靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定

目的设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用最强的shRNA片段。方法设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中。采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-sh RNA2效应最显著。结论成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础。     

RNA同时干扰四个不同基因对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的实验研究

目的 应用RNA干扰技术构建一个载体同时编码四个基因,即血管内皮生长因子(VEGF)、致癌基因蛋白(c-myc)、存活素(survivin)和端粒酶反转录酶的短发夹重组质粒,并与单基因质粒做对比,通过体内外实验,研究其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响.方法 构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和端粒酶反转录酶并含荧光素标记的短发夹RNA质粒命名为P-1,并构建单独表达VEGF、c-myc、survivin和端粒酶反转录酶的质粒,分别命名为P-2、P-3、P-4和P-5,分别将其将转染人鼻咽癌CNE-2Z细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内.以激光共聚焦显微镜观察质粒在CNE-2Z细胞及瘤体内的转染及表达情况.四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞增殖活性,实时PCR在mRNA水平上检测对目的基因表达的抑制作用,免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果,Trans well侵袭小室模型观察导入CNE-2Z细胞对其恶性生物学行为的改变,流式细胞仪观察各组凋亡率,体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 多基因干扰质粒转染鼻咽癌细胞后,CNE-2Z细胞增殖受到明显抑制,体外侵袭能力显著下降(P值均＜0.05).实时PCR证实多基因组4个不同基因mRNA表达均降低,免疫印迹技术验证目的基因蛋白同时表达下调.流式细胞仪结果证明多基因凋亡率明显高于单基因组(P值均＜0.05).体内抑瘤实验表明,与阴性组和空白组相比,P-1组移植瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),并且多基因质粒抑制肿瘤细胞增长的作用要强于单基因干扰质粒(户值均＜0.05).结论 同时干扰多个基因能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础.     

普鲁卡因对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响

目的:探讨普鲁卡因(procaine)对人鼻咽癌(NPC)细胞CNE-2Z的影响。方法:体外培养的NPC细胞CNE-2Z分别加入不同浓度的普鲁卡因,并作用不同的时间。应用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-Dimethyl-thiaoly)-2,5-diphenyl-2H tetrazolium bromide,MTT]法和流式细胞仪检测观察普鲁卡因对NPC细胞CNE-2Z的影响,同时用RT-PCR分析p16和RASSF1A mRNA的表达情况。结果:普鲁卡因能显著抑制CNE-2Z细胞增殖,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。普鲁卡因使细胞周期阻滞于G1期,并能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,但对p16 mRNA表达无明显影响。结论:普鲁卡因对CNE-2Z细胞有增殖抑制作用,它能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,推测这可能是普鲁卡因抑制CNE-2Z细胞增殖的重要分子机制之一。     

鼻咽癌CNE-2Z细胞株受IL-24影响的研究

目的探讨白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株(简称CNE-2Z细胞)增殖的影响,为临床应用提供理论依据。方法取CNE-2Z细胞进行培养,用细胞计数及MTT抑制试验,检测IL-24对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用,找出IL-24作用的峰浓度及最佳细胞增殖状况。采用碘化丙锭染色,流式细胞仪分析和细胞核形态两种方法同时检测体外培养的CNE-2Z细胞的凋亡状况。结果细胞计数及MTT法检测显示体外培养的CNE-2Z细胞在培养48 h增殖状况最差,并且存在峰浓度效应。IL-24 50 ng/ml可诱导CNE-2Z细胞的凋亡。结论IL-24可呈时间和剂量依赖性的抑制CNE-2Z细胞的增殖并诱导其凋亡。     

塞来昔布对人高转移性鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响

目的 研究塞来昔布(Cox-2选择性抑制剂)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响及其相关机制.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,Transwell小室检测细胞侵袭力的改变;免疫细胞化学检测肿瘤细胞中E钙黏素蛋白表达变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中Cox-2和E钙黏素mRNA表达变化.结果 塞来昔布明显抑制CNE-2Z细胞存活率,呈明显的浓度依赖性,24 h后25、50、100 μmol/L塞来昔布组细胞存活率(-x±s,下同)分别为(94.75±1.34)%、(91.77±2.70)%、(64.54±1.20)%,48 h后细胞存活率分别为(88.41±1.28)%、(78.84±1.56)%、(52.46±2.25)%,50%抑制浓度(IC50)为100 μmol/L,同一时间点细胞存活率差异有统计学意义(F值分别为462.204和1328.306,P值均＜0.01).0、25、50 μmol/L塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h,侵袭实验显示穿膜细胞数(-x±s,下同)分别为(263.7±13.5)个、(185.3±8.7)个、(144.0±8.2)个,用药组穿膜细胞数明显减少,组间差异有统计学意义(F=102.089,P＜0.01).免疫细胞化学结果显示,0、25、50μmol/L塞来昔布组E钙黏素阳性表达的CNE-2Z细胞数分别为(21.7±2.6)个、(28.7±2.4)个、(40.3±1.3)个,50 μmol/L组阳性细胞数明显增多(F=78.637,P＜0.01).RT-PCR结果显示:25、50 μmol/L组Cox-2 mRNA的表达比对照组明显下降(t值分别为23.950和36.651,P值均＜0.01);25、50 μmol/L塞来昔布组E钙黏素mRNA的表达明显高于对照组(t值分别为35.829和81. 497,P值均＜0.01).结论 塞来昔布抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的侵袭能力,其机制可能与E钙黏素表达升高有关.     

下调内质网相关降解蛋白-1对鼻咽癌CNE-2Z细胞化疗敏感性的作用及机制

目的 探讨下调内质网相关降解蛋白(Derlin-1)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株化疗敏感性的作用及机制。方法 收集10例鼻咽癌患者鼻咽癌组织及癌旁正常组织并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测组织中Derlin-1 mRNA含量;本实验分组：空白对照组(control组)、阴性对照组(NC组)、敲低组(si-Derlin-1组)。RT-qPCR法检测鼻咽癌Derlin-1 mRNA的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同顺铂浓度时3组细胞的增殖;Annexin V-FITC/PI双染法检测顺铂浓度为5μmol/L时3组细胞的凋亡率;Transwell检测顺铂浓度为5μmol/L时3组细胞的侵袭迁移能力;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法、Western blot法检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 mRNA及蛋白相对表达量。结果 RT-qPCR结果显示,鼻咽癌癌组织中Derlin-1 mRNA相对表达量较癌旁正常组织显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05);si-Derlin-1组Derlin-1 mRNA较control组、NC组...     

靶向人喉癌HEP2细胞Trop2基因的siRNA构建及鉴定

目的 构建能高效干扰Trop2基因的siRNA, 转染人喉癌HEP2细胞, 并初步鉴定其干扰效果。方法 以人Trop2基因为靶基因, 设计合成3条针对不同作用位点的siRNA干扰序列, 用脂质体法将各小干扰序列瞬时转染人喉癌HEP2细胞, 同时设立阴性对照、空白对照, 分别命名为W组(未转染组)、NC组(阴性对照组)、T1组(S1序列组)、T2组(S2序列组)及T3组(S3序列组), 每组各5例。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达, 计算转染效率。转染24 h后, 收集稳定后细胞, 采用实时荧光定量PCR法检测各干扰序列对Trop2基因表达的抑制效果。结果 荧光显微镜下观察, 见HEP2细胞表达绿色荧光蛋白, 证实siRNA已转入细胞, 转染率达90%。RT-PCR法结果显示, 与未转染组、阴性对照组相比, 转染siRNA的人喉癌HEP2细胞中Trop2表达均受到抑制, 与T2、T3组相比, T1组对Trop2 mRNA的抑制作用最明显, 差异有统计学意义(0.470±0.063 vs 0.749±0.024, 0.824±0.027, P<0.05)。结论 成功构建并筛选出了能高效、特异沉默人喉癌HEP2细胞Trop2基因的siRNA序列, 为进一步研究Trop2基因在喉癌中的作用机制及其基因治疗奠定了基础。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察其对鼻咽癌细胞生长的影响;透射电子显微镜检测细胞凋亡,应用流式细胞术观察DNA的含量和凋亡的变化情况,TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。结果：体外塞来昔布抑制CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察到细胞皱缩、胞质丢失、核质浓缩以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞术显示细胞凋亡率显著增高,在80、100gmol／L浓度下细胞凋亡率分别为（10．47±0．18）％和（20．17±0．55）％,与对照组（1．57±0．27）％比较差异均有统计学意义;塞来昔布使G0／G1期细胞比例升高,S和G2／M期比例下降,呈一定剂量效应关系。TUNEL染色法显示药物组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。结论：塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,并诱导其凋亡;其机制可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE-2细胞株放射增敏作用的研究

目的研究yCDglyTK融合自杀基因前药系统对人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的放射增敏作用。方法pcDNA3.1(-)CMVe·Egr-1yCDglyTK质粒经电穿孔法转染CNE2细胞,给予不同剂量γ射线照射及不同剂量前药,通过免疫组化、高效液相色谱、细胞存活率测定(MTT法)及克隆增殖实验,观察不同剂量辐射对自杀基因阳性CNE-2细胞中自杀基因表达及功能的影响,并观察前药干预及γ射线对CNE-2细胞生长的影响。结果电离辐射可诱导增强自杀基因阳性细胞株中yCDglyTK基因的表达;电离辐射与前药的联合大大增强了对自杀基因阳性CNE-2细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独放射。结论yCDglyTK融合自杀基因前药系统对CNE-2细胞有放射增敏作用,其与放射联合使用对CNE-2细胞有明显协同杀伤效应。     

小发卡状RNA联合脱氧核酶抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白基因表达研究

目的:探讨小发卡状RNA单独及联合脱氧核酶对鼻咽癌细胞中EB病毒EBV潜伏膜蛋白1(LMP1)基因表达的抑制作用。方法:带绿色荧光报告基团的LMP1mRNA表达载体,小发卡状RNA及脱氧核酶按照阳性对照组、RNA干扰组、联合组和脱氧核酶组4组分别共转染HNE1细胞,观察分析计数细胞中绿色荧光表达情况,检测LMP1mRNA和蛋白表达水平。结果:联合组细胞绿色荧光OD值均数与RNA干扰组差异有统计学意义(P<0.01);联合组绿色荧光抑制率分别为86.31%和88.88%,比RNA干扰组抑制率75.15%高;EBVLMP1mRNA和蛋白水平检测提示联合组抑制效率较RNA干扰组高。结论:小发卡状RNA联合脱氧核酶能够提高抑制EBV-LMP1基因表达的效率。     

Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用

目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene）表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高（F=547.525,P均〈0.001）;miR-16-1表达增高（F=99.979,P均〈0.001）;Bcl-2 mRNA表达无明显差别（F=0.220,P〉0.05）;Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。     

高压氧和5-氟尿嘧啶联合作用对鼻咽癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的:从细胞水平探讨高压氧或(和)5-氟尿嘧啶(5-FU)处理对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖与侵袭转移的影响及其影响机制。方法:将实验用人鼻咽癌CNE2Z细胞分为对照组(A组)、5-FU组(B组)、高压氧组(C组)、5-FU加高压氧组(D组)4组。采用MTT比色法观察各组处理24、48和72h后对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的抑制作用;采用Transwell小室分析法评价各组处理对鼻咽癌细胞侵袭、迁移相关能力的影响;采用细胞免疫化学染色法检测各组鼻咽癌细胞MMP-9、VEGF的表达水平。结果:C组处理48h和72h后鼻咽癌细胞增殖抑制A值与A组比较均差异有统计学意义(均P<0.01),D组处理仅48h后分别与A、B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组鼻咽癌细胞侵袭迁移结果和MMP-9和VEGF表达的平均值与A组比较差异均无统计学意义(P>0.05),虽D组鼻咽癌细胞侵袭、迁移结果和MMP-9和VEGF表达的平均A值与A组比较均差异有统计学意义(P<0.01),但与C组比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:单纯高压氧处理48h和72h后均能明显抑制人鼻咽癌细胞的增殖,但高压氧和5-FU联合处理仅...     

田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响

目的探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据。方法SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生。结果田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少。结论一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关。     

高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞株放射敏感性的体外研究

摘要：目的体外观察高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响。方法将鼻咽癌CNE-2细胞随机分为A、B、C、D四组。A组：细胞用0．22MPa高压氧处理60min后立即进行2Gy放疗;B组：细胞只应用0．22MPa高压氧处理60min;C组：细胞只进行2Gy放疗处理;D组：细胞不作任何处理。应用MTT法检测各组细胞生长抑制率,PI染色检测各组细胞死亡率,流式细胞计数各组细胞凋亡率。结果A、B、C3组细胞生长抑制率分别为（18．67±4．54）％,（7．47±4．88）％,（14．06±9．39）％,A组与B组和C组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;A、B、C、D4组死亡率分别为（11．70±1．45）％,（4．00±0．56）％,（8．43±0．83）％,（1．43±0．51）％。A与B、C、D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;A、B、C、D4组凋亡率分别为4．37±1．12、2．19±0．35、2．70±0．38、1．65±0．20,A与B、C、D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞有较强的放射增敏作用。     

建立稳定表达融合自杀基因CD／UPRT．UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株

目的：建立稳定表达融合自杀基因CD／UPRT．UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株。方法：构建表达载体pcDNA3．1（一）E6．BARFlP．cD／UPRT．UL49,经脂质体法转染CNE-2细胞,G418和前体药物5-氟胞嘧啶筛选出阳性克隆细胞并扩大培养。抽提阳性克隆细胞总蛋白质,Western-blotting检测目的基因表达。结果：融合自杀基因CD／UPRT．UL49在CNE2转染细胞内稳定表达。结论：本组通过脂质体转染技术,成功地建立了稳定表达融合CD／UPRT．UL49基因的CNE-2细胞株。     

RNA干扰抑制c-Met表达对喉癌Hep-2细胞体内外生长的影响

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人喉癌Hep-2细胞c-Met基因表达,观察对其体外生物学活性和体内生长的影响.方法 构建能够表达针对c-Met的小干扰RNA的RNAi质粒和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒,采用阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂将其转染人喉癌细胞株Hep-2,通过RT-PCR及Western Blot方法检测转染效率,筛选出抑制效果最好的c-Met-siRNA序列;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、运动实验及侵袭实验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力.在裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验中,采用Western Blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-9、VEGF基因表达的影响.结果 pSilencer2.0/c-Met-shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2后,c-Met的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P值分别为0.003和0.02),细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制(P值分别为0.001,0.004和0.004).肿瘤接种到裸鼠后第35天,重组质粒组肿瘤体积为(138±27)mm~3,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低(P<0.05).结论 c-Met-siRNA能成功下调靶基因的表达,并能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、运动、侵袭及移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略.     

EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2及相关基因表达的影响

目的:研究EGCG对鼻咽癌细胞系CNE-2的增殖与凋亡作用,探讨其对细胞增殖与凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:应用MTT实验、流式细胞仪检测细胞的增殖与周期;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果:EGCG明显抑制CNE-2细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用具有剂量-效应关系。EGCG抑制CNE-2细胞Bcl-2表达,诱导CNE-2细胞Bax、Caspase-3表达。结论:EGCG在体外具有抗鼻咽癌细胞的作用,此作用可能是通过调节细胞增殖与凋亡基因的表达实现的。     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞增殖的抑制作用

鼻咽癌是我国头颈部最常见的恶性肿瘤之一，病理类型以低分化鳞状细胞癌多见，临床上以放疗为主，晚期患者辅以化疗。与传统的化疗药物相比，天然抗肿瘤药物日益受到人们的关注。冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来的有效抗癌成分，其主要化学结构是一种四环二萜类化合物，有研究表明对食管癌、肝癌、结肠癌以及白血病等有一定的疗效。本研究通过体外实验探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长是否具有抑制作用，以期为临床应用提供理论依据。[第一段]     

增强型胸苷激酶基因表达载体的构建及其杀伤鼻咽癌细胞的实验研究

目的 探讨改良构建人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit promoter,hTERT)启动子及巨细胞病毒原核(cytomegalovirus,CMV)增强子联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(thymidine kinase,TK)的增强型表达载体在鼻咽癌细胞体内外实验中的靶向杀伤效应及体内应用的安全性评价.方法 以pGL3-basic空载体为模板,分别酶切连接hTERT启动子、CMV增强子及TK基因构建靶向性增强型表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTERTp-CMV(以hTERT单启动子调控TK基因表达载体作为对照组),转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞及用做对照组的人乳腺癌MCF-7细胞和端粒酶阴性的正常人脐静脉内皮细胞ECV-304,分别采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达差异、实时荧光定量PCR检测转染后TK基因mRNA表达差异、TeloChaser法检测上述细胞中的端粒酶活性、四甲基偶氮唑蓝(MTt)联合Boyden小室实验分析增强型载体对鼻咽癌细胞增殖及侵袭抑制的作用.将鼻咽癌细胞接种于裸鼠腋部皮下,构建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,研究增强型载体对裸鼠移植瘤的体内生长抑制作用及对全身的毒副反应情况.结果 ①成功改良构建hTERT/CMV双调控TK基因的增强型表达载体.②转染增强型载体组及单启动子载体组的鼻咽癌5-8F细胞均有绿色荧光表达,但前者荧光数量及强度均较后者强,对照组端粒酶阳性的乳腺癌细胞也有很强的荧光表达,而ECV-304细胞几乎无绿色荧光表达.实时荧光定量PCR结果显示,增强型载体组的TK基因mRNA表达量是单启动子组的2-5倍.③ TeloChaser法结果显示,两种肿瘤细胞(5-8F细胞、MCF-7细胞)端粒酶活性均为阳性,正常对照ECV-304细胞端粒酶活性为阴性.④MTT联合Boyden小室侵袭实验结果显示,增强型表达载体对5-8F细胞体外增殖及侵袭力均有明显抑制作用.相对细胞存活率为37.0%,较对照组明显低(P<0.01).⑤体内实验结果显示,增强型靶向表达载体对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长具有明显抑制作用,抑瘤率达56.3%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而裸鼠肝肾病理检查未发现明显损害.结论 以hTERT/CMV双调控机制介导TK基因的增强型表达载体能够高效、靶向杀伤鼻咽癌细胞及移植瘤,实验动物体内应用无明显毒副作用.