免疫印迹法检测高温作业工人血清中热应激蛋白70ku抗原和抗…

热应激蛋白７０ｋｕ（ＨＳＰ７０）是主要的热应激蛋白。用已纯化的ＨＳＰ７０抗原和已制备好的ＨＳＰ７０抗体，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性相结合的免疫印迹法检测１７名高温作业工人和１７名对照组人群血清中ＨＳＰ７０抗原和抗体。结果，与对照组相比，高温作业工人血清中ＨＡＰ７０含量增加，ＨＳＰ７０抗体阳性率为２３．５％。结果表明ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法用于检测工人血清     

某钢铁企业不同作业环境工人HSP70抗体水平的血清流行病学调查

探讨血清热应激蛋白70（HSP70）抗体作为工人长期经历某些环境应激后健康监测指标的可行性。采用Westernblot免疫印迹法检测接触不同有害作业环境因素和相对无有害接触的某钢铁企业795名职工的血清主要热应激蛋白70抗体水平。多种有害接触均可使工人血清HSP70抗体水平升高,特别是高温和粉尘的联合暴露,以及粉尘（石灰）暴露和噪声暴露工人血清HSP70抗体水平均明显高于对照组（P＜0．05）。毒物接触（锰）工人血清HSP50抗体也高于对照组,但差异无显著性（P＞0．05）。血清HSP70抗体水平有可能作为评价工人经历某些环境应激（如高温、粉尘、噪声）的血清学标记物或环境危害监测指标。     

高温和一氧化碳联合作用对应激反应的影响

采用mRNA斑点杂交和免疫蛋白印迹方法，探讨了高温、一氧化碳（CO）以及它们联合作用对大鼠肝脏热应激蛋白70ku（HSP70）mRNA、HSP70蛋白合成的影响；使用纯化的HSP27、HSP60、HSP70、热应激同源蛋白70ku（HSC70）、HSP89α和HSP89β，调查了接触高温、CO工人血浆中相应的抗体，也调查了这些工人中血浆游离氨基酸浓度。结果：在应激处理之后，大鼠肝脏HSP70mRNA、HSP70蛋白明显增加，高温和CO联合作用对HSP70mRNA、HSP70诱导表现为协同作用，但高温起主要作用。接触高温、CO工人血浆中HSP27和HSP70抗体阳性率明显增高（P＜0．05），但在CO组是最高的。尽管以前的调查结果表明这些工人摄入蛋白质不足，但他们血浆中游离氨基酸却趋向增高，特别是蛋氨酸、色氨酸，因为主要HSP70几乎不含这两种氨基酸。结果提示了这些工人所面临的主要问题是如何促进这些氨基酸的利用，减轻职业有害因素应激时正常蛋白的抑制。     

高温作业人群血浆热休克蛋白70抗体与心血管病关系的研究

目的：通过测定高温作业人群热休克蛋白70抗体（HSP70-Ab）水平,探讨HSP70-Ab与高温对职业人员心血管损伤程度的关系及其在心血管病发病机制中的作用。方法：采用蛋白质免疫印迹-酶联免疫吸附测定法（Western blot-ELISA）分别检测高温作业人员（实验组,62例）、行政后勤服务人员（对照组,43例）血浆中HSP70-Ab抗体滴度。结果：高温组HSP70-Ab阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：HSP70可能与高温作业人员心血管病的发病率有关,血浆HSP70-Ab可能是接触有害职业因素相关心血管病的生物学标志。     

热应激蛋白70抗体滴度作为二硫化碳接触的生物标记物的研究

目的 :了解二硫化碳接触工人的血清热应激蛋白 70 (HSP 70 )抗体滴度及探讨其作为CS2 接触的分子生物标记物的可行性。方法 :选择某化纤厂 79名工人 ,5 4名为接触组 ,2 5名为对照组。用Westernblot ELISA法对工人血清HSP 70抗体水平进行了检测。采用Logistic回归分析技术 ,分析了HSP 70抗体与CS2 接触之间的关系。结果 :抗体各滴度接触组工人血清HSP 70抗体阳性率明显高于对照组 ,有非常显著意义 (P <0 .0 1)。采用Logistic回归分析控制了因素的混杂作用后 ,这种联系仍然存在。结论 :血清HSP 70抗体滴度可反映CS2 的接触状况。以血清HSP 70抗体滴度作为分子生物学标记物 ,对CS2 接触者进行健康监护有重要意义。     

血浆热应激蛋白抗体与高血压及其新旧标准之间的关系

应用改进的酶联免疫反应技术测定血浆中热应激蛋白抗体的滴度，探讨血浆热应激蛋白（HSP）60、70、90α和90β抗体与高血压及新旧标准之间的关系。结果发现：随机180名人群中以18．67／12．00kPa为标准，高血压组血浆HSP70抗体1：10阳性率比对照组显著升高（P＜0．05）；以21．33／12．67kPa为标准，高血压组4种热应激蛋白抗体阳性比例也轻度升高，但无显著意义（P＞0．05）；按年龄分组，随年龄的增加，高血压比例和HSP70抗体阳性比例均增加，二者呈一定的相关性（r＝0．9284）。提示血浆HSP70抗体的产生可能参与了高血压的发病机理。以18．67／12．00kPa为标准，更能准确地划分高血压与正常血压。     

不同苯接触水平工人血浆热应激蛋白70抗体滴度与健康状况的关系研究

目的 找出不同苯接触水平工人血浆热应激蛋白70抗体滴度与工人健康状况之间的关系。方法 在某两厂选择高暴露工人30名、36名分别作为高暴露组和低暴露组，另选择不接触苯的工人40名作为对照组，采用酶联免疫吸附法测定其血浆热应激蛋白70抗体滴度，分析与其它健康指标之间的关系。结果 高暴露组血浆热应激蛋白70抗体1：20阳性率(26．7％)明显高于对照组(7．5％)，并且高暴露组中血浆抗体阳性者不良症状发生率、阳性体征检出率、脂质过氧化水平均明显高于抗体阴性者。结论 不同苯接触水平工人健康状况与其血浆热应激蛋白70抗体滴度有密切关系。     

噪声作业工人血浆热休克蛋白60、70抗体滴度分析

目的 探讨噪声作业工人血浆热休克蛋白(HSPs)60、70抗体滴度及其与累积噪声暴露量(CNE)的关系。方法 用Westem blot免疫印迹法对391名工人(噪声暴露207名，对照184名)的血浆HSP60、70抗体水平进行测定，用趋势X^2检验和多因素Logistic回归模型分析HSP60、70抗体水平与噪声暴露的关系。结果 除HSP60抗体滴度1：80外，其他滴度观察组HSP60、70抗体阳性率与对照组间差别均有显著性意义；HSP70抗体滴度为1：10阳性率随累积噪声暴露量(CNE)增大而升高；用Logistic回归分析控制了混杂因素的作用后，血浆HSP60、HSP70抗体检出率与CNE呈正相关关系。结论 血浆HSP60、70抗体滴度与工人CNE有密切的关系。     

噪声作业工人血浆热应激蛋白60抗体与高血压的关系研究

目的探讨噪声作业工人血浆热应激蛋白（HSP）60抗体与高血压之间的关系。方法用Western blot免疫印迹法测定噪声作业工人血浆HSP60抗体水平。用多因素Logistic回归模型分析HSP60抗体水平与高血压的关系。结果高血压组调查对象HSP60抗体阳性率为13．86％，血压正常组为6.55％，差别有显著性意义（P〈0．05）；在排除了常见高血压病危险因素的影响后，高血压与HSP60抗体之间仍然存在着较强联系（P〈0．05）。结论血浆HSP60抗体可能是噪声作业工人高血压的危险因素。     

轴索损伤后热休克蛋白70的变化对Tau蛋白表达的影响

目的观察大鼠轴索损伤后相应神经元内热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）和Tau蛋白表达的变化及热应激对其表达的影响,探讨HSP70神经保护作用的机制。方法将57只雄性Wistar大鼠分为正常对照组（A组,3只）、单纯视神经牵拉伤组（B组,18只）、单纯热应激处理组（C组,18只）和热应激预处理牵拉伤组（D组,18只）。对B组大鼠右侧视神经施予牵拉,对C组大鼠施予热应激处理,D组大鼠经热应激预处理24h后再对右侧视神经施予牵拉。B、C、D组分别在伤后4、8、16h,1、3、5d各处死3只动物。光镜下观察视神经、视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的形态学变化,免疫组化染色检测各组动物RGCs中HSP70、Tau蛋白的表达情况。结果牵拉伤后视神经轴索、RGCs的形态发生明显的病理变化,热应激预处理再致伤后上述病理改变有显著改善。单纯牵拉伤可使RGCs中HSP70、Tau蛋白的表达增强,单纯热应激处理后HSP70的表达增强、Tau蛋白的表达不受影响,热应激预处理后再致伤使HSP70的表达明显增强、高峰表达时间提前、维持时间延长,而Tau蛋白的表达明显减弱。结论Tau蛋白表达增强可能参与了迟发性轴索断裂及迟发性神经元凋亡;HSP70可能通过减轻Tau蛋白的异常聚集而发挥神经保护作用;增强内源性神经保护作用可能是弥漫性轴索损伤治疗的新途径。     

The Combined Effects of High Temperature and Carbon Monoxide on Heat Stress Response

ＴｈｅＣｏｍｂｉｎｅｄＥｆｆｅｃｔｓｏｆＨｉｇｈＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄＣａｒｂｏｎ　ＭｏｎｏｘｉｄｅｏｎＨｅａｔＳｔｒｅｓｓＲｅｓｐｏｎｓｅＷＵＴａｎｇ－ｃｈｕｎ（邬堂春）；ＨＥＨａｎ－ｚｈｅｎ（贺涵贞）；Ｔａｎｇｕａｙ；ＲｏｂｅｒｔＭ．；ＷＵ...     

细粒棘球蚴热休克蛋白70重组抗原的免疫学特性研究

目的鉴定纯化的重组细粒棘球蚴热休克蛋白70(EgHSP70)的免疫学特性。方法对已构建的阳性表达菌EgHSP70/pGEX-6P-1进行大量诱导表达后纯化,用EgHSP70和HSP70/GST作抗原制剂分别免疫小鼠,制备抗血清,通过ELISA法和Western blot法对重组EgHSP70的免疫学特性进行鉴定。结果ELISA法检测结果表明,原头蚴、囊液等天然抗原均可被免疫小鼠血清识别,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);Western blot显示免疫小鼠血清能够有效识别重组蛋白,同时重组EgHSP70也可被免疫兔血清识别。结论纯化后的重组蛋白EgHSP70具有较好的免疫原性和抗原性,可望作为包虫病疫苗候选分子,值得进一步深入研究。     

人淋巴细胞HSP70蛋白多态性双向电泳-Western blot分析

目的：将双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术用于HSF70蛋白多态性分析。方法：分离5名志愿者淋巴细胞中的蛋白质组成分,使用2种蛋白酶抑制剂Leupeptin和PMSF进行处理,进行双向电泳,其中第一次等电聚焦电泳时间延长至24h,电泳完毕,一面胶用于银染,另一面胶采用Western blot方法特异性鉴定其中的HSP70成分。结果：运用2-DE和Western blot,至少可以检测到5种以上HSP70亚型成员。结论：该方法可将HSP70各亚型充分分离。     

500kV变电站工人HSP70表达水平研究

目的探讨工频电磁场对500kV变电站工人外周血HSP70表达水平的影响,寻找可实际应用早期效应标记物。方法选择广东省内500kV变电站263名巡检人员作为暴露人群及抽取252名各变电站行政管理人员作为对照人群,分别抽取外周血5ml,用HSP70ELISA试剂盒进行测定。结果 500kV变电站工人与对照组的工频电场（t=12.455,P=0.000）、工频磁场（t=18.942,P=0.000）暴露比较差异有统计学意义。经校正后,变电站工人与对照人群外周血HSP70蛋白表达水平比较差异无统计学意义（F=0.624,P=0.430）。结论长期接触工频电磁场没有引起变电站工人HSP70表达水平增加。     

细粒棘球蚴重组HSP70基因的表达、纯化及免疫学鉴定

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)基因的重组质粒并原核表达、纯化及对其免疫特性进行鉴定。方法从重组质粒HSP70/pGEM-T中酶切HSP70目的片段,亚克隆入表达载体pET-28a,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)plysS进行融合表达,经His-band树脂纯化试剂盒小量纯化,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。结果成功构建Eg.HSP70/pET-28a/E.coli BL21基因工程菌株,诱导表达重组蛋白和纯化分离得到14kDaEg.HSP70均能被细粒棘球蚴天然抗原免疫的兔多克隆抗血清识别。结论初步证实该重组蛋白具有较好的抗原性。     

NY-ESO-1和热休克蛋白70融合基因的构建和原核表达

目的 构建热休克蛋白(HSP)70和肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1融合基因,并在大肠杆菌中诱导表达. 方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从人肝癌细胞株HepG2扩增HSP70基因,测序后插入pGEX-ESO1质粒中,构建NY-ESO-1与HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-ESO1-HSP70,IPTG诱导含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)表达目的蛋白,Western blot 鉴定蛋白的特异性. 结果 扩增得到长度为1 917 bp的人HSP70全长基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;获得pGEX-ESO1-HSP70融合基因原核表达质粒,经IPTG诱导,在BL21(DE3)中表达分子量约106 kD的融合蛋白(包括GST 26 kD,NY-ESO1 10 kD,HSP70 70 kD),Western blot检测该蛋白可与HSP70特异性结合. 结论 成功构建pGEX-ESO1-HSP70重组表达质粒,并获得高效表达的ESO1-HSP70融合蛋白,为HSP70-多肽疫苗在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础.     

高温高湿环境犬肢体火器伤后HSP70含量变化的实验研究

目的探讨高温高湿环境下肢体火器伤后热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）含量变化的规律。方法将１８只犬随机分为高温 高湿组、常温常湿组、热适应组,分别在致伤前及火器伤后ｌ、３、４、６、８、１０、１４、１８、２４ｈ检测外周血淋巴细胞和伤道骨骼 肌中ＨＳＰ７０含量。结果淋巴细胞中ＨＳＰ７０含量在高温高湿组的两个高峰分别为伤后４ｈ和ｌ４～ｌ８ｈ;热适应组３ｈ达 到高峰,持续至６ｈ;常温常湿组６ｈ达到高峰。常温常湿组伤道骨骼肌ＨＳＰ７０含量在伤后ｌ４～１８ｈ也出现一个增幅不 明显的高峰期。结论　高温高湿环境下肢体火器伤后ＨＳＰ７０含量的变化有其独特的规律。     

Study on Amino Acid Composition of HSP70 and the Level of Plasma Free Amino Acids of Workers with Long-term Exposure to Harmful factors

In order to know the practical value of heat stress protein 70 (HSP70) and to know the changes of plasma free amino acids of workers with the induction of HSP70 by harmful factors, the amino acid composition of major HSP, HSP70 purified from the heated cultured human leukemia cancer cell line K562, rabbit liver, rat liver and heart, and mouse liver with two-step procedures of DE52-cellulose ion exchange chromatography and affinity chromatography on ATP-agarose was examined. The level of plasma free amino acids of workers with long-term exposure to heat, carbon monoxide and the combined effect of both heat and car bon monoxide was also investigated. The results showed that the three richest amino acids in HSP70 of all origins were Gly, Glu and Asp, except that of rat heart which was rich in Gly, Phe and Glu. Additionally, Lys, Val, Leu and Ala were also found very rich in HSP70 of all origins. Compared with controls, the most of plasma free amino acids tended to increase and free methionine and tryptophan