慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ表达的变化

目的 观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元磷酸化突触素Ⅰ(p-Synapsin Ⅰ)表达的变化.方法 雄性SD大鼠45只,体重150～180 g,月龄1～2月,随机分为5组(n=9):假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(M+K组).除S组外,所有大鼠均行鞘内置管,恢复3 d后鞘内给药,NS组给予生理盐水40 μl,M组给予吗啡20 μg,K组给予氯胺酮30μg,M+K组分别给予吗啡20μg及氯胺酮30 μg,2次/d,连续7 d.于给药前(T_0,基础状态)、给药后1、3、5、7 d及停药后1d(T_(1～5))时测定机械缩爪阈值(PWT)与热缩爪潜伏期(PWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3～6脊髓背角,测定p-Synapsin Ⅰ(Ser603)的表达.结果 与基础值比较,M组T_(1,2)时PWT升高,T_(4,5)时PWT降低,T1～3时PWL延长,T_5时PWL缩短,M+K组T_(1～5),时PWT升高,PWL延长(P＜0.05).与S组和NS组比较,M组T_(1,2)时PWT升高,T_(4,5)时PWT降低,T1～3时PWL延长,T_5时PWL缩短,M+K组T_(1～5),时PWT升高,PWL延长(P＜0.05),K组PWT和PWL差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,M+K组T_(2～5)时PWT升高,T_(3～5)时PWL延长(P＜0.05).与S组和NS组比较,M组和M+K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达上调(P＜0.05),K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,M+K组p-Synapsin Ⅰ(Ser603)表达下调(P＜0.05).结论 脊髓背角神经元Synapsin Ⅰ的磷酸化参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成,吗啡促进Synapsin Ⅰ磷酸化的部分机制与激活N-甲基-D-天冬氨酸受体有关.     

鞘内注射氯胺酮对神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑的影响

目的 探讨鞘内注射氯胺酮对神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑的影响.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8),置管后5 d,神经病理性痛组(NP组)、生理盐水对照组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(MK组)采用背根神经节慢性压迫法制备神经病理性痛模型,假手术组(S组)仅暴露L5椎间孔.背根神经节慢性压迫后1 d NS组鞘内注射0.9%生理盐水20止,M组和K组分别给予吗啡20μg或氯胺酮50μg,MK组给予吗啡20μg+氯胺酮50μg,1次/d,连续14 d.分别于给药前(基础状态)、给药1、3、5、7、9、11、14 d时测定机械缩足阈值(PWT)和热缩足潜伏期(PWL).最后1d给药后立即处死大鼠,取脊髓组织,其中4只采用免疫组织化学方法测定脊髓背角突触数目,另外4只用于测定脊髓背角突触后膜致密物厚度.结果 与S组比较,其余5组PWT降低,PWL缩短,NP组、NS组、M组和K组突触数目和突触后膜致密物厚度增加(P＜0.05);与NP组比较,M组、K组和MK组PWT升高,PWL延长,突触数目和突触后膜致密物厚度降低(P＜0.05);与M组比较,MK组PWT升高,PWL延长,突触数目和突触后膜致密物厚度降低(P＜0.05).结论 鞘内注射氯胺酮可抑制神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑.

Abstract：

Objective To investigate the effects of intrathecal (IT) ketamine on the synapsis remodeling in the spinal dorsal horn during devolopment of morphine tolerance in a rat model of neuropathic pain (NP). Methods Male SD rats weighing 200-250 g were used in this study. IT catheter was placed in the subarachnoid space according to Yaksh. Forty-eight SD rats in which IT catheter was successfully placed were randomly divided into 6groups (n=8 each): group sham operation (group S); group NP; group normal saline 20 μl IT(group NS);group morphine 20 μg IT (group M); group ketamine 50 μg IT (group K) and group morphine 20 μ g + ketamine 50 μg IT (group MK). NP was induced by compression of right L4,5 dorsal root ganglions with steel wire inserted through L4,5 intervertebral foramen in NP,M,K and MK groups. Normal saline or morphine and/or ketamine were injected IT once a day for consecutive 14 days. Paw withdrawal threshold (PWT) to mechanical stimulation and paw withdrawal latency (PWL) to a thermal nociceptive stimulus were measured on 0, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 days during the consecutive 14 days of administration. The animals were sacrificed after the final IT administration. The lumbar segment of the spinal cord was removed for determination of the number of synapsis in the spinal dorsal horn by immuno-histochemistry in 4 animals in each group and observation of synaptic structure remodeling using electron microscope in another 4 animals in each group. Results Compared with group S, PWT was significantly decreased and PWL was shortened in the other 5 groups, and the number of synapsis was significantly increased and the synaptic structure was thickened in NP, NS, M and K groups (P ＜ 0.05). Compared with group NP,PWT was significantly increased and PWL was prolonged in M, K and MK groups, and the number of synapsis was significantly decreased and the thickness of synaptic structure was significantly reduced in group MK ( P ＜ 0.05).Compared with group M, PWT was significantly increased, PWL was prolonged, the number of synapsis was significantly decreased and the thickness of synaptic structure was significantly reduced in group MK ( P ＜ 0.05). Conclusion IT ketamine can inhibit the synaptic remodeling in the spinal dorsal horn during development of morphine tolerance in a rat model of NP.     

关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸转运体3型的表达

目的观察谷氨酸转运体3型(EAAT3)在关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角表达的变化。方法36只健康雄性SD大鼠随机分为六组,每组6只,行鞘内置管。其中的四组制成佐剂性关节炎模型,分别经鞘内给予生理盐水(A组)、吗啡10μg/kg(B组)、吗啡20μg/kg(C组)、吗啡10μg/kg加纳洛酮10μg/kg(D组);另外两组非致炎大鼠分别经鞘内给予生理盐水(E组)、吗啡20μg/kg(F组)。各组给药均为每日2次,连续7d。动态检测大鼠50%缩爪阈值,以免疫组化方法检测脊髓背角EAAT3表达。结果B、C组关节炎大鼠在鞘内给予吗啡第7天形成较稳定的吗啡耐受,其脊髓背角EAAT3表达下降。结论脊髓EAAT3可能参与炎性痛大鼠慢性吗啡耐受的形成机制。     

人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠,体重280～320 g,采用右踝关节腔内注射完全弗氏佐剂的方法制备炎性痛模型.取模型制备成功的24只大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):生理盐水对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、人参皂甙Rg1组(G组)及吗啡复合人参皂甙Rg1组(MG组).致炎后3d时M组、G组及MG组分别鞘内注射吗啡10 μg、人参皂甙Rg1 100μg及吗啡10μg+人参皂甙Rg1 100 μg,C组给予等容量生理盐水,吗啡2次/d,人参皂甙Rg1 1次/d,连续7d.分别于致炎前(T1)、鞘内给药前1d(T2)、给药1、3、5、7 d(T3-6)时测定机械缩足阈值(PWT).最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3-5节段脊髓组织,采用TUNEL染色法测定细胞凋亡情况,计算脊髓背角细胞凋亡率.结果 与T1时比较,4组T2-6时PWT降低(P＜0.01);与T2时比较,M组T3.4时PWT升高,G组和MG组T3～6时PWT升高(P＜0.05);与C组比较,M组和MG组PWT和脊髓背角细胞凋亡率升高(P＜0.05),G组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,MG组PWT升高,脊髓背角细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 人参皂甙Rg1预防吗啡耐受形成的机制与降低炎性痛大鼠脊髓背角细胞凋亡有关.     

慢性吗啡耐受大鼠脊髓谷氨酸转运体及谷氨酸的变化

目的：利用慢性关节炎吗啡耐受大鼠模型,观察脊髓背角谷氨酸转运体（GT）水平以及谷氨酸浓度的变化,阐述阿片耐受的机制。方法：24只SD大鼠随机分为四组（n=6）。吗啡组（M组）鞘内注入20μg吗啡,连续7 d;盐水对照组（S组）鞘内注入20μL生理盐水连续7 d;吗啡纳络酮组（MN组）鞘内注入20μg吗啡、10μg纳络酮连续7 d;纳络酮组（N组）鞘内注入10μg纳络酮连续7 d。于注药后第7 d观察大鼠的行为学变化,并取脊髓腰4~5节段,应用免疫组化法和计算机图像分析技术观察大鼠脊髓背角谷氨酸转运体（EAAT1,EAAT3）表达变化,采用毛细管电泳法检测谷氨酸浓度变化。结果：与S组、MN组、N组相比,M组大鼠脊髓背角谷氨酸转运体表达下降（P〈0.05）;缩脚潜伏期减少（P〈0.05）,谷氨酸浓度升高（P〉0.05）。上述变化在S组、MN组、N组之间没有差异（P〉0.05）。结论：形成关节炎吗啡耐受的大鼠脊髓背角EAAT1、EAAT3表达减少,谷氨酸浓度升高。     

胞外信号调节激酶信号通路在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,体重300～350 g,随机分为3组(n=10).置管后7 d开始给药,对照组(C组)鞘内注射0.4%二甲基亚砜10μl,慢性吗啡耐受组(M组)给予吗啡10μg,ERK上游激酶抑制剂+吗啡组(P组)于给予吗啡前30 min给予丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂PD98059 10μg,2次/d,连续7 d.每天第1次给药后30 min及最后一次给药后1 d时测定甩尾潜伏期,并计算最大镇痛效应百分比.最后一次测定甩尾潜伏期后取脊髓L3-5节段,采用Western blot法和免疫荧光法测定脊髓背角μ受体和磷酸化ERK1/2(p-ERK/1/2)的表达水平.结果 M组和P组随着给药时间的延长,形成了吗啡耐受,而P组吗啡耐受程度轻于M组(P＜0.05).与C组比较,M组脊髓背角μ受体表达下调,p-ERK1/2表达上调(P＜0.01).与M组比较,P组脊髓背角μ受体表达上调,p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 ERK信号通路参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节CGRP、SP、BDNF表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 取鞘内置管成功的25只大鼠,于左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂50μl致炎,致炎后第4天开始鞘内给药.随机分为5组(n=5):A组鞘内给予生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,仅给药1 d;C组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;D组鞘内给药方法同C组,同时每日首次给药后用电针刺激仪电针大鼠阳陵泉穴和足三里穴,刺激强度2 mA,刺激频率2 Hz,波宽0.6ms,刺激时间30 min;E组电针刺激频率15Hz,波宽0.4 m,余同D组.于致炎前、鞘内给药前1 d、给药后1、2、3、4、5、6、7 d(T0-8)时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).给药7 d后取L4～L6背根神经节,采用RT-PCR法测定CGRP、SP、BDNF的mRNA表达.结果 与T0时比较,各组T1时PWL缩短(P＜0.05);与T1时比较,B组～E组T2时PWL延长(P＜0.05);与T2时比较,B组～E组T3-8时PWL缩短(P＜0.05).与A组比较,B组～E组PWL延长,C组CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与B组比较,C组～E组PWL延长(P＜0.05);与C组比较,D组和E组PWL延长,CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与D组比较,E组PWL缩短,CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05).结论 大鼠背根神经节内CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调参与了吗啡镇痛耐受的形成;电针治疗可抑制吗啡镇痛耐受的形成,机制可能与抑制背根神经节内CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达有关.     

急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节嘌呤受体P2X4表达的变化

目的 评价急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节嘌呤受体P2Y4 (P2X4R)表达的变化.方法 雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:生理盐水组(NS组,n=5)、急性吗啡耐受组(M组,n=5)和炎性痛组(F组,n=20).F组建立福尔马林炎性痛模型,M组和NS组鞘内注射吗啡或生理盐水,10 μg(10 μl)/次,2 h/次,连续6次,最后1次给药后2h处死取脊髓背角和背根神经节.NS组和M组分别于每次给药后(T1-6)测定热刺激缩足反射潜伏期(PWL),F组于致炎后4、7、10和14d时随机取5只大鼠测定PWL后处死取脊髓背角和背根神经节,采用免疫组化法检测P2X4R表达.结果 与基础值比较,F组致炎后4～14 d PWL明显降低,M组T1-5时PWL升高,T6时PWL差异无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,M组脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,F组在致炎后第4天脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,于第7天时P2X4R表达至峰值,第10天和第14天时P2X4R表达逐渐下调(P＜0.01).结论 急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,该变化可能与急性吗啡耐受和炎性痛的形成有关.     

电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的 探讨电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠25只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=5):生理盐水组(NS组)鞘内注射生理盐水10μl;吗啡组(M组)鞘内注射吗啡10 μg;错义寡核苷酸组(MO组)鞘内注射吗啡10μg+ ERK1/2错义寡核苷酸10μg;反义寡核苷酸组(AO组)鞘内注射吗啡10 μg+ERK1/2反义寡核苷酸10 μg;电针组(EA组)鞘内注射吗啡10 μg,同时每日首次给药后电针大鼠阳陵泉和足三里(频率2 Hz,波宽1 ms,电流强度3 mA,刺激时间30 min).各组注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于鞘内给药前、鞘内给药2、4、6d和鞘内给药结束后1 d(T0-4)测定机械痛阈.于T4时机械痛阈测定结束后,取脊髓背角组织,采用Western blot法测定大鼠ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 M组、MO组和AO组和EA组发生了吗啡耐受,EA组吗啡耐受程度最轻.与NS组比较,M组和MO组p-ERK1/2表达上调,AO组总ERK1/2表达下调(P＜0.05),EA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组和MO组比较,AO组p-ERK1/2和总ERK1/2表达下调,EA组p-ERK1/2表达下调(P＜0.05);与AO组比较,EA组p-ERK1/2和总ERK1/2表达上调(P＜0.05).结论 电针可抑制慢性吗啡给药所导致的脊髓背角ERK1/2活性升高,从而缓解吗啡耐受的形成.     

鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓NOS活性和NO产量的影响

目的 观察鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓一氧化氮(NO)产量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法 32只Wistar大鼠制成慢性坐骨神经痛模型并随机分为4组，每组8只：对照组(C组)，鞘内应用0．9％生理盐水10μl；氯胺酮组(K组)，鞘内应用氯胺酮50μg；吗啡组(M组)，鞘内应用吗啡20μg；吗啡加氯胺酮组(KM组)，鞘内应用吗啡10μg加氯胺酮25μg。每日给药1次，连续7d。用药后30min用辐射热刺痛仪测定热痛阈值(即右后肢抬足潜伏期)，结果用最大镇痛效应百分率(MPE％)表示。用药7d后动物处死，取腰段脊髓，用分光光度法测定脊髓NO产量和NOS活性。结果 M组和KM组用药后MPE明显高于C组和K组(P＜0．01)，但随着用药次数的增加，M组的MPE逐渐下降，在用药后第5、6、7天与KM组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。K组和C组在各时点比较差异亦有统计学意义(P＜0．01)。KM组脊髓NO产量和NOS活性均明显低于其他三组(P＜0．01或P＜0．05)。结论 鞘内应用吗啡和氯胺酮可对抗神经痛大鼠对辐射热的痛觉过敏反应，对防治中枢神经敏感化的进一步形成和发展有一定作用，具有临床应用潜能。     

脊髓胶质细胞在大鼠炎性痛形成中的作用

目的 评价脊髓胶质细胞在大鼠炎性痛形成中的作用.方法 清洁Ⅱ级成年雄性SD大鼠,体重180～220 g,取蛛网膜下腔置管成功的大鼠65只,随机分为5组(n=13),生理盐水组(NS组):右后肢踝关节外侧皮下注射NS 50μl;炎性痛组(IP组):采用右后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂50μl的方法制备炎性痛模型;氟代柠檬酸组(FC组):经蛛网膜下腔导管注射FC 1 nmol/10 μl,15 min后右后肢踝关节外侧皮下注射NS 50 μl;NS+IP组:经蛛网膜下腔导管注射NS 10 μl,15 min后制备炎性痛模型;FC+IP组:经蛛网膜下腔导管注射FC 1 nmol/10 μ,15 min后制备炎性痛模型.于模型制备前2 d(T_0)、皮下注射药物前(T_1)和注射药物后2、4、6、8、10、12、24、26 h(T_(2～9))时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).皮下注射药物后8 h时采用免疫组化法测定脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)和小胶质细胞标记物(OX-42)的表达水平.结果 与NS组比较,IP组和NS+IP组T_(3～9)时MWT和TWL降低,FC+IP组T_(3～9)时MWT降低,T_(8,9)时TWL降低,IP组、NS+EP组和FC+EP组脊髓GFAP和OX-42的表达水平均上调(P<0.05);与IP组比较,FC组T_(3～9)时MWT和TWL升高,FC+IP组T_(3～7)时MWT和TWL升高,2组脊髓GFAP和OX-42的表达水平均下调(P<0.05或0.01).结论 脊髓胶质细胞的活化参与了大鼠炎性痛的形成.     

氯胺酮预先给药对慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受的影响

目的 探讨氯胺酮预先给药对慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重180～200 g,随机分为3组(n=8):吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和氯胺酮+吗啡组(KM组).于左后足底皮下注射完全弗氏佐剂0.125 ml制备慢性炎性痛模型.注射完全弗氏佐剂后3 d,M组腹腔注射吗啡5 mg/kg,K组腹腔注射氯胺酮10 mg/kg,KM组腹腔注射氯胺酮10mg/kg,10 min后腹腔注射吗啡5 mg/kg,1次/d,连续3 d.于制模前(基础状态)、注射氯胺酮前(T1)、注射氯胺酮后15 min(T2)、30 min(T3)、60 min(T4)及120 min(T5)时测定机械痛阈和热痛阈.结果 与基础值比较,各组T1时机械痛阈及热痛阈均降低(P<0.01).第1次注射情况:与11时比较,M组和KM组T2-5时机械痛阈及热痛阈升高(P<0.05或0.01).第2次注射情况:与T1时比较,M组T2时机械痛阈升高(P<0.05),KM组T3-5时机械痛阈和热痛阈升高(P<0.05或0.01).第3次注射情况:与T1时比较,KM组T4时热痛周升高(P<0.05);与M组第3次注射时比较,KM组T3,5时机械痛阈及T3-5时热痛阈升高(P<0.05).结论 氯胺酮10 mg/kg预先给药可减轻慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受.     

脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 取鞘内置管成功的健康雄性大鼠24只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+蛋白酶体抑制剂MG-132组(M+ MG组)和MG-132组(MG组)于每天8:00和20:00分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10μg、吗啡10 μg+ MG-132 2.5μg、MG,-132 2.5 μg,连续7d.于鞘内注射前1 d(基础值)、鞘内注射第1、3、5和7天时测定大鼠甩尾潜伏期,以计算最大抗伤害效应百分比(MPAE).于最后一次鞘内注射结束后取5只大鼠,处死后取L3-5脊髓,采用Western blot法测定谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)和兴奋性氨基酸转运体1(EAAC1)的表达水平.结果 M组和M+MG组鞘内注射期间MPAE逐渐降低(P＜0.05);与NS组比较,M组和M+ MG组鞘内注射期间MPAE升高,M组脊髓GLAST和EAAC1表达下调(P＜0.05),M+ MG组脊髓GLAST和EAAC1表达差异无统计学意义,MG组上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,M+ MG组MPAE升高,脊髓GLAST和EAACI表达上调(P＜0.05或0.01).结论 脊髓蛋白酶体参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

吗啡耐受大鼠脊髓NR2B与mGluR5的相互作用

目的 评价吗啡耐受大鼠脊髓含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的相互作用.方法 雄性SD大鼠,体重220～280 g,取鞘内置管成功的大鼠16只,随机分为2组(n=8).对照组(C组)鞘内注射生理盐水10 μl;吗啡组(M组)鞘内注射吗啡10 μg(10 μl).每日给药2次,连续7 d.于给药前和给药后30 min采用热水缩尾法测定痛阈,计算最大镇痛效应百分比(MPE).最后1次痛阈测定结束后第2天,处死大鼠,取L4-5,脊髓背角,采用Western blot法测定NR2B和mGluRS蛋白表达水平;应用免疫共沉淀技术,NR2B抗体沉淀提取蛋白,Western blot法检测沉淀物.结果 与C组比较,给药1～5 d时M组MPE升高(P<0.01),给药7 d时差异无统计学意义(P>0.05).与C组比较,M组NR2B蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),mGluRS蛋白表达上调(P<0.01).免疫共沉淀法证实NR2B与mGluR5存在相互作用.结论 吗啡耐受大鼠脊髓NR2B与mGluR5存在相互作用.     

糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用

目的 评价糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠20只,体重300～350 g,随机分为4组(n=5):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)和吗啡+糖皮质激素受体激动剂组(MD组)分别于8:00和20:00鞘内注射生理盐水10μl、吗啡10μg、吗啡10μg+RU38486 2μg、吗啡10μg+地塞米松4μg,连续6 d.于每天8:00给药后30 min行甩尾实验,给药第7天处死大鼠,取L3～L5脊髓行TUNEL染色,光镜下观察脊髓背角神经元的凋亡情况,计算凋亡率.结果 地塞米松、RU38486分别对慢性吗啡耐受的形成起促进、抑制作用.与C组比较,M组和MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05);与M组比较,MR组脊髓背角神经元凋亡率降低,MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05).结论 糖皮质激素受体参与了慢性吗啡耐受形成中大鼠脊髓背角神经元凋亡的过程.