维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用体外细胞培养的方法,观察了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）对人胃癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）生长的影响,并通过荧光染色和流式细胞仪技术研究其对ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡的影响。结果表明ＶＥＳ（５、１０和２０μｇ／ｍｌ）对ＳＧＣ０７９０１细胞生长有明显抑制作用;同时可诱导ＳＧＣ－７９０１细胞调亡。提示ＶＥＳ可通过诱导细胞凋亡来抑制胃癌细胞生长。     

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡

目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡执行阶段的机制。方法 分别将对照组0．1％无水乙醇和5，10，20μg／m1 VES加入培养液中，24h后通过荧光染色观察细胞核形态和线粒体跨膜电位(△ψm)改变，并用Westem蛋白印记检测凋亡诱导因子在线粒体和细胞质中的重新分布。结果 VES可明显诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡，20vg／m1 VES可使细胞凋亡率达到49．7％，伴有△ψm的明显降低，并有凋亡诱导因子自线粒体中的释放。结论 VES可能是通过使线粒体通透性改变，降低△ψm并释放线粒体中的凋亡诱导因子，诱导SGC-790l细胞凋亡。     

CD47在维生素E琥珀酸酯诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用

目的 探讨CD47在维生素E琥珀酸酯诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中的作用.方法 实验采用的细胞系是人宫颈癌Hela细胞,分为空白对照、VES处理(10μg/ml VES作用24h)、CD47抑制剂处理细胞和VES处理、CD47过表达转染细胞和VES处理、空载体转染细胞和VES处理共5组.流式细胞术检测各处理组细胞的...     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中线粒体的作用

目的探讨在维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)诱导人胃腺癌SGC7901细胞凋亡过程中线粒体的作用。方法SGC7901细胞经5、10、20μgmlVES处理后,用荧光染色法观察线粒体跨膜电位(Δψm)改变,用WesternBlot法检测细胞质中细胞色素c的表达情况和caspase3的表达与激活。结果VES可使线粒体Δψm明显降低,有明显的剂量效应和时间效应关系。胞质中细胞色素c和caspase3表达增加,同时激活caspase3。结论VES可能是通过使线粒体通透性改变并释放细胞色素c,激活下游caspase3,从而诱导SGC7901细胞凋亡。     

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌细胞凋亡途径

目的　探讨维生素E琥珀酸酯 (VES)诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡的死亡受体 (Fas)信号转导途径。方法　人胃腺癌SGC -790 1细胞经不同剂量VES(5,10 ,2 0 μg/ml)处理 ,同时做琥珀酸、维生素E和空白对照 ,采用DAPI(4,6-贰脒基 -2 -苯基吲哚 )荧光染色法观察细胞凋亡情况 ,用WesternBlot法检测Fas、带有死亡结构域的Fas相关蛋白 (FADD)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (caspase -8)蛋白表达情况 ,Fas和FADD反义寡聚核苷分别转染SGC -790 1细胞后 ,用荧光法检测caspase -8活性。 结果　经VES处理后的细胞DAPI染色可见凋亡的形态学改变 ,2 0 μg/mlVES处理 48h后的细胞凋亡率为 89.6% ;VES处理 48h后Fas、FADD和caspase -8蛋白表达明显增加 ,且呈剂量 -效应关系 ;阻断Fas可明显抑制FADD蛋白表达 ,Fas和FADD反义寡聚核苷转染细胞后caspase -8活性明显降低 (P <0 .0 1) ,其中阻断Fas的效果高于阻断FADD。结论　维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡过程中启动了Fas信号转导途径 ,VES启动Fas后 ,FADD将Fas和caspase -8联接起来 ,活化caspases级联反应 ,从而构成Fas/FADD/caspase -8的凋亡信号途径     

c-Jun N-末端激酶在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)属于丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)家族成员，多种细胞外应激信号可使其磷酸化而活化，在细胞应激反应中起重要作用。我们通过研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对人胃癌SGC-7901细胞中JNKMAPK表达的影响，探讨该途径在VES诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞分化的作用

目的研究维生素E琥珀酸酯(VES)对胃癌细胞的诱导分化作用。方法5，10μg／ml维生素E琥珀酸酯处理人胃癌SGE-7901细胞，分别采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长；^3H-TdR掺入法测定DNA合成速率；流式细胞术检测细胞周期的分布；分光光度法检测分化标志酶的活性。结果VES可使细胞形态学改变；抑制SGC-7901细胞的生长。降低DNA的合成速率；使细胞出现G0／G1期停滞；分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低。结论VES可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长。     

内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究

目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况,流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况,同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态...     

肌醇激酶1在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生自噬过程中的作用

目的 研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)诱导人胃癌细胞自噬过程中肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)发挥的作用。方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,设置溶剂对照组(0.1%无水乙醇)、不同剂量(5、10、15、20μg/mL)VES组、4μ8C组(4μ8C为IRE1抑制剂)和VES+4μ8C组。Western blot检测对照组、不同剂量VES组内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3, LC3)、Beclin-1,未折叠蛋白反应分支通路肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1, IRE1)、X-盒结合蛋白1 (X box-binding protein 1, XBP1)、c-Jun氨基末端激酶(c-J...     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞外调节激酶影响

目的探讨三羟异黄酮（genistein）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞外调节激酶1/2（ERK1/2）MAPK信号转导通路的影响.方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法分别检测三羟异黄酮以及与ERK1/2上游激酶MEK1/2抑制剂联合作用时对MDA-MB-231增殖的抑制作用;应用Western blot蛋白免疫印记法分别检测ERK1/2总蛋白、c-Jun、c-Fos蛋白的表达.结果 MTT结果显示,与对照组相比,三羟异黄酮作用48h后,细胞存活度随浓度增加而降低,合用MEK1/2抑制剂细胞存活度最低;Western blot分析提示,随三羟异黄酮剂量的增加,ERK1/2、c-Jun、c-Fos蛋白表达增加,但合用抑制剂后蛋白表达降低.结论三羟异黄酮可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,并激活了ERK1/2 MAPK信号转导通路;MEK1/2抑制剂可以抑制三羟异黄酮介导的ERK1/2活化,同时提高三羟异黄酮的肿瘤抑制作用.     

诱导胃癌细胞凋亡中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的表达

目的　研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (caspase 8)在维生素E琥珀酸酯 (VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法　以人胃癌SGC 790 1细胞作为靶细胞 ,采用WesternBlot法、荧光分光光度法、DAPI染色法探讨caspase 8在VES诱导SGC 790 1细胞凋亡过程中的表达和活性。结果　经 5、10、2 0mg/LVES处理后 ,细胞中caspase 8蛋白表达增加 ,caspase 8活性分别为 ( 17 83±1 82 )U和 ( 33 74± 2 6 5 )U、( 5 2 34± 3 10 )U ,均呈剂量 效应关系 ;用caspase 8抑制剂z 异亮氨酸 谷氨酸 苏氨酸 天冬氨酸 (IETD fmk)处理SGC 790 1细胞后 ,降低了VES诱导的细胞凋亡率及caspase 8的活性。结论　caspase 8是VES诱导SGC 790 1细胞凋亡的重要参与者。     

姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制

目的 探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的可能机制。方法 体外培养人胃癌细胞SGC-7901,细胞计数盒8（CCK8）法观察不同浓度姜黄素对胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用;流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期;Western blot检测SGC-7901细胞核转录因子κB（NF-κB）、livin、caspase-3蛋白表达情况。结果 与对照组比较,各剂量姜黄素组SGC-7901细胞增殖活力均受到抑制,呈剂量效应关系（r=0.901,P<0.01）与时间效应关系（r=0.389,P<0.01）;与对照组（2.8%）比较,20、40、60 μmol/L姜黄素组SGC-7901细胞凋亡率[分别为7.7%、13.4%、20.7%]明显升高（P<0.05）;与对照组（58.59%）比较,20、40、60 μmol/L姜黄素组SGC-7901细胞周期G1期比例[分别为60.24%、65.13%、68.35%]明显升高（P<0.05）;与对照组比较,姜黄素组SGC-7901细胞内NF-κB、livin蛋白表达降低,caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）,呈剂量效应关系。结论 姜黄素可抑制人胃癌细胞SGC-7901的活性,其机制可能与姜黄素下调NF-κB信号通路,促进livin解除对caspase的抑制效应而激活caspase-3,发挥其诱导细胞凋亡作用有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌的影响

目的观察Ras-Raf-ERK 1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖和凋亡影响,探讨bFGF及其信号转导途径与卵巢癌发生发展关系。方法以bFGF和促细胞分裂剂激活性蛋白激酶1(MEK1)抑制剂PD98059处理CAOV3细胞,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白印迹(Western blot)检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的活性。结果bFGF处理后细胞增殖比明显增加,且与bFGF水平呈剂量依赖关系,bFGF浓度为75 ng/ml时细胞增殖比最高为140%;bFGF使无血清诱导的凋亡细胞比例下降[(33.20±5.32)%~(2.38±3.36)%];bFGF诱导ERK1/2活性增高。PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF通过Ras-Raf-ERK 1/2途径介导,促进卵巢癌CAOV3细胞增殖,抵抗无血清诱导凋亡。在卵巢癌发生发展过程中,bFGF信号传递发挥了重要作用。     

镉诱导大鼠腺垂体细胞凋亡及与p38 MAPK&ERK1/2途径介导机制关系的初步研究

目的了解CdCl2对腺垂体的损伤以及细胞凋亡发生与p38MAPK、ERK12表达的关系,为了解镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据。方法采用健康雄性SD大鼠进行整体试验(n=12),分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0mgkgbwCdCl2,6周后取腺垂体进行指标检测;离体试验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmolLCdCl2处理,收获细胞进行检测;特异性阻断剂阻断凋亡效应的试验采用2.65μmolLp38MAPK的特异阻断剂SB203580或10μmolLERK12激酶的特异阻断剂U0126处理细胞,然后以3.12μmolL或100.00μmolL的CdCl2处理细胞后进行相应的检测。检测指标包括:TUNEL法和流式细胞术等检测凋亡。结果整体实验和离体实验结果均显示CdCl2以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞发生凋亡(P<0.05);特异性阻断剂效应的研究结果显示2.65μmolLSB203580和10μmolLU0126对TUNEL阳性细胞的相对灰度和凋亡细胞率均有一定的影响。结论在一定的剂量条件下,CdCl2影响腺垂体激素分泌水平,并导致发腺垂体细胞凋亡,MAPKs家族成员p38MAPK和ERK12激酶通路在凋亡发生过程中可能发挥一定的作用。     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0及 2 0 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALadder)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果发现 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;γ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景