乙型肝炎间接血凝法的探讨

<正> 为研究乙型肝炎的需要,我们以全国统一检测法,对关中地区健康人群和肝炎住院患者共6774例进行了HBgAg的调查测定。在测定过程中,为了提高其敏感性,增强特异性和节约试剂等,故又采用对流电泳等法同时进行了实验比较和探讨。现报告如下: 原理:间接血凝试验是以红血球为载体,根据抗原和抗体反应的特异性,用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)的一种简易血清学方法。由于多种不同的抗原——抗体     

B病毒糖蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立

目的表达B病毒糖蛋白,筛选出具有较好检测敏感性和特异性的抗原或抗原组合,用以检测猴血清中的抗体。方法原核表达B病毒糖蛋白C,D和G,经纯化、复性后用蛋白印记验证其抗原性,建立ELISA法,对方法进行评价。结果3个表达抗原反应特异性较好;以BV-ELISA为标准,各抗原的检测敏感性分别是：BVgC-ELISA84.6％,BVgD-ELISA88.5％,BVgC＋gD-ELISA96.2％,检测特异性分别是：BVgC-ELISA93％,BVgD-ELISA85.7％,BVgC＋gD-ELISA64.3％。结论表达的3个BV重组抗原都具备作为替代抗原检测BV抗体的潜力。     

反向间接血凝法检测乙型肝炎表面抗原的初步观察

用绵羊或人“O”型红血球以戍二醛或甲醛固定后,再经过高稀释度的鞣酸处理,这种红血球能将较多的蛋白质抗原或抗体吸附在其表面,称为致敏。用抗原致敏的红血球,在适当条件下与待检血清作用,如血清中有特异性抗体,则发生抗原抗体反应而出现凝集现象,称为间接血球凝集试验(简称间接血凝),用以检查病人血清中有无抗体。反之,如将抗体     

嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白和脂多糖抗原在血清学诊断中的意义

目的评价嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白(OMP)和脂多糖(LPs)作为血清学诊断抗原的敏感性和特异性.方法用OMP、LPS和全菌(WC)作为Western blot和ELISA的诊断抗原检测自然感染和实验感染嗜肺巴氏杆菌小鼠相应的IgG抗体滴度,同时测定3种抗原与实验动物常见致病菌的交叉反应.结果与嗜肺巴氏杆菌自然感染和实验感染小鼠血清的ELISA反应中,不同时期,LPS作为诊断抗原时血清抗体阳性率最高,WC次之,OMP最低.自然感染小鼠群中,出生4周LPS抗体阳性率即可达80%,而同期的WC和OMP仅为25%和20%,故LPS敏感性最高.与实验动物常见致病菌免疫血清和阴性种鼠血清的ELISA反应中,WC抗原表现出较高的吸光度(A)值,经Western blot证实,其反应为非特异性反应,LPS抗原特异性最强,OMP抗原次之.结论混合多株具有型或种特异性的OMP或LPS作为ELISA的诊断抗原,无论从特异性和敏感性上均高于全菌抗原.     

不同抗原修复方法对免疫组化试验结果的影响

免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术,能将形态、代谢和功能密切结合起来,具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点,已广泛用于病理诊断.     

单克隆抗体酶联免疫吸附试验诊断结核性脑膜炎的研究

应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验检测35例结核性脑膜炎、28例其它脑膜炎和102例脑非膜炎患者脑脊液中的的结核杆菌抗原和抗体。结果显示结核患者脑脊液特异性抗原和抗体水平明显高于对照组(P<0.01)。本法检测抗原和抗体的敏感性分别为82.9％和85.7％;特异性为96.9％和96.3％,提示可作为结核性脑膜炎的辅助诊断方法。动态观察尚可为疗效判定提供依据。     

异种丝虫抗原免疫酶染色试验诊断丝虫病的评价

用马来丝虫、牛丝虫成虫冰冻切片抗原免疫酶染色试验检测抗丝虫ＩｇＧ抗体，比较二者的敏感性和特异性。两种抗原免疫酶染色试验的敏感性分别为９２．９％和８７．１％，假阳性率分别的５．１％和１０．２％，经统计学处理两种抗原敏感性和假阳性率差异均无显著性。马来丝虫、牛丝虫抗原对肠道线虫病人血清抗体的交叉反应率分别为９．４％和２５．９％，经统计学处理二者差异具高度显著性；牛丝虫抗原交叉反应的抗体滴度亦显著高于马来丝虫抗原。牛丝虫粗抗原检测丝虫抗体的应用有其局限性。     

日本斑点热立克次体近缘株重组OmpB蛋白抗原性研究

目的 探讨关于斑点热立克次体的临床诊断及流行病学调查而进行的诊断方法学研究.方法 构建R.Japonica Anhui 120 strain OmpB原核表达质粒,表达、鉴定并纯化重组蛋白,用其作为抗原建立间接ELISA检测方法,检测120份临床样本中日本斑点热立克次体特异性IgG抗体,并评价方法的敏感性和特异性.结果 获得了高表达、高纯度的OmpB重组蛋白,建立的间接ELISA方法体系与美国食品和药物管理局认可的诊断试剂盒相比有良好的特异性和敏感性,两者的特异性为100％,敏感性为96.7％,符合率为99.2％,Kappa值为0.98.结论 OmpB重组蛋白具有很好的免疫反应性,能特异地检出斑点热立克次体IgG抗体,间接ELISA方法可作为临床诊断的技术储备及流行病调查和科学研究.     

Sa抗原相关蛋白质的研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）特异性抗Sa抗体识别的Sa抗原,探讨Sa抗原的相关蛋白质。方法 从人胎盘组织阴离子交换柱层析法纯化Sa抗原,应用免疫印迹法检测155例各种风湿病患者血清的抗Sa抗体,155例患者中类风湿关节炎71例,强直性脊柱炎11例、银屑病关节炎7例、反应性关节炎7例、幼年特发性关节炎4例、骨性关节炎5例、风湿性多肌痛6例、痛风6例、系统性红斑狼疮7例、干燥综合征10例、炎性肌病8例、混合性结缔组织病4例、白塞病6例、成人Still病3例。切取与免疫印迹法阳性条带相对应的电泳胶内条带,胰蛋白酶胶内酶解,用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱鉴定目标蛋白质。以大肠杆菌重组表达目标蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。瓜氨酸化修饰重组蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。结果 抗Sa抗体表现为相对分子质量为50000（和）55000的阳性印迹条带,在155例风湿病中,对RA的诊断敏感性和特异性分别为47．9％和95．2％。质谱鉴定Sa抗原相关蛋白质为波形蛋白（Vimentin）。抗波形蛋白抗体在RA组与其他风湿病组的阳性率差异有统计学意义（P=0．005）,对RA的诊断敏感性和特异性分别为36．6％和83．3％,但与抗Sa抗体的一致性差（Kappa=0．316）。抗瓜氨酸化波形蛋白抗体阳性率在RA组较其他风湿病组高（P〈0．01）,对RA的诊断敏感性和特异性分别为49．3％和86．9％,且与抗Sa抗体的一致性较高（Kappa=0．746）。结论 运用质谱技术鉴定的Sa抗原相关蛋白质波形蛋白,瓜氨酸化修饰后的抗原性与Sa抗原相仿,提示瓜氨酸化波形蛋白与Sa抗原密切相关。     

异尖线虫四种抗原的酶免测定法检测抗体的比较

以异尖线虫幼虫(Anisakis type Ⅰ)实验感染家兔,用不同方法制备四种抗原,按不同感染强度和不同时期进行ELISA测定。四种抗原不同感染强度所得血清内均可测到特异性IgG抗体,但存在特异性抗体出现时间快慢和抗体水平高低问题。SEC抗原在其敏感性和制备等方面均优于其它三种抗原,感染1周时出现强阳性反应,且维持时间长,当阳性判断标准定为0.987(X±3SD)时,所有感染后血清对于SEC抗原和WWE抗原敏感性分别为75％和62.5％,感染早期(7d)开始OD值明显上升,维持时间短的为2周,长的为5周,当10周时恢复到感染前水平,说明具有早期诊断意义。     

卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用

目的 探讨卡介苗( BCG)缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用.方法 选取主流结核病血清学检测抗原的4种不同组合试剂A(结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂)、B(结核分枝杆菌抗体检测试剂)、C(结核杆菌特异性抗体检测试剂)、D(活动性结核抗体检测ELISA系统),通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群[分为结核菌素纯蛋白衍生物试验(PPD)阳性和阴性组]的结核抗体,应用贝叶斯概率统计学方法,综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响.结果 试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80.0％、66.7％、80.7％、56.0％,明显高于健康人群的23.9％、8.9％、6.6％、1.0％,差异均有统计学意义(x2值分别为47.53,51.59,90.48,69.68,均P＜0.01).其中试剂A、B对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高(x2值分别为2.124,2.220,均P＜0.05),试剂C、D对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性(x2值分别为0.122,0.479,均P＞0.05),试剂D的准确率最高,其对活动性肺结核患者IgM检出率为2.1％.结论 IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关,高的检测敏感性常伴随特异性的损失,选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性.     

肝癌血清自身抗体的研究进展

肿瘤相关抗原会被机体的免疫系统识别而产生相应的自身抗体,其是非常有前景的肿瘤标志物之一,有多种途径可以检测和鉴别。而肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其预后差、致死率高。在向肝癌转变的过程中,抗肿瘤相关抗原抗体的出现甚至早于肿瘤相关抗原。目前,研究较多的抗肿瘤相关抗原抗体包括p53抗体、胰岛素样生长因子Ⅱ信使RNA结合蛋白家族抗体、抗Ku86蛋白抗体等。其中,新近发现的血清抗Ku86抗体的敏感性和特异性甚至高于甲胎蛋白,而糖调节蛋白78抗体与甲胎蛋白联合检测可以大大提高肝癌诊断的敏感性。因此,未来抗肿瘤相关抗原抗体可能成为更好地诊断肿瘤尤其是早期肿瘤的血清标志物。     

提高免疫细胞化学染色的方法与应用

免疫组化是用已知抗体或抗原检测组织细胞中相应未知抗原或抗体的一门新技术,具有方法统一、敏感性高、特异性强等优点,能将形态、机能和代谢密切结合起来,已广泛用于临床病理诊断及其相关学科的研究。免疫组化染色的成败与组织切片中抗原的妥善保存及抗原恢复方法有着十分密切的关系。现将近年来我们在免疫组化染色中遇到影响抗原保存的因素及恢复抗原性的方法介绍如下,供同道参考:     

免疫组织化学双PAP方法在淋巴瘤科研上的应用

免疫组织化学双PAP方法国内外已应用于淋巴瘤科研工作中。其原理是利用酶与抗体或抗原结合后,既不改变抗体或抗原的免疫学反应的特异性,也不影响酶本身的活性。在适当的酶底物中很稳定,所以染色标本可以长期保存。 PAP法是过氧化酶——抗过氧化酶免疫复合物方法的简称。PAP制备是将辣根过氧化酶(Horseradish Peroxidaes)和其特异性抗体制成可溶性复合物,再使其与直接或间接结合在抗原上的抗体连接起来,最后用酶底物显色。 Vacca(1980)在PAP法的基础上,重新使用第二抗体与PAP形成更大的抗原——抗体复合物,进一步提高了敏感性,比     

FD结核病诊断试剂盒检测结核杆菌杭体

目前用于结核病检验的常规方法,由于灵敏度差,如痰涂片(AFB)法,一次检查阳性率仅为30％～40％,结核杆菌培养,需6～8周才获得结果,结核菌素皮试法及ELISA法,其特异性尚不能令人满意,PCR法价格昂贵,操作复杂,需一定的设备条件方可开展,FD结核病诊断盒将结核杆菌特异性抗原(LAM)固相在特制的载体上,当被检样品中含有一定量的结核杆菌的抗体(LAM抗体)时,使以载体上的特异性抗原(LAM)结合成抗原抗体复合物,复合物再与标记有相应“二抗”的胶体金试剂作用,而形成红色或紫红的圆形斑点,故呈现红色或紫红色斑点为阳性结果。结核杆菌抗体,结核病患者和大多数健康人的血液中都含有抗结核杆菌抗体、但其含量,前者显著高于后者。     

抗原捕获试验在诊断特发性血小板减少性紫癜中的应用价值

目的：探讨抗原捕获试验在诊断特发性血小板减少性紫癜（ITP）中的应用价值。方法：用抗原捕获试验检测42例ITP患者和21例继发性血小板减少性紫癜（STP）患者的抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅱa抗体（抗GPⅡb/ⅡaAb），酶联免疫竞争抑制试验检测血小板相关抗体（PAIg)，比较二者对ITP诊断的敏感性的特异性。结果：抗原捕获试验检测ITP患者抗GPⅡb/ⅡaAb敏感性为73．8％，特异性为90．5％；酶联免疫竞争抑制试验检测ITP患者PAIg敏感性为71．4％，特异性为23．8％。结论：抗原捕获试验检测抗GPⅡb/ⅡaAb在ITP诊断中有重要价值。     

抗肿瘤单克隆抗体的研究进展(二)

(六)肿瘤体内放射免疫显像利用肿瘤单克隆抗体与其相应肿瘤抗原反应的特异性和放射性核素可以进行体外探测等特点发展起来的放射免疫显像技术,是近年来开展对肿瘤及其转移灶或复发灶进行定位或定性诊断的无创伤性新技术。其基本原理是,从动物或组织培养中获得的各种抗肿瘤抗原抗体,采用合适的同位素标记后注入相应肿瘤患者体内,标记抗体叫随血流到达肿瘤部位,与肿瘤抗原发生特异性结合。     

ELISA与IgG两种测定囊虫抗体方法结果对照

ELISA法检测囊虫抗体具有很高的敏感性和特异性,是用于诊断囊虫病的最好方法之一.囊虫抗体IgG胶体金标诊断试剂盒是以纯化的囊虫抗原固定于纤维膜表面,使用时加入待测血清,如样品中含有抗囊虫特异性抗体,则可与膜表面的相应抗原结合,形成紫红色复合物,颜色的深浅与样品中存在的抗囊虫特异性抗体lgG的量成正比.我们用两种不同的方法对300例门诊有疑似囊虫病的人进行对照检测,现报道如下:     

儿童脑脊液中结核菌抗的抗体检测及意义

为快速诊断结核性脑膜炎膜炎，减少漏诊误诊，本文利用自制抗结核菌抗体，采用ＥＬＩＳＡ试验平行检测了２４例结脑和２９例其他２疾病和脑脊液中结核菌抗的和抗ＰＰＤ抗体ＩｇＧ，结果表明，检测抗原、抗体的敏感性分别为８３．３％，９１．７％；特异性分别为１００％，９３．１％，认为用ＥＬＩＳＡ法同时检测脑脊液中结核菌抗原和抗体比检测抗原或抗体好，这样可以弥补单项检测的假阴性、减少漏诊，有助地快速诊断结脑。     

全血快速免疫学试验

全血快速免疫学试验,可用来检测患者血液中抗原、抗体和某些药物.试验过程中仅需一种双特异性试剂:即特异性抗体(或特异性抗原)与特异性凝集红细胞之抗体相连接的试剂.当双特异性试剂中的特异性抗体或抗原与患者血液中相对应的抗原或抗体结合时,则可引起患者血液中红细胞的凝集反应.本试验方法不需特殊设备、操作简便,适用于门诊或群体体检的筛选.