反义寡脱氧核苷酸抑制U937泡沫细胞血管内皮生长因子的表达(英文)

AIM:To study the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) induced by oxidized low density liprotein (ox-LDL) and the inhibitory effects of antisense oligodeoxynucleotide (asODN) on the levels of VEGF protein and mRNA in the U937 foam cells. METHODS: U937 cells were incubated with ox-LDL 80 mg/L for 48h, then ,the foam cells were treated with asODN (0,5,10, and 20μmol/L). The VEGF concentration in the media was determined by ELISA. The VEGF protein expression level in cells was measured by immuohistochemistry; the positive ratio detected by a morphometrical analysis system was used as the amount of the VEGF expression level. The VEGF mRNA level was examined by Northern blotting. RESULTS: After U937 cells were incubated with ox-LDL, VEGF expression level increased greatly both in the cells and in the media. asODN markeldy inhibited the increase of VEGF. After treatment with asODN 20μmol/L, the VEGF protein concentration in the media decreased by 45.0%, the VEGF positive ratio detected by immuohistochemistry in cells decreased by 64.9%, and the VEGF mRNA level decreased by 47.1%. CONCLUSION: The expression of VEGF in U937 foam cells was strong. asODN inhibited VEGF expression significantly in U937 foam cells in vitro.     

阿托伐他汀对oxLDL诱导泡沫细胞Lkn-1表达的影响

目的观察阿托伐他汀对OX-LDL诱导U937细胞形成泡沫细胞过程中Lkn-1表达的影响,探讨阿托伐他汀抗AS的作用机制。方法在由O．1μmol／L佛波脂（PMA）诱导分化人U937巨噬细胞中加入100mg／Lox—LDL及不同浓度（0．1、1、10μmol／L）的阿托伐他汀共同孵育24h,分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）和RT-PCR方法检测培养细胞上清中Lkn-1的表达变化。结果OX-LDL组较正常对照组Lkn-1的表达明显增加（P〈0．05）。给药各组较OX-LDL组Lkn-1明显减少（P〈0．05）。且随阿托伐他汀浓度的增加Lkn-1表达呈逐渐减少的趋势（P〈0．05）。结论阿托伐他汀能抑制ox—LDL诱导U937细胞系形成泡沫细胞过程炎症因子Lkn-1的表达和分泌,可能为其抗动脉粥样硬化的重要机制之一。     

白藜芦醇对U937细胞基质金属蛋白酶-9转录的抑制作用

目的:观察白藜芦醇对佛波酯诱导的U937细胞中基质金属蛋白酶-9活性的影响,并从蛋白、mRNA及核转录因子激活蛋白-1(AP-1)水平对其影响进行分析。方法:酶谱法测定U937细胞培养上清中MMP-9的活性;Western blot法考察MMP-9蛋白的生成;RT-PCR法检测MMP-9 mRNA的表达;电泳迁移率变动分析法(EMSA)研究核转录因子SP-1的活性。结果:PMA 10nmol/L 可显著诱导无血清培养的U937细胞中MMP-9活性(P<0.01);白藜芦醇在1和10 μmol/L浓度下可抑制 PMA 10 nmol/L诱导的MMP-9活性(P<0.05 和P<0.01);PMA 10 nmol/L可显著诱导U937细胞中MMP-9蛋白生成(P<0.01)和MMP-9 mRNA的表达(P<0.01),白藜芦醇在1、10μmol/L浓度下可抑制PMA 10 nmol/L诱导的MMP-9蛋白生成和MMP-9 mRNA的表达(P<0.05);白藜芦醇在10、1和0.1μmol/L浓度下可抑制PMA诱导的U937细胞中AP-1的活化。结论:白藜芦醇可有效地抑制PMA诱导的U937细胞中MMP-9的活性,其作用可能是通过抑制PMA诱导的U937细胞核转录因子AP-1活化,进而降低MMP-9 mRNA表达,减少MMP-9蛋白生成而实现的。     

白藜芦醇通过下调血管紧张素Ⅱ分泌抑制白血病U937细胞增殖

目的:观察白藜芦醇或血管紧张素Ⅱ对白血病U937细胞增殖作用,及白藜芦醇调节U937细胞分泌血管紧张素Ⅱ作用,探讨白藜芦醇抗癌作用机制。方法:人白血病U937细胞暴露于一定浓度梯度的白藜芦醇(12.5,25,50,100,200μmol.L-1)或血管紧张素Ⅱ(0.25,1,4,16nmol.L-1),U937细胞培养一段时间(12,24,36,48h)后,MTT法检测U937细胞增殖抑制率。在白藜芦醇作用下,用放射免疫法检测U937细胞培养上清液中血管紧张素Ⅱ含量。结果:白藜芦醇呈时间与浓度依赖性抑制U937细胞增殖;血管紧张素Ⅱ呈时间与浓度依赖性促进U937细胞增殖;白藜芦醇作用U937细胞,培养细胞上清液中血管紧张素Ⅱ含量明显降低,且与细胞增殖率呈正相关。结论:白藜芦醇有可能通过下调血管紧张素Ⅱ的分泌而抑制白血病细胞增殖,为临床治疗白血病提供试验依据。     

肿节风注射液对U937细胞共刺激分子表达的影响及其机制

目的 探讨肿节风注射液(Sarcandra glabra injection,SGI)对白血病U937细胞共刺激分子表达的影响及其作用机制。方法 用不同浓度(1.83,2.75,3.66,5.49,7.32 g·L^-1)的SGI处理白血病U937细胞48 h后,提取RNA,RT-PCR检测细胞的CD86和B7-H1 mRNA表达;免疫印迹法观察经SGI处理前后CD86、胞浆和核内NF-κB蛋白表达。结果 SGI处理后,B7-H1 mRNA表达降低;在SGI浓度为3.66~7.32 g·L^-1,CD86 mRNA表达升高;CD86蛋白含量随SGI处理浓度增加而升高;胞浆中的NF-κB蛋白含量下降,胞核中含量增加。结论 SGI在一定浓度下能诱导U937白血病细胞CD86表达,下调B7-H1的表达,其机制可能与核内NF-κB含量增加有关。     

银杏叶提取物对U937泡沫细胞IL-1β、TNF-α及IL-10表达的影响

本研究考察了氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的U937细胞致炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗炎细胞因子白细胞介素10(IL-10)及其受体(IL-10R)的蛋白及mRNA的表达，同时观察银杏叶提取物(GbE)对它们的作用。U937细胞用100 mg·L^-1 ox-LDL刺激24 h形成泡沫细胞，同时分别加入不同浓度的GbE(0.1, 1及10 μg·L^-1)共孵育，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-10R的蛋白或mRNA表达。U937泡沫细胞组IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-10R的蛋白或mRNA的表达较对照组显著增加(P<0.01)。GbE组IL-1β及TNF-α的蛋白和mRNA的表达水平明显降低，IL-10的蛋白、IL-10和IL-10R的mRNA表达水平明显提高，与U937泡沫细胞组相比差异显著(P<0.05, P<0.01)。GbE对U937泡沫细胞致炎细胞因子IL-1β及TNF-α表达的显著抑制作用，对抗炎细胞因子IL-10及其受体IL-10R表达的显著上调作用可能是其抗atherosclerosis(AS)的机制之一。     

口服热休克蛋白对动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞清道夫受体A和巨噬细胞CD36的影响

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种严重威胁人类健康和生命的心血管疾病。本研究旨在探讨口服热休克蛋白（HSP60）对AS大鼠主动脉平滑肌细胞清道夫受体A（scavenger receptor A,SR-A）和巨噬细胞CD36的影响。1材料与方法 1.1仪器试剂高脂饲料（山西医科大学实验动物中心提供）,维生素D3粉剂（饲料级）（浙江花园生物高科股份有限公司）,HSP60抗原（北京博奥生生物技术公司）,     

通关藤对U937细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的利用细胞凋亡基因芯片比较通关藤作用前后U937细胞基因表达谱的改变,探讨通关藤诱导U937细胞凋亡的可能机制。方法利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。提取经和未经50μL/mL通关藤处理的U937细胞的mRNA,逆转录为cDNA,然后用含89个目的基因的细胞凋亡基因芯片(APH-012)进行杂交,GEArray软件分析,通过比较得到通关藤处理前后表达有差异的基因。结果通关藤作用前后表达有差异的基因共36条(占芯片基因总数的44.4%),其中28条(28/89,31.5%)基因表达上调,8条(8/89,8.9%)基因表达下调。这些改变的基因主要包括肿瘤坏死因子配体和受体家族、bcl-2家族、caspase家族、P53家族成员。结论通关藤主要通过上调促凋亡基因及下调凋亡抑制基因来诱导U937细胞凋亡,其中死亡受体途径活化可能在凋亡过程中发挥重要作用。     

苦参碱对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察苦参碱（Matrine，Mat）对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法：采用体外培养技术，通过细胞形态、MTT实验、细胞周期测定观察Mat对U937细胞及HUVECs增殖的影响。结果：Mat（0．2～0．5mg／mL）作用24h后对U937细胞均有增殖抑制作用（P〈0．05或P〈0．01），在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性，其作用U937细胞48h的半数抑制浓度（IC50）约为0．4mg／mL，有效作用时间为1d；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用24、48、72h后对HUVECs增殖无明显抑制作用，亦无剂量和时间依赖性（P〉0．05）；Mat（0．2～0．5mg／mL）作用U937细胞48h后，S期细胞比例增加，细胞发生S期阻滞（P〈0．05或P〈0．01）；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用HUVECs 48h后，对细胞周期无明显影响（P〉0．05）。结论：一定浓度Mat对U937细胞具有增殖抑制作用，呈时间-剂量依赖关系。Mat在一定浓度和时间下不能抑制HUVECs增殖，对其细胞周期亦无明显影响。     

U937泡沫细胞中细胞间粘附分子—1的表达及欧芹素乙的抑制作用

目的：研究在人类单核细胞系U937泡沫细胞中,细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达水平,观测欧芹素乙（欧前胡内酯,imperatorin,IMP)对ICAM－1表达的抑制作用。方法：将U937细胞与80mg/L氧化低密度脂蛋白孵育48h,建立U937泡沫细胞模型,在培养基中预加入不同浓度的IMP（0,25,50,100μmol/L）,采用Western blotting检测ICAM－1的蛋白表达;采用Northern blotting检测ICAM－1的mRNA水平。结果：泡沫细胞中ICAM－1的表达显著高于正常U937细胞。ICAM－1的蛋白和mRNA水平分别是正常U937的15和10倍。经IMP50和100μmol/L预处理后,泡沫细胞中ICAM－1的高表达被显著抑制。当IMP浓度达到100μmol/L时,ICAM－1的蛋白水平降低了79％,mRNA水平降低了74％。结论：经氧化低密度脂蛋白孵育后,U937泡沫细胞中ICAM－1呈现高表达,IMP能显著抑制这种表达。     

NG701通过减少CD36 mRNA表达抑制泡沫细胞形成

目的:观察NG701对泡沫细胞形成及CD36mRNA表达的影响。方法:利用大鼠腹腔提取的巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白共培养得到巨噬细胞源性泡沫细胞,加入不同浓度的NG701,观察泡沫细胞内胆固醇含量的变化,并利用RT-PCR法对CD36mRNA表达情况进行检测。结果:NG701能够显著减少泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯的含量,降低CE/TC的值。并剂量依赖性的降低CD36mRNA表达。结论:NG701能通过减少CD36表达抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成。     

大黄素诱导白血病U937细胞凋亡及机制初探

目的研究中药大黄素(Emodin)对人髓系白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响,探讨bcl-2/bax比值变化和procaspase-3(CPP32)的激活在其中的作用。方法MTT法绘制细胞生长曲线;克隆形成试验观察大黄素对U937细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测、DNA倍体分析及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡;PCR及检测大黄素作用前后bcl-2/bax基因及蛋白表达的变化;流式细胞术测定大黄素作用前后caspase-3活性变化及检测CPP32的蛋白表达的变化。结果大黄素能抑制U937细胞增殖,作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为30μmol·L-1;线粒体膜电位、亚G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的检出证实大黄素能诱导U937细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用后G0/G1期细胞比例较对照组增高,S期比例下降,且与药物浓度呈正相关。大黄素作用后U937细胞bcl-2/bax基因及蛋白的表达水平比值下降,被激活的caspase-3阳性细胞增多,CPP32蛋白表达水平下降,并呈时效关系。结论大黄素能通过诱导凋亡来抑制U937细胞增殖,bcl-2/bax比值的降低及CPP32的活化可能参与了大黄素抑制U937细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

白花蛇舌草提取物诱导U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨中草药白花蛇舌草(HDW)醇提取物在体外对人白血病细胞株的增殖抑制和凋亡作用。方法以白血病U937细胞为研究对象,以不同浓度和不同时间HDW醇提取物为干预因素,用MTT法检测HDW醇提取物对U937细胞的抑制作用;用细胞形态学、流式细胞术、DNA电泳观察细胞凋亡情况。结果U937细胞经HDW醇提取物作用后,呈时间和剂量依懒性。光镜观察可见细胞膜完整、核碎裂、凋亡小体等形态学特征,DNA电泳呈现典型的梯形条带,流式细胞仪分析表明0.5,1,2,4 mg/mL的HDW醇提取物使U937细胞发生凋亡率分别为4.18%,56.96%,82.43%,56.41%。结论HDW醇提取物抗肿瘤效应强,同时抑制U937细胞的增殖及诱导细胞凋亡。     

白花蛇舌草提取物诱导U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨中草药白花蛇舌草(HDW)醇提取物在体外对人白血病细胞株的增殖抑制和凋亡作用。方法以白血病U937细胞为研究对象,以不同浓度和不同时间HDW醇提取物为干预因素,用MTT法检测HDW醇提取物对U937细胞的抑制作用;用细胞形态学、流式细胞术、DNA电泳观察细胞凋亡情况。结果U937细胞经HDW醇提取物作用后,呈时间和剂量依懒性。光镜观察可见细胞膜完整、核碎裂、凋亡小体等形态学特征,DNA电泳呈现典型的梯形条带,流式细胞仪分析表明0.5,1,2,4 mg/mL的HDW醇提取物使U937细胞发生凋亡率分别为4.18%,56.96%,82.43%,56.41%。结论HDW醇提取物抗肿瘤效应强,同时抑制U937细胞的增殖及诱导细胞凋亡。     

通关藤诱导白血病细胞U937,HL60细胞凋亡的实验研究

目的探讨通关藤抑制白血病细胞增殖作用及其机制。方法以不同浓度的通关藤提取物制剂处理白血病细胞U937、HL60,1~5 d,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测对细胞增殖的影响,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡程度,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3,PARP改变,以JC-1染色法检测线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平。结果通关藤提取物制剂呈时间和剂量依赖性抑制U937、HL60细胞增殖,50μL/mL时能明显降低线粒体跨膜电位(ΔΨm),活化caspase 3,剪切PARP,诱导细胞凋亡。结论通关藤提取物制剂对U937、HL60白血病细胞有显著的抑制和诱导凋亡作用,能通过降低线粒体跨膜电位途径触发白血病细胞凋亡。     

二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响,探讨TSG抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法体外培养经PMA处理过的U937细胞,在给予ox-LDL刺激的同时给予不同浓度TSG干预,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中SOD活力,TBA法测定培养液中MDA含量,蛋白免疫印迹法分析观察各组细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法分析观察各组细胞ICAM-1和VCAM-1的基因表达。结果模型组细胞液总SOD活力较对照组明显降低,TSG高剂量及阳性对照组总SOD活力较模型组明显升高(P<0.05);模型组细胞液MDA水平较对照组明显升高,TSG高中剂量及阳性对照组较模型组明显升高(P<0.05)。蛋白免疫印迹分析显示,模型组ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);TSG高剂量和辛伐他汀能明显降低ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达(P<0.05)。逆转录聚合酶链反应分析显示,模型组细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平较正常组明显升高(P<0.01);TSG高剂量和辛伐他汀较模型组能明显降低ICAM-1、VCAM-1mRNA水平(P<0.01)。结论TSG具有抗氧化、抑制单核巨噬细胞黏附分子分泌作用;其作用可能与其抗动脉粥样硬化有关。     

银杏内酯B对oxLDL刺激大鼠胸主动脉平滑肌细胞和U937细胞功能变化的作用

目的观察银杏内酯B对oxLDL或PAF引起的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及U937单核细胞趋化因子分泌的抑制作用。方法用³H-Tdr参入实验测定VSMC增殖。用ELISA和RT-PCR方法测定MCP-1和IL-8的蛋白和mRNA水平。Western blotting测定p65和IKB的蛋白量。放射受体配体结合实验观察oxLDL与PAF受体的结合。结果银杏内酯B呈剂量依赖性地抑制oxLDL诱导的VSMC增殖以及U937细胞MCP-1和IL-8分泌，并抑制oxLDL诱导的p65活化和IKB降解。并证实oxLDL可以抑制PAF与其在U937细胞上受体的结合。结论银杏内酯B在体外具有一定的抗oxLDL促进VSMC增殖及刺激单核细胞趋化因子分泌的作用。银杏内酯B抑制oxLDL的毒性作用可能部分通过抑制其与PAF受体的结合实现。     

冬凌草甲素增强U937细胞吞噬凋亡小体过程中ERK途径的调节作用

目的研究冬凌草甲素促进U937人淋巴瘤细胞分化的巨噬细胞吞噬凋亡小体的机制。方法光学显微镜下计数检测吞噬率,PKC活力检测盒测定PKC活力,吖啶橙染色,Hoechst 33258染色及W estern b lot法。结果酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂gen iste in和蛋白激酶C(PKC)广泛的抑制剂stauroporine均不同程度地抑制了冬凌草甲素诱导U937分化的巨噬细胞对凋亡小体的吞噬增强效果。2.7μmol.L-1的冬凌草甲素处理U937细胞后,时间依赖性地增加了PKC活力。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素的吞噬增强作用。免疫印迹结果显示冬凌草甲素作用U937细胞后,ERK磷酸化程度增加,而PD98059逆转了ERK磷酸化。结论冬凌草甲素增强U937细胞对凋亡小体的吞噬作用,其吞噬机制是通过激活PTK和PKC激酶,导致下游ERK途径活化,从而增强吞噬过程。     

脂多糖与干扰素α联用诱导白血病U937细胞凋亡及其机制

目的：探讨Toll样受体配体内毒素脂多糖（LPS）与干扰素(IFN)-α联用对白血病U937细胞凋亡的作用及其机制。方法：将200 μg/L的LPS和（或）2000 U/mL的IFN-α作用于U937细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 法检测作用48 h后U937细胞中caspase-8 mRNA的表达。结果：LPS与IFN-α联用较单用LPS、IFN-α能明显抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率（P<0.01）,且各药物组较对照组均有统计学意义（P<0.01）。LPS与IFN-α联用作用48h后,caspase-8mRNA的表达水平较IFN-α组、LPS组和对照组升高（P<0.01）。结论：LPS与IFN-α联用能有效抑制白血病细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与caspase-8的激活有关。     

WRN基因在氢醌致U937细胞DNA损伤中的作用

目的 WRN基因在氢醌(HQ)致U937细胞DNA损伤中的作用.方法 常规培养白血病细胞U937至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以10、20、40μmol/L HQ染毒24 h及48 h,以等体积的完全培养基培养的细胞组为完全空白对照组.采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用免疫印迹法检测WRN蛋白的相对表达量.结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效用随染毒浓度增加而增大,48 h比24 h的DNA损伤程度增加,呈时间—剂量依赖性(P＜0.05);(2)免疫印迹结果显示,HQ染毒24 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒48 h高剂量组分别与空白组、低剂量、中剂量中比较,WRN蛋白相对表达量呈降低的趋势(P＜0.05).结论 HQ诱导WRN蛋白表达下调影响U937细胞DNA损伤修复.