日本血吸虫未成熟虫卵超微结构和免疫电镜的初步观察

目的 观察日本血吸虫未成熟虫卵发育过程中形态学变化，深入了解抗卵胚免疫作用的效应机制。方法 应用透射电镜及免疫电镜方法，研究日本血吸虫卵及其肉芽肿反应超微结构，并对成熟虫卵及未成熟虫卵进行透射电镜和免疫电镜比较观察。结果 进一步证实日本血吸虫宙表面布满网络状纤丝和微棘状突起。成熟虫行毛微管呈现典型的９＋２结构。肉芽肿瘤细胞形态超微结构显示嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、浆细胞、淋巴细胞和纤维母细胞功能活跃     

碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的实验观察

目的观察碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的药效。方法以碳酸氢铵作为实验组,以敌百虫作为阳性对照组,以清水作为空白对照组。在室温下用不同浓度的农用碳酸氢铵,作用于一定数量的含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织。观察不同时间、不同碳酸氢铵浓度下虫卵的孵化情况。结果在室温下农用碳酸氢铵在200mg/L浓度时浸泡含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织,12h、24h日本血吸虫虫卵的孵化率为0。200mg/L的碳酸氢铵体外持效观察7天内均能有效抑制和杀灭虫卵。结论碳酸氢铵体外在200mg/L时有明显抑制和杀灭日本血吸虫虫卵的作用。     

日本血吸虫虫卵在诱导型一氧化氮合酶敲除大鼠中的分布

目的 观察血吸虫虫卯在野生型(WT)大鼠和诱导型一氧化氮合酶敲除(iNOS-/-)大鼠肝肠组织及粪便中的分布情况,分析iNOS在感染大鼠中对日本血吸虫感染及虫卵产生的影响.方法 采用WT大鼠和iNOS-/-大鼠构建日本血吸虫感染实验动物模型.采用碱消化组织虫卵计数法及改良加藤厚涂片法检测日本血吸虫虫卯在大鼠肠组织和粪便...     

日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中的表达与免疫定位

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸
虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸
脱氢酶（GAPDH）为内参,Taqman探针qRT-PCR检测Sjp40 mRNA的表达;提取各组肝脏总蛋白,以硫酸铵盐析法和Protein G
免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-McAb 9G7和抗弓形虫tSAG1-McAb Y3A8（对照抗体）,western blot检测Sjp40蛋白的表达;
制备肝脏石蜡切片,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展,进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿
组织中的定位。结果日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 mRNA水平显著高于29 dpi 尚
未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵（P<0.05）,westernb blot 证实了Sjp40 蛋白在29 dpi 和45 dpi 兔肝脏中的表
达。免疫荧光显示：Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内,而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫
卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增
加,在感染兔急性肉芽肿病变期（45dpi）呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象,提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过
程中具有重要作用。
     

日本血吸虫卵可溶性抗原与病人和病兔血清的免疫印斑反应

日本血吸虫可溶虫卵抗原（ＳＥＡ）与血吸虫病人和兔血清的免疫印斑反应结果表明：ＳＥＡ中有七咱不同分子量的蛋白为主要血清学反应成分，其中≤２６ＫＤ、７ＫＤ及９６ＫＤ组分蛋白在血吸虫病检查中具有高度的敏感性和特异性，尤其是抗７ＫＤ和９６ＫＤ抗体在治疗兔的血清中消失较早。     

未致敏小鼠实验性日本血吸虫虫卵肉芽肿中淋巴细胞的动态观察

将日本血吸虫虫卵经尾静脉注入正常小鼠,观察沉积在肺血管床形成的虫卵肉芽肿内淋巴细胞的动态变化。结果表明,注卵后第一天即见淋巴细胞浸润,随后,淋巴细胞均数及其所占反应细胞总数的构成比逐渐增加。酯酶染色结果表明,注卵后10天内酯酶染色阳性细胞高于阴性细胞数,第10天后发生逆转;至第35天时更为明显。     

日本血吸虫成虫在体外培养中产卵和虫卵发育成熟的影响因素研究

在无血清８４１培养基中分别添加胸腺嘧啶核苷、乌氨酸、强的松龙和胰蛋白胨，可促进日本血吸虫产卵。经１５天的观察证实在８４１培养基中添加上述成份组成的８９１培养基比８４１培养基产量高，畸卵率低和产卵高峰持时间长。成虫最初２４ｈ内产出的虫卵体外培养至第１５天，ＲＰＭＩ１６４０培养基，无血清８４１２基８４１培养基和８９１培养基上成熟期虫卵物百分比依次为１１．６±４．７，１８．７±５．６，２８．４±８３．和     

日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶抗血清的制备

目的制备日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶免疫血清。方法大量诱导表达日本血吸虫26kDa谷胱苷肽-S-转移酶，予亲和层析纯化；用纯化蛋白免疫家免，制备谷胱苷肽-S-转移酶的免疫血清。结果亲和层析纯化获得26kDa谷胱苷肽-S-转移酶，融合蛋白免疫家免三次后获得谷胱苷肽-S-转移酶的免疫血清，其滴度达1：12800。结论纯化的谷胱苷肽-S-转移酶免疫家兔诱导产生了高滴度的抗体。     

日本血吸虫虫卵特异性蛋白的基因克隆及多态性分析

目的日本血吸虫虫卵中可能参与免疫调节的分子的克隆及其多态性分析。方法在NCBI数据库及国家人类基因组南方研究中心（Chinese National HumanGenome Center,CHGC）日本血吸虫基因数据库中筛选出两个类 IPSE（IL-4-inducing principle of S. mansoni eggs）基因（AY812212和AY223149）、一个类蛇毒过敏样蛋白基因（AY812797）和-个类亲环素蛋白基因（AY814078）。用RT—PCR检测表达谱。并从日本血吸虫虫卵cDNA文库中克隆这四个基因。定向克隆入质粒pET28-a,经双酶切鉴定筛选得重组的阳性克隆后测序。所得序列应用生物信息学分析软件VectorNTISuite7．0、Mega4．0和在线软件Rankpep进行初步分析。结果成功构建了4个重组质粒pET28a-223149,pET28a-812212,pET28a-812797和pET28a-814078,并测定和分析了这4个基因。结论日本血吸虫虫卵基因存在基因多态性,可能与免疫逃避有关。     

重组日本血吸虫26 ku谷胱甘肽-硫-转移酶的表达、纯化及其免疫特性分析用于急性血吸虫病免疫诊断

目的将日本血吸虫(中国大陆株)26 ku谷胱甘肽-硫-转移酶(26 ku SjGST)基因克隆入pET28a(+)并诱导表达26 ku rSjGST蛋白,纯化并用于急性血吸虫病免疫诊断.方法构建重组质粒pET28a-SjGST,转化到E.coli BL21,经IPTG诱导表达并进行SDS变性蛋白质电泳,以小鼠抗GST单克隆抗体为一抗,进行Western-blot分析.用His·BandPurification Kit亲和层析纯化重组蛋白,以此重组蛋白作为抗原,用ELISA法检测急性血吸虫患者血清和非流行区正常人血清. 结果成功地构建了重组质粒pET28a-SjGST,SDS变性蛋白质电泳显示可见一与预期分子量大小相符的特异蛋白条带的表达.Western blot分析表明,该重组蛋白能被小鼠抗GST单克隆抗体识别.ELISA结果表明,rSj GST用于急性血吸虫患者血清中抗体检测的阳性率为92.3%.结论 rSj GST得到表达和纯化,该重组蛋白用于急性血吸虫患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,为进一步探讨其在血吸虫病诊断中的应用奠定了基础.     

循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨纯化的日本血吸虫(中国大陆株)重组信号蛋白14—3—3(rSjl4—3—3)诊断血吸虫病的价值。方法 利用纯化的rSjl4—3—3抗原与成虫抗原，间接EUSA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSjl4—3—3抗体检出率为100％和92．0％，与正常人血清未出现交叉反应；抗AWA抗体检出率为98．0％和94．0％，与正常人有7．3％的交叉反应。结论 rSjl4—3—3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性，具有实用价值。     

C_（57）BL／6鼠日本血吸虫病肝虫卵肉芽肿模型特性初步研究

本实验对所建虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）致敏和未致敏Ｃ５７ＢＬ／６鼠日本血吸虫病肝虫卵肉芽肿模型特性进行初步探讨，并与Ｃ５７ＢＬ／６鼠自然感染模型进行比较。结果显示：１．经脾注射活卵诱发小鼠肝虫卵肉芽肿方法可行，２．ＳＥＡ致敏组肝虫卵肉芽肿形成过程及细胞组成基本与自然感染组相似，但发展速度较快；３．ＳＥＡ致敏组和自然感染组各期虫卵肉芽肿内ＩｇＧ抗体均呈阳性。从而证明，所建ＳＥＡ致敏Ｃ５７ＢＬ／６鼠日本血吸虫病肝虫卵肉芽肿模型对于肝虫卵肉芽肿防治研究确有价值。     

佝偻病简易诊断与骨X线及实验性诊断的相关性

目的 探讨婴幼儿佝偻病的简易诊断与骨X线、实验性诊断的相关性。方法 对简易诊断为佝偻病的166例小儿全部作骨X线、骨碱性磷酸酶（BALP）,血生化检查。结果 经骨X线确诊为佝偻病78例（47．0％）。BALP检测结果与X线检查结果符合率最高。夜惊、多汗、乒乓头、枕秃在佝偻病患儿中发生率较高。结论 简易诊断具有一定的实用价值,可应用于我国基层卫生机构,若有条件应用骨X线、BALP、血生化测定则可提高佝偻病诊断的准确性。     

免疫组化在肺小细胞癌和肺非小细胞癌活检标本中的鉴别诊断价值

目的：探讨免疫组化在肺小细胞癌（SCLC）和肺非小细胞癌（NSCLC）鉴别诊断中的作用。方法应用免疫组化SP法,选择肺穿刺及支气管镜活检标本,病理形态疑似SCLC 共72例,检测CD56、Syn、TTF1、CK5/6、CK14、P63、CK7及NapsinA的蛋白表达,分析SCLC的病理形态特征和免疫表型特点及其与NSCLC的鉴别。结果72例肺癌患者中,SCLC共27例,低分化鳞状细胞癌（SCC）共17例,低分化腺癌（ADC）共28例。结论 SCLC和NSCLC在临床治疗上方法不同,充分应用免疫组化可以进行诊断和鉴别诊断,从而可以减少误诊,同时给临床治疗方案的选择提供重要依据。     

应用日本血吸虫病患者血清特异性抗体亚类考核疗效

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ＫＤ原建立的ＢＡ－ＥＬＩＳＡ系统检测慢性血吸虫病患者治疗前、后血清中的ＩｇＧ１，ＩｇＧ３和ＩｇＧ４抗体水平，同时用常规ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＭ特异抗体。结果表明：各类抗体均未见假阳性，亦未与肝吸虫病和肺吸虫病者血清出现交叉阳性。提示ＩｇＧ１和ＩｇＧ４抗体的敏感性和特异性高，具有诊断和疗效考核的价值。     

核素显像对缺血性心肌病的诊断与疗效评价

目的探讨核素显像对缺血性心肌病(ICM)的诊断价值和疗效评价价值。方法选择321例临床综合资料确诊的ICM患者进行组合核素显像(CR I),与190例非缺血性扩张性心肌病患者(DCM)的核素显像表现进行对照,分析核素显像诊断ICM的灵敏度、特异度、准确率。对167例ICM患者进行治疗后随访显像,并与临床疗效评价情况对比,验证核素显像评价疗效的准确性。结果核素组合显像诊断ICM的灵敏度为92.8%(298/321),特异度为88.1%(170/193),阳性预测值93.7%(298/318),阴性预测值89.5%(170/190),准确性为91.6%(468/511)。核素显像评价疗效总有效率为85.0%(142/167),临床评价疗效总有效率为83.8%(140/167),二者结果接近。结论核素组合显像能提高缺血性心肌病的诊断准确性,在监测疗效方面与临床评价符合率高。     

老年急性脑梗塞患者血清C反应蛋白、脂蛋白（a）和纤维蛋白原含量的检测及临床意义

目的：探讨老年急性脑梗塞与血清C反应蛋白(CRP)、脂蛋白（a）［LP（a）］ 和纤维蛋白原（FG）的关系。方法：选择老年急性脑梗塞患者106例，采用免疫比浊法于入院当天测定CRP、LP（a）及FG含量。同时选择性别和年龄相似的健康老年人70例作为对照组。比较不同程度和不同梗塞面积老年急性脑梗塞患者血清CRP、LP（a）和FG水平。结果：①老年急性脑梗塞组CRP、LP（a）和FG分别为（14.06±2.17）mg•L^-1、（322.34±6.31） mg•L^-1和（8.24±2.62）g•L^-1，与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。②不同梗塞面积的老年急性脑梗塞患者组间CRP、LP（a）和FG水平呈现大梗塞灶＞小梗塞灶＞腔隙性梗塞，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）。③不同严重程度老年急性脑梗塞患者组CRP、LP（a）和FG水平为重型＞中型＞轻型，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：老年急性脑梗塞的发生与血清CRP、LP（a）和FG水平关系密切。CRP、LP（a）和FG水平越高，梗塞面积越大、病情程度越严重。CRP、LP（a）和FG可作为老年急性脑梗塞的危险因素，并可预测梗塞面积和病情的严重程度。