荧光定量PCR检测乙肝患者HBV DNA的临床价值

我们通过检测228例乙肝患者血清HBV DNA拷贝数及乙肝病毒血清标记物的检测，发现HBV DNA的定量检测更能真实反映乙肝病毒在体内的复制和感染程度。     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (PCR)与普通定性 PCR检测血清 HBV DNA结果的差异。方法　同时采用荧光标记 (Ampli Sensor)定量 PCR方法及普通定性 PCR方法对 10 0例乙型肝炎血清样品进行 HBV DNA检测 ,并分析其相关性 ,比较其差异。结果　 10 0例荧光定量 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 74.0 % (74/ 10 0 ) ,定性 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 5 2 .0 % (5 2 / 10 0 ) ,两种方法的 HBV DNA检出率比较具有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　荧光定量 PCR与普通定性 PCR相比具有一定的优势 ,完全可以取代定性 PCR方法 ,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测     

荧光定量PCR检测358例乙型肝炎病毒DNA结果分析

目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以研究其临床价值。方法采用一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合的实时检测定量PCR方法来检测358份临床血清标本。结果123份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本,阳性率为96.7%(120例),平均拷贝数为1.8×108/ml;108份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本其阳性率为39.8%(43例),平均拷贝数为6.6×105/ml;11份HBsAg,HBcAb阳性的标本,其阳性率为36.4%(4例),平均拷贝数为5.7×105/ml。结论FQ-PCR能够准确定量及有效避免假阳性。FQ-PCR可以真实反应HBV的感染和复制情况,对乙型肝炎的诊断,治疗方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。     

荧光定量PCR检测358例乙型肝炎病毒DNA结果分析

目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以研究其临床价值.方法采用一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合的实时检测定量PCR方法来检测358份临床血清标本.结果123份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本,阳性率为96.7%(120例),平均拷贝数为1.8×108/ml;108份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本其阳性率为39.8%(43例),平均拷贝数为6.6×105/ml;11份HBsAg,HBcAb阳性的标本,其阳性率为36.4%(4例),平均拷贝数为5.7×105/ml.结论FQ-PCR能够准确定量及有效避免假阳性.FQ-PCR可以真实反应HBV的感染和复制情况,对乙型肝炎的诊断,治疗方案的选择和疗效观察有较大的指导意义.     

血清HBV-DNA PCR荧光定量检测对乙型肝炎治疗的临床意义

我院2004-03～2006-04对160例HBV患者应用血清HBV-DNA PCR荧光定量检测方法进行了定量检测,现总结如下. 　　1 对象和方法 　　1.1 对象 2004-03～2006-04我院住院和门诊检查HBsAg阳性的患者的血清共388份,其中男109例,女51例,年龄16～67（平均36.4）岁.     

荧光定量PCR检测血清巨细胞病毒DNA的临床应用

目的建立一种区分巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)潜伏性感染与活动性感染并适于临床大量标本CMV DNA检测的常规检测方法。方法利用血清作为待检标本,通过优化实验方案,建立血清CMV DNA的荧光定量PCR(fluorogenic quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测方法;并利用FQ-PCR技术对54例疑似CMV感染的患儿(1个月～15岁,抗CMV IgM阳性或IgM与IgG双阳性)及32例患非感染性疾病的患儿(3个月～14岁,抗CMV IgM检查均阴性,部分患儿抗CMV IgG阳性)血清CMV DNA进行检测。结果54例CMV疑似感染患儿中,CMV DNA检测大于1×10~3拷贝/ml者占40.74%,而32例非感染性疾病患儿中,CMV DNA检测大于1×10~3拷贝/ml者只占18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.05)。采用FQ-PCR技术,在LightCycler和Rotor-Gene检测仪上检测具有相同的灵敏度,且具有可比性。结论FQ-PCR定量检测血清CMV DNA的方法能够更灵敏地反映CMV活动性感染,假阴性率低,重复性好,结果可靠。FQ-PCR定量检测血清内CMV DNA的方法可作为临床CMV DNA的检测的常规方法。     

乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用

目的　建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法　用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果　建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%～ 6 5% ,批间误差为 2 6 %～ 9 1 % ;在 1 0 4 ～ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) 4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBVDNA阳性率为 1 0 0 % ,含量为1 0 6 89± 1.6 9拷贝 /ml,抗HBe阳性的 96例中HBVDNA阳性率为 55 2 % ( 53/ 96 ) ,含量为 1 0 4 .0 9± 1.19拷贝 /ml;6 2例献血员未检出HBVDNA。乙肝临床治疗监测发现 ,外周血中HBVDNA含量检测可有效反映治疗效果 ,指导临床用药。结论　荧光定量PCR检测方法是一种相对准确、灵敏度高、特异性较强和较简便的HBVDNA定量检测技术 ,对乙肝诊断、指导临床用药和治疗监测方面具有实用价值     

PCR在检测HBV DNA中的应用

ＰＣＲ在检测ＨＢＶＤＮＡ中的应用汤继光，黄立东，范友谊，李玉强，杨爱民，徐云，周光炎目前，国内文献报道用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，大多集中在方法学上［１，２］。我们用ＰＣＲ技术和酶联免疫试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测了６１２...     

终点法荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用

目的运用终点法荧光定量PCR检测HBV-DNA,探讨其临床应用价值。方法运用本研究组制备的引物和荧光探针分别将HBV-DNA质粒及临床标本进行普通PCR和实时荧光定量PCR反应,再将普通PCR产物在荧光测定仪上测定荧光强度,与实时荧光定量PCR结果相比较,观察其符合程度。另外,运用相同方法比对本研究制备的PCR体系与市售荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的符合程度。结果终点法荧光定量PCR与实时荧光定量PCR检测HBV-DNA质粒及临床标本结果一致(P>0.05),与市售荧光定量PCR试剂比较,其符合程度较高(P>0.05)。结论终点法荧光定量PCR检测临床HBV-DNA标本稳定可靠,可作为荧光定量PCR的应用方法之一在基层医院推广应用。     

乙型肝炎患者HBV DNA定量与血清标志物的关系分析

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物与HBV DNA定量之间的关系。方法分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）对391例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性血清进行检测,分析检出率及相关性。结果391例HBsAg阳性血清共检出7种模式,以HBV DNA含量大于5×10^2copy／mL为阳性。HBsAg阳性（＋）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）（＋）、乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）（＋）模式的阳性检出率较高,为96．9％,HBV DNA含量也较高,其中大于10^7copy／mL的血清为53．8％。HBsAg（＋）、抗-HBe（＋）、抗-HBc（＋）模式中阳性检出率为25．3％,171例（74．7％）HBV DNA含量小于5×10^2copy／mL。HBsAg（＋）、抗-HBc（＋）模式中阳性检出率为65．4％。结论HBsAg和HBV DNA联合检测,更能反映乙型肝炎患者HBV感染、传染性及体内复制情况。     

荧光定量PCR测定HBV DNA的不确定度评定与应用

目的 对荧光定量PCR（FQ-PCR）测定HBVDNA测量不确定度进行评定，并探讨其应用价值。方法 通过对FQ-PCR检测HBVDNA测量过程的分析，确定并简化测量不确定度的来源；采用不确定度A类评定方法以及不确定度B类评定方法，量化各不确定度分量；确定合成不确定度与扩展不确定度。结果 测量不确定度来源主要有：批内重复性、批间重复性和方法偏倚等因素。FQ-PCR测定HBVDNA的扩展不确定度U=0．62（k=1．96，n=2）；在各不确定度分量中，由方法偏倚导致的不确定度所占比重最大。结论 FQ-PCR测定HBVDNA引入扩展不确定度使结果具有可比性，同时可作为乙型肝炎患者抗病毒治疗疗效判断和质控物浓度选择的依据。     

溶血对荧光定量PCR检测HBV DNA结果的影响

实时荧光定量聚合酶链反应 (fluorescencequantita tivepolymerasechainreaction ,FQ PCR)技术融汇了PCR技术的核酸高效扩增 ,探针技术的高特异性 ,光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点 ,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。由于此方法具有简便、快速、敏感、特异、无PCR后处理步骤等特点 ,目前HBVDNA荧光定量已成为监测治疗效果的常规手段 ,应用越来越广泛。在制订HBVDNA标本留取标准时 ,许多医院都规定溶血标本为不合格标本。因为血红素及其代谢产物为DNA聚合酶的抑制物[1] ,令人担心溶血会影响定量结果的准…     

分离胶促凝剂真空负压采血管对乙型肝炎病毒DNA荧光定量聚合酶链反应检测结果的影响

目的 探讨分离胶促凝剂真空负压采血管采集全血标本对荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)结果的影响.方法 分别用分离胶促凝剂真空负压采血管和普通第二代促凝剂真空负压采血管同时采集90例乙型肝炎患者空腹静脉血,对不同方式所采集标本测得的HBV DNA结果进行统计学分析.结果 以HBV...     

标本处理方法对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响

目的为提高标本检出率,比较煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法等3种不同标本处理方法对荧光定量聚合酶链反应（FQPcR）技术检测乙型肝炎（简称乙肝）病毒（HBV）DNA的影响。方法收集36例乙肝确诊患者和14例非乙肝患者的血标本,分别经煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法平行处理后,采用FQ-PCR进行检测。结果经3种方法处理的标本HBVDNA的检出率分别为52．78％、55．56％和100．00％。核酸纯化法的检出率明显高于其他2种方法（P〈0．01）。结论标本处理质量对进行HBVDNAFQ-PCR检测十分重要,煮沸法和Chelex 100树脂法不适用于临床标本检测,用核酸纯化法处理标本可保证FQ-PCR检测结果的准确性。     

溶血因素对荧光定量PCR检测HBV-DNA结果的影响

HBV-DNA的定量检测对临床诊断乙型肝炎,评价抗病毒药物疗效,研究乙型肝炎自然病史具有重要意义[1].荧光定量PCR(FQ-PCR)技术在保持巢氏PCR高度敏感性的同时,又因其能在电脑控制1～2 h全自动同步完成96个样品的扩增及定量,因此又具有高效率[2].而杂交法检测具有较高的特异性,但敏感性低,临床应用受到限制.目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测.而血液在采集过程中因多种因素的影响,因此常会遇到溶血的标本.本文旨在评价标本溶血对荧光定量PCR检测HBV-DNA结果的影响.     

三种HBV DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果影响的比较

目的 研究3种核酸提取方法对黄疸、溶血和脂血标本HBV DNA荧光定量结果的影响,为进一步提高临床检验质最和改进检测技术提供理论依据.方法 采用目前临床常用的多聚糖病毒沉淀浓缩法(PEG法)、碱液直接裂解和微量核酸释放剂(Micro-Nucleic-Releaser,MNR)等3种核酸提取方法,对含有HBV的黄疸、溶血和脂血标本进行荧光定量PCR检测,研究不同标本对荧光PCR定量结果和扩增效率的影响.选择酚一氯仿提纯法作为核酸提取对照方法.结果 黄疸、溶血和脂血标本,对3种不同核酸提取方法的荧光PCR定量结果和扩增效率都产生不同程度的影响,其中完全溶血的标本对PCR扩增效率的影响最大,如定量值为4×103拷贝/ml的低拷贝完全溶血标本,MNR法测定结果为2.21×103拷贝/ml,PEG法为1.02×103拷贝/ml,碱性直接裂解法的定量值为阴性,临床自然溶血较重的标本对荧光定量检测影响较小,脂血和黄疸标本对荧光定量PCR扩增效率有明显抑制作用,但对实际定最值无明显影响;其中,MNR法在不同标本的定量重复性和荧光PCR扩增效率最好,碱液直接裂解法较差.酚.氯仿提纯法虽然获得较高的扩增效率,但存在大约有1个数量级的核酸丢失.结论 基于MNR核酸提取方法的荧光定量PCR检测,对不同的临床标本均可获得较好的扩增效率、敏感性和重复性,操作简便、快速且无核酸丢失和污染,适合临床检验应用.