MPPa光动力作用对鼻咽癌细胞生长抑制的初步研究

目的观察MPPa光动力作用对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用及可能机制.方法采用倒置显微镜观察和MTT法检测MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞生长状况;应用膜联蛋白Annexin V-PI双染结合流式细胞仪分析和细胞核染色观察MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞凋亡的发生情况;罗丹明123结合流式细胞仪分析MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞线粒体膜电位的变化.结果MPPa光动力作用显著抑制人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的生长,在低浓度MPPa和低能量密度光照条件下其抑制作用呈剂量效应关系,倒置显微镜下观察到MP-n光动力作用组癌细胞数量显著减少,细胞脱落、固缩;MPPa光动力作用人鼻咽癌细胞株CNE2细胞发生凋亡和继发性坏死的比率均显著高于单纯光照射组、单纯MPPa光敏剂处理组和假照射组(P＜0.01),而单纯光照组、单纯MPPa光敏剂处理组和假照射组三对照组间无明显差异(P＞0.05),Hoechst33258细胞核荧光染色荧光显微镜下观察到MPPa光动力作用后癌细胞核固缩、碎裂,可见凋亡小体.MPPa光动力作用人鼻咽癌细胞株CNE2细胞线粒体膜电位下降.结论MPPa光动力作用不仅能有效抑制诱导人鼻咽癌细胞株CNE2细胞生长,而且可诱导其发生凋亡,且MPPa光动力作用可能通过线粒体通路诱导鼻咽癌细胞凋亡.     

粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究

目的：探讨粉防己碱（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法：将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果：Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长（P〈0.05）。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强（P〈0.05）。结论：Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。     

干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

茶氨酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡影响的研究

目的研究茶氨酸在体内外对鼻咽癌细胞株CNE2增殖、凋亡、抗血管生成的作用。方法体外培养鼻咽癌CNE2细胞,将其分为阴性对照组,顺铂(CDDP)组和茶氨酸实验组,分别用PBS、CDDP和不同浓度的茶氨酸处理体外培养的CNE2细胞。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪和TUNEL法分析细胞凋亡,观察茶氨酸对CNE2细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用,免疫组织化学检测CD34、VEGF的表达情况。结果 100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸对鼻咽癌CNE2细胞作用72 h时细胞增殖抑制率达到峰值。流式细胞仪和TUNEL法检测100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸处理72 h后细胞凋亡率最高,而且随着浓度的增加,细胞凋亡率升高。茶氨酸对移植瘤的抑瘤率为44.54%。实验组与对照组相比,瘤体组织中CD34、VEGF的表达均降低,具有统计学意义。结论茶氨酸通过抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制鼻咽癌细胞CNE2的增殖。     

姜黄素与5氟尿嘧啶联合应用抗鼻咽癌的实验研究

目的：探讨姜黄素与5氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用,并研究其机制。方法姜黄素、5-FU单独应用及两者联合应用作用于鼻咽癌CNE-2Z细胞72 h,MTT法检测细胞生长状况,流式细胞仪检测鼻咽癌细胞的凋亡率, Western blot 检测Bcl-2、Bax、caspase-3以及 NF-κB 蛋白表达水平变化。 Real-time PCR 检测 caspase 家族中 caspase-3、caspase-7、caspase-9 mRNA表达水平的变化。结果凋亡率检测结果显示：两药联合应用后,肿瘤细胞的凋亡率明显高于单用药组（ P＜0.01）。姜黄素组、5-FU组和药物合用组CNE-2Z细胞的Bcl-2蛋白、细胞核内及细胞浆内NF-κB蛋白的表达水平下降,Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平增高。联合用药组caspase-3、caspase-7和caspase-9 mRNA表达水平高于单用药组。结论姜黄素和5-FU 抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用是通过诱导细胞凋亡来实现的。药物联合应用抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用可能是通过抑制Bcl-2基因的表达,增强Bax基因的表达,并通过抑制NF-κB活性来诱导凋亡而实现的。     

苦参碱改构体X抑制鼻咽癌细胞CNE2增殖作用的实验研究

目的：探讨苦参碱改构体X对人鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用及其可能的机制。方法：本实验分5组,即实验组、阴性对照组、正常细胞对照组、溶剂组、空白对照组（调零孔）;倒置光学显微镜下观察细胞形态;采用MTT实验检测药物抑制率;流式细胞仪检测细胞周期的分布和凋亡情况。结果：加药细胞组形态变圆、变小、胞内可见空泡;MTT检测可见药物对人鼻咽癌细胞株CNE2有显著的抑制作用（P〈0.05）,抑制率最大可达到97.9%,但是对人脐静脉内皮细胞没有表现出相应的抑制作用,抑制率最大仅达到7.7%;流式细胞仪检测结果可见CNE2细胞的周期阻滞在S期和有浓度依赖性的明显凋亡,凋亡率最大可达89.71%。结论：苦参碱改构体X可通过细胞周期S期阻滞和诱导细胞凋亡来抑制鼻咽癌细胞的增殖分裂。     

抗癌活性肽对人肿瘤细胞株增殖的影响及其机理探讨

目的:探讨由山羊内脏提取制备的抗癌活性肽(Anti -cancer active peptide,ACBP)对人胃癌细胞株BGC - 823、MGC - 803、人鼻咽癌细胞株CNE增殖的影响及作用机理.方法:应用MTT法和流式细胞术观察不同剂量ACBP在不同时间对体外培养的BGC - 823、MGC - 803及CNE细胞增殖的影响,并对细胞周期及凋亡进行了检测.结果:MTT结果显示ACBP对BGC - 823、MGC - 803及CNE的增殖有抑制作用且呈现剂量依赖效应,在ACBP 20ug/mL时,对三种细胞株的抑制率分别达到38.3％、29.79％和42.02％ (P ＜0.01)).流式细胞术检测细胞周期结果显示,3种对照组细胞大部分处于G0/G1期和S期,培养24h后,S期细胞数开始减少,G0/G1期细胞数增加,48h和72h后呈现显著性变化(P＜0.01).流式细胞术检测细胞凋亡结果显示ACBP作用早期,凋亡细胞(AV+/PI -)增多,在48h和72h后更加明显.结论:ACBP对分化不同的胃癌细胞BGC - 823、MGC - 803及鼻咽癌CNE细胞的增殖有抑制作用,其作用机制可能为诱导细胞凋亡,抑制DNA合成.     

Bcl-2、Bak及caspase-9、3在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法以体外培养的人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,给予不同浓度水平的VES处理不同时间后,采用四甲偶氮唑盐比色(MTT)法观察VES对人胃癌细胞的生长抑制作用;用Annexin-V-FITC方法检测VES对胃癌细胞的凋亡诱导作用;采用Western blotting方法检测VES处理后的胃癌细胞中Bcl-2和Bak蛋白表达及caspase-9、caspase-3酶原的表达。结果(12.5～50.0)μmol/L的VES作用于人胃癌细胞24h后就可以抑制胃癌细胞的生长,呈明显的剂量依赖关系;Annexin-V-FITC和PI双染流式细胞仪检测结果表明,50μmol/LVES处理SGC-7901细胞12h后即可以引起细胞凋亡,且随作用时间的延长凋亡越明显。Western blotting结果显示,VES可以调节胃癌细胞中与凋亡相关的Bcl-2和Bak蛋白的表达,同时促进caspase-9、caspase-3酶原的裂解与活化。结论调节Bcl-2和Bak蛋白的表达,并裂解caspase-9、caspase-3是VES在体外发挥对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的可能机制之一。     

百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU-87生长的影响及其机制。方法百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU-87及预处理NF-κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU-87生长,并明显诱导细胞凋亡;预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU-87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调。结论百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现。     

重组人p53腺病毒基因药物对人鼻咽癌细胞的抑制实验

目的探索p53基因在鼻咽癌基因治疗方面的可行性。方法以人鼻咽癌CNE细胞株为实验对象,将重组人p53腺病毒药物（1010rAd/p53）转染人鼻咽癌CNE细胞,用MTT比色实验及流式细胞仪实验的方法进行体外实验,观察重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞体外生长的影响。结果各浓度重组人p53腺病毒药物（1010rAd/p53、109rAd/p53、108rAd/p53、107rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长有抑制。尤以1010rAd/p53明显。转染3天后,重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）诱导人鼻咽癌CNE细胞明显凋亡。结论重组人p53腺病毒药物（rAd/p53）对人鼻咽癌CNE细胞生长能有效抑制,为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

维生素E琥珀酸酯对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞的生长抑制作用.方法:以5,10,20,40 mg/L浓度的VES作用于人鼻咽癌CNE2细胞,使用光镜、透射电镜、MTT法、流式细胞仪观察和检测作用24,48,72 h后细胞形态、增殖、凋亡及细胞周期分布情况.结果:...     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的分析5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dC）对鼻咽癌细胞株CNEl、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞，MTT实验观察细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期分布情况和凋亡细胞比例。结果5-aza-2dC对4株细胞的增殖均具有抑制作用，CNEl和6-10B细胞的半数抑制剂量低于CNE2和5-8F。药物处理使4株细胞凋亡率呈剂量依赖性增加，CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后，CNEl、CNE2、6-10B细胞出现不同程度G0／G1期阻滞，而5-8F表现为G0／G1期和G2／M期双期阻滞．CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。结论5-aza-2dC对CNEl、CNE2、5-8F和6-10B细胞具有抑制增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞作用，CNEl和6-10B对药物敏感性高于CNE2和5-8F。     

SAA 对鼻咽癌 CNE2细胞生物学行为的影响

目的：观察血清淀粉样蛋白 A（SAA）的超表达和抑制表达对鼻咽癌 CNE2细胞生物学行为的影响。方法体外培养 SAA 高表达的 pcDNA3．1（＋）-SAA-CNE2细胞系和干扰 SAA 表达的 pGPU6／GFP／Neo-SAA-CNE2细胞系,两种细胞由课题组前期重组的 SAA 高表达 pcDNA3．1（＋）-SAA 质粒及抑制 SAA 表达的 pGPU6／GFP／Neo-SAA 质粒分别转染构建。流式细胞仪分析以上两种细胞的细胞周期。平皿克隆实验检测细胞的增殖状况。结果流式细胞仪检测细胞周期显示 SAA 表达的增多可促进 CNE2细胞分裂。平皿克隆实验显示 SAA 可使 CEN2细胞的增殖能力增强。结论 SAA 具有促进人鼻咽癌 CNE2细胞增殖和体外迁移浸润的作用。     

肿瘤坏死因子对人鼻咽癌CNE3细胞增殖相关基因蛋白表达的影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子 ( TNFα)对人鼻咽癌 CNE3细胞生长相关基因表达的影响。方法 ;体外培育的人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE3,通过 MTT细胞毒试验确定TNFα的最佳抑制剂量 ,用免疫组织化学技术观察 TNFα作用 48h后 ,CNE3细胞中增殖相关的几种蛋白表达的变化。结果 :TNFα可下调 PCNA、Ki- 67、p2 1 ras、mtp5 3等蛋白的表达 ,增强 p2 1 WAF1蛋白表达。结论 :TNFα可通过影响有关细胞周期进程基因蛋白表达而抑制细胞生长     

PECAM-1 siRNA对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨血小板内皮细胞黏附因子-1（platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1）基因小分子RNA干扰（small interfering RNA,siRNA）对人鼻咽癌辐射致耐药CNE1/R细胞增殖及凋亡的影响。方法：设计干扰RNA编码DNA特异性序列,合成siRNA片段,转染CNE1/R细胞,G418筛选出稳定转染细胞株。蛋白质印迹法检测PECAM-1 siRNA干扰后,细胞中PECAM-1蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖及流式细胞术检测细胞凋亡。结果：筛选出稳定转染细胞株,实验组PECAM-1蛋白表达较阴性组下调3.4倍,证实干扰有效。与阴性组及空白组相比,实验组细胞增殖能力下降,凋亡率升高。结论：PECAM-1基因siRNA可抑制CNE1/R细胞增殖,促进其凋亡。PECAM-1可能在鼻咽癌细胞辐射后生长凋亡中起作用。     

表皮生长因子受体对鼻咽癌放疗后细胞增殖的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对射线照射后的鼻咽癌细胞的增殖的影响。方法:用shRNA-EGFR转染人鼻咽癌细胞系CNE1,应用X射线照射转染EGFRSiRNA前后的细胞,MTT实验比较转染干扰质粒前后照射后细胞增殖变化。结果:shRNA-EGFR成功转染CNE1细胞。CNE1细胞干扰后照射较干扰前照射增殖减低。结论:通过抑制鼻咽癌细胞EGFR的表达,可以抑制鼻咽癌放疗后的增殖。     

抑制核转录因子κBp65对鼻咽癌CNE2细胞的生物学影响

目的  探讨核转录因子κBp65（NF-κBp65）沉默对鼻咽癌的生物学作用。方法  构建NF-κBp65特异性小干扰核糖核酸（siRNA）质粒表达载体（pGPU6/RFP/Neo-NF-κBp65）和阴性对照质粒表达载体（pGPU6/RFP/Neo-NC）。采用非脂质体脂类转染剂将重组质粒表达载体转入人鼻咽癌CNE2细胞,建立NF-κ Bp65沉默的稳定转染CNE2细胞株（NF-κBp65沉默组）和阴性对照细胞株（阴性对照组）;蛋白质印迹法（Western blot）分析癌细胞中NF-κBp65基因的表达水平,MTT实验及流式细胞术分析癌细胞的增殖能力和细胞周期变化;复制裸鼠移植瘤模型,分析沉默NF-κBp65对癌细胞成瘤性的影响。结果  成功获得稳定转染CNE2细胞株,NF-κBp65沉默组细胞中NF-κBp65蛋白表达水平降低;NF-κBp65沉默后,CNE2细胞周期阻滞于S期,增殖速度减慢;NF-κBp65沉默组裸鼠移植瘤生长慢,重量轻,与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义（F =14.386,P <0.05）。结论  NF-κBp65沉默能降低鼻咽癌CNE2细胞的恶性生物学行为。

     

d-δ-三烯生育酚对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨d-δ-三烯生育酚对人鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响。方法实验设对照组和不同d-δ-三烯生育酚浓度(40、50、60μmol/L)处理的实验组,采用Hoechst荧光染料染色和显微镜观察细胞的形态。3-(4,5二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴蓝(MTT)实验、流式细胞术分析d-δ-三烯生育酚对CNE2细胞的增殖、周期和凋亡的影响。结果 d-δ-三烯生育酚处理CNE2细胞48 h后,随d-δ-三烯生育酚的浓度升高,细胞生长抑制率明显增加,分别为(27.71±1.01)%、(57.09±0.56)%和(95.04±0.17)%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);细胞核或细胞浆内出现致密浓染的颗粒状或条块状荧光的凋亡细胞明显增多,实验组细胞凋亡率分别为(9.18±1.86)%、(34.97±1.01)%和(52.97±2.77)%,与对照组(1.58±0.48)%比较,随浓度升高,凋亡细胞率增加,差异具有统计学意义(P<0.01);实验组S期的细胞百分率分别为(25.40±1.93)%、(35.83±3.74)%和(47.13±2.49)%,与对照组(19.63±1.46)%比较,细胞呈S期阻滞,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 d-δ-三烯生育酚具有抗鼻咽癌CNE2细胞的生物学活性。     

脂质体介导的p53基因转染对鼻咽癌细胞作用的研究

目的 通过转染野生型p53基因,观察其对鼻咽癌细胞CNE2生长的影响.方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒,用脂质体(lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,以RT-PCR检测p53基因的表达,通过细胞生长曲线、AO/EB染色和流式细胞术等方法对转染细胞的生物学行为进行检测.结果 人鼻咽癌CNE2细胞转染p53基因后,基因在细胞中表达增加,细胞的生长受到抑制,在荧光显微镜下观察到凋亡细胞增多,流式细胞技术显示细胞凋亡率增高.结论 采用脂质体转染野生型p53基因的方法,可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长,诱导鼻咽癌细胞凋亡.     

Vγ9Vδ2 T细胞联合顺铂增强对鼻咽癌细胞的杀伤作用

目的探讨Vγ9Vδ2 T免疫细胞联合顺铂（CDDP）对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法采用CCK8法观察低浓度CDDP、唑来膦酸（ZOL）联合Vγ9Vδ2 T细胞对鼻咽癌细胞增殖活性的影响;流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）和CD107a的分泌及鼻咽癌细胞表面MICA和MICB的表达;Western blotting检测MICA和MICB的蛋白表达。结果随着CDDP浓度的增加,鼻咽癌CNE2Z细胞存活率降低,CDDP联合Vγ9Vδ2 T细胞的杀伤作用优于单独使用CDDP对CNE2Z细胞的杀伤作用（P < 0.05）。ZOL对Vγ9Vδ2 T细胞的增殖有促进作用,随着ZOL浓度提高,ZOL联合Vγ9Vδ2 T细胞对CNE2Z细胞的杀伤作用增强（P < 0.05）。低浓度CDDP和ZOL联合Vγ9Vδ2 T细胞可增强对鼻咽癌细胞的杀伤作用,当效靶比为10:1时,联合处理的杀伤效果最好,差异有统计学意义（P < 0.05）。低浓度CDDP、ZOL处理的鼻咽癌细胞可增强Vγ9Vδ2 T细胞免疫因子CD107a、TNF-α和IFN-γ的分泌（P < 0.05）。低浓度CDDP联合Vγ9Vδ2 T细胞明显上调鼻咽癌细胞表面MICA和MICB的表达（P < 0.01）。结论CDDP能增强Vγ9Vδ2 T细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用,其机制可能与促进鼻咽癌细胞表面MICA和MICB的表达及增加Vγ9Vδ2 T细胞TNF-α和IFN-γ的分泌有关。