银杏叶提取物对U937泡沫细胞IL-1β、TNF-α及IL-10表达的影响

本研究考察了氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的U937细胞致炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗炎细胞因子白细胞介素10(IL-10)及其受体(IL-10R)的蛋白及mRNA的表达，同时观察银杏叶提取物(GbE)对它们的作用。U937细胞用100 mg·L^-1 ox-LDL刺激24 h形成泡沫细胞，同时分别加入不同浓度的GbE(0.1, 1及10 μg·L^-1)共孵育，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-10R的蛋白或mRNA表达。U937泡沫细胞组IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-10R的蛋白或mRNA的表达较对照组显著增加(P<0.01)。GbE组IL-1β及TNF-α的蛋白和mRNA的表达水平明显降低，IL-10的蛋白、IL-10和IL-10R的mRNA表达水平明显提高，与U937泡沫细胞组相比差异显著(P<0.05, P<0.01)。GbE对U937泡沫细胞致炎细胞因子IL-1β及TNF-α表达的显著抑制作用，对抗炎细胞因子IL-10及其受体IL-10R表达的显著上调作用可能是其抗atherosclerosis(AS)的机制之一。     

肿节风注射液对U937细胞共刺激分子表达的影响及其机制

目的 探讨肿节风注射液(Sarcandra glabra injection,SGI)对白血病U937细胞共刺激分子表达的影响及其作用机制。方法 用不同浓度(1.83,2.75,3.66,5.49,7.32 g·L^-1)的SGI处理白血病U937细胞48 h后,提取RNA,RT-PCR检测细胞的CD86和B7-H1 mRNA表达;免疫印迹法观察经SGI处理前后CD86、胞浆和核内NF-κB蛋白表达。结果 SGI处理后,B7-H1 mRNA表达降低;在SGI浓度为3.66~7.32 g·L^-1,CD86 mRNA表达升高;CD86蛋白含量随SGI处理浓度增加而升高;胞浆中的NF-κB蛋白含量下降,胞核中含量增加。结论 SGI在一定浓度下能诱导U937白血病细胞CD86表达,下调B7-H1的表达,其机制可能与核内NF-κB含量增加有关。     

Protein expressions in macrophage-derived foam cells：comparative analysis by two-dimensional gel electrophoresis

目的:研究氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞中蛋白质组的差异表达。方法:泡沫细胞模型由人类单核细胞系白血病U937细胞经氧化低密度脂蛋白诱导而成,将对照U937细胞与U937泡沫细胞的蛋白提取物分别进行双向凝胶电泳(2-DE)分离,凝胶经银染后,于PDquest 2-DE图像分析软件中进行图像处理,利用ExPASy蛋白质组学网站中U937细胞的蛋白表达谱信息,对所得的U937泡沫细胞2-DE图谱作进一步鉴定。结果:通过对2-DE蛋白图谱的分析,共150点与参考胶相匹配(匹配率:75％),与U937细胞图谱相比,泡沫细胞中有37个蛋白点表达量有显著性变化(P<0.05),与对照U937细胞相比,在U937泡沫细胞中28个蛋白点表达量上调,9个点表达量下调,其中,8个U937细胞中表达的蛋白点,在U937泡沫细胞中未检测到;而11个在泡沫细胞中表达的蛋白点,未在对照U937细胞中表达。结论:本研究首次建立经氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞的蛋白差异表达谱,从而提供了对动脉粥样硬化病理过程中巨噬源性泡沫细胞功能性分析研究的新思路。     

白藜芦醇对U937泡沫细胞清道夫受体CD36表达的影响

目的 研究白藜芦醇对U937泡沫细胞B类清道夫受体CD36mRNA、蛋白表达的影响.方法 U937细胞与佛波酯100μg·L^-1、ox-LDL 80 mg·L^-1孵育48 h,建立U937泡沫细胞模型;以不同浓度的白藜芦醇（1、10、20μmol·L^-1）预处理U937细胞24 h再加入佛波酯100μg·L^-1、ox-LDL 80 mg·L^-1共同孵育48 h后通过RT-PCR和Western印迹检测分别检测U937细胞CD36mRNA和蛋白的表达情况.结果 U937泡沫细胞组CD36mRNA和蛋白的表达较U937细胞对照组明显增加（2.389±0.249）vs（0.953±0.242）,P〈0.01;（2.562±0.218）vs（1.000±0.052）,P〈0.01,白藜芦醇干预后,随着浓度的增加,U937泡沫细胞的CD36mRNA和蛋白表达水平呈浓度依赖性下降（P〈0.05）.结论 白藜芦醇能浓度依赖性地下调ox-LDL诱导的U937泡沫细胞CD36mRNA和蛋白的表达.     

银杏叶提取物对大鼠主动脉内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响以及银杏叶提取物(Ginkgo bilobaextract,GbE)对RAEC的保护作用.方法:MTT法和LDH的释放检测RAEC的损伤;用基础酶联免疫吸附实验(ELISA)检测VEGF蛋白含量;用RNA点杂交(Dot blot)法和原位杂交法检测细胞中 VEGF mRNA的表达.结果:LPC 5 mg/L明显抑制RAEC的生长,加入 GbE 0.01-1 μg/L后,LPC对RAEC生长抑制率明显降低。LPC可使RAEC条件培养基中VEGF蛋白表达明显增加,GbE可剂量依赖性地降低VEGF的蛋白含量.原位杂交及点杂交结果显示正常培养的RAEC未见明显的 VEGF mRNA表达,LPC刺激后可见其高表达,同时加入GbE后,VEGF mRNA的表达明显降低.结论:LPC能诱导RAEC表达高水平的VEGF,GbE可明显降低其含量.     

丹酚酸B对香烟烟雾提取物诱导的支气管上皮细胞凋亡的影响

目的 研究丹酚酸B对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞凋亡的影响及机制。方法 将人支气管上皮细胞16HBE分成对照组、模型组(香烟烟雾提取物诱导)、实验低剂量组(烟雾诱导+11μmol·L^-1丹酚酸B处理)、实验中剂量组(烟雾诱导+22μmol·L^-1丹酚酸B处理)、实验高剂量组(烟雾诱导+44μmol·L^-1丹酚酸B处理)、实验高剂量+Compound C组(烟雾诱导+44μmol·L^-1丹酚酸B+AMPK信号通路抑制剂Compound C处理)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况,以蛋白质印迹法检测磷酸化腺苷—磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)蛋白表达,用PI单染法检测细胞周期,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,用分光光度法检测胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果 对照组、模型组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+Compound C组的...     

U937泡沫细胞中细胞间粘附分子—1的表达及欧芹素乙的抑制作用

目的：研究在人类单核细胞系U937泡沫细胞中,细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达水平,观测欧芹素乙（欧前胡内酯,imperatorin,IMP)对ICAM－1表达的抑制作用。方法：将U937细胞与80mg/L氧化低密度脂蛋白孵育48h,建立U937泡沫细胞模型,在培养基中预加入不同浓度的IMP（0,25,50,100μmol/L）,采用Western blotting检测ICAM－1的蛋白表达;采用Northern blotting检测ICAM－1的mRNA水平。结果：泡沫细胞中ICAM－1的表达显著高于正常U937细胞。ICAM－1的蛋白和mRNA水平分别是正常U937的15和10倍。经IMP50和100μmol/L预处理后,泡沫细胞中ICAM－1的高表达被显著抑制。当IMP浓度达到100μmol/L时,ICAM－1的蛋白水平降低了79％,mRNA水平降低了74％。结论：经氧化低密度脂蛋白孵育后,U937泡沫细胞中ICAM－1呈现高表达,IMP能显著抑制这种表达。     

基于Cleaved caspase-9研究丹酚酸B对肝纤维化细胞凋亡的影响

目的从凋亡角度,观察丹酚酸B对体内外肝纤维化细胞的影响及对凋亡蛋白cleaved caspase-9的影响。方法采用二乙基亚硝胺诱导小鼠肝纤维化模型,共造模12周;体外采用(25、50、100μmol·L~(-1))丹酚酸B作用于经TGF-β1刺激的HSC-T6细胞。HE染色检测病理学改变,并确定纤维化病变区域; Hoechst 33258荧光染色法观察纤维化区域细胞凋亡情况; Annexin V-FITC/PI检测凋亡率; Western blot法检测纤维化组织和HSC-T6细胞中cleaved caspase-9的表达。结果 HE染色结果提示12周为小鼠肝纤维化时期,丹酚酸B低、高剂量组未形成假小叶,纤维化程度均轻于模型组; Hoechst 33258染色显示,与模型组相比,丹酚酸B低、高剂量能够明显促进纤维化区域细胞凋亡; Annexin V-FITC/PI结果显示,丹酚酸B促进TGF-β1刺激的HSC-T6凋亡;Western blot结果提示,与模型组比较,丹酚酸B组cleaved caspase-9表达水平明显升高;与TGF-β1组比较,丹酚酸B50μmol·L~(-1)组cleaved caspase-9表达明显增加。结论丹酚酸B能够明显促进体内外肝纤维化细胞凋亡,其促凋亡进机制可能与上调cleaved caspase-9有关。     

丹酚酸B对自发性糖尿病大鼠合并大血管病变的保护作用

摘 要 目的：探讨丹酚酸B对自发性糖尿病（GK）大鼠合并大血管病变的保护作用及可能的机制。方法: 将32只GK大鼠随机分为模型组和丹酚酸B低、中、高剂量组(40,80,160 mg·kg^-1),另选取正常8只Wistar大鼠作为正常对照组。所有GK大鼠给予高糖、高脂饲料16周后以L-N-硝基甲酯（L-NAME）10 mg·kg^-1·d^-1灌胃,连续8周。给药开始及结束前对大鼠的血糖和血压进行检测,麻醉后取腹主动脉血进行血常规检测,放血后取胸主动脉制作病理切片,观察血管病变,Western-blot法检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。结果: 所有GK大鼠血糖水平持续升高,但模型组与给药组差异无统计学意义（P>0.05）,模型组大鼠实验结束时血压显著升高,给予丹酚酸B可剂量依赖性降低血压,差异有统计学意义（P＜0.05）;丹酚酸B可显著降低模型大鼠的白细胞总数和分类计数,明显减轻血管病变程度并减少VEGF的表达。结论:丹酚酸B对自发性糖尿病大鼠的大血管具有明显的保护作用,其可能的机制为降低血压、抗炎以及降低VEGF的表达。     

丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响

目的 探究丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响.方法 根据人近端肾小管上皮细胞HK-2细胞培养方式的不同,分为对照组、葡萄糖组和实验组,对照组加入5.5 mmol/L的葡萄糖;葡萄糖组加入葡萄糖的浓度分为10、20和30 mmol/L;实验组在培养基中分别加入丹酚酸B和葡萄糖(30 mmol/L),丹酚酸B的浓度分为0.1、1、10和100 μmol/L,培养24 h.使用蛋白提取试剂盒分别提取3组培养细胞中的总蛋白,采用Bradford法测定不同培养组细胞自噬相关蛋白的含量,进行分析比较.结果 随着葡萄糖刺激浓度的增高,p62蛋白表达增加.24 h后,高糖可诱导HK-2细胞自噬相关蛋白p62表达增加,LC3表达减少,且呈剂量依赖性.与对照组相比,随着丹酚酸B干预剂量的增高,24 h后的细胞LC3的表达增加,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性(P<0.05).Logistic回归分析的结果显示,LC3蛋白含量、p62蛋白含量是影响细胞自噬的独立影响因素.结论 在高糖的干预下,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性.     

反义寡脱氧核苷酸抑制U937泡沫细胞血管内皮生长因子的表达(英文)

AIM:To study the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) induced by oxidized low density liprotein (ox-LDL) and the inhibitory effects of antisense oligodeoxynucleotide (asODN) on the levels of VEGF protein and mRNA in the U937 foam cells. METHODS: U937 cells were incubated with ox-LDL 80 mg/L for 48h, then ,the foam cells were treated with asODN (0,5,10, and 20μmol/L). The VEGF concentration in the media was determined by ELISA. The VEGF protein expression level in cells was measured by immuohistochemistry; the positive ratio detected by a morphometrical analysis system was used as the amount of the VEGF expression level. The VEGF mRNA level was examined by Northern blotting. RESULTS: After U937 cells were incubated with ox-LDL, VEGF expression level increased greatly both in the cells and in the media. asODN markeldy inhibited the increase of VEGF. After treatment with asODN 20μmol/L, the VEGF protein concentration in the media decreased by 45.0%, the VEGF positive ratio detected by immuohistochemistry in cells decreased by 64.9%, and the VEGF mRNA level decreased by 47.1%. CONCLUSION: The expression of VEGF in U937 foam cells was strong. asODN inhibited VEGF expression significantly in U937 foam cells in vitro.     

银杏达莫对急性脑梗死病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白水平的影响

目的:观察银杏达莫注射液对脑梗死病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白(OX-LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法:72例急性脑梗死病人分为试验组(36例,静脉滴注银杏达莫注射液20 mL·次-1,qd,连续14 d)和对照组(36例,每日静脉滴注丹香冠心注射液20 mL,连续14 d),于治疗前和治疗后14 d分别检测血浆OX-LDL,SOD,MDA的水平变化。结果:试验组病人治疗前血浆OX-LDL,SOD,MDA水平分别为(0．69±s 0．20)mg·L-1,(80±6)kU·L-1,(6．4±1．3)μmoL·L-1,治疗后分别为(0．54±0．23)mg·L-1, (107±9)kU·L-1,(4．1±1．0)μmoL·L-1,治疗前后有非常显著差异(P<0．01);对照组治疗前后血浆OX-LDL,SOD和MDA水平变化不明显(P>0．05)。治疗期间2组病人均未出现明显不良反应。结论:银杏达莫注射液具有清除自由基,降低血浆OX-LDL水平的作用。     

丹酚酸B对MC3T3-E1细胞Dkk1 mRNA表达的影响

目的:观察丹酚酸B对MC3T3-E1细胞Dkk1mRNA表达的影响。方法:MC3T3-E1细胞分组:正常对照组、成骨诱导组、地塞米松1×10-6 mol·L-1组、地塞米松1×10-6 mol·L-1+丹酚酸B1×10-7 mol·L-1组、地塞米松1×10-6 mol·L-1+Dkk1抗体100μg·L-1组、丹酚酸B1×10-7 mol·L-1组、Dkk1抗体100μg·L-1组。加药7 d后用RT-PCR法检测细胞Dkk1mRNA表达水平。结果:与正常组相比,成骨诱导后Dkk1的表达增多,地塞米松组的Dkk1表达明显增多,丹酚酸B组Dkk1的表达减少,Dkk1抗体单用未见Dkk1的表达。与地塞米松组相比,丹酚酸B单用Dkk1的表达比地塞米松组少。丹酚酸B、Dkk1抗体可对抗地塞米松应用后引起的Dkk1表达增多。结论:丹酚酸B可以减少Dkk1的表达和对抗地塞米松使用后引起的Dkk1表达增多,这可能是其促骨形成的机制之一。     

缺氧对血管内皮生长因子诱导牛冠状动脉内皮细胞脂蛋白通透性升高的调控及丹酚酸B的抑制作用

目的　为了了解缺氧对血管内皮生长因子(VEGF)增强血管内皮细胞通透性作用的影响及其与动脉粥样硬化的关系 ,考察了正常和缺氧状态下VEGF对体外培养牛冠状动脉内皮细胞 (BCEC)脂蛋白通透性的影响及丹酚酸B的抑制作用。方法　正常及缺氧条件下 ,将VEGF及丹酚酸B加入BCEC共孵育 ,用SN 695型液闪计数器测 [12 5I]低密度脂蛋白([12 5I]LDL)通过BCEC的百分率。结果　VEGF可显著增强BCEC对 [12 5I]LDL的通透性 ,这种增加具有浓度依赖性。缺氧 3h可促进VEGF所致的的通透性增加。丹酚酸B在正常和缺氧条件下均显著抑制VEGF诱导的BCEC通透性升高。结论　VEGF可增强血管内皮细胞的通透性 ,可能在动脉粥样硬化的形成和发展过程中起一定作用。丹酚酸B对VEGF诱导的血管内皮通透性升高有显著的抑制作用     

二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响,探讨TSG抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法体外培养经PMA处理过的U937细胞,在给予ox-LDL刺激的同时给予不同浓度TSG干预,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中SOD活力,TBA法测定培养液中MDA含量,蛋白免疫印迹法分析观察各组细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法分析观察各组细胞ICAM-1和VCAM-1的基因表达。结果模型组细胞液总SOD活力较对照组明显降低,TSG高剂量及阳性对照组总SOD活力较模型组明显升高(P<0.05);模型组细胞液MDA水平较对照组明显升高,TSG高中剂量及阳性对照组较模型组明显升高(P<0.05)。蛋白免疫印迹分析显示,模型组ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);TSG高剂量和辛伐他汀能明显降低ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达(P<0.05)。逆转录聚合酶链反应分析显示,模型组细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平较正常组明显升高(P<0.01);TSG高剂量和辛伐他汀较模型组能明显降低ICAM-1、VCAM-1mRNA水平(P<0.01)。结论TSG具有抗氧化、抑制单核巨噬细胞黏附分子分泌作用;其作用可能与其抗动脉粥样硬化有关。     

VEGF诱导牛主动脉内皮细胞通透性升高及丹酚酸B对其的抑制作用(英文)

目的:考察血管内皮生长因子/血管通透因子(VEGF)对体外培养牛主动脉内皮细胞脂蛋白通透性的影响及丹酚酸B的抑制作用。方法:将不同浓度的VEG、丹酚酸B及培养基加入牛主动脉内皮细胞单层,与~(125)I-LDL共孵育,在不同的时间段用SN-695型液闪计数器测其通过细胞单层的百分率。结果:VEGF可显著增强牛主动脉内皮细胞单层对~(125)I-LDL的通透性(P<0.01),这种增加具有时间和剂量依赖性。丹酚酸B能显著抑制VEGF诱导的这种高通透(P<0.01)。结论:上述结果提示VEGF在动脉粥样硬化的形成和发展过程中起一定作用。丹酚酸B对VEGF诱导血管内皮通透性升高有显著的抑制作用。     

吲哚美辛对脂多糖引起的人类风湿性关节炎滑膜细胞中白介素-6表达的影响

目的研究吲哚美辛对脂多糖引起的人类风湿性关节炎（RA）成纤维状滑膜细胞(FLS)中白介素-6（IL-6）表达的影响。方法用放免分析法检测IL-6蛋白的表达水平； RT-PCR方法测定IL-6 mRNA的表达水平。结果LPS处理对FLS中IL-6表达无显著影响； LPS刺激的U937细胞培养液上清液可明显增强FLS 中IL-6蛋白分泌及mRNA表达； 吲哚美辛可显著抑制上述变化，且其抑制作用随浓度的增加而增强。结论吲哚美辛可抑制LPS刺激的U937细胞培养上清液引起的FLS中IL-6的表达。