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1.
目的探讨KU60019抑制ATM对HepG2细胞辐射旁效应的调控作用。方法使用KU60019抑制ATM,通过转移辐射条件刺激液构建HepG2细胞辐射旁效应模型。实验分为空白组(NC组)、辐射旁效应组(ICM组)、辐射旁效应+KU60019组(联合组)、单纯辐照组(IR组)。MTT法检测细胞存活率;生长曲线实验检测细胞增殖;微板法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量;活性氧试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平;荧光分光光度法检测细胞线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随着KU60019浓度增加,HepG2细胞数量逐渐减少,后续选择7 μmol/L KU60019进行实验。与NC组比较,ICM组、联合组与IR组的细胞存活率、增殖能力、SOD活力、线粒体的膜电位逐渐降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS与MDA含量逐渐升高(P<0.05)。结论KU60019抑制ATM能降低HepG2细胞抗氧化能力,提高辐射敏感性。 相似文献
2.
原发性肝癌患者ATM表达水平及其临床意义 总被引:3,自引:0,他引:3
[摘要] 目的 探讨ATM基因在原发性肝癌患者中的表达及其临床意义。方法 采用RT-PCR方法检测原发性肝癌患者外周血中ATM mRNA的表达。结果 25例原发性肝癌患者ATM表达阳性率为(164.40±42.21)%,较正常人的表达率(51.50±6.49)%明显升高,差异有显著性(F=38.054,P<0.01)。结论 ATM在肝癌患者中异常表达,有望成为肝癌患者治疗的新靶点。
[关键词] 共济失调毛细血管扩张症 突变基因 肝肿瘤RT-PCR 相似文献
3.
毛细血管扩张-共济失调症突变基因(ATM)是重要的抑癌基因和DNA修复基因,其参与细胞DNA损伤的识别、修复,细胞周期及凋亡调控等。DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式之一,ATM启动子异常甲基化可引起ATM表观沉默,导致细胞的肿瘤易感性及放射敏感性增加,研究ATM启动子甲基化可为精准放射治疗及放射治疗增敏提供新的思路。该文主要对ATM启动子甲基化与肿瘤的相关性研究进行综述,为深入研究ATM启动子甲基化对肿瘤早期诊断、肿瘤放射治疗增敏的作用提供依据。 相似文献
4.
常规染色体畸变分析法对AT细胞高辐射敏感性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)的高辐射敏感性。方法 以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639(GM细胞)为对照,用常规染色体畸变分析法,在AT细胞和GM细咆经60COγ射线0、1、2、3、4 Gy照射后,观察比较AT细胞和GM细胞之间染色体畸变率(CAF)的差异,并分别进行曲线拟合。结果 在0、1、2、3、4 Gy剂量下,AT细胞染色体畸变率明显高于GM细胞(P<0.05);AT和GM细胞染色体畸变率与剂量成正相关,均可拟合成剂量效应直线方程Y=a+bX,且AT细胞剂量效应直线回归方程斜率明显大于GM细胞(P<0.05)。结论 AT患者AT细胞的辐射敏感性显著高于GM细胞,具有高辐射敏感性。 相似文献
5.
目的 研究在髓性白血病原代细胞和肿瘤细胞株中共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)的转录水平。以确定反义封闭ATM基因治疗在白血病中应用的可行性。方法 利用半定量RT-PCR技术。检测了正常人及31例髓性白血病患者和9种肿瘤细胞株的ATMmRNA表达量。结果 31例髓性白血病患者及9种肿瘤细胞株中ATM mRNA表达量普遍降低。结论 由于白血病患者中ATM mRNA表达量普遍降低,因此,反义封闭ATM对于白血病原代细胞基因治疗的适应性有待商榷。 相似文献
6.
抑制ATM表达对X线照射下肝癌细胞损伤修复的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ATM)表达对人肝癌细胞株HepG2在X线照射下细胞损伤修复的影响.方法 设计3条沉默ATM的小分子干扰RNA(siRNA)的序列,用脂质体法转染HepG2细胞,筛选出有效的浓度及作用时间,分别利用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测ATM mRNA、蛋白表达水平,MTT法检测转染后细胞增殖,流式细胞术检测X线照射后HepG2细胞周期、凋亡等生物学功能方面指标的变化.结果 筛选出沉默ATM基因的siRNA有效序列.qRT-PCR结果 显示第3条siRNA抑制率最高,可达72%,转染后48 h的ATM蛋白表达抑制78%.转染siRNAATM 后HepG2细胞的增殖能力无明显变化,HepG2ATM组在X线照射后G2/M期细胞明显增多,S期细胞明显减少;X线照射后HepG2ATM组早期凋亡百分比是阴性对照组的2倍.结论 抑制ATM表达可显著抑制肝癌细胞对辐射损伤的修复,为后期研究ATM在肝癌治疗中的作用机制提供了实验基础. 相似文献
7.
《陕西医学杂志》2016,(7):771-773
目的:探讨大肠癌细胞株HM7、HT29间辐射敏感性差异与共济失调毛细血管扩张症突变(ATM)基因的关系。方法:应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分析10Gy X线照射前后HM7、HT29中ATM mRNA表达水平变化。结果:在X线照射前,HT29中ATM mRNA水平比HM7高;在照射后,HM7细胞的ATM mRNA水平在早期(1h)就出现轻度上升(是基础水平的1.4倍);而HT29细胞在照射后4h才表现为ATM mRNA量上升(是基础水平的1.6倍):两者在照射后12h左右ATM mRNA表达水平恢复接近基础水平。结论:经X线照射后,在对放射相对敏感的HT29与对放射相对抗拒的HM7细胞中,ATM mRNA水平变化规律存在差异。这种ATM mRNA表达的不同可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一。 相似文献
8.
目的探讨原花青素对提高人肝癌HepG2细胞对化学治疗药物的敏感性。方法运用一定浓度的原花青素分别联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)、阿奇霉素(DOX),作用于肝癌HepG2细胞48 h后,采用WST-8法检测细胞增殖抑制率。结果原花青素组(终浓度800 mg/L)对细胞的增殖抑制率为25.7%。根据金正均的Q值法计算各组作用的协同性,原花青素联合化学治疗药物,当5-Fu浓度为2、4、8、16μg/mL时,Q值分别为0.92、0.96、1.10、1.12,表现为作用相加(0.85
1.15);当DOX浓度为0.2、0.4、0.8、1.6μg/mL时,Q值分别为1.15、1.17、1.10、1.16表现为协同作用(Q>1.15)。结论葡萄籽原花青素可提高人肝癌HepG2细胞对化学治疗药物5-FU、DDP、DOX的敏感性。 相似文献
9.
目的 观察Bcl-2 siRNA对人类肝癌细胞HepG2 5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法 Bcl-2 siRNA表达载体构建并稳定转染至肝癌细胞HepG2中,用G418筛选稳定的阳性细胞克隆。用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA水平,免疫荧光检测目的基因Bcl-2蛋白水平的表达。用131、30、1300和13 000 mg/L 5-FU处理稳定转染细胞,用MTT观察细胞对药物敏感性的影响,用流式细胞术观察细胞凋亡情况。Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 5-FU处理细胞24 h,Bcl-2 siRNA转染组的细胞生长抑制率明显高于阴性载体转染组和正常细胞;Bcl-2 siRNA转染组细胞凋亡率高于正常细胞和阴性载体转染组;在Bcl-2表达下调时,Bax蛋白表达水平不变。结论 siRNA下调目的基因Bcl-2能增强人类肝癌细胞HepG2对5-FU的敏感性;HepG2细胞对5-FU的敏感性增强与Bax/Bcl-2的比例增高有关。 相似文献
11.
目的 构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell).方法 重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定.以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测.结果 所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286 bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性.葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20 mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P>0.05).结论 成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应. 相似文献
12.
目的 探讨肝细胞表面载脂蛋白E(apoE)的代谢及蛋白多糖对其的影响。方法 采用抗apoE单克隆抗体(7C9)特异性结合方法,分析肝素、硫酸软骨素和软骨素酶及xyloside对HepG2细胞表达apoE结合与解离的影响。结果 HepG2细胞在含β-D-xyloside的培养液中生长,细胞表面apoE可减少45%,而apoE分泌则增加4.3倍;与肝素酶(3U/ml)或肝素(1mg/ml)一起孵育可分别减少细胞表面apoE25.0%和30.5%,而与软骨素ABC酶(1.5U/ml)孵育可减少细胞表面apoE40%;硫酸软骨素A和B可分别减少细胞表面apoE 23.6%和15.3%,硫酸软骨素C则没有影响作用;氨基多糖减少细胞表面apoE后,可增加LDL对HepG2细胞表面的结合1.8倍。结论 肝细胞表面apoE主要(约40%)通过硫酸软骨素蛋白多糖、小部分(约23%)通过硫酸乙酰肝素蛋白多糖与细胞表面连接;细胞表面apoE水平降低可增加LDL与细胞表面的结合。 相似文献
13.
目的:探究过表达miR-122 a是否可提高肝癌细胞HepG2对化疗药物的敏感性,并阐明其提高化疗药物敏感性的部分机制.方法:构建过表达miR-122 a的HepG2细胞系(miR-122a肿瘤细胞组),并与HepG2细胞(肿瘤细胞组)置于含不同浓度顺铂的培养液中,CKK-8法观察miR-122a上调对HepG2细胞存活率的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法观察miR-122a上调对HepG2细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-122a肿瘤细胞组和肿瘤细胞组中bcl-2和p53蛋白的表达水平.结果:低铂浓度顺铂条件下,miR-122 a肿瘤细胞组细胞的存活率低于肿瘤细胞组细胞的存活率,miR-122 a肿瘤细胞组24 h细胞的凋亡率高于肿瘤细胞组(P<0.05);Western blot法检测bcl-2和p53蛋白结果显示,在低浓度顺铂溶液中,miR-122a肿瘤细胞组bcl-2表达量低于肿瘤细胞组(P<0.05),miR-122a肿瘤细胞组p53表达量高于肿瘤细胞组(P<0.05).结论:过表达miR-122a能上调p53蛋白表达、下调bcl-2蛋白表达,增加HepG2细胞对顺铂敏感性,为肝癌患者提供基因治疗和降低肿瘤细胞耐药提供了理论和实验基础. 相似文献
14.
目的 探讨乳腺癌MCF 7、肝癌HepG2 和胰腺癌PANC 1细胞系对泰索帝的敏感性及其与Survivin表达水平的关系。方法 台盼蓝拒染法和MTT试验观察MCF 7、HepG2 和PANC 1三种细胞系对泰索帝的敏感性 ;应用RT PCR和免疫荧光方法检测三种细胞系中SurvivinmRNA和蛋白表达。结果 MCF 7、HepG2 和PANC 1三种细胞系均有SurvivinmR NA和蛋白表达 ,阳性率分别为 39.7%、5 8.2 %和 91.4 % ;泰索帝处理后 ,三种细胞的生长曲线呈现递减性抑制 (P <0 .0 1) ;MTT分析显示 ,MCF 7、HepG2 和PANC 1对泰索帝的半数有效量分别为 (14 .4± 1.9)、(31.9± 6 .4 )和 (6 4 .0± 6 .5 )ng/ml。结论 Survivin表达与肿瘤细胞对泰索帝敏感性呈显著负相关 ,Survivin可作为筛选肿瘤化疗药物的新指标 相似文献
15.
目的探讨低分子肝素(LMWH)对肝癌细胞株HepG2转移及黏附的影响。方法不同浓度LMWH作用于HepG2细胞株,分别在作用24、48、72 h采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其细胞生长抑制率,Transwell小室检测HepG2细胞迁移率的变化,纤维黏附蛋白黏附实验观察HepG2细胞株的黏附性变化。结果 0.0×106IU·L-1组24、48、72 h的细胞生长抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05);0.5×106、1.0×106、1.5×106、2.0×106、2.5×106IU·L-1组24、48、72 h的细胞生长抑制率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。同一时间段各浓度组与0.0×106IU·L-1组比较细胞生长抑制率差异均有统计学意义(P<0.05);2.0×106IU·L-1和2.5×106IU·L-1组与0.5×106IU·L-1组比较细胞生长抑制率差异有统计学意义(P<0.05),其余各浓度组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,0.5、5.0、10.0 g·L-1组细胞迁移率和黏附率下降,差异均有统计学意义(P<0.05);0.5、5.0、10.0 g·L-1组之间细胞迁移率和黏附率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LMWH可抑制HepG2细胞生长并降低其迁移率和黏附率。 相似文献
16.
Summary: The HL-60 cells were transfected with chkl antisense and sense chain, and 24 h later subjected to irradiation. Twenty-four h after irradiation, the changes in the chk1 protein expression was assayed by Western blot, and the cell cycles and apoptosis rate detected by FCM. The irradiated apoptosis sensitivity was increased by antisense blocking of chk1 gene in HL-60 cell line with the apoptosis rate being 26.31 %, significantly higher than that by the sense blocking (10.34 %, 0. 025〈P〈0.05). In HL-60 cells transfected with chkl antisense chain, the G2/M phase arrest was attenua:ted and the cells in G2/M phase were accounted for 38.42 %, significantly lower than those of the cells transfected with chkl sense chain (54.64 %, 0. 005〈P〈0.01). It was concluded that antisense blocking of chk1 gene could increase the apoptosis sensitivity to irradiation. 相似文献
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目的:体外建立顺铂( DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株( HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪( FCM )检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。 相似文献
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目的探讨腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的BATF2/SARI过表达对肝癌细胞HepG2细胞活力的影响及其分子机制。方法通过分子克隆技术构建AAV介导的BATF2/SARI过表达载体,用包装纯化后的AAV-BATF2感染HepG2细胞,MTT检测其对细胞活力的作用,荧光素酶分析其对NFκB转录活性的影响。结果重组AAV-BATF2载体构建成功,AAV-BATF2感染的HepG2细胞生长活力受到明显抑制,NFκB转录活性明显下调。结论重组AAV-BATF2病毒感染人肝癌细胞HepG2可抑制肿瘤细胞增殖,其对NFκB转录活性的抑制可能是其发挥作用的机制之一。 相似文献
19.
目的:通过对奥沙利铂(L-OHP)、吉西他滨(GEM)单独及联合作用抑制肝癌细胞株HepG2生长的实验研究,探讨两药合用的效果及最佳剂量。方法:采用一定浓度梯度L-OHP和GEM单独及联合与人肝癌细胞株HepG2孵育后,采用MTT法检测细胞生长变化,并采用两药相互作用系数来评价两药相互作用性质。结果:在各作用时间点,联合组对肝癌细胞HepG2的生长抑制率与相应浓度L-OHP、GEM单药组相比均显著增强。结论:L-OHP与GEM联用可增强互补,减少各自用药剂量,达到减毒增效的目的。 相似文献
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目的 探讨环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂联合白细胞介素-2 (interleukin-2,IL-2)对小鼠肾癌免疫治疗的作用及其机制。方法 以Renca细胞建立Babl/c小鼠异位肾癌模型,共28只,随机等分成4组,不同组别予以不同给药,分别为IL-2组、NS-398(一种COX-2抑制剂)组、IL-2+NS 398组和空白对照组。在第14天、28天提取各组荷瘤小鼠外周血,用流式细胞术检测调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的变化;切取荷瘤小鼠瘤体及脾脏,免疫组化检测小鼠脾脏和肿瘤局部Treg的变化。 结果 小鼠异位肾癌在不同药物处理后,肿瘤体积出现明显变化,联合用药组肿瘤体积减小明显,经多组t检验,与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05)。同时,COX-2抑制剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤及脾脏中Treg的表达,且与IL-2联合有协同作用(P<0.05)。结论 COX-2抑制剂联合IL-2可显著抑制荷瘤小鼠异位肾癌的发展,说明Treg的下调是抑制肾癌生长的可能机制之一。 相似文献