血吸虫病快速免疫诊断——胶体染料试纸条法的研究

目的 开发一种血吸虫病快速免疫诊断方法。方法 用国产胶体染料Ｄ－１标记日本血吸早虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），以此标记物与血吸虫病人血清中的抗血吸虫抗体反应，再用点有羊抗人ＩｇＧ（第二抗体）的硝酸纤维层析膜以年捕获标记抗原与抗体的复合物。结果 用 纸条法检测急性血吸虫病人血清３０份，慢性血吸虫病人血清８４份，其敏感性分别为９６．７％和９４．０％，检测健康人血清６０份，其特异性为９６．７％，检测肝吸虫     

华支睾吸虫成虫抗原免疫酶染色试验和间接免疫…

应用成虫冰冻切片抗原作免疫酶染色试验及间接免疫荧光抗体试验，对比检测了５１份华支睾吸虫病患者和５０份健康人血清，两法的阳性率分别为９２％和８８％；假阳性率分别为２％和４％，应用ＩＥＳＴ和ＩＦＡＴ双比检查２２份急性血吸虫病患者血清，２０份慢性血吸虫病患者血清及１５份并殖吸虫病患者血清。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率分别为１４％、５％和０；ＩＦＡＴ出现的交叉反应率分别为１４％、１０％和０。表明两法诊断华支睾     

金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的　建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法　在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上,以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体,金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体,建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果　用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份,其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ;１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性;１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ,与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应;１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性,交叉反应率为６－７ ％ ;与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ,经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论　用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性,并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备,有广阔的应用前景。     

双夹心DIGFA检测血吸虫循环抗原的应用研究

以日本血吸虫重组极低密度脂蛋白（ＳＶＬＢＰ）制备的多抗为捕捉抗体，胶体金标记血吸虫虫卵多克隆抗体为覆盖抗体，采用双夹心金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测血吸虫病病人血清中循环抗原。结果７０份急性血吸虫病病人血清的阳性率为１００％，１５９份慢性血吸虫病病人血清的阳性检出率为６２．３％；１２０份流行区健康人群血清检测均阴性；１００份非流行区健康人群血清，２份呈阳性反应，假阳性率为２％。与肺吸虫病病人血清     

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测？…

目的 探索一种简捷的检查血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）的多克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ），并以Ｓ－ＥＬＩＳＡ作对比。结果 用Ｓ－ＤＩＧＦＡ和Ｓ－ＥＬＩＳＡ平行检测９５例慢性血吸虫病患者，阳性检出率分别为８１．０５％和８２．１１％；正常人血清１８０份，两者的假阳性率分别     

快速检测抗日本血吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以血吸虫虫卵浸出液为抗原，金标记兔抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗血吸虫抗体的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。以该法检测血吸虫病患者血清８７份，阳性检出率为９８．９％，非流行区血清１０份，阴性符合率为１００％，１５例肺吸虫病患者血清，１例出现阳性反应，交叉反应率为６．７％；１０例华支睾吸虫病患者和２５例乙型肝炎患者，均无交叉反应。本法与ＥＬＩＳＡ比较，符合率达９６．７％，揭示ＤＩＧＦＡ的敏感性和特异     

单克隆抗体反向间凝试验的建立及其在日本血吸虫病诊断上的应用

ＭｃＡｂ－Ｇ３－ＲＩＨＡ诊断血吸虫病、采用绵羊红细胞，经戊二醛固定、鞣酸鞣化，致敏纯化肠相关ＭｃＡｂ，然后冷冻干燥用于检测宿主血清中循环抗原，并以ＩＨＡ对比检测ＣＡｂ。以之检测６３０份样本，其中正常人２２４例，ＲＩＨＡ假阳性率为４．４％，ＩＨＡ为４．９１％；急性血吸虫病１６５例，ＲＩＨＡ阳性率９８．７９、ＩＨＡ９９．３９％；疫区人群２４１份，ＲＩＨＡ阳性率７１．７８％，ＩＨＡ为８４．２３％；其中粪检阳性者ＲＩＨＡ阳性率８６．６７％（６５／７５），粪检阴性者的阳性率是６５．０６％（１０８／１６６），而ＩＨＡ的阳性率分别为９６．０％（７２／７５），７８．９２％（１３１／１６６），ＥＰＧ≥３０的慢性血吸虫病者ＲＩＨＡ及ＩＨＡ阳性率均为１００．０％，当ＥＰＧ＜３０时，ＲＩＨＡ和ＩＨＡ阳性率分别是６９．２３％、９２．３１％。实验结果显示：急性血吸虫病人群循环抗原ＧＭＲＴ为慢性患者的２１．７６倍，不同感染度的慢性患者循环抗原ＧＭＲＴ较为接近。急、慢性血吸虫病血清中ＣＡｂ显著多于循环抗原。本法操作简便，有较好的特异性与敏感性，适用于血吸虫病循环抗原的检测。     

快速检测抗日本血吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以血吸虫虫卵浸出液为抗原，金标记兔抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗血吸虫抗体的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。以该法检测血吸虫病患者血清８７份，阳性检出率为９８．９％；非流行区血清１００份，阴性符合率为１００％；１５例肺吸虫病患者血清，１例出现阳性反应，交叉反应率为６．７％；１０例华支睾吸虫病患者和２５例乙型肝炎患者，均无交叉反应。本法与ＥＬＩＳＡ比较，符合率达９６．７％。揭示ＤＩＧＦＡ的敏感性和特异性与ＥＬＩＳＡ相近，但方法简便、快速、试剂稳定，且无需特殊设备，适合于基层单位和现场应用     

成虫童虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验…

以肺吸虫成虫童虫冰冻切片抗原片做间接荧光抗体试验及免疫酶染色试验对比检测９４份肺吸虫感染者和４０例正常健康人血清，两法的阳性率分别为９３．６、９５．７％和８９．４％，假阳性率均为０。ＩＦＡＴ和ＩＥＳＴ对比检测３４份血吸虫病人血清，３５份华支睾吸虫病人血清和３０份肺结核病人血清，ＩＦＡＴ出现的交叉反应率为１４．７％、５．７％、０和１４．７％、８．６％、０。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率为５．９％、０、０和     

DIFA等四项免疫学方法检测血吸虫病合并弓形虫感染的研究

弓形虫ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ对急性血吸虫病有严重的交叉反应，影响弓形虫病的临床诊断。本文用ＤＩ－ＦＡ、ＩＦＴ、ＩＳＡＧＡ－ＩｇＧ和ＩＨＡ检测６６例急性血吸虫病，结果其阳性率分别为１９．７０％、２２．７３％、１６．６７％和６５．１６％；用ＤＩＦＡ和ＩＦＴ检测健康人群的弓形体阳性率为９％；还用上述方法检测两种病的混合血清和兔急性血吸虫病血清。通过比较、分析认为前三种方法可用于两病的鉴别。本文还用上述方法检测２１例慢性血吸虫病，阳性率在０～１９．０５％之间，无明显血清交叉反应。     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。     

日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白的纯化及在诊断中的应用

本研究以前染蛋白为指示,将制备型SDS—PAGE和电渗析技术相结合,分离、纯化日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白,用于ELISA中诊断血吸虫病。结果:纯化日本血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psj31/32)与急、慢性日本血吸虫病和曼氏血吸虫病人血清反应的阳性率分别为100％、100％和98.4％;纯化曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psm31/32)与上述病人血清反应的阳性率均为100％。与NHS和其它寄生虫病人血清反应的特异性较高。Psj31/32和Psm31/32检测同种血清,它们的OD值具有高度的正相关关系,但OD值与曼氏血吸虫病人粪便中虫卵数量(EPG)无相关关系。结果提示:两种纯化的31/32kD蛋白在血吸虫病诊断中具有较高的敏感性和特异性,并具有共同抗原决定簇存在,不仅可用于诊断急、慢性日本血吸虫病,而且Psj31/32也可作为诊断曼氏血吸虫病的候选抗原,用于我国输入性曼氏血吸虫病的诊断。     

Dot-IGSS检测日本血吸虫病人血清抗体的研究

运用斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)检测了日本血吸虫病人血清抗体,并与斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)作了比较。检测了急性血吸虫病人血清38份,两法结果全部阳性;慢性血吸虫病人血清70份,Dot-IGSS阳性69份(98.6％),Dot-ELISA阳性65份(92.9％);治疗后血吸虫病人血清40份,Dot-IGSS阳性15份(37.5％),Dot-ELlSA阳性11份(27.5％)。用两法检测华枝睾吸虫病人血清20份,均有1份为阳性;检测正常人血清40份,均未出现阳性反应。将8份阳性血清作倍比稀释(1:20～1:61440)后分别用该两法检测,Dot-IGSS的敏感性明显高于Dot-ELISA(P<0.05)。对120例过去无血吸虫病史、接触疫水且皮试阳性者血清检测结果表明,Dot-IGSS的阳性检出率明显高于Dot-ELISA、COPT及循环抗原测定法(P<0.01)。     

金标免疫渗滤法诊断试剂盒诊断血吸虫病的价值研究

目的　评价金标免疫渗滤法诊断试剂盒（DIGFA-kit）用于血吸虫病血清流行病学调查的价值。方法　采用DIGFA与ELISA单盲平行检测各期血吸虫病病人血清、非流行区人群血清、疫区人群血清和血吸虫病已控制地区人群血清共2304份。结果　DIGFA检测血吸虫抗体的敏感性为96.8%，对非流行区健康人群的特异性为100%；该法检测疫区居民血清508份，抗体阳性检出率为35.6%，在Kato法粪检阳性的81人中，其中抗体阳性79人，阳性符合率为97.5%；检测血吸虫病已控制地区人群血清，抗体阳性率为4.6%；根据DIGFA的敏感性和对非流行区人群的特异性，计算其Youdens指数为0.926。上述各项结果与ELISA比较，差异无显著性（P>0.05）。结论　DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性，且方法简便、快速，胶体金标记物制备容易，试剂稳定，运送方便，在现场和临床诊断更具有优越性。     

Evaluation on the applied value of the dot immunogold filtration assay (DIGFA) for rapid detection of anti-Schistosoma japonicum antibody

The dot immunogold filtration assay (DIGFA) is a rapid technique for the detection of anti-Schistosoma japonicum antibody. Its sensitivity with regard to sera obtained from patients with acute or chronic schistosomiasis was shown to be 100 and 96.9%, respectively. The specificity when using sera of people living in an area non-endemic for schistosomiasis japonica was 100%. Cross-reaction rates for paragonimiasis and clonorchiasis patients were 14.3% and 0%, respectively. Parallel serum tests of 1091 residents from an area endemic for S. japonicum by means of DIGFA, enzyme-linked immunosorbent assay and indirect haemagglutination test resulted in positive rates of 9.3%, 11.5% and 11.0%, respectively. Thus, there was a high level of agreement between the sets of results (P>0.05). In conclusion, DIGFA holds considerable promise for rapid and accurate diagnosis of S. japonicum, as it does not require any specific instruments and can be applied with ease. DIGFA has therefore several advantages over conventional diagnostic approaches and is useful not only for screening and sero-epidemiological surveys in the field, but also in clinical settings.     

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的　建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法　应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果　对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论　DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

水蛭可溶性抗原诊断日本血吸虫病的初步研究

目的　探讨水蛭可溶性抗原 (L SA)用于诊断日本血吸虫病的可能性。　方法　首先用 Western blot对 L SA与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性进行分析 ,进而对 L SA- EL ISA用于诊断慢性血吸虫病的效果作出评价。　结果　经 SDS- PAGE及 Western blot技术分析的结果表明 ,L SA的主要蛋白组分区带为 8条 ,其中分子质量为 116～ 118、72、4 5和 31ku蛋白组分可被日本血吸虫病患者血清所识别 ;用 L SA- EL ISA检测慢性血吸虫患者血清 85份 ,阳性检出率为90 .5 9% (77/ 85 )检测正常人血清 87份和其它 3种寄生虫病患者血清 5 6份 ,假阳性率分别为 4 .6 0 % (4/ 87)和 1.79% (1/5 6 )。与 SEA- EL ISA法比较 ,两者敏感性和特异性差异无显著性 (P>0 .0 5 )。　结论　日本血吸虫病患者血清中存在较多的抗 L SA抗体 ;用 L SA检测慢性血吸虫病显示出较好的敏感性和特异性 ,因而水蛭是一种值得进一步研究的血吸虫异源抗原