氢化可的松抑制人中性粒细胞与滑膜细胞粘附机理研究

目的研究氢化可的松对正常人中性粒细胞(PMN)与滑膜细胞(HSC)粘附的作用及其机理.方法MTT比色法检测PMN与HSC的粘附,Cell-ELISA和RT-PCR法检测HSC粘附分子的表达,EMSA研究核转录因子NF-κB的活化.结果氢化可的松可显著抑制50U·mL^-1rhTNF-α与IL-1β刺激的HSC与PMN的粘附;显著抑制HSC表面VCAM-1的表达及VCAM-1mRNA表达,但对ICAM-1mRNA的表达无显著影响;同时对TNF-α诱导的NF-κB活化有显著抑制作用.结论氢化可的松显著抑制PMN与HSC的粘附,其作用机理可能是通过抑制NF-κB的活化,进而抑制滑膜细胞中VCAM-1mRNA及蛋白表达而实现的.     

大鼠中性粒细胞与滑膜细胞粘附模型的建立

目的：建立大鼠中性粒细胞（PMN）与滑膜细胞（RSC）的粘附模型。方法：MTT比色法。结果：500 U.mL^-1 rhTNF-α与IL-1刺激RSC 12 h对PMN有明显的粘附作用, MTT-PMN细胞数与540 nm吸光度值有良好的线形相关性;氢化考的松（hydrocortisone, Hy）和美洛昔康（meloxicam, Melo）均可抑制PMN与500 U.mL^-1 rhTNF-α/或IL^-1诱导的RSC粘附,提示Hy和Melo治疗类风湿性关节炎（RA）可能与其抑制PMN与RSC粘附作用有关。结论：以MTT比色法为基础建立的检测大鼠PMN与RSC的粘附模型,可用于PMN与RSC粘附抑制剂的筛选。     

Sanggenon C对人多形核白细胞和滑膜细胞粘附的抑制作用及其机制

目的:观察化合物Sanggenon C对人外周血多形核白细胞(PMN)与人滑膜细胞(HSC)粘附的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:MTT比色法研究PMN与HSC粘附,Cell-ELISA及RT-PCR法研究HSC粘附分子ICAM-1和VCAM-1表达,EMSA研究核转录因子NF-κB的活化.结果:Sanggenon C在0.01-10μmol·L~(-1)范围内均可显著抑制TNF-α 5O kU·L~(-1)与IL-1β诱导的HSC与PMN粘附,其IC_(50)分别为27.29nmol. L~(-1)和54.45nmol·L~(-1);Sanggenon C可显著抑制HSC表面ICAM-1和VCAM-1蛋白表达,同时也显著抑制VCAM-1 mRNA表达,但对ICAM-1 mRNA表达无显著影响;Sanggenon C在1-10μmol·L~(-1)浓度下也可显著抑制TNF-α对NF-κB的活化.结论:Sanggenon C是一个有效的人PMN与HSC粘附抑制剂,其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化,进而抑制HSC表面VCAM-1的表达或抑制ICAM-1转录后调控过程而实现的.     

红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的探讨红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖、α1(I)型胶原mRNA合成、IκB和NF-κB表达的影响。方法用原位杂交、免疫细胞化学和凝胶电泳迁移率技术(EMSA)检测HSC的增殖和胶原基因表达。结果乙醛刺激HSC增殖、α1(I)型胶原mRNA合成 ,使IκB表达下降、NF-κB活性增加。红景天苷(0.5～2.5 mg·mL^-1)对上述影响有抑制作用,且以1.5 mg·mL^-1组效果最好。结论红景天苷明显抑制乙醛刺激的HSC增殖及胶原基因的表达。     

獐牙菜苦苷的抗炎活性及其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α表达的影响

目的 观察獐牙菜苦苷（Swertiamarin）的抗炎活性以及对核转录因子-κB（NF-κB）通路的调控作用。方法 采用脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7构建体外炎症模型,CCK-8法观察獐牙菜苦苷对细胞活性的影响,ELISA法检测其对炎症相关因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）表达的影响,RT-PCR法测定其对NF-κB通路相关因子p65和IKK-α的mRNA表达的影响。结果 100 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能降低细胞存活率,3.125~50 μg·mL^-1浓度对细胞存活率无影响;25~50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能降低炎症相关因子TNF-α及IL-6的释放;12.5~50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能抑制p65的mRNA表达,50 μg·mL^-1獐牙菜苦苷能抑制IKK-α的mRNA表达。结论 獐牙菜苦苷对LPS诱导的炎症模型中TNF-α、IL-6的生成具有抑制作用,其机制可能与抑制NF-κB通路相关因子p65、IKK-α的表达有关。     

美洛昔康凝胶剂中促渗剂的筛选

目的 研究薄荷醇和氮酮在美洛昔康凝胶中对皮肤渗透性的影响。方法 制备包含不同浓度的薄荷醇和氮酮的0.75%美洛昔康凝胶,采用改良的Franz扩散池,用离体小鼠皮肤进行体外透皮作用实验,以紫外分光光度法测定美洛昔康累计渗透量及渗透速率。结果 不含促渗剂的美洛昔康凝胶的渗透速率为0.862mg·h^-1,含1%、3%、5%薄荷醇的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为0.839,、1.973、0.967mg·h^-1,含1%、3%、5%氮酮的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为0.693、0.969、0.789mg·h^-1,含3%薄荷醇和1%、3%、5%氮酮的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为1.237、0.997、0.928mg·h^-1。结论 3%薄荷醇对美洛昔康凝胶有明显较好的促渗作用。     

抗炎药物对HEK293细胞NF-κB活化的调节作用

目的探讨不同作用机制的抗炎药物对内源性和TNFα诱导的NF-κB的调节作用。方法利用荧光素酶报告基因测定法检测细胞内NF-κB活化水平，MTT法测定细胞增殖，PI染色-流式细胞仪测定细胞凋亡。结果 一定浓度的美洛昔康和地塞米松能够明显降低HEK293细胞内源性和10 ng·mL^-1 TNFα诱导的NF-κB活化，1×10^-9 mol·L^-1氢化考的松分别明显增加和降低这两种活化，而吲哚美辛对内源性活化无明显影响。4种药物对HEK293细胞增殖均无明显作用。地塞米松单独或联合TNFα、吲哚美辛联合TNFα能够引起细胞凋亡。结论不同类型的抗炎药物对内源性和TNFα诱导的NF-κB活化影响不同。提示NF-κB活化调节可能成为药物作用机理研究的有效靶点之一。     

吲哚美辛和美洛昔康对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的抑制作用

目的　研究非甾体抗炎药吲哚美辛(indomethacin)和美洛昔康(meloxicam)对细菌脂多糖(LPS)诱导表达的C57小鼠腹腔巨噬细胞核转录因子NF-κappaB(NF-κB)的抑制作用。方法　NF-κB的测定采用电泳迁移率改变法。结果　小鼠腹腔巨噬细胞经LPS诱导后细胞NF-κB含量明显增高。Indomethacin和meloxicam在10^-5-10^-7mol.L^-1浓度下可明显降低LPS激活的小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活化。结论　Indomethacin和meloxicam对NF-κB活化的抑制作用可能是两者的抗炎作用机理之一。     

炎性刺激剂对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的诱导

目的：建立炎性刺激剂诱导细胞核因子κB（Nuclear factor κB,　NF-κB）的模型，研究传统非甾体抗炎药阿斯匹林（aspirin）作用机理。 方法：用脂多糖（LPS）和佛波酯（PMA）刺激小鼠腹腔巨噬细胞，用电泳迁移率改变检测法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测。结果：LPS 1 μg.mL^-1及3 μg.mL^-1，PMA 2 ng.mL^-1均能诱导细胞核内NF-κB的含量。阿斯匹林10-5 mol.L^-1可以显著抑制LPS（1 μg.mL^-1）和PMA（PMA 2 ng.mL^-1）对细胞核内NF-κB的活化。结论：所建立的以LPS和PMA为刺激剂，诱导细胞核内NF-κB的模型，可用于非甾体抗炎药的抗炎机理的研究。     

肺热普清散对斑马鱼炎症模型的抗炎作用及机制研究

目的 探讨藏药肺热普清散对斑马鱼炎症模型的作用及机制。方法 挑选受精后 72 h 斑马鱼随机移入 24 孔板中,分为对照组、模型组和肺热普清散低、中、高质量浓度(3、10、30 mg·L^-1)组,对照组与模型组不加药,肺热普清散与斑马鱼共孵育 1 h 后,除对照组外,其余各组用 20 μmol·L^-1硫酸铜处理 2 h 制备炎症模型。在荧光显微镜下观察绿色荧光标记中性粒细胞的 Tg(Lyz:EGFP)系斑马鱼体内炎症细胞迁移情况;实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测野生型斑马鱼核因子κB2(NF-κB2)、白细胞介素(IL)-1b、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8 mRNA 水平;Western blotting 实验检测野生型斑马鱼 NF-κB、TNF-α 蛋白表达水平;免疫荧光法检测各组鱼尾 NF-κB 表达。结果 对照组斑马鱼荧光细胞主要分布于头部和主动脉部,躯干部位主动脉以上荧光细胞稀少;模型组荧光细胞在各区域均增加,显示出炎症细胞向血管外迁移的明显趋势,躯干侧线以上荧光细胞计数较对照组显著增加(P<0.001);肺热普清散 10、30 mg·L^-1组躯干部荧光细胞计数与模型组比较显著降低(P<0.01、0.001)。与模型组比较,肺热普清散 3、10、30 mg·L^-1 组 IL-1b、TNF-α、IL-8 的 mRNA 水平显著下调(P<0.05、0.01),10、30 mg·L^-1 组 NF-κB2 mRNA 水平显著下调(P<0.01);10、30 mg·L^-1 组 NF-κB、TNF-α 蛋白表达水平显著降低(P<0.01、0.001)。免疫荧光结果显示,模型组躯干部位和鱼鳍 NF-κB 白色荧光点较对照组明显增加,经 10 mg·L^-1肺热普清散处理后的相同部位荧光点减少。结论 肺热普清散对硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型具有抗炎作用,机制与抑制 NF-κB、TNF-α 表达有关。     

异丹叶大黄素对人滑膜细胞白细胞介素-8生成及mRNA表达的影响

目的研究异丹叶大黄素(isorhapotigenin,Iso)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人滑膜细胞(humansynovialcell,HSC)白细胞介素-8(IL-8)生成和mRNA表达的影响.方法用RIA方法测定IL-8的含量,以RT-PCR法测IL-8mRNA.结果Iso在1×10^-6-1×10^-5mol·L^-1浓度范围内对TNF-α诱导的人滑膜细胞IL-8生成有抑制作用,并抑制TNF-α诱导的HSCIL-8mRNA表达.结论Iso抑制TNF-α诱导的HSCIL-8生成,可能与影响IL-8mRNA表达有关.     

重组人胸腺素α原体外对IFN-γ,IFN-α及TNF-α的影响

目的体外观察重组人胸腺素α原(prothymosin α,Pro Tα)对几种重要细胞因子分泌的影响。方法用脾淋巴细胞、脾巨噬细胞及腹腔巨噬细胞,以ELISA法检测Pro Tα对IFN-γ,IFN-α和TNF-α分泌的影响。结果1×10^-7 mol·L^-1 Pro Tα明显促进脾细胞分泌IFN-γ(P<0.05),该浓度的Pro Tα也明显刺激小鼠脾巨噬细胞分泌IFN-α(P<0.01);在小鼠腹腔巨噬细胞中,Pro Tα能明显刺激IFN-α和TNF-α的分泌(P<0.01)。结论Pro Tα对细胞因子IFN-γ,IFN-α和TNF-α的分泌均有促进作用。     

苯并异硒唑酮磺酰胺衍生物对环氧酶的抑制作用

目的　研究苯并异硒唑酮磺酰胺衍生物对环氧酶的抑制作用。方法　放免法;RT-PCR法。结果　化合物A和B对COX-1和COX-2的代谢产物TXB2和PGE2的IC₅₀ 比值分别为1000和560 ,化合物A和B可抑制LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞COX-2 mRNA生成,而对COX-1的mRNA生成无影响。结论　化合物A和B为COX-2选择性抑制剂,可抑制COX-2 mRNA的生成     

毛细管电泳法测定人血浆胸腺九肽的含量

目的建立定量测定人血浆中胸腺九肽的毛细管区带电泳法。方法运行缓冲液为50 mmol·L^-1 Na₂B₄O₇-10 mmol·L^-1 Na₂HPO₄ (pH 9.10)。毛细管总长57 cm,有效长度50 cm,内径75 μm。运行电压12 kV,运行温度25℃。检测波长:200 nm。结果胸腺九肽的线性范围为1～10 μg·mL^-1,γ=0.9990,重现性RSD为3.05%,回收率为70.97%,RSD为3.32%。结论毛细管电泳法可检测人血浆胸腺九肽的含量,方法简便、可靠、快速。     

低分子量肝素对白细胞黏附和黏附分子表达的影响

目的研究低分子量肝素对白细胞与血管内皮细胞体内外黏附和细胞间黏附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法倒置显微镜观察在致敏豚鼠肠系膜微循环中白细胞的滚动和黏附情况 ,体外观察大鼠中性粒细胞对培养的脐静脉内皮细胞的黏附情况 ,流式细胞仪测定ICAM 1的表达。结果低分子量肝素 2 0、4 0u kg对白细胞黏附有明显抑制作用 ;0 .5、1.0u ml(终浓度 )对中性粒细胞体外黏附有明显抑制作用 ;0 .12 5、0 .2 5、0 .5、1.0u ml对脐静脉内皮ICAM 1的表达有明显抑制作用。结论低分子量肝素有明显抑制白细胞黏附及降低ICAM 1表达的作用。     

槲皮素抑制血小板-内皮细胞粘附及粘附分子表达槲皮素抑制血小板-内皮细胞粘附及粘附分子表达

目的研究槲皮素(Que)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人血小板的粘附作用,及其粘附分子表达。方法用流式细胞仪测定肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导HUVEC表达细胞间粘附分子(ICAM-1)及凝血酶诱导的人血小板P-选择素的表达，用［³H］-Adenine标记人血小板,检测其与HUVEC的粘附反应。结果Que与人血小板作用后，可抑制凝血酶诱导的人血小板表达P-选择素。HUVEC经TNF-α处理后，明显增加细胞表面ICAM-1的表达,加强其与血小板的粘附反应，Que在一定剂量范围内可抑制HUVEC表达ICAM-1,并可抑制其与血小板的粘附作用。结论Que可抑制内皮细胞和血小板粘附及粘附分子表达。     

3,4-oxo-isopropylidene-shikimic acid inhibits adhesion of polymorphonuclear leukocyte to TNF-α-induced endothelial cells in vitro

AIM：To examine the effect of 3,4-oxo-isopropylidene-shikimic acid (ISA) on human polymorphonuclear leukocyte (PMN) adhesion to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and explore its mechanism. METHODS:Adhesion of PMN to HUVEC was measured by rose bengal staining assay. Cell-EL1SA and RT-PCR methods were used to examine the expression of adhesion molecules ICAM-1. Cell viability was detected with MTT assay.RESULTS: ISA (1-100μmol/L) effectively reduced PMN adhesion to TNF-α-induced HUVEC with the inhibitory rate from 17.2% to 53.5%, and exerted no effect on PMN adhesion to normal HUVEC. Adhesion molecule ICAM-1 surface protein and mRNA expression induced by TNF-α (400kU/L) were significantly inhibited by ISA. In addition, the cell viability of HUVEC was unchanged 48h after treatment with ISA. CONCLUSION: ISA inhibited TNF-α-stimulated PMN-HUVEC adhesion and expression of ICAM-1.