乳腺癌线粒体基因组控制区突变的研究

目的:通过测定乳腺癌线粒体基因组控制区突变的频率和分布,探讨其在肿瘤发生中的作用。方法:提取30例乳腺癌患者的癌及癌旁正常组织细胞总DNA,PCR扩增线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)基因组控制区D-loop区,单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)筛查突变标本,基因测序分析突变。结果:在30例乳腺癌组织中9例(30%)乳腺癌共发现14个新的突变位点,其中6例在多聚胞嘧啶区(D310区)的311~313位点出现了CC或CCC删除。结论:乳腺癌线粒体DNA显示了高频率的D-loop区的突变,D310区是点突变、插入/缺失突变的热点。D-loop区尤其是D310区的变化在肿瘤的形成中可能扮演了重要角色。     

修饰型微卫星不稳定性与散发结直肠癌p53基因点突变的相关性

目的 高频度微卫星不稳定性被认定为DNA错配修复缺陷的标志,但既往研究发现一个显著矛盾,即在高频度微卫星不稳定结直肠癌中,p53突变率较一般结直肠癌低.研究旨在确认该矛盾的存在并试图阐明其机制.方法 对180例散发结直肠癌采用高分辨率荧光标记微卫星分析法检测微卫星位点稳定性,PCR扩增直接测序检测p53突变.结果 微卫星不稳定性呈现修饰型和跳跃型两种变化.低频度微卫星不稳定性均呈现修饰型而无跳跃型变化;高频度微卫星不稳定性均检出了跳跃型变化,一部分也并存修饰型变化.微卫星不稳定与肿瘤部位及分化程度明显相关,p53突变与肿瘤分化明显相关.高频度微卫星不稳定肿瘤未检出p53突变,而低频度微卫星不稳定肿瘤p53突变率较高.结论 低频度微卫星不稳定性呈现的修饰型微卫星位点长度变化可能是DNA错配修复缺陷的表型;此表型与提高的碱基置换突变率有关.单纯DNA错配修复缺陷可能不足以导致微卫星不稳定性的跳跃型变化,高频度微卫星不稳定的真正原因仍有待阐明.     

食管鳞状细胞癌线粒体DNA微卫星不稳定性分析

[目的] 研究食管鳞状细胞癌线粒体DNA微卫星不稳定性特征,探讨线粒体DNA微卫星不稳定性与食管鳞状细胞癌的关系.[方法] 用长片段PCR扩增46例食管鳞状细胞癌组织及正常对照组织线粒体DNA,并以此为模板,PCR扩增其控制区D-loop区微卫星位点(C)n序列和(CA)n序列,运用PCR-SSCP方法检测PCR产物微卫星不稳定情况,分析线粒体微卫星不稳定与食管鳞状细胞癌的相互关系.[结果] 46例食管鳞状细胞癌中,mtMSI检出率为32.6%(15/46),其中13例于D-loop区(C)n序列检出MSI,5例于D-loop区(CA)m序列检出MSI,于(C)n和(CA)n序列同时检出者3例m正常组织中未检出mtMSI,mtMSI与临床病理参数无关.[结论] 线粒体DNA D-loopK(C)n序列微卫星不稳定性在食管鳞癌中是存在的,可能是食管癌发生过程中的早期事件,并可能在食管鳞状细胞癌发生中起重要作用.     

非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床意义研究

  目的   探讨非小细胞肺癌EGFR基因外显子突变与其临床病理特征的关系。   方法   利用ADx-ARMS?EGFR基因突变检测试剂盒,检测214例未接受过Gefitinib治疗的非小细胞肺癌患者组织中EGFR基因外显子18、19、20和21突变。   结果   非小细胞肺癌组织中EGFR基因总突变率为45.8%（98/214）,外显子18、19、20和21的突变率分别为0.93%（2/214）、22.0%（47/214）、2.3%（5/ 214）和20.6%（44/214）。另有2例19和21外显子双重突变。EGFR基因在肺腺癌组织中的总突变率为50.3%（93/185）明显高于肺鳞状细胞癌17.2%（5/29）（P=0.001）。EGFR基因在女性患者中的突变率57.0%（57/100）高于男性36.0%（41/114）（P=0.002）,EGFR基因在NSCLC淋巴结转移患者中的突变率（66.7%）显著高于无淋巴结转移患者（39.5%）（P < 0.05）,但EGFR基因突变率与肺癌患者的年龄、肿瘤分级和临床分期均无显著性差异（P>0.05）。   结论   中国肺癌尤其是肺腺癌患者存在EGFR基因的较高突变率,EGFR外显子19、21突变结合肺癌的临床病理特征有望成为评估TKI治疗非小细胞肺癌疗效的分子标志。      

微卫星状态与术后大肠癌患者的临床及病理特征相关性研究

  目的  分析微卫星状态与术后大肠癌患者的临床及病理特征的相关性。  方法  选取南京大学医学院附属鼓楼医院2014年6月至2017年6月病理诊断确诊的572例大肠癌患者的临床及病理资料,并对其手术切除标本进行微卫星状态与KRAS、NRAS突变状态的检测,同时采用免疫组织化学法检测组织中Ki-67、EGFR、MGMT及Lgr5的表达情况。按照微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）状态,分为高度微卫星不稳定（high-frequency MSI,MSI-H）大肠癌组与微卫星稳定状态（microsatellite stability,MSS）和低度微卫星不稳定（low-frequency MSI,MSI-L）大肠癌组,比较组间的临床、病理等资料的差异。  结果  572例大肠癌患者中40例（7.0%）为MSI-H,532例（93.0%）为MSS/MSI-L。与MSS/MSI-L组大肠癌病例相比MSI-H组具有以下特征:1）病灶常位于右半结肠;2）不同年龄段的发病比例相当;3）肿瘤分期较早,即Ⅰ/Ⅱ期分期比例较大（P=0.003）;4）淋巴结转移比例较低（P= 0.023）;5）形成癌结节比例较低（P=0.005）;6）KRAS第2外显子突变率较低（P=0.004）,NRAS未突变。两组在MGMT、EGFR、Lgr5、Ki-67免疫组织化学阳性率检测未见显著性差异。  结论  微卫星状态与大肠癌患者的年龄相关,与MSS/MSI-L的大肠癌患者相比,MSI-H的患者具有其特殊的临床病理特征,且NRAS及KRAS第2外显子的突变率低,MGMT甲基化率高,可为大肠癌的个体化诊断和治疗提供依据。      

胃癌中p14、p15、p16基因微卫星不稳定性的研究

 目的 对照检测伴有正常及高级别上皮内瘤变的胃腺癌组织中定位于染色体9p21区D9S166、D9S171、D9S941、D9S942和IFNA的微卫星不稳定性（MSI），探讨p14、p15和p16基因与胃癌发生发展的关系。方法 选择55例伴有正常及高级别上皮内瘤变的胃腺癌标本，应用手工显微切割、聚合酶链反应、高压凝胶电泳、硝酸银染色等技术, 对照分析正常、高级别上皮内瘤变和胃腺癌组织中9p21上的5个微卫星位点的MSI变化。结果 胃癌组织MSI总发生率为27 %（64／233），高级别上皮内瘤变MSI总发生率为18 %（42／233），正常组织中未发生MSI。胃癌组织中的MSI发生率显著高于高级别上皮内瘤变（P＜0.05）。在胃癌组织中，5个微卫星位点的MSI发生率依次为D9S171（45 %）、IFNA（41 %）、D9S941（22 %）、D9S166（16 %）、D9S942（15 %）；高级别上皮内瘤变组织中，依次为IFNA（22 %）、 D9S171（21 %）、D9S941（18 %）、D9S166（14 %）、D9S942（11 %）。在胃癌组织中D9S171位点的MSI发生率为45 %，在高级别上皮内瘤变的MSI发生率为21 %。两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌中染色体9p21区发生有高频率的MSI，MSI 可能为胃癌发生过程中的早期分子事件，并且在胃癌发展过程中持续发挥作用。p14、p15和p16基因可能与胃癌的发生发展相关。     

散发性结直肠癌PTEN基因突变与微卫星改变间的关系

背景与目的：研究散发性结直肠癌(Sporadic colorectal cancer,SCRC) 组织中抑癌基因PTEN突变高发区外显子5、7和8的突变与人类结肠癌基因不稳定性间的关系,以进一步研究结肠癌的分子遗传学发病机制。材料与方法：采用聚合酶链反应（PCR）、PCR结合单链构象多态性（PCR-SSCP）技术对68例散发性结直肠癌患者的癌组织及其癌旁组织的PTEN基因第5、7 和第8外显子突变情况和结直肠癌高度敏感的微卫星检测位点Bat25、Bat40及D18S21的改变情况进行检测分析。结果：微卫星改变阳性个体组中PTEN基因突变发生率为28.57%(4/ 14),与微卫星改变阴性个体组中PTEN基因突变发生率相比较,差异有统计学意义（χ2=8.06,P <0.01）。 结论：PTEN基因的突变在微卫星不稳定性结肠癌的发生发展中产生一定的作用。     

肾透明细胞癌线粒体犇犖犃非犇-犾狅狅狆区微卫星不稳定性与预后的关系

目的：线粒体 DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）是多种肿瘤的热点变异区域,其中线粒体微卫星不稳定性（mitochondrial microsatellite instability,mtMSI）与肿瘤相关。本研究探讨肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma, ccRCC）患者 mtDNA 非 D-环（displacement loop,D-loop）的微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）与 ccRCC 患者预后的关系,以寻找新的判断 ccRCC 预后的标志物。方法采集河北医科大学第四医院2002-08-01－2007-08-31随访资料完整的70例肾癌患者外周血,并提取基因组 DNA,运用聚合酶链反应（PCR）对 mtDNA 非 D-loop 区的3个微卫星灶5892-5919、8272-8289和9777-9782进行扩增并测序。将 mtDNA 非 D-loop 区的测序结果与线粒体文库中的剑桥序列（revised cambridge reference sequence,rCRS）进行比对,以判断该区域的微卫星状态,分析 mtMSI 和临床随访资料与 ccRCC 预后的潜在关系。生存曲线分析采用 Kaplan-Meier 方法,组间比较采用 Log-rank 检验,多因素分析采用 Cox比例风险回归模型。结果影响肾透明细胞癌患者5年生存率的单因素分析显示,＞55岁组患者的5年生存率低于≤55岁组,χ2＝135．213,P ＜0．001;男性组的5年生存率低于女性组,χ2＝7．850,P ＝0．005;肿瘤直径≥5 cm 组低于＜5 cm组,χ2＝43．202,P ＜0．001;透明细胞癌组低于非透明细胞癌组,χ2＝49．273,P ＜0．001;线粒体 DNA 8272-8289区域9 bp 正常组（CCCCCTCTACCCCCTCTA）高于9 bp 缺失组（CCCCCTCTA）,χ2＝39．216,P ＜0．001;5892-5919和9777-9782区域的 MSI 与患者5年生存率差异无统计学意义,χ2值分别为1．117和4．011,P 值分别为0．291和0．527。多因素分析显示,肿瘤直径大小、病理类型和8272-8289区域的 MSI 是影响 ccRCC 患者预后的独立危险因素。结论肿瘤直径大小、病理类型是影响 ccRCC 患者预后的独立危险因素。分析 ccRCC 患者 mtDNA 非 D-loop 区的 MSI,可判断 ccRCC 患者的预后,其中8272-8289区域的9 bp 缺失可作为判断 ccRCC 患者预后的一个新型独立的指标。     

恶性肿瘤患者血浆纤维蛋白原和D二聚体含量的测定及其临床意义

 目的 探讨恶性肿瘤患者治疗前后血浆纤维蛋白原（Fg）和血浆D二聚体（D-dimer，D2D）含量变化及其临床意义。方法 采用免疫比浊法检测30 例急性白血病（AL）和60 例实体瘤患者治疗前后Fg和D2D含量。结果　AL 患者化疗前血浆Fg，D2D 升高，与正常对照组比较差异有统计学意义（t = 4.85，P＜0.05；t = 5.86，P＜0.05） 。缓解后，Fg，D2D 含量比治疗前有所降低，但仍高于正常水平（t = 3.12，P＜0.05；t = 3.24，P＜0.05）。实施手术的60例实体瘤患者术前血浆Fg，D2D 显著升高，与正常对照组比较差异均有统计学意义（t = 4.25，P＜0.05；t =7.62，P＜0.05）。术后7 d血浆D2D 进一步升高，Fg略有降低。结论　AL 和实体瘤患者存在不同程度凝血和纤溶系统的异常，并随病情的好转而改善，血浆Fg，D2D 含量可作为恶性肿瘤病情进展、疗效观察及预后的指标。     

癌基因MDM2 mRNA在急性白血病的过度表达及其临床意义

 目的　探讨癌基因MDM2 mRNA在急性白血病（AL）中的过度表达及其临床意义。方法　采用RT-PCR法检测了100例初诊及复发或难治AL患者和20名健康对照者MDM2基因的表达。采用χ2检验、t检验及单因素方差分析对结果进行统计学分析,以比较各组MDM2基因阳性率及表达强度差异。结果　100例患者中58例（58 %）AL患者有较高水平的MDM2表达,明显高于对照组（P＜0.005）;不良预后组28例中19例（67.9 %）MDM2高表达,明显高于一般预后组[56例中19例MDM2高表达（33.9 %）]（P＜0.05）。结论　MDM2基因过度表达在AL的发病机制及不良预后中起了重要的作用。 结论：MDM2基因过度表达在AL的发病机制及不良预后中起了重要的作用。     

软癥散结合剂对食管癌移植瘤BAT-26及D3S1067微卫星不稳定性的影响

[目的]观察软瘸散结合剂对裸鼠人食管癌移植瘤的抑制作用,及其对瘤体BAT-26及D3S1067微卫星不稳定性（MSI）的影响。[方法]建立裸鼠皮下食管癌移植瘤模型,模型建成后随机分为5组：正常组、生理盐水组、软瘸散结合剂低、中、高剂量组。实验15d后剥取肿瘤并称重,计算抑瘤率。荧光PCR法检测移植瘤组织中BAT-26及D3S1067MSI的表达。[结果]低、中、高剂量软瘾散结合剂对裸鼠的移植瘤抑制率分别为27．11％、47．69％和35．56％。软瘾散结合剂中剂量组D3S1067 MSI发生率显著性低于生理盐水组（P〈0．05）。各组BAT-26位点MSI表达均很低,且无统计学差异。[结论]软瘕散结合剂能抑制人食管癌细胞移植瘤生长,这一作用可能与其下调肿瘤细胞D3S1067位点的微卫星不稳定性相关。     

Mitochondrial DNA alterations in thyroid cancer

BACKGROUND: Alterations in mitochondrial DNA have been identified in a number of solid tumor types, including gastric, head and neck, breast, colorectal, lung, and bladder carcinomas. Recently, a homopolymeric C stretch (D310) located within the noncoding D-loop of the mitochondrial genome was identified and described as a mutational hotspot. The objective of the present study was to examine a series of thyroid cancers for genetic alterations in this region. METHODS: Seventy-two (72) thyroid cancers were examined for alterations in D310 using PCR-based methods. The primary tumors tested included 35 papillary carcinomas, 18 medullary carcinomas, 9 anaplastic carcinomas, 9 follicular carcinomas, and 1 insular carcinoma. RESULTS: Alterations in D310 were observed in 2/35 papillary carcinomas (5.7%), 1/18 medullary carcinomas (5.6%), 1/9 anaplastic carcinomas (11.1%), and 1/9 follicular carcinomas (11.1%). Overall, the rate of alterations was 5/72 (6.9%). CONCLUSIONS: Mutations in the D310 region of the D-loop of mitochondrial DNA are found in thyroid tumors of varying histologic types and grades. This mutation rate is lower than the reported rate of alteration in tumors of epithelial origin, and shows no relationship to histologic grade.     

原发性肺癌线粒体DNA控制区微卫星不稳定性的研究

[目的]探讨线粒体DNA控制区微卫星不稳定性（mitochondrial microsatellite instability,mtMSI）与肺癌的相关性。[方法]采用PCR-SSCP（PCR single-stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP）和序列测定技术对37例肺癌组织及癌旁组织线粒体DNA控制区的3个微卫星位点进行了分析。[结果]37例肺癌样本中共检出mtMSI12例（32.4%）,肺癌mtMSI发生率与患者性别、年龄及肿瘤的病理类型无相关性（P〉0.05）,吸烟组（包括曾经吸烟者）与非吸烟组mtMSI发生率两者有显著差异（P〈0.05）。[结论]线粒体DNA控制区的遗传不稳定性在一些肺癌的发生中可能起一定作用。     

急性白血病7q杂合性缺失和微卫星不稳定性研究

目的探讨等位基因杂合性丢失及微卫星不稳定性在白血病发病过程中的作用及意义。方法采用PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术，选择位于7q多态微卫星标志序列引物探讨急性白血病等位基因杂合性丢失（LOH）现象。结果在D7S487位点LOH发生率为3．0％（1／33），D7S523发生率为6．1％（2／33），D7S515发生率为15．2（5／33），D7S636发生率为9．1％（3／33），在33例患者中无1例出现微卫星不稳定性（MSI）。20例正常对照标本中无1例出现LOH和MSI。结论7q区域可能存在肿瘤抑制基因（TSG）参与急性白血病的发生发展。     

急性白血病患者乳酸脱氢酶变化的临床意义

 目的　观察急性白血病（AL）患者血清乳酸脱氢酶（LDH）的变化,探讨其对AL疗效和预后判断的临床意义。方法　采用全自动生化分析仪检测156例AL患者[包括初治组63例、完全缓解（CR）组46例、复发组47例]的LDH值,常规反带方法分析AL染色体核型,并根据核型分成预后好、预后中等及预后差3组,分析LDH值与上述分组、患者白细胞数及白血病亚型的相关性。结果　初治组和复发组的AL患者血清LDH值[其中位数（P50）分别为399和265 U／L]明显高于CR组（P50 153 U／L）（P＜0.05）。LDH的增高与外周血白细胞数（rs＝0.604）及骨髓中白血病细胞比例（rs＝0.538）密切相关（均P＜0.01）。LDH与不同白血病亚型有关（L2、M4明显增高）（P＜0.01）。难治复发的AL患者初治时LDH值（P50 538 U／L）高于非难治复发组（P50 294 U／L）。具有不良预后染色体核型的AL患者初治时LDH（P50 778 U／L）明显高于预后良好组（P50 306 U／L）和预后中等组（P50 405 U／L）（P＜0.01）。结论　LDH在AL发病时明显升高,其升高程度与病期、亚型及恶性度有相关性,AL缓解期LDH可下降,LDH可作为AL诊治过程中判断病情、评估预后的参数。     

FHIT基因微卫星变异与宫颈癌关系的分析

[目的]探讨FHIT基因微卫星变异与宫颈癌的关系。[方法]选取FHIT基因的两个微卫星多态标记,采用聚合酶链反应法（PCR）对50例宫颈癌及40例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织进行杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定性（MI）的检测。[结果]在D3S1234位点上宫颈癌的LOH发生率为46%（23/50）,CIN的LOH发生率为40%（16/40）,宫颈癌与CIN的LOH发生率差异无统计学意义（P〉0.05）,宫颈癌的MI发生率为18%（9/50）,CIN的MI发生率为12.5%（5/40）,差异无统计学意义（P〉0.05）;在D3S4103位点上宫颈癌的LOH发生率为40%（20/50）,CIN的LOH发生率为37.5%（15/40）,差异无统计学意义（P〉0.05）,宫颈癌的MI发生率为14%（7/50）,CIN的MI发生率为7.5%（3/40）,差异无统计学意义。但宫颈癌在两位点上LOH和MI发生频率均高于CIN,且高级别CIN发生率高于低级别CIN。[结论]FHIT基因的变异发生在宫颈癌变的晚期;FHIT基因的LOH与MI对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。     

Clinical value of mitochondrial mutations in colorectal cancer.

PURPOSE: Prognostic factors that could select high-risk recurrence colorectal cancer patients and predict chemosensitivity are needed. Since mutations of mitochondrial DNA (mtDNA) have been described in different types of cancers and since they may play a role in response to anticancer agents, we investigated in a population-based series of colorectal cancer patients the clinical value of mtDNA mutations. PATIENTS AND METHODS: The displacement loop (D-loop) region of mtDNA was sequenced on a series of 365 patients recorded in the Digestive Cancer Registry of C?te-d'Or (France) between 1998 and 2000. Clinicopathologic characteristics were correlated to the presence of a D-loop mutation. Survival rates were compared with the log-rank test. A multivariate survival analysis was performed. RESULTS: D-loop mutations were found in 38.3% of the tumors. The 3-year survival rate was 53.5% in patients with D-loop mutation versus 62.1% in patients without (P = .05). After adjustment for age, stage, and microsatellite instability status, the relative risk of death in patients with D-loop mutation was 1.40 (95% CI, 1.02 to 1.93; P = .034) as compared with those without. In stage III colon cancers, adjuvant chemotherapy was beneficial only for patients without D-loop mutation (3-year survival, 78.3% v 45.4%, P < .02). In those with D-loop mutation who received adjuvant chemotherapy, the relative risk of death was 4.30 (95% CI, 1.23 to 15.00; P < .02). CONCLUSION: The D-loop region is a hotspot for somatic mutations in colorectal tumors. Moreover, presence of tumor D-loop mutation appears to be a factor of poor prognosis in colorectal patients and a factor of resistance to fluorouracil-based adjuvant chemotherapy in stage III colon cancers.