ser10）磷酸化水平对蛋白磷酸酶2A的调控基因IGBP1（α4）表达的影响,并利用生物信息学预测IGBP1基因启动子区AP-1位点。在Bel7402和A549细胞株上构建稳定高表达AP-1和H3（Ser10）磷酸修饰位点突变型细胞株,采用双荧光素酶报告系统验证p-H3（Ser10）对α4的转录调控作用。结果：与对照组相比,肝癌细胞株中H3（Ser10）磷酸化的表达水平增加2.61倍（P < 0.05）,同时发现具有癌基因功能的α4蛋白表达也上调2.0~6.3倍（P < 0.05）。H3（Ser10）位点突变的Bel7402细胞（Bel-H3S10A）中H3（Ser10）磷酸化水平明显下降,在软琼脂上形成的克隆数量减少30%。氯化镉明显诱导p-H3（Ser10）磷酸化和α4的表达（P < 0.05）,且具有剂量-反应关系,提示H3（Ser10）磷酸化可能调控α4的表达。生物信息学预测发现IGBP1启动子区存在多个AP-1的结合位点。双荧光素酶报告试验结果显示,A549-AP-1-H3S10A （S10A）细胞株中H3（Ser10）磷酸化水平降低,在氯化镉处理下,α4的蛋白表达水平下降了47%（P < 0.05）。结论：组蛋白H3（Ser10）磷酸化在维持肿瘤细胞的恶性表型中起作用,可能是通过激活转录因子AP-1进而调控促癌因子α4的表达实现的。     

食管鳞癌细胞系中STAT3的激活及VEGF和Bcl-2的表达

目的：探讨信号转导子及转录活化子3（STAT3）在食管鳞癌细胞系中的激活情况以及STAT3与其下游靶基因产物VEGF和Bcl～2的表达情况方法：采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中STAT3及p-Stat3（STAT3蛋白的活化形式），VEGF和Bcl-2蛋白的表达情况，并采用凝胶电泳迁移率（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）法检测两株食管鳞癌细胞核中STAT3与DNA的结合活性结果：食管鳞癌细胞中存在激活的STAT3信号传导通路，通路蛋白STAT3、p-STAT3及其下游靶基因产物VEGF．Bcl-2在细胞中均有表达，蛋白在细胞核中具有较高的DNA结合活性结论：两种食管鳞癌细胞系中均有组成性激活的STAT3信号通路，提示STAT3信号通路可能在食管鳞癌发生、发展中起重要作用。     

蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药

目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制.方法:在MG-132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平.结果:MG-132联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01).Western blotting检测显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Western blotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、Bcl-XL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG-132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG-132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG-132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1-TRAIL/R细胞的致凋亡效应(P<0.05).结论:蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关.