红细胞膜外翻囊泡钙摄取方法的建立

细胞膜上的ATP和Mg~(2 )依赖性的Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATP酶(即钙泵)的基本功能是主动转运Ca~(2 ),维持胞内Ca~(2 )的相对恒定.细胞内Ca~(2 )浓度持续升高将会危及细胞的各种功能.细胞膜Ca~(2 )转运障碍与高血压发病有密切关系.红细胞膜是研究各种浆膜Ca~(2 )转运的理想模型.作者改进了文献方法.建立了以红细胞膜IOV来研究Ca~(2 )摄取的方法,为研究高血压发病过程中细胞膜Ca~(2 )的摄取异常机理,提供了一种可靠的手段.     

维拉帕米治疗室上性快速型心律失常时红细胞钙泵和Ca~(2+)变化的研究

对维拉帕米(VR)治疗室上性快速型心律失常(SVT)时红细胞钙泵和Ca~(2+)变化进行对此研究,正常人30名红细胞内Ca~(2+)为0.32±0.02μmol/gHb,红细胞膜钙泵为44.1±1.8μmol·Pi~(-1)·gHb~(-1)·h~(-1)。SVT 53例发病时,红细胞内Ca~(2+)为0.47±0.02μmol/gHb,膜钙泵为07.5±2.5μmol·Pi~(-1)·gHb~(-1)·h~(-1),明显高于     

心痛定对自发性高血压大鼠红细胞膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶、Mg~(2+)ATP酶活性的影响(简报)

目前对钙-钙调素(Calmoclulin,CaM)与遗传性高血压发病的关系报道很多。在对自发性高血压大鼠(SHR)的研究中,已证实钙代谢障碍主要表现在细胞内钙浓度及钙与膜的结合、转运、与CaM的结合和囊泡摄取等多环节的异常。由于红细胞膜具有除Na~+-Ca~(2+)交换以外的各种主动及被动的阳离子转运系统及99％的可交换钙都容纳在单一库内的双重优点,加之其取材方便,制备简单,因而我们对钙通道阻断剂心痛定治疗前后SHR红细胞膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶,Mg~(2+)ATP酶活性进行了研究。     

Ca~(2+)K~+浓度低pH和低温对心肌摄取脂质体的影响

用~(14)C标记的脂质体灌流离体的大鼠心脏,改变灌流液的Ca~(2+)、K~+浓度、pH值及灌流温度,观察其对心肌摄取脂质体的影响,发现高钙([Ca~(2+)]4.5 mmol/L)、高钾([K~+]8.67 mmol/L)灌流可增加心肌摄取脂质体的量。而低钙([Ca~(2+)]0.5 mmol/L)、低钾([K~+]2.67 mmol/L),低pH(pH 6.8)及低温(30℃)对心肌摄取脂质体无明显影响。     

维拉帕米治疗室上性快速型心律失常时红细胞钠泵和Na~+、K~+、Mg~(2+)的变化

对维拉帕米(VR)治疗室上性快速型心律失常(SVT)时红细胞钠泵和Na~+、K~+、Mg~(2+)变化进行对比研究,正常人30名红细胞内Na~+、K~+、Mg~(2+)分别为77.9±2.1、172.5±3.8、16.4±0.4μmol/g Hb,红细胞膜钠泵为43.9±6.1 μmol Pi/g Hb/h。SVT 33例发病时,红细胞内Na~+、K~+、Mg~(2+)为83.7±5.0、143.2±12.5、12.6±0.5 μmol/g Hb,红细胞膜钠泵为65.1±5.2μmol Pi/g Hb/h。给VR后,红细胞内Na~+明显高于正常人(P<0.05),红细胞内K~+和Mg~(2+)则低于正常人(P<0.01),红细胞膜钠泵活力仍高于正常人水平。     

呋喃二氢吡啶Ⅰ对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

大鼠急性心肌缺血1h,再灌注30min,血浆乳酸脱氢酶(LDH)和游离脂肪酸(FFA)含量明显升高;红细胞膜Na,K-ATP酶活性下降,Ca-ATP酶活性增强;红细胞内Ca~2量增多,Na~+,K~+含量无明显变化;红细胞膜N-乙酰神经氨酸(NANA)的含量下降.呋喃二氢吡啶Ⅰ能使人鼠心肌缺血再灌时LDH,FFA的释放量从1581±295 IU/L,1.41±0.18 mmol/L分别下降到198±68 IU/L,0.96±0.16mmol/L(P分别<0.01,n=6);红细胞膜Na,K-ATP酶活性、NANA含量从0.139±0.044μmol·P_1/(mg·h),32.8±5.19μg/mg分别回升到0.248±0.075μmol·P_1/(mg·h),57.92±5.63μg/mg(P分别<0.05和0.01,n=6);Ca-ATP酶,红细胞内Ca~(2+)含量分别从1.390±0.240μmol·P_1/(mg·h),30.3±7.0mmol/减少到0.725±0.138μmol·P_1/(mg·h)和5.6±2.5mmol/g(P分别<0.01,n=6).这些结果提示该药对心肌的保护作用与抑制心肌细胞钙内流有关.     

牛磺酸对Ca~(2+)引起的脂质体聚集的影响

在人工生物膜—脂质体上观察了牛磺酸对Ca~(2+)引起的脂质体聚集的影响。结果表明,牛磺酸对Ca~(2+)引起的脂质体聚集的影响呈双向性,即低Ca~(2+)浓度(5μmol/L)时促进,而高Ca~(2+)浓度(5mmol/L)时抑制脂质体聚集。牛磺酸的上述作用受脂质体内Na~+和K~+浓度的影响。实验结果提示,牛磺酸具有缓冲Ca~(2+)效应的作用,这可能是牛磺酸能有效调节细胞钙稳态的机理之一。     

Mg^2＋和Ca^2＋对兔心肌单离腺苷酸环化酶的调节机制

用兔心肌可溶性肌纤维膜和层析分离的腺苷酸环化酶(AC)组分制备人工蛋白脂质体,并观察Mg~(2 )和Ca~(2 )对上述两种蛋白脂质体中AC的影响。结果表明,Mg~(2 )激活AC在可溶性肌纤维膜的蛋白脂质体中有两种不同的亲和常数,分别为0.14mmol/L和1.1mmol/L。其中高亲和常数在AC组分的调节部位,低亲和常数是Mg~(2 )和GTP结合蛋白质的结合部位。Ca~(2 )抑制AC的活性,它的抑制常数为30μmol/L。Mg~(2 )和Ca~(2 )对AC的作用是竞争性的。     

Effects of daurisoline on cytosolic free calcium in fetal rat cerebral cells.

Cytosolic free Ca~(2-)([Ca~(2 )]i)was measured in dissociated cerebral cells isolated from fetal rats with the fluorescent indicater fura-2. Increase in[Ca~(2 )]i occurred rapidly following explsure of the cells to 50 mmol/L KCI,10~(-7) mol/L Bayk 8644 or 200μmol/L glutamate(Glu).[Ca~(2 )]i elevated by     

人体精子的钙吸收:特征与机制

采用安全简便的方法对人体精子的基础钙(~(45)Ca~(2 ))吸收问题进行了分析研究。结果发现~(45)Ca~(2 )的吸收呈时间依赖性过程,其最高吸收值为0.23nmol/mg蛋白质,这是在实验开始后400秒时达到的。即使将钾的浓度从0.7mmol增至50mmol(并降低相应的氯化钠浓度)也不能促进~(45)Ca~(2 )吸收。 ~(45)Ca~(2 )吸收以剂量依赖性方式被异搏定、三氟拉嗪和抗霉素A抑制,其最大抑制浓度的半数值分别是130μmol、7μmol和50nmol。 氯化钾和钙通道阻滞剂异搏定20μmol的去极化浓度不能改变~(45)Ca~(2 )的转运,但在高于20μmol异搏定浓度情况下,发生了剂量依赖性钙吸收抑制。这就很难用通道阻滞剂的门控电压来解释。事     

Ca~(2+)、Mg~(2+)对完整红细胞膜脂区流动性的影响

以1,6.-二苯基-1,3,5-已三烯(DPH)为荧光探剂,用荧光偏振法测定了Ca~(2+)、Mg~(2+)对完整红细胞膜脂区流动性的影响。Ca~(2+)能降低红细胞膜的流动性,而Mg~(2+)则无显著影响,细胞膜流动性的大小与膜上结合的Ca~(2+)量有关,而细胞所处的介质中Ca~(2+)浓度可影响膜上Ca~(2+)结合量。胰岛素对膜的流动性影响可能与膜上结合Ca~(2+)和Mg~(2+)相对量有关。     

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides, Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性，筛选最佳高糖干预浓度；检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol, Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril, Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性，筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L...     

镉对小鼠免疫功能和淋巴细胞钙稳态影响的探讨

本文采用体外试验的方法观察到 50μmol/L的CdCl_2对LACA小鼠脾T淋巴细胞功能抑制26.08％,125～500μmol/L剂量下,对T淋巴细胞转化的抑制呈剂量—反应相关。500μmol/L时,抑制率达100％。50μmol/L CdCl_2可引起T淋巴细胞胞内游离Ca~(2+)浓度显著增高,温育40分钟时,增加80％(P<0.001),60分钟时增加115％,由于此测定是在无Ca~(2+)体系中进行的,所以Ca~(2+)浓度的增高可能是由细胞内钙库释放所致。同时还观察到CdCl_2对T细胞Ca~(2+),Mg~(2+)-ATPase活性抑制和细胞膜脂流动性下降,但其所需CdCl_2剂量水平较高。     

罗格列酮对高糖培养的大鼠系膜细胞增生及p27表达的影响

目的:探讨罗格列酮对糖尿病肾病保护作用的机制。方法:体外培养的大鼠系膜细胞分为正常对照组(NG,含5.6mmol/L D-葡萄糖),NG+甘露醇(25 mmol/L)组,高糖组(HG,含30mmol/L D-葡萄糖),HG+罗格列酮(5μmol/L)组,HG+罗格列酮(10μmol/L)组,HG+罗格列酮(20μmol/L)组。用MTT法测定细胞增生,免疫细胞化学法测定p27Kip1表达。结果:(1)培养72小时后,在模拟高血糖的高糖培养基中,各浓度罗格列酮均可抑制大鼠系膜细胞增生,且此作用与渗透压改变无关。(2)与NG组相比,HG组培养24小时p27表达降低(P<0.05),与其增生活跃相一致,随时间延长,p27表达量逐渐增加,48、72小时无明显差异。与HG组相比,5μmol/L罗格列酮组作用24、48小时无明显差异,作用72小时p27表达增加(P<0.05);10μmol/L、20μmol/L罗格列酮组在各时间点均增加p27表达,有统计学意义。随着罗格列酮剂量增加,p27表达也明显增加。结论:在高糖环境下罗格列酮至少部分通过增加p27表达引起系膜细胞增生抑制,从而对糖尿病肾病起保护作用。     

原发性高血压红细胞钙代谢的初步探讨

原发性高血压钙恒稳异常不仅表现在血管平滑肌,也见于其它组织细胞,尤其是血液的有形成分。本文观察了原发性高血压患者红细胞的某些钙恒稳指标,并与正常人进行了比较。结果表明:高血压患者红细胞总钙浓度较正常人明显增加,红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活性明显降低,胞浆钙调素含量显著降低。结果提示:高血压患者红细胞Ca~(2+)-ATP酶活性下降导致胞内Ca~(2+)浓度升高,从而增加外周血管阻力,而CaM可能是通过调节Ca~(2+)-ATP酶活性间接影响血压的。     

马贡法测定血清镁的方法学探讨

本文介绍一种简单、灵敏的血清镁马贡(Magon)测定法。血清镁在0～4mmol/L内线性良好。平均回收率101.9％。与MTB法比较r=0.9913,=0.992x+0.019,批内CV3.92％,批间CV4.27％。98例健康人血清镁测定结果为0.96±0.065mmol/L,干扰实验:Zn~(++)60μmol/L、K~+50mmol/L、Na~+、Cl-560mmol、Ca~(++)10mmol/L,甘油三酯9.67mmol/L对结果无影响。     

鸡红细胞膜脂质过氧化实验体系的建立

采用H_2O_2作用于鸡血红细胞膜建立一种新的体外脂质过氧化实验体系,与此同时加入维生素E(VitE)或茶叶提取液,观察其对红细膜脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示,H_2O_2(100mmol/L)可有效地诱发红细胞膜的脂质过氧化作用,VitE 10~(-2)mol/L则显著抑制H_2O_2诱发的膜脂质过氧化(P<0.01,n=20),并且VitE这种效应是呈一定的剂量依赖关系。在茶叶提取液也观察到类似的结果。     

γ射线辐照对β-淀粉样肽诱导红细胞膜损害的作用

目的:研究γ射线辐照对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的红细胞膜损害的保护作用.方法: 红细胞经50 Gy和100 Gyγ射线照射后,再用Aβ处理,分别用分光光度法测定红细胞溶血率和渗透脆性;扫描电镜观察细胞形态;1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)荧光探针标记检测细胞膜流动性.结果: γ射线辐照可抑制红细胞的自然溶血和Aβ导致的溶血,但只有100 Gy辐照的差异具有统计学意义(P<0.05),使自然溶血率和Aβ引起的溶血率由(3.76±0.50)%,(11.90±1.50)%分别降至(1.87±0.09)%和(7.90±0.90)%.50 Gy和100 Gy的辐照均可降低Aβ引起的细胞变形程度,增加细胞膜的流动性(P<0.05),荧光探针的各相异性值由0.36±0.01分别降至0.33±0.00和0.32±0.01,并提高红细胞对低渗溶液的耐受性,50%溶血时的NaCI浓度由82.3 mmol/L分别降至80.7 mmol/L和76.9 mmol/L.结论: 在本实验条件下,γ射线辐照可降低Aβ对红细胞膜的损伤,并可增加红细胞膜的流动性及稳定性.     

Duchenne型肌营养不良红细胞膜糖、脂质及Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶的变化

对10例Duchenne型肌营养不良(DMD)患者红细胞膜进行了膜糖、脂质及Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶活力的研究。结果为DMD红细胞膜唾液酸显著减少,而中性糖含量无变化;膜磷脂含量无明显改变,但膜胆固醇显著增加,磷脂/胆固醇之比显著降低,膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATP酶活力显著升高。表明DMD红细胞膜有组成和功能上的改变。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨不同剂量的黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,以期探索黄芩苷防治DN的药效机制,为中医药防治DN提供新的视角和实验根据.方法 体外培养大鼠肾小球系统细胞(GMC)并分为9组:正常组(LG 5.5mmol/L)、模型组(HG 25mmol/L)、黄芩苷1组(HG 25mmol/L+黄芩苷3.125μmol/L)、黄芩苷2组(HG 25mmol/L+黄芩苷6.25μmol/L)、黄芩苷3组(黄芩苷(HG 25mmol/L+黄芩苷12.5μmol/L)、黄芩苷4组(HG25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)、黄芩苷5组(HG 25mmol/L+黄芩苷50μmol/L)、黄芩苷6组(HG 25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)和PKC抑制剂组(HG 25mmol/L+ PKC抑制0.5 nmol/L),每组设平行6孔,培养24h、48h、72h后,应用MTT比色法检测各组GMC增殖情况,倒置显微镜下观察各组GMC生长情况,评价黄芩苷对GMC生长的影响.结果 从各时间点测得的OD值可见,用药组与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05),黄芩苷组与PKC阳性药组比较差异均有统计学意义(P<0.05).从抑制率可见,24h时,除了黄芩苷6组(即给药剂量为100μmol/L)对高糖刺激后GMC增殖有抑制作用之外,其余各组对高糖刺激后GMC增殖均无抑制.48h、72h随着时间增加,各组对高糖刺激后GMC增殖的抑制率逐渐升高,且随着黄芩苷浓度增加抑制率逐渐增高.结论 高糖环境下,体外培养GMC存在异常增殖现象,黄芩苷对高糖刺激GMC增殖有抑制作用,且具有一定剂量效应关系.即抑制率随着黄芩苷浓度的增高而升高,尤其是25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L三组的时间剂量依赖关系更加明显,且在72h的时间点抑制率最高,抑制效果最佳.