HSP70-PCs的抗肿瘤作用

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）由Ritossa在1962年研究果蝇唾液腺染色体时首先发现,是一类广泛存在于自然界生物体内、具有重要生理功能且高度保守的蛋白质。在正常细胞中有少量表达,约占细胞总蛋白的5％-10％,当细胞处于高温、感染、创伤、缺氧及恶性肿瘤等应激状态下,     

热诱导培养角朊细胞表达HSP70

0　引言　热休克蛋白 (HSP)是一类当细胞受到各种有害因素刺激时合成增多的蛋白质 ,在细胞内蛋白的加工过程中具有重要作用 .我们对体外培养的角朊细胞进行热处理 ,然后观察细胞中 HSP70的表达情况 ,并对其意义进行初步探讨 .1　材料和方法1 .1　材料　角朊细胞无血清培养基 (KC- SFM) (GibcoBRL) ,鼠抗人 HSP70单克隆抗体 (Santa Cruz公司 ) ,生物素化羊抗鼠 Ig G及 SABC试剂盒 (武汉博士德生物工程有限公司 ) ,HSP70寡核苷酸探针 (上海生命技术公司合成 ) .1 .2　方法　取手术包皮 (本校西京医院门诊手术室提供 ) ,用2 .5 g·…     

肾癌HSP70-PC体外诱导DC成熟激活特异性抗肿瘤免疫的作用

目的研究肾癌细胞株中纯化的HSP70-PC体外诱导DC成熟及激活特异性抗肿瘤免疫的作用。方法采用亲和层析及离子交换层析法纯化肾癌细胞HSP70-PC，体外致敏DC，流式细胞仪检测DC表型变化，用DC体外诱导CTL产生，MTT法比较其对不同肿瘤细胞的杀伤活性。结果HSP70-PC和TNF-α均能使DC高表达分化相关抗原CD1a、CD83、HLA—DR，肾癌细胞中纯化的HSP70-PC致敏的DC体外诱导的CTL对肾癌细胞有较高的杀伤活性。结论肾癌细胞中纯化的HSP70-PC能有效地诱导DC成熟，并使其具有活化针对肾癌细胞的特异性CTL的能力。     

HSP70在香烟诱导人类气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

目的 研究热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)诱导人类支气管上皮细胞(16-HBE)黏液高分泌中的作用.方法 建立CSE刺激16-HBE诱导黏液蛋白基因(MUC5AC)高表达模型,给予HSP70单抗阻断HSP70生物活性;提取细胞mRNA、蛋白,采用RT-PCR及Western blot等方法检测炎性细胞因子(TNF-α)、HSP70及MUC5AC的表达.结果 CSE刺激后细胞MUC5AC、TNF-α、HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达较空白组(未予CSE刺激)增高(P<0.05).HSP70生物作用阻断后,MUC5AC和TNF-α mRNA的表达水平降低(P<0.05),同时表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化水平也降低(P<0.05).结论 CSE可诱导16-HBE细胞MUC5AC基因表达增高,是重要的气道黏液刺激因子.HSP70参与了气道黏液分泌,其机制可能是通过上调TNF-α表达量,从而激活EGFR通路导致MUC5AC表达增加.     

HSP70在大鼠内毒素血症肺损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）在内毒素血症大鼠肺损伤中的作用及可能机制。方法大鼠尾静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）复制内毒素血症模型。雌性Wistar大鼠24只，随机分为4组：对照组（C组）；内毒素血症组（E组）；Gln提前干预组（G1组）；Gln延迟干预组（G2组）。所有的动物于注射LPS之后6h放血处死，测定肺组织HSP70的表达、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）的含量，并用光镜观察大鼠肺组织的病理变化。结果E组同C组相比，肺组织HSP70表达明显增多（P〈0．01），SOD活性明显降低（P〈0．01），MDA含量增高（P〈0．05）。与E组相比，G1，G2组肺组织HSP70表达增多（P〈0．05），SOD活性增高（P〈0．05），MDA含量明显降低（P〈0．05）。G1与G2在肺组织HSP70表达。SOD活性，MDA含量等方面比较均无显著性差异（P〉0．05）。结论增加HSP70的表达对内毒素血症大鼠肺损伤可能起保护作用，作用机制可能与增加肺组织HSP70，提高机体应激时抗氧化能力有关，尚不能认为Gln提前干预与Gln延迟干预之间有差异。需要作进一步研究。     

新生猪缺氧缺血性脑病HSP70表达的实验研究

目的　应用新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)的动物模型 ,探讨HIE早期病变中心区与周边区HSP70表达及其动态演变规律 ,为HIE的早期诊断和预后评估提供有价值的临床参考信息。方法　 3日龄新生猪随机分为正常对照组、假手术组、缺氧缺血后 3,6 ,2 4h组。采用双侧颈总动脉结扎 ,混合气体 (3%氧气和 97%氮气 )吸入 30min建立动物模型。应用SP免疫组化法 ,检测HSP70阳性细胞计数 ,分析不同缺氧缺血组病变中心区和周边区HSP70表达之间的关系。结果　正常对照组和假手术组均无HSP70阳性细胞表达 ;缺氧缺血组于 3h出现HSP70阳性细胞 ,6h达高峰 ,之后逐渐下降。各组病灶中心区HSP70阳性细胞计数 3h与 6hP <0 0 5 ;6h与 2 4h组比较P <0 0 1;各组周边区HSP70阳性细胞计数比较P <0 0 1;病灶中心区和周边区HSP70表达比较P <0 0 1,差异均有显著性。结论　根据HIE病灶中心区和周边区HSP70阳性细胞表达的不同 ,提示HIE早期病灶周边区有可逆性脑组织区域存在 ,及时予以治疗可减少后遗症的发生。     

氯胺酮对内毒素诱导HSP70在肝组织表达的影响

目的　观察氯胺酮对感染性休克大鼠肝热休克蛋白 (HSP70 )表达的影响。方法　 64只大鼠随机分为对照组、内毒素组及氯胺酮组 ,于内毒素处理后 2小时及以内毒素组临终为时点测定肝 HSP70表达及肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)血浆水平 ,并观察各组生存时间。结果　内毒素明显提高肝 HSP70的表达及 TNF- α血浆水平(P<0 .0 5 ) ,氯胺酮组 HSP70表达明显上调 ,TNF- α明显减少 ,存活率明显升高 (P<0 .0 5 )。结论　氯胺酮能提高感染性休克大鼠肝 HSP70的表达 ,抑制内毒素刺激的 TNF- α的释放 ,提高大鼠存活率。     

HSP70对组织细胞的保护

1962年科学家Ritossa[1]在研究果蝇唾液腺的染色体中首次发现了热休克蛋白(heat shock protein,HSP).HSP是指所有生物细胞在应激原诱导下所产生的高度保守的一组蛋白质,根据其分子量大小可将HSP分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和sHSP等5个家族.     

HSP70蛋白在胃癌中的表达

目的 探讨热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)在人胃癌组织中的表达.方法 采用EnVision免疫组化分别检测HSP70在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌组织中表达.结果 HSP70在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌组织中的阳性率分别为58%、66%、72%,过表达率分别为8%、31%、57%.在胃癌组织和不典型增生胃黏膜中HSP70的表达明显高于正常胃黏膜中的表达(x2=12.16,P＜0.05).结论 HSP70在胃癌和不典型增生病变中呈现过度表达,可应于早期诊断和评估胃癌的发生,进一步研究其分子机制将为胃癌的治疗提供理论依据.     

HSP70对严重烧伤大鼠保护作用的实验研究

目的寻找对严重烧伤早期缺血缺氧性损伤的可行性保护途径.方法构建含HSP70的重组腺病毒载体,股静脉注射该腺病毒载体48 h后,检测大鼠严重烧伤后6 h其血清中内毒素及LDH、IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子水平.结果未转染组大鼠严重烧伤后6 h血清中内毒素及检测的细胞因子水平较正常对照组明显升高.静脉注射含HSP70重组腺病毒组大鼠严重烧伤后血清中上述指标的检测水平与未转染组比较明显降低,但仍显著高于正常对照组.结论静脉注射含HSP70重组腺病毒可减轻严重烧伤后大鼠的缺血缺氧性损伤,但不能完全阻断该损伤.     

热休克蛋白70在人挫伤脑组织中的表达及其意义

目的了解脑损伤后热休克蛋白70(HSP70)在人挫伤脑组织中的表达及其临床意义。方法对88例脑挫裂伤患者急症开颅行脑失活组织清除术和额极、颞极切除内减压术所得挫伤脑组织,采用免疫组化方法检测其HSP70的表达,并分析HSP70表达量与术前GCS评分、受伤时间、患者年龄、性别及预后的关系。结果HSP70与GCS评分明显相关,在死亡患者表达最少,而与患者年龄、性别、受伤时间无关。结论HSP70在GCS6～10分患者中的表达最强,提示其参与人脑挫伤后神经元的保护和修复过程。     

膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.     

重组腺病毒介导的HSP70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的防护作用

目的　研究重组腺病毒介导的热休克蛋白 70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法　将重组含人全长HSP70基因的腺病毒载体 (AdCMVHSP70 )转染体外培养的肠上皮细胞株IEC 6 ,检测转染细胞HSP70的基因表达水平。对照组 (转染空载体组 )、转染HSP70 2 4h、48h及72h组IEC 6细胞经缺氧再复氧处理后 ,分别对细胞的活力、凋亡及死亡水平进行检测分析。结果AdCMVHSP 70转染组细胞HSP70基因表达为阳性 ,对照组无表达。经缺氧再复氧处理后 ,AdCMVHSP70转染组细胞活力较对照组明显增强 (P <0 0 1 ) ,Annexin V Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少 (P<0 0 1 ) ,凋亡有一定水平的抑制 (P <0 0 5)。结论　重组腺病毒介导的HSP70转染可保护肠上皮细胞抵抗缺氧再复氧损伤 ,具有明确的细胞保护作用。而其具体保护机制可能与抑制细胞凋亡有关     

热休克蛋白70在鼠脑缺血/再灌注损伤的表达

目的:为了加深了解热休克蛋白70(HSP70)与脑缺血/再灌注损伤的关系,探讨HSP70的表达与细胞形态学变化。方法:24只SD大鼠通过左颈总动脉灌注生理盐水形成轻度左侧脑缺血。其中12只大鼠为单纯缺血组,另12只为缺血30分钟后再灌注30分钟组。两组切片分别进行免疫细胞化学和病理组织学观察。结果:我们发现脑缺血30分钟HSP70在顶叶皮层表达,分布在细胞膜,轴突和树突中。再灌注30分钟无HSP70表达。结论:局灶性脑缺血可诱导HSP70表达,恢复血循环无HSP70表达。     

心肺脑复苏后患者脑损害与热休克蛋白70的相关性

目的 探讨心肺脑复苏后患者发生脑损害与其自身的热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)的相关性.方法 随机选取湖北省中西医结合医院2013年6月-2015年2月收治的心肺脑复苏成功患者60例作为复苏组,另选60例健康人员作为对照组,对复苏组患者进行2h、5h、12h、24h、48h的动态HSP70测定,并对患者进行同一时间段颈静脉血氧饱和度(Oxygen saturation of jugular venous blood,SjvO2)的监测,分析HSP70与SjvO2的相关性.结果 进行心肺脑复苏的患者其HSP70的测得值在复苏后几小时即显著升高,于5h达到峰值,各个时间段的测定值均显著高于对照组(P＜0.01);复苏后2h、5h、12h、24h、48h这些时间段的HSP70值与患者的SjvO2值存在显著正相关(P＜0.01).患者清醒所需时间越短,其HSP70水平越高.结论 热休克蛋白70是具有细胞保护作用的应激蛋白,SjvO2值越低,HSP70值亦越低,脑损伤越重,其与心肺脑复苏后患者的脑损害程度存在相关性,可用于心跳骤停早期昏迷患者的脑损害估计.     

腺病毒介导的HSP70基因转染对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究热休克蛋白70(HSP70)基因转染对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad.EGFP)按不同感染倍数(MOI)感染体外心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(Ad.HSP70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,研究HSP70基因转染对心肌细胞的保护作用。结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞,随着MOI值升高,Ad.EGFP的感染效率和基因表达增强,在MOI值为50时,Ad.EGFP感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。免疫组化染色法结果显示,表达的HSP70主要分布于心肌细胞的胞质和胞核中;利用体外的缺氧/复氧损伤模拟在体的缺血/再灌注损伤,结果显示Ad.HSP70感染组的细胞活力、MT...     

异丙酚和异氟醚麻醉对颅脑损伤患者围术期血清热休克蛋白70水平的影响

目的 观察异丙酚和异氟醚麻醉对颅脑损伤患者围术期血清热休克蛋白70(HSP70)水平的影响.方法 选择行开颅血肿清除术治疗的中、重型急性颅脑损伤患者30例,按随机数字表法分为异丙酚组和异氟醚组,每组15例.麻醉诱导后前组患者静脉靶控输注异丙酚(效应室靶浓度为3～4μg/ml),后组患者吸入1.2%异氟醚,并且均间断静注维库溴铵、芬太尼维持麻醉深度.应用ELISA法测定患者麻醉诱导前、打开硬脑膜后1 h、术后24 h血液HSP70的含量,记录患者的术后苏醒时间和气管导管拔除时间.结果 2组患者麻醉诱导前、打开硬脑膜后1 h、术后24 h血液HSP70含量随时间的推移均增加,差异有统计学意义(P＜0.05),与异氟醚组比较,异丙酚组患者在打开硬脑膜后1 h和术后24 h时血液HSP70含量较高[(2.00±0.24)ng/ml,(2.19±0.26)ng/ml,t=2.080,P=0.047;(3.57±0.32)ng/ml,(3.81±0.31)ng/ml,t=2.086,P=0.046],术后苏醒进间和气管导管拔除时间较短[(7.7±2.8)min,(5.6±2.7)min,t=2.091,P=0.046;(8.9±3.9)min,(6.0±3.6)min,t=2.116,P=0.043)],差异有统计学意义,＜0.05).结论 静脉靶控输注异丙酚麻醉可维持颅脑损伤患者围术期适度的应激状态.

Abstract：

Objective To investigate the effect of propofol and isoflurane anesthesia on serum heat shock protein 70 ( HSP70 ) of perioperative patients with brain injury and compare the anesthetic effect of the two narcotic drugs. Methods 30 patients with medium or severe traumatic brain injury,treated by hematoma evacuation operation,were randomly divided into propofol ( n = 15 ) and isoflurane group ( n = 15 ). After anesthesia induction,propofol (target effect concentration of 3 ～ 4 μg/ml ) was intravenously injected and 1.2% isoflurane was inhalated into the patients of the 2 groups,respectively. In addition,vecuronium and fentany were intermittent intravenously injected into patients to maintain the depth of anesthesia. HSP70 in blood of patients were detected before anesthesia induction, 1 h after the dura was opened and 24 h after the operation by ELISA method. Recovery and tracheal extubation time of patients were recorded. Results HSP70 levels in blood of patients in the 2 groups were significantly increased compared with the former time point(P＜0.05 ). HSP70 content in propofol group was significantlyhigher at 1 h after the dura was opened( ( 2.00 ± 0. 24 ) ng/ml, ( 2.19 ± 0.26 ) ng/ml, t = 2. 080, P = 0.047 ) and 24 h after the operation( t=2.086, P=0.046) ,and recovery and tracheal extubation time was shorter compared with the isoflurane group(P＜0. 05). Conclusion Perioperative moderate stress,and early postoperative recovery and extubation can be maintained in patients with traumatic brain injury with profol anesthesia.     

乌司他丁对脓毒症急性肺损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的研究热休克蛋白(HSP)70在脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠中的表达变化及应用乌司他丁(UTI)进行干预,并探讨作用机制。方法 39只Wistar大鼠分为假手术(sham)组(9只)、ALI组(15只)和UTI组(15只)。大鼠盲肠结扎穿孔术后6、12、24 h分别处死大鼠。检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织形态学变化,应用实时荧光定量-聚合酶链反应(realtime-PCR)测定肺组织HSP70 mRNA的表达。结果与ALI组比较,UTI组PaO2显著改善(P<0.05),肺W/D比值降低(P<0.05),苏木精-伊红染色显示肺组织损伤减轻。各时间点肺组织HSP70 mRNA表达明显上升(P<0.05)。结论 HSP70在脓毒症ALI大鼠中的表达上调,UTI可能通过上调HSP70的表达改善脓毒症肺组织的损伤。     

去甲肾上腺素诱导热休克蛋白70保护心肌细胞的机制

目的探讨去甲肾上腺素预处理心肌细胞后诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的表达及其对心肌细胞保护作用机制。方法 Wistar大鼠乳鼠心肌细胞培养,分为3组:对照组:心肌培养3～5天未施加任何因素;缺氧/复氧组:心肌细胞培养3～5天后,模拟缺氧(加入饱和氮气pH 6.8 D-Hank’s液培养细胞)3 h,复氧(用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞)孵育6 h;去甲肾+缺氧/复氧组:模拟缺氧前30 min加入100 nmol/L去甲肾,其它同缺氧/复氧组。测定心肌HSP70和bcl-2以及相关的细胞凋亡指标。结果 HSP70和bcl-2的表达在去甲肾+缺氧/复氧组明显高于缺氧/复氧组,去甲肾+缺氧/复氧组的细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组。结论去甲肾上腺素预处理可能通过诱导心肌组织HSP70和bcl-2高表达,发挥其对供心的保护作用。     

五味子乙素诱导的HSP27和HSP70对小鼠肝损伤的保护作用

目的 观察五味子乙素(Sch B)诱导的HSP27和HSP70对小鼠肝损伤的保护作用.方法 采用扑热息痛(APAP)小鼠肝损伤模型,Sch B和槲皮素给药后检测血清转氨酶水平,Western blot法检测小鼠肝脏HSP27和HSP70的表达.结果 Sch B在APAP模型小鼠显著诱导HSP27和HSP70的表达及降低小鼠血清转氨酶水平,槲皮素可抑制上述作用.结论 Sch B可通过诱导小鼠肝脏HSP27和HSP70的表达而发挥保肝作用.