卵巢癌顺铂耐药细胞系建立及部分耐药基因的表达

目的建立卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞系,并比较耐药与非耐药卵巢癌细胞系之间部分耐药相关基因的表达差异。方法采用浓度梯度递增法建立人卵巢癌DDP耐药细胞系SKOV-3/DDP。验证其有关的生物学指标;并用免疫组化法及RT-PCR技术检测耐药与非耐药卵巢癌细胞系之间P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及部分耐药相关基因的表达差异。结果耐药细胞系对DDP、氟尿嘧啶(fluorouracil)和多柔比星(doxorubicin)的耐药指数(RI)分别为13.94、10.83、4.52;细胞周期比例SKOV-3/DDP细胞系G0/G1期细胞明显少于SKOV-3细胞系(P<0.01),S期、G2/M期细胞明显多于SKOV-3细胞系(P<0.01);P-糖蛋白(P-gp)阳性细胞率SKOV-3/DDP细胞系为65%±5%;SKOV-3细胞系为6%±2%,两者差异极显著(P<0.001)。在检测的耐药相关基因中MDR1、Sur-vivin在SKOV-3/DDP细胞系呈阳性表达,在SKOV-3细胞系未表达;TopoⅡβ表达情况与此相反。结论顺铂诱导的卵巢癌细胞耐药可对其他不同作用机制的药物产生交叉耐药,多药耐药涉及多个相关基因的表达,说明耐药的发生是一个多途径的复杂过程。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1／cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。     

灵芝多糖逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的作用及其机制

目的:探讨灵芝多糖(GLPS)对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP耐药性的逆转作用,阐明GLPS通过改善卵巢癌耐药基因而改善其耐药的机制.方法:用不同剂量梯度(4、40和400 mg·L-1)GLPS、顺铂(DDP,1、10和100 mg·L-1)作用卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP,用MTT法每12 h检测细胞抑制...     

香菇多糖体外逆转A2780卵巢癌细胞顺铂耐药及可能机制

目的:研究香菇多糖体外逆转A2780卵巢癌细胞顺铂耐药及可能机制。方法:根据药物处理方法将A2780卵巢癌细胞分为CON组(未行香菇多糖或顺铂处理)、DDP组(仅用顺铂处理)、LEN组(仅用香菇多糖处理)及D+L组(香菇多糖联合顺铂处理),比较四组细胞增殖、细胞周期及凋亡率和耐药基因mRNA表达的差异。结果:D+L组细胞第1-7天的吸光度、S期、G2/M期和PI均显著低于CON组、DDP组和LEN组细胞(均P<0.05),G0/G1期和细胞凋亡率均显著高于CON组、DDP组和LEN组细胞(均P<0.05);LEN组和D+L组细胞MDR1和MRP1基因mRNA表达无明显差异(均P>0.05),CON组和DDP组细胞MDR1和MRP1基因mRNA表达显著高于LEN组和D+L组细胞(均P<0.05)。结论:香菇多糖体外可逆转卵巢癌细胞对顺铂耐药性,可能与降低MDR1和MRP1表达有关。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理.方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoCl/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析.结果MPA明显抑制CoCl/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P＜0.01);MPA与DDP合用对CoCl/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P＜0.01).结论MPA能明显抑制CoCl/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性.     

甲基莲心碱对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用

目的建立人舌鳞癌卡铂耐药细胞株Tca8113/CBP,探讨甲基莲心碱Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增卡铂浓度、体外间歇诱导法建立Tca8113/CBP耐卡铂细胞株;MTT法检测Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用;RT-PCR法检测Nef作用前后Tca8113/CBP内耐药相关基因肺耐药蛋白LRP与成纤维细胞肌型原肌球蛋白FMT的表达水平;免疫荧光观察Nef作用前后细胞形态结构变化。结果历时5个月建立的Tca8113/CBP细胞株对卡铂耐药性稳定,耐药指数为4.06。Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到2.12倍;与Tca8113/CBP细胞比较,经Nef干预后,Tca8113/CBP细胞内LRP与FMT mRNA表达水平明显降低(P<0.01),细胞内F-actin的含量也明显下降,排列整齐,分布趋于均匀,接近非耐药Tca8113细胞水平。结论 Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预Tca8113/CBP细胞内LRP和FMT表达,增加Tca8113/CBP细胞内卡铂的含量,改变微丝结构,降低细胞黏附能力,干扰细胞增殖周期有关。     

miR-130a在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达及其意义

目的分析miR-130a在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达,探讨miR-130a与卵巢癌对顺铂耐药的关系。方法以浓度梯度递增法构建卵巢癌耐顺铂细胞株,MTT法对耐药细胞株进行鉴定并测定耐药指数,应用荧光实时定量PCR检测并分析各细胞株中miR-130a的表达。结果成功构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CIS1、A2780/CIS2和SKOV3/CIS(P<0.05),其耐药指数分别为30.2、5.3和24.5。荧光实时定量PCR结果显示miR-130a在卵巢癌耐药细胞株中存在稳定的异常高表达(P<0.05),A2780/CIS1、A2780/CIS2以及SKOV3/CIS中miR-130a表达分别较亲本细胞平均上调30.51倍、4.87倍和24.43倍。各耐药细胞中miR-130a表达上调倍数接近于各自的顺铂耐药指数。结论 miR-130a表达的上调可能与卵巢癌细胞株对顺铂的耐药性密切相关。推测抑制miR-130a的表达有助于逆转卵巢癌顺铂耐药性,miR-130a有望成为逆转卵巢癌顺铂耐药性的潜在基因治疗靶点。     

IL-17A促进卵巢癌顺铂耐药的体外机制探讨

目的:探究IL-17A促进卵巢癌顺铂（DDP）耐药的体外机制。方法:应用流式细胞术分析外源性rhIL-17A对DDP诱导的A2780（顺铂敏感卵巢癌细胞株）和OVCAR3（顺铂耐药卵巢癌细胞株）细胞的凋亡和周期分布变化的影响,并以IL-17RAmAb进行相应的阻断实验。结果:rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的凋亡无显著影响;但可显著降低DDP对A2780和OVCAR3细胞的毒性作用（P<0.05）,以IL-17RAmAb进行阻断实验可部分消除rhIL-17A对DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞凋亡的阻滞作用（P<0.05）。rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的周期分布无显著影响;但可显著抑制 DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞周期阻滞（P <0.05）,使A2780和OVCAR3细胞的G0/G1期比例增加,G2+S期比例减少。结论: IL-17A可通过IL-17RA抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡,同时可抑制DDP诱导的卵巢癌细胞周期阻滞,从而加剧以DDP为基础的卵巢癌化疗耐药性。     

白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药逆转的初步研究

目的探讨白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,以MTT法检测单用白藜芦醇对SKOV-3/DDP的杀伤影响,确定其对此细胞株的逆转剂量;同法测定无毒剂量白藜芦醇干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,通过流式细胞仪检测白藜芦醇逆转剂量干预细胞株后细胞的凋亡情况,采用RT-PCR方法检测白藜芦醇处理SKOV3/DDP细胞前后MDR-1和Bcl-2基因的表达。结果回归分析得出,当白藜芦醇终活性浓度<115.68 U/ml时,对SKOV-3/DDP细胞生长无明显抑制作用,其抑制率小于10%。DDP组于24、48、72 h作用耐药SKOV3/DDP细胞的IC50分别为（23.31±0.42）、（9.01±0.72）、（6.45±0.83）μg/ml,当与逆转剂量（100 U/ml）的白藜芦醇联合应用时白藜芦醇使DDP对耐药SKOV3/DDP细胞的IC50均降低,差异有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与24 h RF值相比,48 h和72 h RF值差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与对照组相比,DDP组和白藜芦醇+DDP组人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1 mRNA、Bcl-2 mRNA及MDR-1/Bcl-2值与对照组比较,组间差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05),且白藜芦醇+DDP组SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1/Bcl-2值明显高于DDP组(（印）P（正）<0.05)。结论白藜芦醇与卵巢癌发生、发展的密切相关,可有效逆转人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂化疗耐药性,且可通过下调MDR-1和Bcl-2的mRNA表达以减少P-gp蛋白表达及药物外排,维持细胞内的DDP浓度。     

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

原位杂交在诊断小儿乙肝相关性肾炎的意义

目的 :探讨ISH在诊断HBV -GN的意义及不同病理形态的HBV -DNA的分布部位 ,数量及分布状况与病理类型的关系。方法 :分别采用免疫荧光法 ,聚合酶链式反应 (PCR) ,原位杂交 (ISH)法检测肾组织中HBV标志物的存在状况。结果 :在 4 2例患儿中 ,通过检测患儿肾组织中HBV -Ag ,诊断 2 1例为HBV -GN ;PCR法检测的HBV标志物阳性率最高 ,为 6 0 .0 % ,ISH法次之 ,为 4 5 .2 4 % ;HBV -DNA在不同病理形态中 ,不同部位的阳性细胞率各不相同 ,在膜性肾病中 ,上皮细胞的阳性率明显高于其它病理类型 (P <0 .0 5 )。而膜增殖性肾炎主要分布在内皮与系膜区细胞中 ;在我们的研究中发现 :单纯应用免疫荧光法明确HBV -GN的诊断 ,对膜性HBV -GN的漏诊率较高 ;而对膜增生性HBV -GN的误诊率太高。结论 :应用原位杂交法检测肾组织中HBV -DNA的存在状况对HBV -GM的确诊有重要意义 ;应用原位杂交法检测肾组织中HBV -DNA的分布部分对明确病理类型有重要的诊断价值 ;应用原位杂交法检测肾组织中HBV -DNA的分布部位及存在状况对探讨HBV -GN的发病机制有重要意义。     

CHANGES IN CHOLELITHIASIS IN TIANJIN IN THE PAST 30 YEARS

This paper traces, the changes in cholelithia- sis in Tianjin during the past 30 years, these changes in cha.racteristics of gallstone ma.y be attributed to the decrease of biliary asca.ria.sis and changes iri diet. Living standards and health knowledge may also cause differenc.es, in stones of urban and rural patients and in those found in patients engaged in mental or physica.l labor.     

ADVANCES IN VASCULAR SURGERY IN CHINA

This article presents some main advances in the management of arterial and venous diseases during the recent 35 years. In the treatment of arterial diseases, the manufacture and application of pure silk and dacron prosthesis in the late fifties has enlarged the scope of surgery for aneurysms. Even resections of huge complicated thoracoabdominal aneurysms have been performed with good results since the eighties. Embolectomy by means of a Fogarty catheter has been used with success since 1970. As to chronic arteriosus obliterans, including thromboangitis obliterans and arteriosclerosis, omental graft (1982) and staged arterio-venous reversal (1986) may produce good results. In the treatment of aortitis, nephrectomy is good for cases involving unilateral renal artery. Bypass, endarterectomy, patch graft or angioplasty for those cases with stenosis at the beginning of the main branches are very beneficial. In the management of portal hypertension, splenorenal shunt has been widely adopted since 1952. In 1964 pericardiac devasculization was first used, and in recent years there was an increasing trend in its practice. As to venous diseases in the lower extremity, a classification based on whether the lesion involves venous reflux or venous return disturbance has been suggested in recent years. Venous reflux diseases with valvular insuffciency of the saphenous vein has an incidence of 14%, valvular insufficiency of the deep femoral vein is even more common with an incidence as high as 55%. The operations for each category are mentioned. Diseases of venous return disturbance are mainly the sequel of thrombosis of the deep vein. The are two types i. e. whole extremity and segmental.     

DIETARY SURVEY IN BEIJING IN 1983

Dietary survey was carried out in October and November 1983 in 73 urban residents and 92 rural residents of Beijing from l,594 persons, 25-64 years of age, with equal distribution in both sexes. The result showed that Beijing diet was higher in car bohydrate and low in fat. The average daily salt in take was 14.2 g for urban residents and 15.7 g for rural residents, being about three times the estimated normal requirement. The proportion of polyunsa- turated fat to saturated fat was 2.6:1, whereas the ideal proportion should be l:1. Recommendation is made to reduce salt and animal fat intake in the Beijing diet.     

2006年秋冬季青岛地区婴幼儿病毒性腹泻病原分析

目的 了解青岛地区引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原组成及其流行情况.方法 2006年9～12月,采集青岛市儿童医院婴幼儿病毒性腹泻大便样品共38份,采用胶体金法检测轮状病毒;采用RT-PCR法检测星状病毒和人杯状病毒.结果 在38份样品中检测到轮状病毒7份,阳性率为18.42%;检测到星状病毒4份,阳性率为10.53%; 检测到人杯状病毒6份,阳性率为15.79%.其中1份混合感染星状病毒和人杯状病毒,1份混合感染轮状病毒和星状病毒,未发现轮状病毒和人杯状病毒的混合感染.结论 2006年秋冬季,引起青岛地区婴幼儿感染性腹泻的3种主要病毒中,以轮状病毒为主,其次为人杯状病毒和星状病毒.     

海南地区新生儿睾丸的形态观测

从海南地区足月新生儿３１例尸体中取睾丸６２个（左、右各３１个），对睾丸的位置、形态进行观测。形态分类：卵圆形、圆柱形、圆锥形、圆形，左侧分别占７７．４２±７．５１％、９．６８±５．３１％、９．６８±５．３１％、３．２３±３．１８％，右侧分别占８３．８７％±６．６１％、６．４５±４．４２％、６．４５±４．４２％、３．２３±３．１８％。睾丸的长、宽、厚（ｍｍ），左侧分别为９．３３±０．９７、６、１０±０．９８、５．５１±０．７３，右侧分别为９．３８±０．９９、６．３６±０．９５、５．６４±０．６２。睾丸的重量（ｇ），左侧０．２２±０．０５，右侧０．２４±０．０５。     

体外PPD淋巴细胞转化试验对儿童结核病的诊断价值

本文报道各种类型的儿童结核病30例,即旧结核菌素试验为阳性和阴性者各15例,与健康儿对照组17人比较,观察体外PPD淋巴细胞转化试验。结果如下:旧结核菌素试验阳性组为19.74±7.93;阴性组为16.23±4.23;健康儿对照组为2.58±2.01。前二组分别与对照组比较,差异有高度显著性,提示体外PPD淋巴细胞转化试验对旧结核菌素试验阴性的结核病患儿有一定的临床诊断价值。     

荧光原位杂交方法检测人精子染色体

目的：将Ｆ１ＳＨ方法应用于精子间期核检测染色休数目。方法：用二硫苏糖醇破精子表面蛋白壳，使探针容易穿透，再选用１３、２１、ｘ探针与精子核杂交，检测相应染色体数目。结果：可见红色核中绿色信号，结果直观，能准确计数染色体数目。结论：ＦＩＳＨ技术应用于精子间期核，能准确、快速、直观地检出染色体数目异常，使细胞学难以制备精子染色体的难题得以解决。