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1.
目的 提取、克隆BALB/c小鼠乳糖酶基因Lac,了解其序列及所编码蛋白的属性,并制备Lac cDAN探针,为进一步研究乳糖不耐受奠定基础。方法 取4周龄BALB/c小鼠小肠组织,用Trizol试剂盒提取总RNA,经RT—PCR、梯度PCR获取Lac cDNA。测序鉴定后将序列提交NCBI GenBank,同时利用生物信息学,对其编码产物进行预测。探针的制备采用随机引物法以地高辛标记。结果 所获得的Lac cDNA编码区有912bp,编码303个氨基酸残基,在其二级结构中存在一个糖苷键水解酶基序,C-末端有一疏水螺旋区。标记后的探针经检测,灵敏度达到1pg/μl。结论 所获得的Lac基因经鉴定确为乳糖酶基因,由它编码的蛋白产物是乳糖酶。标记的探针灵敏度很高,可以用于原位杂交实验。 相似文献
2.
目的 构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法 用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果 用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论 成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 ,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础 相似文献
3.
目的:克隆人类环孢霉素A受体亚型cyclophilinA(CypA)基因,对该基因进行序列测定。方法:利用EST重叠序列拼排技术,设计特异性CypA引物,以人外周血白细胞总RNA为模板,进行RT—PCR扩增,纯化PCR产物,装pGEM—T载体,进行DNA序列测定。结果:成功克隆了人类CypA基因cDNA序列的开放阅读框,经DNA序列测定证实序列正确。结论:通过克隆人CypA基因,并克隆人PGEM—T载体,为下一步的基因表达和功能研究奠定了实验基础。 相似文献
4.
目的 探讨Unev无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性.方法 参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Unev无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析.结果 获得了Unev无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp).Unev无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%.与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的.结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关. 相似文献
5.
小鼠GITRL基因的克隆和序列分析 总被引:4,自引:3,他引:1
目的:克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA,同时对其序列分析。方法:采用RT-PCR方法,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长519hp,编码173个氨基酸残基,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论:获得小鼠GITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能提供基础。 相似文献
6.
目的:构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子的逆转录病毒表达载体。研究:用RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCⅠ类分子H-2Dd的编码基因,克隆于载体pGEM-T中。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV,构建pMSCV-H2Dd4重组逆转录病毒表达质粒,并进行酶切和序列测定鉴定。结果:用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实,H-2Dd基因正确插入载体pMSCV,H-2Dd的编码基因经序列测定证实,与文献报道完全一致,阅读框架与设计相符。结论:成功构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子编码基因的逆转录病毒载体,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础。 相似文献
7.
抗鼠IgD特异性单克隆抗体414/DF可变区基因的克隆和cDNA序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆鼠抗原D型免疫球菌蛋白特异性单克隆抗体414/DF可变区基因,方法 从培养的可分泌高亲和力抗鼠IgD特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞414/DF提取总RNA,反转录成cDNA,用合成的一对寡核苷酸引物从中扩增了抗体可变区基因经克隆入pUC19质粒,进行核苷酸序列分析,结果 所克隆基因分别长357bp和327bp编码119和109个氨基酸,均含3个抗原互补决定区和4个框架区,并含有维持抗体结构 相似文献
8.
目的:探讨BALB/c无毛同类系小鼠无毛基因表型的分子遗传学基础。方法:采用PCR和RT-PCR方法扩增BALB/c无毛同类系小鼠和BALB/c小鼠无毛基因的部分序列,并对测序结果进行对比分析。结果:BALB/c无毛同类系小鼠无毛基因3110位碱基(外显子12)发生G→A突变,使911位的色氨酸密码子(TGG)突变为终止密码子(TGA)。结论:BALB/c无毛同类系小鼠谱系清楚,遗传机制明确,将是一种有价值的动物模型。 相似文献
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研究发现 ,在Quaking(QK)突变小鼠 (战栗者 )中 ,由于位于 17号染色体QK基因 (QK ,QK 1~ 7,GenBank登记号U44 940 )的缺失突变或点突变 ,导致其神经系统 (包括中枢及周围神经系统 )的髓鞘形成障碍 ,临床表现为以后半身为主的震颤等 ,严重者可于胚胎早期死亡[1,2 ] 。人类QK基因尚未克隆 ,为此。我们通过同源序列分析方法以小鼠的QK 1~ 7基因的编码区序列作为信息探针 ,成功地克隆了人类QK的 6种剪接型。一、材料和方法1 信息分析方法 ;信息分析方法在SUN工作站采用GCG软件包进行 ,根据大规模测序提供… 相似文献
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目的 克隆树鼩(Tupaia belangeri)Retn基因,为在树鼩中开展Retn相关研究提供实验资料.方法 在树鼩脂肪组织中抽提总RNA,用RT-PCR进行基因扩增,通过基因克隆、重组质粒的酶切鉴定,对Retn克隆质粒的序列测定和分析.结果 抽提的总RNA完整性较好,RT-PCR产物电泳检测得到了目的条带,重组克隆质粒经Pst I单酶切证明了Retn基因已克隆至质粒载体,测序获得了363个核苷酸序列,1个编码114个氨基酸的开放阅读框,序列提交GenBank,登录号为JF267792;经Blast软件进行序列分析,其核苷酸序列和氨基酸序列与鼠类的同源性分别为95%和99%.结论 成功克隆了树鼩Retn基因及序列测定,为树鼩Retn基础数据的建立和开展相关研究提供了实验资料. 相似文献
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单纯疱疹病毒Ⅰ型Stocker株gD膜外区基因的克隆与序列测定 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:为了克隆单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)gD膜外区基因。方法:采用Vero细胞培养HSV-I Stocker株,并提取病毒DNA作为PCR模板。PCR扩增出的gD片段经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切,插入质粒pB220相应位点,转化E.coliDH5α。重组质粒经PCR、酶切鉴定命名为pBV220-gD。对克隆的HSV-I Stocker株gD基因进行序列,并与其他HSV-Ⅰ,ⅡgD基因相应部分进行比较。结果:核苷酸序列同源性分别为99.77%、86.55%,氨基酸序列同源性分别为99.31%、88.28%。结论:SHV-Ⅰ gD基因的克隆为表达该基因,进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗及gD,gD受体的结构功能奠定了基础。 相似文献
12.
目的 获得人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建重组表达载体并对其诱导表达。方法 利用RT PCR技术从人外周血单个核细胞中扩增出TALL 1全长及其胞外区基因编码区序列 ,克隆于载体pGEX 4T 1中 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果 ①从人外周血单个核细胞中扩增出编码TALL 1基因全长及其胞外区片段cDNA序列 ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;②成功构建了GST融合表达载体pGEX 4T 1 hTALL 1和pGEX 4T 1 sTALL 1;③表达了hTALL 1 GST和sTALL 1 GST融合蛋白。结论 人TALL 1基因全长及其胞外区片段的克隆成功及融合蛋白的表达 ,为进一步探索TALL 1抗原表位打下了基础。 相似文献
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目的探讨MICA^*008基因在白血病与尿毒症患者中的分布。方法应用PCR/SSP的方法检测白血病患者66例,尿毒症患者91例和无血缘关系健康人81例的MICA^*008基因。结果白血病患者、尿毒症患者和正常健康人的MICA^*008基因频率分别为22.2%,18.8%和34.3%。前两者的基因频率无差异(P〉0.05),但均低于后者(P〈0.05)。结论白血病和尿毒症患者的MICA^*008基因频率均低于正常健康人,但两者之间无差异。 相似文献
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目的:为研究TLR2胞外域在肽聚糖诱导的信号转导中的功能,构建TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段真核表达载体。方法:提取HL-60细胞总RNA,以RT-PCR方法获取了TLR2胞外域cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,转化E.coli JM109,建立了TLR2胞外域的cDNA克隆;籍此,又相继克隆了胞外域的氨基端和羧基端片段,然后将这三个片段克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果:序列分析表明,与GenBank中的人TLR2全长cDNA序列比较,仅4个碱基不同,同源性为0.998。结论:成功获得了HL-60细胞TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆。 相似文献
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目的构建人Toll样受体1(TLR1)胞外段原核表达质粒。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)mRNA中扩增人TLR1胞外区cDNA;将扩增的目的基因与原核表达载体pET30a(+)质粒经NcoⅠ和NotⅠ双酶切后连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选转化子,菌落PCR及测序验证克隆序列的正确性。结果测序结果表明,成功构建pET30a(+)-TLR1胞外区基因重组质粒,并转化感受态E.coli BL21(DE3)。结论 TLR1胞外段在大肠杆菌BL21中正确克隆,为TLR1信号通路的进一步研究打下了基础。 相似文献
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目的 克隆人肌生长抑制素(myostain,MSTN)基因.方法 提取人肌肉组织mRNA,逆转录成cDNA,将回收PCR产物直接和pCEM-T质粒进行连接,构建重组质粒载体pCEM-T-L4STN,将扩增后的pCEM-T-MSTN进行双酶切鉴定和测序鉴定,对测序结果进行BLAST分析.结果 经克隆得到MSTN基因片段,和人MSTN基因的同源性为100%.结论 肢带型肌营养不良症家系中患者的MSTN基因未发生突变.克隆的MSTN cDNA基因为进一步表达重组MSTN蛋白提供了基础. 相似文献