经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞和间充质干细胞对急性心肌梗死模型心功能的改善

目的:为保护濒死心肌提供机会窗口,对比观察经冠脉移植自体骨髓单个核细胞或间充质干细胞后,实验性急性心肌梗死动物心功能变化及心肌组织核转录因子кB、心肌细胞凋亡情况。方法:实验于2005-03/2006-11在河北省人民医院实验中心完成。选用24只雄性冀中白猪,随机数字表法分为4组:正常对照组、模型组、单个核细胞组、间充质干细胞组,6只/组。①24只猪均以盐酸氯胺酮200mg臀部肌肉注射麻醉后,分别于各自右侧股骨抽取骨髓20mL,采用Fercoll法分离获得骨髓单个核细胞,加入胶体金溶液,培养12～16h待用。分离过程中取出含有骨髓单个核细胞成分的细胞层,常规培养传代,每3d换液1次,贴壁生长细胞即为骨髓间充质干细胞,加入胶体金溶液,培养24h待用。②除正常对照组外,其余各组均经导管球囊封闭第一对角支以远的前降支,复制猪急性心肌梗死模型。单个核细胞组、间充质干细胞组均于造模后立即开通前降支,分别经球囊注入预先分离的骨髓单个核细胞6×108个、间充质干细胞6×108个。模型组造模后于梗死1h开通前降支,经球囊注入磷酸盐缓冲液10mL。③各组分别于术前及术后4周经心脏超声检测心功能,取材行病理学检查、心肌组织核转录因子кB的免疫组织化学检测及心肌细胞凋亡检测。结果:24只雄性白猪均进入结果分析。①心功能变化:术前各组左心室收缩末内径、左心室舒张末内径、左心室射血分数、短轴缩短率基本相似。移植术后4周,正常对照组、单个核细胞组、间充质干细胞组左心室舒张末内径均明显低于模型组(F=4.68,P=0.01),左心室射血分数及短轴缩短率均明显高于模型组(F=5.14,P=0.01;F=3.32,P=0.04),各组左心室收缩末内径差异无显著性意义(F=1.64,P=0.21)。②心肌组织病理学改变:电镜下单个核细胞组、间充质干细胞组在梗死边缘区可见有胶体金颗粒的不成熟的心肌细胞,胞质中散在肌丝结构,肌丝排列紊乱不规则。③心肌组织核转录因子кB阳性率表达:与模型组比较,单个核细胞组、间充质干细胞组的梗死边缘区核转录因子кB阳性率明显降低(F=25.59,P=0.0001);正常心肌区核转录因子кB阳性率亦明显降低(F=18.20,P=0.0001)。④心肌细胞凋亡检测结果:与模型组比较,单个核细胞组、间充质干细胞组在心肌梗死区细胞凋亡率均明显降低(F=6.63,P=0.0027),梗死边缘区细胞凋亡率亦明显降低(F=36.07,P=0.0001)。正常心肌区单个核细胞组细胞凋亡率与模型组基本相似(F=9.69,P=0.004),但间充质干细胞组有所降低。⑤心功能与心肌细胞凋亡及心肌组织NF-кB的相关性:急性心肌梗死4周时,左心室射血分数与心肌细胞凋亡、心肌组织核转录因子кB均呈负相关(r=0.613,P=0.001;r=-0.437,P=0.033)。心肌细胞凋亡与心肌组织核转录因子кB呈正相关(r=0.672,P=0.002)。结论:经冠脉移植骨髓单个核细胞和间充质干细胞均可改善实验性急性心肌梗死动物的心功能,与梗死边缘区核转录因子кB表达降低及心肌细胞凋亡减少有关。骨髓单个核细胞移植的促血管增生作用优于间充质干细胞移植。     

骨髓间质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的病理学观察

目的:观察急性心肌梗死大鼠行骨髓间质干细胞移植后受损心肌组织的病理形态学变化。方法:实验于2004-01/2005-06在上海胸科医院完成。选取健康成年雌性SD大鼠40只,随机数字表法分为骨髓间质干细胞注射组、模型对照组,20只/组。①两组大鼠均建立心肌梗死模型。造模0.5h后,骨髓间质干细胞注射组于结扎点下方缺血区域组织注射Dill标记的骨髓间质干细胞3×106个,模型对照组心肌缺血区域注射100μL生理盐水。②造模后4～6周处死两组大鼠,取出心脏,剪除双侧心房及右心室,沿左心室长轴由心尖到底部做3mm厚切片,镜下观察心肌梗死区域病理组织学表现。③选择心肌梗死表现明显的蜡块切片,行酸性复红染色,用LeicaQWin多媒体彩色病理图文分析软件进行图像分析,自动测量出切片中心肌梗死组织占总面积的百分比。免疫组化检测梗死心肌血管内皮生长因子和FactorⅧ蛋白因子的表达情况。结果:40只大鼠均进入结果分析。①梗死心肌的病理形态学观察:光镜下两组均可见大小不等的心肌梗死灶,梗死心肌区域细胞肿胀坏死,严重缺血坏死区出现心肌溶解。但骨髓间质干细胞注射组上述改变明显弱于模型对照组,其心肌梗死中层可见条索状的梗死灶及纤维瘢痕灶,并且有残存的心肌呈岛状散在分布,纤维瘢痕区域心肌细胞、微血管和毛细血管数量均明显增加,侧支循环丰富。另外,骨髓间质干细胞移植组于造模初期4只大鼠心内膜面有灶性软骨生成,向心室腔突起。②梗死心肌面积百分率的检测:骨髓间质干细胞注射组梗死心肌面积百分率明显低于模型对照组[(3.69±0.48)%,(19.20±1.77)%,t=7.621～10.820,P=0.001]。③梗死心肌血管内皮生长因子和FactorⅧ免疫组化检测:骨髓间质干细胞注射组血管内皮生长因子、FactorⅧ呈阳性表达,模型对照组未检测到血管内皮生长因子和FactorⅧ。结论:骨髓间质干细胞在大鼠心脏内可以转化为血管内皮细胞或分泌血管内皮生长因子,是治疗缺血性心血管疾病理想的细胞来源。心内膜面有灶性软骨生成可能是由于注射细胞时进针太深,警示注意骨髓间质干细胞移植的副反应。     

超声造影评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的超声造影评价兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植于缺血心肌后缺血心肌细胞的修复重建能力,比较3种体外不同处理方式的MSCs自体移植治疗梗死后心脏的心功能改善效果。方法新西兰白兔40只结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型后随机分为4组,2周后分别将自体骨髓间充质干细胞(MSCs组10只)、经5-aza诱导24 h的MSCs(诱导组10只)、新鲜分离的骨髓单个核细胞(BMMNs组10只),1,1-二十八烷基-3,3,3,3-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethyl indocarbocyanine perchlorate,Dil)标记后用微量注射器注射于兔缺血心肌内,并以无血清培养基注射动物为对照组(正常对照组10只)。分别在造模前、后、细胞移植后2周、4周超声心动图测量左室收缩、舒张末内径(LVESD、LVEDD),计算左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS),同时用心肌声学造影(MCE)评价缺血区的血流灌注。细胞移植后8周处死实验动物,病理学检测梗死区毛细血管生长状况。结果细胞移植术后8周,各细胞移植组毛细血管密度均较对照组增多,MCE见细胞移植后显著改善梗死区血流灌注。M型超声心动图检查,细胞移植后2周、4周均见MSCs组和诱导组LVEF、FS值比对照组升高(P0.05),而BMMNCs组仅在移植后4周明显改善(P0.05);LVESD、LVEDD细胞移植组与对照组比较无差异(P0.05)。结论体外培养纯化后的MSCs、5-aza诱导24 h的MSCs以及BMMNs自体移植可改善左室收缩功能,增加毛细血管密度,改善局部血流灌注。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究现状和展望

目前心肌梗死的治疗手段主要包括药物治疗、冠状动脉介入治疗、冠状动脉旁路手术等，这些手段只能在一定程度上挽救濒死心肌细胞，防止梗死扩大，缩小心肌缺血范围，也在可以在一定程度上缓解患者的临床症状，理想的疗法应是能使心肌重生来改善心脏的功能。干细胞是一类具有无限或较长期增殖、自我更新和分化潜能的细胞，干细胞移植是一项新兴的细胞生物工程技术。因此，近年来，干细胞移植治疗心肌梗死成为一个研究热点。     

介入治疗联合自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的临床观察

近年来,冠状动脉介入治疗(PCI)使急性心肌梗死(AMI)患者的病死率和远期预后得到明显改善。尽管闭塞血管的再通可挽救顿抑的心肌,但不能修复已坏死的心肌。2001年,纽约医院的Orlic等[1]首次报道将骨髓干细胞移植至梗死小鼠心脏中,证实了骨髓干细胞修复心肌的治疗方法是安全、可行的,但是尚无大规模临床实验证实其有效性,同时,也有一些研究结果对骨髓干细胞移植的安全性和有效性持有异议。本研究旨在应用介入的方法经重新开通的AMI相关血管将自体骨髓干细胞移植入AMI的区域,观察其安全性及对心功能的改善情况。1资料与方法1.1病例选择20…     

自体骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死

目的：将大体动物自体骨髓间质干细胞移植至心肌梗死后的心肌瘢痕组织中，观察细胞在梗死区的存活以及对心功能的改善情况。方法：实验于2003-04／2004—03在徐州医学院第二附属医院介入导管室完成。①选择21只中国小型家猪，三四个月龄，体质量30-40kg。随机分为实验组11只和对照组10只，应用闭胸经股动脉介入的方法制作动物心肌梗死模型。②10余天后实验组将培养的自体骨髓干细胞移植于梗死区，对照组在梗死区植入营养液。（要）8周后，以心脏彩超及放射性核素心肌扫描观察梗死心肌的恢复及心功能的变化。④最后行组织学分析。结果：①21只家猪，实验过程中死亡3只，1只建模未成功，进入结果分析实验组9只，对照组8只。②心脏彩超显示实验组移植后左室射血分数较移植前增加[（42．07&;#177;2.06）％，（47．00&;#177;2．36）％，P〈0．05]。③^99Tc^m-MIBI显示实验组梗死面积比移植前缩小[（34&;#177;12）％，（21&;#177;10）％]。④实验组微血管密度较对照组显著增加（8．32&;#177;1．26）个／0．2mm^2，（4．61&;#177;1．32）个／0．2mm^2，P〈0．05]。结论：自体骨髓间质干细胞移植至梗死区后，可使梗死面积缩小，心脏功能改善。     

同种异体骨髓间质干细胞移植联合VEGF基因转染治疗心肌梗死的实验研究

目的：探讨同种异体骨髓间质千细胞（BMSCs）移植联合血管内皮生长因子（VEGF）基因转染对大鼠急性心肌梗死血管再生和心功能的影响：方法：体外分离、纯化、培养大鼠BMSCs，以BrdU标记细胞；制备、抽提、纯化质粒PAdTrack／VEGF165。结扎冠状动脉建立急性心肌梗死模型2周后，随机将其分为4组（n=12），进行心肌内BMSCs移植和／或VEGF165转染，组Ⅰ：BMSCs移植＋VEGF165转染；组Ⅱ：BMSCs移值；组Ⅲ：VEGF165转染；组Ⅳ：DMEM注射作为对照组。4周后行免疫组化和超声心动图检查：结果：组Ⅰ和组Ⅱ梗死及缺血心肌处可见大量BrdU标记的移植细胞，其中缺血心肌处部分移植细胞分化为血管内皮细胞并形成新生毛细血管。Ⅷ因子染色阳性的新生血管密度分布为组Ⅰ〉组Ⅲ〉组Ⅱ〉组Ⅳ（P均〈0．01）。细胞移植和基因转染治疗后室壁厚度和室壁运动幅度改善，EF值增加幅度（△EF）组Ⅰ〉组Ⅱ〉组Ⅲ〉组Ⅳ（P均〈0．01）：结论：同种异体骨髓间质干细胞移植联合VEGF基因转染能进一步增强大鼠梗死缺血区血管再生、改善室壁厚度和心功能，有利于心肌梗死后的康复。     

骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死的研究进展

心肌梗死是当今世界严重威胁着人类健康的疾病之一.传统认为,心肌细胞缺乏再生能力.心肌梗死后,坏死组织由瘢痕组织代替,周围正常心肌细胞代偿性肥大,不可避免地出现心室重塑,导致心功能障碍和心律失常的发生.     

脂肪间充质干细胞移植对犬心肌梗死后心功能的影响

目的：观察将脂肪间充质干细胞移植人犬心肌梗死模型后，犬心功能的变化情况。方法：实验于2005—08／2006-03在解放军总医院心内科实验室及解放军总医院实验动物中心完成，选用杂种犬13只，按随机数字表法分为2组，对照组7只，脂肪间充质干细胞移植组6只。①两组犬均进行心肌梗死模型制备，取犬脂肪间充质干细胞进行体外分离培养和DAPI标记，脂肪间充质干细胞移植组犬心外膜下共注射2&;#215;10^6个DAPI标记后的脂肪间充质干细胞，对照组注射相同体积IMDM完全培养基。常规关闭胸腔，继续饲养4周。②于细胞移植术前、术后4周行超声心动检查，测定左心室射血分数、左心室舒张末容积及左心室收缩末容积；术后4周行血流动力学检查，测定左心室舒张末压力、左心室收缩末压力、左心室室内压最大上升速率及左心室室内压最大下降速率。术后4周后处死动物取心脏标本观察移植细胞存活及分化情况。结果：对照组1只犬于移植术后第2天死亡，进入结果分析共12只犬，对照组和脂肪间充质干细胞移植组各6只。①移植术后4周移植细胞存活及分化的观察结果：在脂肪间充质干细胞移植组心肌组织冰冻切片中可见发出DAPI蓝色荧光染色的细胞核，同一视野下还可看到发绿色荧光的细胞浆。②移植术后4周两组犬心功能的比较：脂肪间充质干细胞移植组与对照组比较，左心室室内压最大下降速率、左心室舒张末压力、左心室舒张末容积及左心室收缩末容积减少（P〈0．05～0．01），左心室射血分数、左心室收缩末压力、左心室室内压最大上升速率增加（P〈0．05-0．01）。结论：脂肪间充质干细胞移植可在心肌细胞内存活，并可分化为心肌细胞，改善急性心肌梗死后心力衰竭犬的心脏功能。     

经冠状动脉自体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死：3个月疗效随访

背景：急性心肌梗死预后的决定因素是心肌梗死的面积。减少梗死面积的方法有改善血运和替代治疗。骨髓间充质干细胞可以分化为心血管组织，而且获取容易体外培养扩增，成为心血管替代治疗的理想细胞。目的：评价经冠状动脉人骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的疗效。设计：患者自身前后对照观察。单位：南京医科大学附属南京第一医院心内科、核医学科、超声心动图室。对象：选择2003-03／2004—03南京医科大学附属南京第一医院心内科收治的急性心肌梗死进行骨髓间充质干细胞移植治疗患者20例。患者知情同意，术后完整随访〉3个月。男15例，女5例，平均年龄（64&;#177;10）岁。方法：①20例患者，均行经皮冠状动脉介入治疗治疗梗死相关血管。术后3d内采集患者自体骨髓，提取干细胞体外诱导、分化、增殖。2周内经冠状动脉植入梗死相关血管，平均植入干细胞数量为（21．7&;#177;30．14）&;#215;10^7。②干细胞植入前及术后3个月行门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F-脱氧葡萄糖，^18F—FDG）检查，预测存活及坏死心肌，并获取梗死面积。同时行超声心动图检查评价室壁运动、心功能指标，术后3个月复查超声心动图检查评价室壁运动、心功能指标改善情况。③门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）评价采用5分法：正常0分，稀疏1分，明显稀疏2分，缺损3分。超声心动图评价标准：正常1分，减低2分，明显减低3分，室壁无运动或矛盾运动4分；室壁运动二个分值或二个分值以上为室壁运动改善。主要观察指标：①门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）结果。②超声心动图随访观察患者干细胞移植前后梗死相关心肌节段评分及心功能指标。结果：20例患者全部进入结果分析。①门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）结果：20例患者心肌灌注缺损面积治疗后较治疗前明显减少（（33&;#177;15）％，（44&;#177;18）％，P〈0．05）；代谢缺损面积治疗后较治疗前明显减少（（33&;#177;17）％，（43&;#177;21）％，P〈0．05）；治疗前共有199个节段血流灌注及糖代谢缺损匹配，判定为坏死心肌，治疗后79个节段血流灌注代谢明显改善，仍有120个节段血流灌注、糖代谢无明显改善（P〈0．05）。⑥超声心动图结果：患者术后射血分数值术后显著大于术前[（53&;#177;8）％，（42&;#177;7）％，P〈0：05]。结论：经冠状动脉途径植入人骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死，方法简单易行，治疗后梗死面积明显减少，坏死区域心肌血流灌注、代谢改善，术前判定为无存活心肌节段术后明显减少，患者心功能得到改善。     

自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死

目的研究自体骨髓干细胞经冠脉移植对心肌梗死患者心功能的影响及其安全性。方法24例冠心病伴心肌梗死患者,男20例,女4例,平均60岁(27～79岁),体外分离培养自体骨髓干细胞2～3周,开通梗死相关罪犯血管,通过冠脉转运将骨髓干细胞植入患者的心肌梗死区,移植的骨髓间充质干细胞数为(0.9～3.5)×106,骨髓单个核细胞数为(1.6～8.3)×106。术前和术后6个月分别行99mTcMIBI心肌灌注显像、二维超声心动图和动态心电图检查。结果2例患者因罪犯血管狭窄小于50%未行PCI,仅移植干细胞,1例患者因严重的冠状动脉三支血管病变未能行PCI而仅行干细胞移植,另l例患者行PCI术后,心功能仍无明显改善,半年后移植干细胞。其余20例患者在梗死相关动脉开通后注入细胞。24例患者二维超声心动图检查示LVEF较术前明显增加[51.13±9.68)vs.(42.58±12.49),P<0.05],LVDd较术前稍减少[(58.21±7.75)vs。(58.25±8.31),P>0.05],但未达统计学意义;16例99mTcMIBI检查显示梗死部位心肌灌流明显改善。术中及术后随访6～23个月无心律失常和其他合并症发生。结论进行自体骨髓干细胞经冠脉移植治疗冠心病、心肌梗死具有抑制左室重构,改善心脏功能的作用。随访6～23个月未见心律失常。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死临床观察

目的探讨自体骨髓间充质干细胞经冠状动脉途径移植治疗急性心肌梗死的临床疗效。方法 NYHA心功能Ⅱ～Ⅳ级且心肌存在灌注缺损、拟择期行介入治疗术的急性心肌梗死患者36例,随机分为观察组17例和对照组19例,2组介入治疗术后分别通过大腔导管于梗死相关血管内注入等量骨髓间充质干细胞和生理盐水;于介入治疗术前、术后1,3个月行24h动态心电图、静息心脏超声心动图及99mTeSPECT检查进行疗效及风险评价。结果观察组左心室舒张末期内径术后3个月时较术前和术后1个月时均明显减小（P〈0.05）,对照组手术前、后差异无统计学意义（P〉0.05）;观察组左心室射血分数术后1,3个月时均较术前和同期对照组明显增加（P〈0.05）,对照组术后3个月较术前明显增大（P〈0.05）;观察组灌注缺损面积百分比术后3个月时较术前和术后1个月时均明显减小（P〈0.05）,对照组术后3个月与术前比较差异有统计学意义（P〈0.05）;术后3个月2组左心室舒张末期内径、左心室射血分数及灌注缺损面积百分比比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;2组恶性临床事件比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论自体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死是相对有效安全的。     

诊断超声联合微泡对骨髓间充质干细胞移植改善兔心肌缺血灌注的研究

目的 探讨诊断超声联合微泡介导下经静脉移植同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)改善心肌缺血兔血流灌注的价值.方法 冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌缺血模型,分为对照组(组Ⅰ)、单纯静脉移植MSCs组(组Ⅱ)和超声+微泡+MSCs组(组Ⅲ).4周后行心肌超声造影(MCE)分析各组心肌缺血区血流灌注情况,超声心动图检测左心室功能,免疫组织化学检测心肌缺血区CD34表达,Western blotting检测VEGF蛋白的表达并行定量分析.结果 MCE检测前壁的平均灰阶值组Ⅰ(51.86±11.75)与组Ⅱ(63.08±15.32)和组Ⅲ(70.42±12.21)比较差异有统计学意义(P值分别为0.032,0.000).左室短轴缩短率(FS)组Ⅰ[(19.28±2.84)%]与组Ⅱ[(26.29±2.93)%]和组Ⅲ[(30.43±4.09)%]比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),组Ⅱ和组Ⅲ比较差异亦有统计学意义(P<0.05).组Ⅲ的射血分数(EF)为(61.5±5.8)%,与组Ⅰ[(42.6±5.0)%]和组Ⅱ[(55.6±4.71)%]比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05).双平面Simpson法EF值组Ⅲ[(48.6±3.96)%]与组Ⅰ[(34.64±4.59)%]和组Ⅱ[(41.78±4.21)%]比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).CD34免疫组织化学检测显示各组均可见阳性血管着色,但组Ⅲ阳性血管最多,组Ⅱ次之,组Ⅰ最少.Western blotting VEGF/GAPDH定量分析显示,组Ⅲ表达(236.59±47.13)明显高于组Ⅱ(151.48±25.07,P<0.01)和组Ⅰ(89.43±20.43,P<0.01).结论 超声介导的微泡破坏与经静脉移植MSCs可有效改善心肌缺血兔的血流灌注及心功能.     

兔自体骨髓间充质干细胞移植联合激光心肌血运重建治疗急性心肌缺血

背景:应用骨髓间充质干细胞移植修复坏死心肌,改善心脏功能已受到广泛关注.最近有报道指出激光具有促进骨髓间充质干细胞治疗心肌缺血的作用.目的:观察兔自体骨髓间充质干细胞移植联合激光心肌血运重建治疗急性心肌缺血的效果.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-01/07在安贞医院外科实验室完成.材料:成年雄性新西兰大白兔32只,随机分为4组:模型对照组、细胞移植组、激光组、联合组,8只/组.方法:造模前3 d,经兔双侧胫骨穿刺抽取骨髓,经密度梯度离心和换液法分离纯化骨髓间充质干细胞,并行BrdU标记.各组兔均在全麻下结扎冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型,2周后,模型对照组在标记部位分3点注射0.6mL α-MEM培养基:细胞移植组同法注射等量第4代骨髓间充质干细胞悬液,细胞总数约3×106个;激光组应用高功率CO2治疗仪进行激光心肌打孔3个,功率为5 J;联合组在标记点先行激光打孔,再在孔道周围心肌中层注射等量细胞悬液.主要观察指标:治疗4周后取出心脏,采用抗BrdU及抗肌钙蛋白T双重免疫组化染色检测骨髓间充质干细胞在梗死区心肌存活及分化情况,采用抗CD146免疫组化染色测定毛细血管密度,通过超声测定左室射血分数,通过计算心尖部位位移趋势及运动速度(应变)评价心肌阶段运动功能.结果:细胞移植组、联合组均检出岛状分布的双染阳性细胞,胞核呈黑色、胞浆呈棕色.与模型对照组比较,细胞移植组、激光组、联合组治疗区血管密度均显著增加(P均<0.05),且联合组增加幅度明显高于细胞移植组、激光组(P均<0.05),细胞移植组、激光组血管密度基本相似.与治疗前比较,治疗后4周细胞移植组、联合组左室射血分数、心尖段位移和应变值均明显改善(P<0.05),且与模型对照组、激光组比较差异有显著性意义(P<0.05).结论:兔自体骨髓间充质干细胞可在心肌微环境内存活并分化为心肌样细胞,移植后联合激光心肌血运重建在增加心肌毛细血管密度方面优于单纯细胞移植或激光心肌血运重建治疗,在提高心脏功能方面的优势尚需进一步分析.     

急性心肌缺血激光打孔心肌内埋植碱性成纤维生长因子缓释栓对心肌存活性影响的实验研究

目的　检测急性心肌缺血犬模型行激光打孔心肌内埋植碱性成纤维生长因子缓释栓后缺血心肌的存活性 ,以评价该方法对缺血心肌灌注的影响。方法　 18条健康杂种犬随机分成 3组 ,即急性心肌缺血组(AMI组 )、激光打孔组 (TMLR组 )和激光打孔联合碱性成纤维生长因子缓释栓组 (bFGF FG组 )。所有实验犬均结扎左前降支中段造成急性心肌缺血模型 ,TMLR组和bFGF FG组在冠脉结扎后 3 0min于缺血区心肌用KTP激光打孔 ,bFGF FG组并于打孔的心肌隧道内埋植碱性成纤维生长因子缓释栓。术后 2个月用多普勒组织成像结合小剂量多巴酚丁胺负荷超声评价缺血心肌的存活性。结果　 3个实验组各有 1条犬死亡。静脉输注多巴酚丁胺后 ,AMI组左室前壁及前室间隔增厚率 (ΔT % )、左室前壁运动幅度 (MA)及舒缩速率参数收缩期峰值速率 (s)、舒张早期与晚期峰值速率比值 (e/a)以及二尖瓣瓣环运动速率参数e/a ,随着多巴酚丁胺剂量的增大逐渐降低 ,室壁运动记分指数 (WMSI)逐渐升高 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;二尖瓣瓣环运动速度参数s无明显变化 (P >0 .0 5 )。TMLR组在静脉输注 5 μg·kg-1·min-1多巴酚丁胺后 ,ΔT %、MA、左室前壁及二尖瓣瓣环s和e/a升高 ,WMSI降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;当多巴酚丁胺剂量增大到 10 μg·kg-1·m     

血红素氧合酶-1基因修饰的骨髓间充质干细胞培养上清液对心肌梗死治疗作用的实验研究

目的探讨血红素氧合酶-1（HO-1）基因修饰的骨髓间充质干细胞（Mscs）培养上清液对大鼠心肌梗死的治疗作用。方法HO-1腺病毒或对照GFP腺病毒转染MSCs,Westernblot检测HO-1的表达;流式细胞仪检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、GFP-MSCs、MSCs的凋亡;ELISA和RT-PCR检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs细胞因子的分泌。收集HO-1-MSCs、GFP—MSCs在无氧无血清条件下的培养上清液,于结扎冠状动脉1h后多点注射到心肌梗死区边缘,注射ControlMedium为对照组。注射4d后检测心功能变化,4周后取梗死区边缘心肌行Masson染色和免疫组化CD34染色。结果HO-1转染的MSCs可以稳定高效地表达HO-1蛋白（P=O-01）,HO-1-MSCs在无氧无血清条件下的凋亡率显著低于GFP-MSCs和MSCs（P=0-01）,且其在无氧无血清条件下HGF、bFGF、TGF—β、VEGF分泌水平显著增高（P=0-02）;注射4d后发现HO-1-MSCs上清液治疗组心功能各项指标均显著改善（P〈0。01）;4周后HO-I-MSCs上清液治疗组胶原面积明显减少（P〈0-01）,且梗死区微血管数量也增加。结论HO-1-MSCs分泌多种细胞因子,通过促进血管新生,减少胶原沉积以及减少心肌坏死,从而改善心功能以及急性心肌梗死后的左心室重构。     

斑点追踪成像评价实验兔心肌梗死后骨髓干细胞移植区域心肌收缩功能

目的 应用超声斑点追踪(STI)技术探讨兔左室心肌梗死区域骨髓干细胞移植后的心肌收缩功能.方法 24只健康新西兰兔,随机分为3组:正常对照组(假开胸组)、急性心肌梗死(AMI)组(结扎左冠状动脉前降支,造成左室前壁心肌梗死)和骨髓干细胞移植组(AMI后2周,对梗死区域进行干细胞移植),于骨髓干细胞移植后4周分别采集三组动物左室短轴基底段、中间段及心尖段的动态二维灰阶图像;应用STI技术分析左室不同水平各节段心内膜下心肌径向应变率(SrR)、周向应变率(SrC)、旋转率(RotR)及扭转角度(Rot),常规超声心动图测定左室舒张末期内径(LVEDd)、左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS),心导管测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室压力最大上升及下降速率(LVdp/dtmax).结果 与正常对照组比较,AMI组LVEDd显著增大,LVEF、LVFS显著减低,LVSP、LVdp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高,左室前壁局部及左室短轴三水平整体SrR、SrC、RotR和左室Rot均降低;骨髓干细胞移植组LVEDd较AMI组显著减小,LVEF、LVFS明显升高,LVSP、LVdp/dtmax明显升高,LVEDP降低明显,左室前壁局部及左室短轴三水平整体SrR、SrC、RotR和左室Rot均升高,但与正常对照组比较差异无统计学意义.结论 STI可准确评价骨髓干细胞移植区域的心肌功能.

Abstract：

Objective To assess the left ventricular(LV) regional myocardial systolic function after bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) injection in rabbits with acute myocardial infarction(AMI) by 2-dimensional ultrasound speckle-tracking imaging.Methods Twenty-four healthy rabbits were randomly divided into three groups:group of sham-operated,group of masculine control (AMI was induced by ligation of left anterior descending coronary artery),and group of cell infusion(after two weeks of AMI,bone marrow mesenchymal stem cells were injected to the region of AMI).Four weeks after cell deliver two-dimensional strain images were acquired from LV short-axis view(at the levels of mitral annulus,muscle papillary and apex),radial strain rate (SrR),circumference strain rate (SrC),rotation rate (RotR) and rotation (Rot) of three levels in short-axis views were measured by speckle-tracking imaging.The conventional echocardiography indices included LV diameter of end diastole(LVEDd),LV ejection fraction(LVEF),LV fractional shortening(LVFS).The catheter indices included LV systolic pressure(LVSP),LV end diastolic pressure (LVEDP)and maximum rate of rise and descend of LV pressure(LVdp/dtmax).ResultsCompared with sham-operated group,rabbits had significantly larger LVEDd,lower LVEF and LVFS,lower LVSP and LVdp/dtmax,higher LVEDP in control group,SrR,SrC,RotR and Rot of LV anterior regional myocardial function and global myocardial function of three levels in short-axis views were lower.Compared with control group,the rabbits had significantly smaller LVEDd,larger LVEF and LVFS,larger LVSP and LVdp/dtmax,lower LVEDP,SrR,SrC,RotR and Rot of LV anterior regional myocardial function and global myocardial function of three levels in short-axis views were larger in group of cell infusion.There was no significant between group of cell infusion and group of sham-operated.Conclusions Speckle tracking imaging can evaluate the regional myocardial systolic function of the area of BMSCs transplantation accurately.     

核素心肌显像对自体骨髓干细胞原位移植治疗心肌梗死后心功能不全患者临床效果的评价

目的探讨核素心肌显像对自体骨髓干细胞原位移植（BMCT）治疗心肌梗死后心功能不全患者临床效果的评价。方法选择54例陈旧性心肌梗死伴心功能不全患者,BMCT使用集落细胞刺激因子150～300μg皮下注射,每日一次,注射3—5d,使白细胞总数达到2．3×10^10-3．0×10^10。选择同期住院符合入选标准的54例接受常规治疗的陈旧性心肌梗死伴心功能不全患者作为对照组。仪器为Siemens e．Cam双探头单光子发射计算机断层成像仪,显像剂为99^Tc^m-甲氧基异丁基异腈（MIBI）心肌灌注显像,采用低能高分辨准直器,矩阵64×64。Hann滤波后行图像重建,以极坐标靶心图半定量分析法,对治疗前后显像极坐标靶心图行归一化处理。〉40％者为存活心肌,≤40％为梗死区,勾画出放射性缺损区。心肌梗死面积=心肌放射性缺损区面积／靶心图总面积×100％。结果治疗组治疗后与治疗前比较,平均灌注缺损面积减少,纽约心功能分级降低,6分钟步行距离明显延长,左室射血分数明显提高,室壁运动积分指数明显下降,左室舒张末容积明显缩小,血清脑利钠肽降低,差异均有统计学意义;而对照组治疗后各项指标虽有改善,但与治疗前比较差异无统计学意义。治疗组治疗后与对照组治疗后各项指标比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗组死亡8例中6例年龄超过70岁。结论99^Tc^m-MIBI心脏核素显像评价BMCT术后近期疗效较有价值。BMCT治疗心肌梗死后心功能不全可改善患者的心功能,增加运动积分,生活质量改善。同时也提示骨髓干细胞原位移植对高龄老年心肌梗死后心功能不全患者疗效差。     

间充质干细胞在造血干细胞移植术中应用的研究进展

造血干细胞移植(HSCT)是近年来治疗血液系统恶性疾病的有效手段,目前已在临床得到广泛应用.由于移植物排斥、造血恢复延迟、免疫重建缓慢而增加感染及早期移植相关死亡,以及供、受体组织不相容引发的移植物抗宿主病(GVHD),成为了临床医生亟待解决的棘手问题.作为造血微环境重要组成的间充质干细胞(MSC)由于其来源广泛、取材方便、可进行体外扩增、具有多分化潜能、促进造血和具有免疫调节能力等优点,成为了近年来研究的热点,并逐渐被应用于临床治疗,以下就其在造血干细胞移植术中的应用作一综述.     

超声检测骨髓干细胞水凝胶制剂对实验兔心肌梗死后左心室功能恢复的研究

目的 应用超声检测家兔急性心肌梗死(AMI)模型骨髓干细胞水凝胶复合物注射前后心功能,评价该方法治疗心肌梗死的疗效.方法 56只兔建立左室前壁AMI模型,制备BrdU标记骨髓干细胞(BMSCs)水凝胶复合物.AMI后1周存活兔52只分为4组行梗死区心外膜注射:①处理组(A组),BrdU标记BMSCs水凝胶复合物;②阳性对照组(B组),BrdU标记BMSCs;③材料组(C组),BrdU标记后水凝胶;④空白组(D组),等量胎牛血清.分别于AMI造模前、AMI造模后1周及心外膜注射处理后4周对4组兔进行超声检查.常规超声心动图测定左室舒张末期内径(LVDd)、左室前壁舒张末期厚度(AW)、左室射血分数(LVEF),定量组织速度成像(QTVI)分析左室前壁、前室间隔基底段、中段收缩期峰值运动速度(Vs)及舒张早期峰值运动速度(VE).结果 与AMI造模前比较,AMI造模后1周4组AMI模型兔LVDd显著增大,AM厚度显著变薄,LVEF显著减低,梗死局部Vs、VE均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与AMI造模后1周比较,心外膜注射后4周材料组与空白组LVDd、AM厚度、LVEF及梗死局部Vs、VE无显著变化;处理组与阳性对照组LVDd显著减小,AM厚度显著增厚,LVEF及梗死局部Vs、VE显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05),以处理组变化更显著(P＜0.05).结论 骨髓干细胞水凝胶复合物可有效治疗心肌梗死,改善心肌梗死后左室重构及梗死局部收缩、舒张功能.