吗啡对备用根大鼠脊髓后角Ⅱ板层突触重建的影响——电镜定量研究

已有研究表明,吗啡依赖大鼠脊髓能够提高培养背根节细胞的存活率。为了从形态学证实吗啡依赖大鼠脊髓对在体背根节细胞的影响,取10只大鼠分为吗啡备用根组和备用根对照组。术前给予实验动物递增性注射吗啡,使其成瘾,术后继续给予维持量吗啡。切除两组动物一侧L_1～L_3和L_5～L_6背根和背根节,保留L_4背根(备用根)。术后34天灌注固定动物,取L_4脊髓后角,制作包括一侧完整Ⅱ板层的超薄切片,在电镜(×7000)下抽样摄片,观察计数照片范围(107μm~2)内来自背根的复合终末(CT)和非背根来源的简单终末(ST)数,并测量CT的面积。结果显示:1.两组动物手术侧和非手术侧Ⅱ板层横断面积及其神经毡面积分数没有差别,这为手术侧和非手术侧Ⅱ板层相同单     

吗啡对备用根大鼠背根内神经纤维侧支出芽的影响——电镜定量研究

过去已通过电镜定量研究观察到吗啡能够促进备用根大鼠(切断一侧脊神经L_(1-3)、L_5、L_6背根,保留L_4背根)在脊髓Ⅱ板层重建了突触联系。本文在此基础上,进一步探讨了备用根大鼠L_4背根内神经纤维的数量变化以及吗啡对神经纤维数量或侧枝出芽的影响。结果显示:1.有髓纤维:对照组大鼠手术侧与非手术侧L_4背根内有髓纤维的数量的比较无统计学差别,吗啡组两侧L_4有髓纤维的数量也无明显差别。2.无髓纤维:与对照组非手术侧L_4背根内无髓纤维数目比较,吗啡组手术侧与非手术侧的无髓纤维数分别有所增加,但两者的增加幅度无统计学差异;与对照组大鼠手术侧L_4背根内无髓纤维的增幅比较也无统计学差异。上述结果表明此时吗啡对备用背根内无髓纤维的侧支出芽无明显的影响。而对非手术侧相应背根无髓纤维的侧支出芽有促进作用;除备用根大鼠非手术侧外,吗啡备用根大鼠手术侧与非手术侧,备用根手术侧L_4背根内增加的无髓纤维可能参与了Ⅱ板层,特别是手术侧Ⅱ板层的突触重建。     

备用背根猫脊髓背核组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用Liu和Chambers创立的备用背根模型,切除成年雄猫(5只)一侧的L_1～L_5、L_7～S_2背根节,保留L_6背根为备用背根,术后动物存活5d。分别制备脊髓T_(12)～L_3节段手术侧(实验组)、非手术侧(对照组)背核组织及其条件培养液。以Hanks平衡盐溶液的条件培养液作为参照组。用实验组、对照组以及参照组条件培养液对Hamburger 35期Leghorn鸡胚腰段背根部进行悬滴法培养,每只动物进行一批实验。于培养24h,48h观察测量各个背根节神经突起的平均长度。在各组背根节从培养24h到48h神经突起明显增长的基础上,求出每批培养物实验组、对照组背根节平均突起长度与参照组平均突起长度的比值以及5批培养物之平均比值。比较实验组、对照组平均比值在同一观测时间内的差异,发现两个观测时间实验组平均比值都明显大于对照组者。结果提示,猫脊髓经部分去后肢背根传入后,背核组织提取液促进神经突起生长的作用增强。     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提取液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的　探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织 >10 k D和 <10 k D两种分子量组分提取液 ,对鸡胚背根节 (DRG)神经突起的促生长作用 ,以及应用吗啡后对此作用的影响。　方法　应用超滤器制备提取液、组织培养和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术 ,分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液 >10 k D组分作用的 DRG神经突起的生长密度 ,比非手术侧 >10 k D组分 ,非手术侧 <10 k D组分和手术侧 <10 k D组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织 >10 k D组分提取液作用的 DRG神经突起生长密度 ,又比备用根大鼠手术侧 >10 k D组分的大。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现 ,两组动物手术侧和非手术侧 >10 k D组分样品的电泳图谱区带数目大致相同 ,但两组动物手术侧分子量约 6 7k D、31k D和 16 k D的 3条区带吸收峰面积百分比 ,较非手术侧的高。　结论　吗啡具有进一步增强去传入纤维支配的脊髓后角组织 >10 k D组分提取液促进 DRG神经突起的生长效应。两组动物手术侧 >10 k D组分提取液分子量约 6 7k D、31k D和16 k D3种蛋白质含量有增高的趋势 ,尤其是吗啡组动物手术侧约 6 7k D蛋白质含量增高的趋势更为明显     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

<正> 我室新近的研究发现,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份,其分子量约在40KD～78KD之间,但不清楚是那种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用.为了寻找这种物质,本研究应用Superdex G-75prep grad凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)层析和细胞培养等技术和方法,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配(手术侧)的脊髓后角组织提取液,以期获得某种神经营养活性物质.用SD雄性大鼠100只,切除其一侧L_1-L_3、L_5和L_6背根,仅保留L_4背根(此动物为备用根模型大鼠),术后5天处死动物.分别切取L1_～L_6节段的手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备成提取液、凝胶层析洗脱液和PHLC层拆洗脱液.结果发现,手术侧脊髓后角组织提取液具有神经营养活性作用,将该提取液经Superdex G-75prep grade凝胶层析和PHLC层析后,得到的A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节(DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用.经SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)显示,A峰洗脱液呈现一条分子量约为60kD的蛋白质主带.结合生物活性检测结果,我们推测分子     

37 吗啡对备用根大鼠背根节神经元胞体的影响—光镜和电镜观察

<正>为了探讨发生侧支出芽及重建突触的背根节神经元,其胞体是否也呈现相应的形态变化,以及吗啡对此变化的影响,取10只大鼠分为吗啡备用极组和备用根对照组,切除两组动物脊髓左侧腰段背根及背根节,仅保留L_4背根(备用背根).术后34天灌注固定动物,取L_4根节树脂包埋,等距切取半薄切片和超薄切片.结果发现:两组大鼠术侧背根节体积,与非术侧比较均没有统计学差异;其亮神经元胞体、胞核和核仁的体积也没有显著差异.对照组非术侧亮神经元胞体尼氏体呈细颗粒状;粗面内质网聚集成小簇,分散在胞质中.而术侧尼氏体呈小块状;粗面内质网簇较大,较为密集.吗啡组术侧亮神经元胞质尼氏作也在胞核周围聚集成小块状,有些还呈斑块样.此时可见大的粗面内质网簇,其分布更为密集.这种变化可能与发出有髓传入纤维的亮神经元在脊髓侧支出芽及其重建突触有关.对照组术侧暗神经元胞体、胞核和核仁的体积分别比非术侧显著增大.吗啡组术侧暗神经元上述三种体积又比对照组术侧的大,而且胞质多聚核蛋白体和粗面内质网明显增多、表明与无髓传入纤维在脊髓侧支出芽及重建突触有关的暗神经元胞体也发生了相应的可塑性变化,吗啡对此变化有明显的促进作用.本文首次为研究吗啡促进脊髓可塑性变化提供新的资料,同时提示暗神经元胞体的可塑性     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的 探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ和〈１０ｋＤ两种分子量组分提取液,对鸡胚背根节（ＤＲＧ）神经突起的促生长作用,以及应用吗啡后对此作用的影响。方法 应用超滤器制备提取液、组织培养和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术,分离和检测神经营养活性物质。结果 备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液〉１０ｋＤ组分作用的ＤＲＧ神经突起的生长密度,比非手术侧〉１０ｋＤ组分,非手术侧〈１０ｋＤ组分和手术侧〈１０ｋＤ组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ组分提取液作用的ＤＲＧ神经突起生长密度,又比备用根大鼠手术侧〉１０ｋＤ组分的大。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现,两组动物手术侧和非手术侧〉１０ｋＤ组分样品的电泳图谱区带数目大致相同,但两组动物手术侧分子量约６７ｋＤ、３１ｋＤ和１     

NGF及NGF mRNA在去部分背根猫脊髓和背根节表达的变化

用成年猫单侧备用根模型 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2 节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 ) ,用免疫组织化学和原位杂交技术 ,对脊髓背角 板层、背核和 L6 背根节中神经生长因子的表达进行了动态观察。结果证明 ,部分背根去传入后 :(1)脊髓各节段双侧背角 板层的神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的数量及体积显著增高、增大 ;(2 )手术侧背核神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的增高强于非手术侧 ,但术后两时间组的手术侧之间无差异 ;(3 )备用根背根节新出现了神经生长因子 m RNA阳性神经元 ,且神经生长因子阳性神经元数量明显高于正常组 ,且随术后时间增加而递增。以上结果表明 :部分背根去传入猫脊髓背角 板层及背核内神经生长因子水平提高 ,尤其备用根背根节神经元神经生长因子的增加 ,为备用背根传入纤维侧支生芽和突触重建提供了良好的条件 ,有助于解释脊髓初级传入纤维损伤溃变后代偿性机能恢复的机制     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性鉴定

<正> 本实验采用凝胶过滤层析法和高效液相色谱技术,分离纯化备用根大鼠部分去传入侧的脊髓后角组织中的神经营养活性物质.1.生物活性检测方法的建立:切除大鼠一侧背根和背根节(DRG),仅保留L-4背根为备用根.术后动物存活5天.分别切取L1-L6节段手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备含手术侧和非手术侧提取液的培养液.用此液分别培养鸡胚DRG,48小时后手术侧组DRG神经突起密度明显大于对照组和非手术侧组,提示去传入纤维支配的脊髓后角组织存在着促神经突起生长的神经营养活性物质.又采用改良的悬滴培养法,发现手术侧脊髓后角组织能支持鸡胚DRG神经元的存活,而且具有促进神经突起生长的作用.2.备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离与纯化,部分背根切除术后5天处死动物,切取手术侧脊髓L1-L6节段后角组织,匀浆、离心后,取上清液经Superdex prep grade G-75凝胶过滤层析,呈现Ⅰ、Ⅱ二个洗脱峰,将各洗脱峰浪加入培养基,Ⅰ峰洗脱液表现有神经营养作用.将Ⅰ洗脱峰进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,银染后呈现多条明显的蛋白区带,去传入脊髓后角组织呈现神经营养活性的物质是在40-78KD之间.将Ⅰ峰洗脱液浓缩,进行高效液相色谱(HPLC)分析,得到4个不同的洗脱峰(a、b、c、d峰).将各洗脱峰液配制成不同浓度的     

部份背根切断对备用根尾侧段脊髓Ⅱ板层trkC表达的影响

目的 :大量的研究已证实部分背根切断后猫脊髓背角具有可塑性。我们前面的研究已观察了部份背根切断对备用根节段Ｌ6 头侧Ｌ3、Ｌ5 脊髓Ⅱ板层和Ｌ3背核ｔｒｋＣ表达的影响 ,本文进一步探讨部份背根切断后备用Ｌ6 节段尾侧Ｌ7脊髓Ⅱ板层ｔｒｋＣ的表达。方法 :用成年雄猫 1 5只分正常组、术后 3ｄ及 1 0ｄ组(切除Ｌ1 -Ｌ5,Ｌ7-Ｓ2 ,ＤＲＧ保留Ｌ6ＤＲＧ为备用根 ) ,取正常组一侧 ,术后 3ｄ及 1 0ｄ组手术侧的Ｌ7脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻切片 ,用ｔｒｋＣ抗血清 ( 1∶1 0 0 0 ,ＳａｎｔａＣｒｕｚ)行免疫组化ＡＢＣ法染色。观察并测量ｔｒｋ…     

吗啡增强备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养鸡胚背根节的促神经突起生长的作用

用组织培养方法，探讨备用很大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节（ＤＲＧ）神经突起的促生长作用，以及应用吗啡对此作用的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的ＤＲＧ神经突起密度（３６．４２±４．６９），比非手术侧的（２３．９６±３．４７）明显增大。提示去初级传入纤维的脊髓后角组织具有促进ＤＲＧ神经突起生长的神经营养活性作用。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的ＤＲＧ神经突起密度（６４．１９±９．２４），又比备用根大鼠手术侧的大。这表明，吗啡具有进一步增强去初级传入纤维支配的脊髓后角组织提取液促进培养的ＤＲＧ神经突起生长的效应。     

备用根大鼠脊髓后角组织的两种分子量组分提取液对培养的鸡胚背根节神经元神经突起生长的影响

应用Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ－１０微浓缩器和组织培养方法，探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织小于１０ｋＤ和大于１０ｋＤ两种分子量组分提取液对鸡胚背根节神经元的神经突起的促生长作用。结果显示：给予备用根大鼠手术侧脊髓后角组织大于１０ｋＤ组分的提取液时，背根节神经元的神经突起密度较非手术例小于１０ｋＤ组分、非手术侧大于１０ｋＤ组分和手术侧小于１０ｋＤ组分者密度明显增大．提示部分去传人纤维支配的脊髓后角组织大于１０ｋＤ组分的提取液，可能含有某些促进培养鸡胚背根节神经元神经突起生长的神经营养物质．     

备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养的鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用组织培养方法，观察备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的背根节神经突起生长密度（１５５．２５±１４．２５）明显高于非手术侧提取液作用的背根节神经突起生长密度（８９．１４±９．６０）。提示部份去传入纤维支配的脊髓后角组织可能存在着促进神经突起生长的神经营养活性物质。     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

我室新近的研究发现 ,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份 ,其分子量约在 40 k D～78k D之间 ,但尚不清楚是哪种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用。为了寻找这种物质 ,本研究用 Superdex G- 75prep grade凝胶层析、高效液相色谱 (HPL C)层析和细胞培养等技术和方法 ,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配 (手术侧 )的脊髓后角组织提取液 ,以期获得某种神经营养活性物质。用 SD雄性大鼠 10 0只 ,切除其一侧 L 1～ L 3、L 5和 L 6背根 ,仅保留 L 4背根 (此动物为备用根模型大鼠 ) ,术后 5 d处死动物…     

吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的　分离纯化吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液 ,以期获得某些神经营养活性物质。　方法　应用SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析、高效液相色谱 (HPLC)和组织培养等技术分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠脊髓组织提取液能够促进体外培养的鸡胚背根节 (DRG)神经突起的生长 ;吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液也具有同样的作用 ,但备用根大鼠和吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液在促神经突起生长作用方面并没有明显的差异。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液具有明显的神经营养活性作用。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液的SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析Ⅱ峰洗脱液和Ⅳ峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE分析 ,Ⅱ峰洗脱液呈现 1条分子量约为 6 5kD的蛋白质主带 ,Ⅳ峰洗脱液的蛋白质成分较为复杂。应用HPLC对凝胶层析Ⅳ峰洗脱液作进一步的分离 ,发现HPLCA峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE显示 ,A峰洗脱液的两条蛋白质主带分子量分别为 30kD和 18kD。　结论　吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液中具有神经营养活性作用的物质可能是分子量约为 6 5kD、30kD和 18kD蛋白质     

电针对脊髓背核突触性终末可塑性的影响——电镜定量研究

实验采用切断猫一侧L_1-L_5、L_7-S_2脊神经背根,保留L_6背根(备用根)模型,研究电针刺激足三里与悬钟、伏兔与三阴交两组穴位30天后对背核可塑性的影响。应用体视学方法测知背核及其神经毯面积均未缩小的情况下,在电镜下比较了两侧背核神经毯单位面积内三种突触性终末的数量变化。发现:针刺的手术侧来自背根有髓纤维的巨大终末数恢复到非手术侧的正常水平,与本室另一组非针刺资料(单纯备用根,其手术侧巨大终末数为正常数量的75%)比较,巨大终末数有显著性增加。表明电针刺激能促进同侧备用根有髓纤维的侧支出芽和突触重建。非背根来源的小扣型终末数在手术侧虽有增多,但其增加幅度与单纯备用根手术侧比较无显著差异。说明针刺对小扣型终末的数量无明显影响。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

应用超微结构定量法探讨针剌对猫脊髓后角第Ⅱ板层的可塑性影响

本实验采用双侧备用根模型(切断双侧L_1-L_5,L_7—S_2脊神经背根,保留L_6背根),针刺动物一侧后肢L_6背根支配范围内的足三里、悬钟、伏兔和三阴交四穴,应用电镜超微结构定量方法,观察电针刺激穴位28天后,对脊髓后角第Ⅱ板层终末可塑性的影响。结果显示,第Ⅱ板层单位面积中复合终末的数量,针刺侧比未针刺侧增多32％。提示针刺能促进完好背根纤维更快地侧支出芽和重建突触联系,以代偿损伤的背根纤维终末。本文也对针刺后第Ⅱ板层中复合终末的形态、面积,简单终末的数量以及电针刺激的某些条件进行了初步的探讨。     

部分背根切断对脊髓中央管上皮细胞凋亡的影响

本室最近研究发现 ,部份背根切断可激发脊髓部份胶质细胞和神经元凋亡 ,且切断一侧背根对非手术侧的细胞凋亡也有影响。已知的研究结果提示导致非手术侧细胞凋亡的激发因素并非直接损伤。目的 :本文进一步探讨部份背根切断与脊髓中央管上皮细胞凋亡的关系。方法 :将 1 5只成年猫分为三组 ,每组 5只 ,其中两组行单侧部份背根切断术 (切除Ｌ1 -Ｌ5,Ｌ7-Ｓ2 ＤＲＧ保留Ｌ6ＤＲＧ为备用根 ) ,术后动物存活 3ｄ及 1 0ｄ ,取三组动物的Ｌ3脊髓石蜡包埋切片后按常规方法行ＤＮＡ原位末端标记 -ＴＵＮＥＬ法染片 ,快红显色显示中央管上皮的凋亡细胞…     

针刺对去部分背根猫脊髓和背根节NGF及NGF mRNA的影响

用免疫组织化学和地高辛标记 c RNA探针原位分子杂交技术 ,观察了针刺对成年备用背根猫 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 )脊髓 板层、背核和背根节内神经生长因子和神经生长因子 m RNA的影响。结果证明 ,针刺促进了备用根背根节的神经生长因子基因的表达 ,使备用背根节内神经生长因子、神经生长因子 m RNA阳性神经元数量明显增多 ,并且针刺时间越长促进作用也越强 ;而对脊髓 板层与背核则无明显影响。本实验结果提示 ,针刺对备用根猫脊髓侧支生芽具有促进作用 ,这种作用主要体现在通过增加背根节神经生长因子基因的表达和神经生长因子的合成来实现的