B型利尿钠肽单克隆抗体的制备

B型利尿钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)是一种由32个氨基酸构成的多肽类神经激素,主要来自于心室,作为一种心衰标志物在临床逐渐被接受.本研究拟以先前已制备的TRX-BNP融合蛋白作抗原,制备BNP单克隆抗体,为研制BNP单抗试剂盒作准备.     

金属螯合四肽的化学合成及单克隆抗体的制备

为了合成金属螯合四肽并制备其单克隆抗体。从初始原料起，采用液相接肽等方法。合成三乙撑四胺钴（Ⅲ）Ｎ－（α－羧基－苯乙基）－β－Ａｌａ－ＧｌｙＯＨ半抗原，并将其偶联到载体蛋白ＢＳＡ上制成抗原，免疫小鼠，采用杂交瘤方法制备单克隆抗体。成功地合成了该金属螯合四肽，获得了８株单克隆抗休杂交瘤细胞系，并对这８株ＭｃＡｂ类与亚类等特性了。可根据需要化学合成一些分子量很小的肽，并制备其单克隆抗体。     

人穿孔素C肽段的单克隆抗体和免疫血清的制备和鉴定

目的制备人穿孔素特异性单克隆抗体和免疫血清。方法利用基因重组技术获得穿孔素(PFP)C端125个氨基酸的肽段免疫Balb/c小鼠和家兔。经取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并用Western印迹和免疫组化法鉴定所制备的单克隆抗体。结果获得4个稳定的分泌抗rhPFP-C的杂交瘤细胞株,腹水抗体的ELISA滴度为1∶3.2×103～1∶6.4×106。兔免疫血清的滴度为1∶3.2×104。结论利用重组人穿孔素肽段可制备出高特异性、高滴度的单克隆抗体和免疫血清。     

泰泽病原体单克隆抗体的制备和鉴定

目的　制备多种抗泰泽病原体的单克隆抗体 ,用于该菌隐性感染的检测。方法　用含泰泽病原体的大鼠肝匀浆免疫BALB c小鼠 ,采用杂交瘤技术和间接免疫荧光方法筛选抗该菌的单克隆抗体 ;运用免疫电镜、Westernblotting和免疫双向扩散试验确定单克隆抗体的抗原定位和相对分子质量及IgG亚类型。结果　共筛选出 5种单克隆抗体 (M2、M3、M4、M5和M7)。免疫电镜表明 :抗体M2、M4、M5、和M7与泰泽病原体的细胞壁结合 ,而M3为抗菌毛的单克隆抗体 ;Westernblotting结果表明 :抗体M2、M3和M4与相对分子质量约为 6 4× 10 3的抗原有特异性结合 ,M5与M7与相对分子质量约为 4 1× 10 3的抗原特异性结合 ;M2、M5、M7为IgG1 ,M3为IgG2b,M4为IgG2a。对模拟自然感染大鼠考的松激发试验阳性为 2 10 ,而单克隆抗体为诊断抗体的IFA则为 8 10。除M7外 ,4种单抗不与清洁级以上大鼠回盲部细菌发生反应。结论　筛选的杂交瘤细胞能稳定分泌抗体 ,其IFA效价达 1∶10 2 4 ;表明这些抗体具有高效价、较高特异性和敏感性。     

抗M2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响

应用放射免疫分析方法及全细胞膜片钳技术研究了抗M     

β淀粉样肽22—35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ     

HFRS病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

抗独特型抗体是由抗体(Ab_1)可变区上的独特型决定簇(Id)诱导产生的一种特殊的抗体(Ab_2)。由于Ab_2的可变区与Ab_1的Id在三维结构上相互补,或在部分一级结构上相类似,因此一部分Ab_2本身所具有的Id可以模拟始动抗原的作用。迄今尚未见到有关肾综合征出血热(HFRS)病毒Ab_2的研究报道。     

抗EphA4多肽单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗EphA4羧基端多肽的单克隆抗体，研究其免疫学特性。方法:体外合成EphA4羧基端多肽免疫小鼠，运用杂交瘤技术建立抗EphA4多肽单克隆抗体细胞株。通过免疫化学方法分析单抗的免疫学特性。结果:获得1株抗EphA4单克隆细胞，所分泌的抗体具有EphA4特异性，能识别人类、鸡与小鼠EphA4；可用于EphA4的ELISA、免疫沉淀、免疫印迹与免疫组织化学染色。结论:抗EphA4多肽单抗具备优良的免疫学特性，适用于多种免疫化学技术，是EphA4及其配体研究的重要工具。     

岩沙海葵毒素单克隆抗体的制备及其鉴定

目的建立岩沙海葵毒素（Palytoxin,PTX）高特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法将PTX偶联成具有免疫功能的PTX-PDP-KLH完全抗原,免疫雌性6—8周龄Balb／c小鼠,利用传统杂交瘤技术制备PTX单克隆抗体。并通过间接酶联免疫吸附测定（ELISA）方法筛选克隆阳性杂交瘤细胞株。结果获得能稳定分泌抗PTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株B8,与载体蛋白没有发生交叉反应。SDS—PAGE分析表明,McAb B8在50KD和25KD处各出现一条条带,与IgG的重链和轻链的大小相符。结论研究制备了特异性单克隆抗体PTX,为进一步建立快速检测、鉴定海产品中岩沙海葵毒素的方法,奠定有效的实验基础。     

抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳...     

抗单链DNA单克隆抗体的制备及应用

目的:制备特异性的抗单链单克隆抗体,为建立一种特异、敏感、简便的细胞凋亡检测方法奠定基础。DNA方法:根据烷化剂盐酸氮芥能特异性地修饰小牛胸腺链上的鸟嘌呤而暴露互补链上的胞嘧啶这一特性,将修饰后的DNA(G)(C)小牛胸腺连于甲基化的牛血清白蛋白上制备成完全抗原,免疫小鼠获得特异性的抗单链单克隆抗体,并对DNABALB/cDNA单抗的类别和特异性进行鉴定;用叠氮钠和抗肿瘤药物诱导了细胞的坏死和凋亡,利用所制备的抗单链单克VP-16HL60DNA隆抗体对其进行检测,并与形态学方法、凝胶电泳法和法进行了比较。TUNEL结果:所制备的抗单链单克隆抗体能与羊DNA抗小鼠发生特异性反应,且能与凋亡细胞特异性结合,而不结合坏死细胞。IgM结论:所制备的单抗为型,利用其能特异IgM地结合单链的特性,可用于检测细胞凋亡,简便、有效地区别细胞凋亡和坏死。DNA     

抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。     

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗早孕因子（EPF）单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10^-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。     

抗创伤弧菌mAb的制备与鉴定

目的: 制备抗创伤弧菌mAb并用于创伤弧菌感染的快速诊断.方法: 用灭活创伤弧菌免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗创伤弧菌的mAb,ELISA法用于mAb的Ig效价,亚类及特异性鉴定.结果: 获得了2株可持续分泌抗创伤弧菌mAb的杂交瘤细胞株.结论: 获得的高特异性的抗创伤弧菌mAb不仅为创伤弧菌感染的快速诊断奠定了坚实的基础,而且为其进一步的治疗方面的研究提供了理论依据.     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。