环维黄杨星D对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察环维黄杨星D(Cvb-D)对异丙肾上腺素(Iso)致心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法给大鼠灌服Cvb-D0.55,1.1和2.2mg/kg,连续21d,以Iso复制心肌缺血性模型大鼠,光学显微镜下观察各组大鼠的心肌组织病理学变化,采用末端标记TUNEL法测定Cvb-D对心肌细胞凋亡的影响,以凋亡细胞数占细胞总数的平均百分比表示。结果Cvb-D可显著减轻Iso诱发的心肌缺血致心肌肌纤维排列紊乱,坏死细胞胞浆溶解,坏死间质区炎性细胞浸润等病理改变;Cvb-D可显著抑制Iso诱发的心肌缺血性模型大鼠心肌细胞凋亡。结论Cvb-D具有抗Iso致心肌缺血,改善心肌缺血致细胞凋亡作用。     

环维黄杨星D对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究环维黄杨星D(CVB-D)对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法:采用培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定心肌细胞搏动频率、细胞存活率、肌酸激酶(CK)的含量;应用特异性荧光指示剂Fluo-3/AM负载急性分离的大鼠心肌细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧损伤+环维黄杨星D组(H/R+CVB-D)乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞存活率与缺氧/复氧损伤组比较明显升高,CK含量与缺氧/复氧损伤组比较明显下降。对急性分离大鼠心肌细胞内[Ca²⁺]i逐步升高,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,CVB-D对胞内钙的升高有显著差异(P<0.05);在无外钙并加入内罗啶孵育后,CVB-D引起的胞内[Ca²⁺]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:环维黄杨星D对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,对急性分离大鼠有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca²⁺]的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

环维黄杨星D对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞凋亡影响

目的研究环维黄杨星D(CVB-D)对去甲肾上腺素(NE)诱导乳鼠心肌细胞损伤凋亡的影响。方法取SD大鼠乳鼠心肌细胞做原代培养,20μmol.L-1NE诱导心肌细胞凋亡模型,Giemsa染色TUNEL、DNA-Ladder凝胶电泳检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达,检测细胞LDH的外漏率,线粒体琥珀酸脱氢酶(MSDH)的活力,观察CVB-D的保护作用。结果模型组Giemsa染色形态学上出现典型的凋亡特征;DNA Ladder凝胶电泳出现典型的梯状条带;TUNEL染色法测定的凋亡率增高;Caspase-3的阳性表达率增高,细胞LDH的外漏率增加,MSDH活力降低。CVB-D明显的降低了细胞LDH的外漏率,提高了MSDH的活力,对心肌细胞的凋亡具有明显的保护作用。结论 CVB-D对心肌细胞凋亡和细胞的能量代谢障碍具有显著的保护作用。     

琥珀酸对原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

本研究采用SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,考察琥珀酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的LDH漏出率的影响,并进一步采用流式细胞术及Western blot考察琥珀酸对心肌细胞凋亡,cleaved caspase-3及p-Akt的影响,探讨琥珀酸对新生大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。研究结果发现:①琥珀酸31.25~500 mg·L^-1对原代心肌细胞活力无明显影响,琥珀酸400,200,100,50 mg·L^-1均可显著降低心肌细胞缺氧复氧损伤LDH漏出率(P<0.01或P<0.05);②琥珀酸400,200 mg·L^-1可显著降低缺氧复氧损伤所致的心肌细胞凋亡百分数(P<0.05),抑制心肌细胞缺氧复氧所致的cleaved caspase-3 蛋白表达增加(P<0.05);③琥珀酸400 mg·L^-1可显著增加心肌细胞的p-Akt蛋白表达(P<0.05),而琥珀酸200 mg·L^-1对p-Akt蛋白表达无明显影响。因此,本研究认为琥珀酸可通过激活Akt的磷酸化而抑制心肌细胞缺氧复氧所致的坏死和凋亡。     

环维黄杨星D对微循环的影响

本通过在体微循环实验研究环维黄杨星Dig对小鼠耳廓微循环和家兔球膜微循环的影响,结果表明,环维黄杨星D具有改善微循环的作用,能明显扩张小鼠耳细动脉和细静脉,拮抗高分子右旋糖酐所致家兔球结膜微循环障碍。     

环维黄杨星D对大鼠肝脏ATP酶活性的影响

目的探讨环维黄杨星D长期给药对大鼠肝组织ATP酶（ATPase）活性影响。方法将SD大鼠随机分为对照组、环维黄杨星D（3、6、12mg/kg）,灌胃4周,采用酶标仪检测Na＋,K＋-ATPase、Ca2＋,Mg2＋-ATPase、Ca2＋-ATPase含量。结果环维黄杨星D各剂量组肝组织中Na＋,K＋-ATPase、Ca2＋,Mg2＋-ATPase、Ca2＋-ATPase活性与对照组比较显著降低。结论黄杨宁对肝脏毒性可能与抑制Na＋,K＋-ATPase、Ca2＋,Mg2＋-ATPase、Ca2＋-ATPase活性有关。     

环维黄杨星D对大鼠肾小管上皮细胞增殖的影响

目的：研究环维黄杨星D对大鼠肾小管上皮细胞的毒性影响。方法：体外培养大鼠肾小管上皮细胞,利用噻唑蓝法（MTT）评价环维黄杨星D（CVB—D）对大鼠肾小管上皮细胞增长抑制的IC50,观察不同浓度药物对细胞形态和细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）活力的影响。结果：CVB-D作用大鼠肾小管上皮细胞48小时后,可明显地抑制细胞增值,其IC50是111．47μmol／L,并且能够导致细胞发生皱缩和空泡化,48小时后细胞上清液中LDH漏出率明显增加。结论：CVB-D在体外对于大鼠肾小管上皮细胞的增殖具有明显的抑制作用。     

环维黄杨星D对结扎大鼠冠状动脉致心肌缺血的影响

目的:研究环维黄杨星D对大鼠心肌缺血的保护作用。方法:采用结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死模型,分别测定手术后各组大鼠的心电图S-T段,心肌损伤范围(坏死及缺血范围),心肌组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、磷酸肌酸激酶(CPK)活性。结果:环维黄杨星D(1.1,2.2 mg/kg)能明显减轻结扎冠状动脉致心肌损伤,减小模型大鼠心肌梗死面积,显著抑制心肌缺血大鼠心电图S-T段升高,显著抑制模型大鼠心肌中SOD活性降低、MDA含量升高,显著抑制模型大鼠心肌中CPK活性降低。结论:环维黄杨星D对结扎大鼠冠状动脉所致心肌缺血损伤具有明显的保护作用。     

环维黄杨星D对大鼠肾脏毒性的初步观察

目的观察环维黄杨星D连续注射给药对大鼠的肾脏毒性作用。方法环维黄杨星D不同剂量组连续给大鼠腹腔注射3个月,观察动物的一般状况、血液生化和肾组织病理变化。结果8mgk/g剂量组有3只动物给药期间出现精神萎糜、反应迟钝、活动呆板、呼吸急促、行走不稳等毒性反应。8mgk/g剂量组大鼠血清的BUN明显升高,4,8mg/kg剂量组部分动物出现肾脏的远曲小管上皮细胞变性、坏死及蛋白管型等病理改变,以8mg/kg剂量组较为严重。结论一定剂量的环维黄杨星D连续注射给药可致肾脏损伤。     

环维黄杨星D对大鼠心室乳头肌电生理作用

 目的 探讨环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠离体右心室乳头肌的电生理作用。方法 采用标准玻璃微电极技术,观察记录大鼠离体右心室乳头肌跨膜电位。结果 CVB-D具有剂量依赖效应，在0.3?3.3μmol·L^-1,CVB-D对动作电位各参数无明显影响，但在13.3?63.3 μmol·L^-1呈剂量依赖性延长动作电位复极化时程，主要延长APD₅₀APD₇₀和APD₉₀;在33.3?63.3/μmiol?L¹呈剂量依赖性抑制静息电位(RP)、动作电位幅值(APA)和0期最大去极化速度(V_max)。研究结果还显示，CVB-D还具有时间依赖效应，当20μmio·L^-1灌流心室肌10 min后开始出现作用，随着药物作用时间的延长，APD₅₀APD₇₀和APD₉₀也逐渐增大，但是到30 min左右时作用达最高峰，而且至少可持续60 min。此外，CVB-D明显延长动作电位的有效不应期（ERP)、增大ERP 与心室肌细胞动作电位时程(APD)的比值。结论 CVB-D具有延长APD及ERP以及增大ERP与APD的比值的作用。     

人参皂苷Rg1对原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤的作用

目的探讨人参皂苷Rg1对原代培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及其是否能直接抑制线粒体通透性转换孔的开放。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,构建缺氧复氧损伤(H/R)模型,应用不同浓度人参皂苷Rg1进行干预,通过检测细胞活力、线粒体膜电位、细胞色素C的释放,观察人参皂苷Rg1对心肌细胞H/R损伤的作用;将不同浓度的人参皂苷Rg1分别和线粒体25℃孵育10 min,加入200μmol/L CaCl_2诱发mPTP的开放,以1μmol/L的mPTP特异性抑制剂环孢素A(Cs A)为阳性对照,每间隔30 s观察520 nm处吸光度的变化,连续观察10 min,以线粒体肿胀程度评估mPTP的开放情况。结果人参皂苷Rg1能增强H/R损伤后心肌细胞活力,阻止H/R引起的线粒体膜电位的降低,减少细胞色素C释放;6.25,25,100,400μmol/L人参皂苷Rg1无直接抑制mPTP开放的作用。结论人参皂苷Rg1可减轻心肌细胞H/R损伤,保护心肌细胞,其作用与直接抑制mPTP开放无关。     

环维黄杨星D对照品的建立

目的建立环维黄杨星D对照品.方法采用热分析、HPLC/MS、末端检测HPLC、紫外衍生HPLC、荧光衍生HPLC、TLC及非水滴定共7种方法测定环维黄杨星D对照品含量.结果热分析法不能用于环维黄杨星D纯度分析,HPLC/MS、紫外衍生HPLC、荧光衍生HPLC及末端检测HPLC四法测定的环维黄杨星D纯度一致.结论多种方法互相印证,表明该文建立的对照品分析方法可行.     

环维黄杨星D分离方法改进

目的：研究环维黄杨星D新的分离方法.方法：黄杨木总生物碱通过酰化、酸溶分离得到环维黄杨星D三乙酰化物，经水解得目标物。结果：用化学分离方法可得到纯度较高的环维黄杨星D。结论：改进后的工艺操作简单、成本低、产品质量稳定，适合工业化生产。     

川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的实验研究

目的:观察川芎嗪预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的保护。方法:利用心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,川芎嗪注射液预处理对心肌细胞进行预处理。结果:川芎嗪提高心肌细胞缺氧/复氧损伤后心肌细胞存活率、减少细胞丙二醛产生、减少乳酸脱氢酶的漏出。结论:川芎嗪对乳鼠心肌细胞有预处理保护作用。其机制与提高心肌细胞抗氧自由基的能力,抑制脂质过氧反应,减轻心肌细胞膜脂质过氧化损伤,保持细胞膜结构的完整性来实现的。     

环维黄杨星D对麻醉犬血流动力学的影响

目的:探讨环维黄杨星D(CVB-D)对麻醉犬血流动力学的影响。方法:分别以0.1、0.2、0.4 mg/kg剂量的CVB-D静脉注射给予麻醉犬,观察给药后收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心输出量(CO)、冠脉流量(CBF)、每搏输出量(SV)、总外周血管阻力(TPVR)等血流动力学指标的变化。结果:CVB-D中、高剂量能降低麻醉犬HR,增加CBF,降低TPVR。此外高剂量CVB-D能升高麻醉犬SAP,增加SV,与对照组比较具有显著性差异。而CVB-D各剂量组对麻醉犬MAP和CO均未见显著影响。结论:CVB-D能够显著改善麻醉犬血流动力学及心脏自身供血,这可能是其治疗心肌缺血性疾病的基础。     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,观察银杏叶提取物(EGB)对心肌细胞缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的影响,为心脏缺血/再灌注损伤的防治提供理论依据。方法:采用胶原酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞。分正常对照组、H/R组、H/R+银杏叶提取物组,用MTT法观察心肌细胞存活率、用Western blotting测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,H/R组心肌细胞存活率显著降低,Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax表达水平上调;银杏叶提取物预处理后进行H/R较大程度地逆转了上述指标变化,与H/R组相比差异均有显著性(P<0.05)。结论:H/R可以诱导心肌细胞损伤;银杏叶提取物可以通过上调Bcl-2,下调Bax而减轻心肌细胞凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

金丝桃苷对原代培养的大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的影响

目的探讨金丝桃苷对原代培养的大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用。方法采用显微镜和M TT法观察缺氧-再给氧导致培养的大鼠原代心肌细胞的损伤和金丝桃苷的保护作用;流式细胞术观察金丝桃苷对心肌细胞凋亡的影响;并观察乳酸脱氢酶(LDH)水平的变化和细胞内C a2 浓度的变化。结果金丝桃苷对缺氧-再给氧导致的心肌细胞损伤有一定的保护作用,可以抑制心肌细胞凋亡的发生;0.5~50μm o l/L金丝桃苷可以剂量依赖性地抑制心肌细胞中LDH的形成和细胞内C a2 超载。结论金丝桃苷具有对抗缺氧-再给氧导致心肌细胞损伤的作用,其机制可能与抑制心肌细胞凋亡、钙超载和抗自由基形成有关。     

环维黄杨星D对大鼠心律失常双向作用的电生理研究

目的通过环维黄杨星D(CVB—D)对大鼠离体心室乳头肌的电生理作用,探讨其抗心律失常和致心律失常的可能机制。方法采用标准玻璃微电极技术,观察记录大鼠离体右心室乳头肌跨膜电位。结果(1)CVB—D在13．3～63．3μmol／L剂量范围内呈剂量依赖性延长动作电位复极化时程(APD),主要延长APD50、APD70和APD90;在33．3～63．3μmol／L剂量范围内,呈剂量依赖性抑制静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)和0相最大去极化速率(Vmax)。(2)CVB—D还具有时间依赖效应,当20μmol／L灌流心室肌10min后开始出现作用,随着药物作用时间的延长,APD50、APD70和APD90也逐渐增大,但是到30～40min左右时作用达最高峰,此后并不继续延长。(3)CVB—D明显延长动作电位的有效不应期(ERP)、增大ERP与APD的比值。(4)CVB-D在较高浓度(33．3μmol／L)作用超过45min后有些细胞出现频发、多源性自发性活动。结论CVB—D具有抗室性心律失常作用,其机制与延长心室肌细胞动作电位时程及其有效不应期(ERP)和增大ERP与APD的比值有关,同时也具有致心律失常作用,其致心律失常作用可能与抑制RP、APA、Vmax以及过度延长APD有关。     

基因芯片技术研究环维黄杨星D对大鼠肾脏基因表达的研究

目的:采用基因芯片技术研究环维黄杨星D(CVB-D)对大鼠肾脏基因表达谱的影响,初步探索其对肾脏毒性作用的机制.方法:10只SD大鼠随机分为正常组和CVB-D 10 mg·kg-1组,连续腹腔给药14d,分别从大鼠肾脏组织中提取总RNA,分离纯化后,反转录合成掺人生物素标记的cDNA探针,与基因芯片杂交,扫描芯片荧光信号图像后,统计处理并进行分析.选取5个差异表达基因,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法进行验证.结果:CVB-D组与空白组比较,共筛选出309条差异表达的基因,其中表达上调基因有147条,下调基因有162条,涉及凋亡通路相关基因、细胞周期相关基因、Ca2+信号通路相关基因、MAPK信号级联等.结论:CVB-D的肾毒性可能与凋亡通路、MAPK信号级联、细胞周期及Ca2+信号通路异常调控相关.