阴道毛滴虫对甲硝唑的耐药性分析

目的研究阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalisvirus)对甲硝唑的耐药性,探索共生人型支原体对其耐药性的影响。方法由医院提供阴道毛滴虫样品,对其进行体外培养,达到纯培养后提取虫株核酸,进行扩增及测序;制备浓度梯度板,测定甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度(minimum lethallon centration,MLC),并将人型支原体进行序列分析和清除后再测定DNA及MLC,并作前后比较。结果甲硝唑对34株阴道毛滴虫MLC范围为1~300μg/ml,其中敏感性较高的共有21株,9株敏感性略低,4株敏感性低;在人型支原体共生与甲硝唑MLC关系测定中,12株扩增出特异性产物(长度大小约为530bp),阳性率为35.3%。DNA检测阳性的12株阴道毛滴虫中,甲硝唑MLC在1~25μg/ml、50~70μg/ml和100~300μg/ml范围内的虫株共生率分别为14.3%、66.7%和75.0%。当MLC在300μg/ml时,有2个虫株呈现人型支原体共生现象,显示人型支原体共生状态与甲硝唑MLC之间存在一定的关联性;清除人型支原体后的甲硝唑MLC测定中,加入多西环素并对虫株进行传代培养。当传至3代后进行检测,12株阳性虫株中仅有7株未再检出人型支原体DNA,其中甲硝唑敏感株的4株MLC无变化,对甲硝唑耐药的3株MLC略有降低,但仍维持在较高水平。结论甲硝唑MLC不同的阴道毛滴虫虫株人型支原体的共生情况也不同。对甲硝唑耐药性越强的虫株人型支原体检出率越高,甲硝唑MLC为300μg/ml的虫株均查出人型支原体,表明阴道毛滴虫对甲硝唑的耐药性与人型支原体共生现象可能存在一定关系。     

利用PCR技术检测阴道毛滴虫体内的人型支原体

采用人型支原体16S rDNA的特异引物，对从广州市多所医院门诊患者分离到的28株阴道毛滴虫进行PCR检测，结果有12株感染了人型支原体，感染率为42.9%。这显示了阴道毛滴虫和人型支原体之间的共生关系在中国具有普遍性。     

阴道毛滴虫与人型支原体共生对AP33基因序列的影响

目的研究河南地区阴道毛滴虫临床分离株与人型支原体共生情况,并观察其共生对阴道毛滴虫AP33基因序列的影响。方法应用人型支原体及AP33基因的特异性引物对41株阴道毛滴虫临床分离株进行PCR扩增,扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测,对AP33基因扩增产物测序,测序结果与GenBank已知序列比对,绘制进化树。结果有34株阴道毛滴虫扩增出人型支原体的特异性片段,大小为334bp;所有虫株均扩增出AP33基因特异性片段,碱基序列相似性为96．8％～99．3％,有多个位点发生突变。进化树分析提示人型支原体的共生对AP33基因序列有一定影响。结论河南地区阴道毛滴虫临床分离株与人型支原体共生具有普遍性,其共生对阴道毛滴虫的基因序列有一定影响。     

阴道毛滴虫双链RNA病毒感染及其对甲硝唑耐药性的影响

目的调查河南地区阴道毛滴虫临床分离株阴道毛滴虫病毒感染情况,探索病毒感染对阴道毛滴虫甲硝唑耐药性的影响。方法 TYM(trypticase-yeast extract-maltose)无菌培养基培养阴道毛滴虫临床分离株,达到纯培养后提取虫体总核酸(DNA和RNA),进行1%琼脂糖凝胶电泳分析;连续稀释法测量每株虫体的甲硝唑最小致死浓度。结果对30株阴道毛滴虫总核酸进行电泳,其中6株有5.5 kb双链RNA病毒带,病毒感染率为20.0%。阴道毛滴虫病毒阴性组甲硝唑最小致死浓度为(24.27±20.899)μg/ml,病毒阳性组为(5.68±3.588)μg/ml,差异有统计学意义(t=2.143,P<0.05)。结论河南地区阴道毛滴虫临床分离株中检测到阴道毛滴虫病毒,无阴道毛滴虫病毒寄生的虫体易发生甲硝唑抵抗。     

甲硝唑不同剂型抗阴道毛滴虫的效果

甲硝唑原药、膜剂和栓剂对阴道毛滴虫有抑制和致死作用，其最低致死浓度均为２５ｍｇ／ｍｌ。阴道毛滴虫在１．２５×１０４～２×１０５个／ｍｌ范围内随着虫数增加，药物杀虫率升高，虫数少时虫体死亡率低。甲硝唑的３种剂型对阴道毛滴虫长期保存株和新分离株具有同等的杀虫效果。甲硝唑膜剂杀虫速度比甲硝唑原药和栓剂快，并具有药量少，杀虫效果高的优点。     

甲硝唑对阴道毛滴虫作用的流式细胞分析

目的 :了解甲硝唑对阴道毛滴虫的作用机制。方法 :应用流式细胞术 ( FCM)检测阴道毛滴虫的细胞周期和甲硝唑对该虫细胞周期的影响。结果 :对照组中 ,阴道毛滴虫细胞周期的时相分布为 G0 /G1期 70 .3%,S期 13.6% ,G2 M期 13.5%和自然死亡率为 2 .8%左右。各用药组虫体的细胞周期时相因药物浓度和随时间推移而改变。尤其给药 9h后 ( 2 0 μg/ml) ,虫体死亡率为4 6.6% ,与对照组相比有显著性差异 ( P<0 .0 1),G0 /G1期和 G2 M期虫体明显减少 ,S期出现积累。结论 :甲硝唑对阴道毛滴虫 G2 M期有抑制作用。     

甲硝唑酯体外抗阴道毛滴虫和阿米巴的效果

用本校药学院物理化学教研室试制的甲硝唑酯对体外培养的阴道毛滴虫和溶组织内阿米巴的作用进行观察。结果表明该药对阴道毛滴虫的致死浓度为２．６μｇ／ｍｌ，与甲硝唑的致死浓度２．０μｇ／ｍｌ相近；该药对溶组织内阿米巴的致死浓度为４０．０μｇ／ｍｌ，与甲硝唑相同。提示该药具有抗此两种原虫的作用。     

解脲支原体与人型支原体体外耐药性探讨

目的 探讨解脲支原体(UU)和人型支原体(Mh)的耐药性，指导临床合理用药。方法 采用体外培养的方法，对244例UU阳性、86例Mh阳性的泌尿生殖道感染患者，做药物敏感试验，检测UU与Mh对抗生素的耐药性。结果 对UU、Mh敏感的药物分别是普那霉素(90．91％)、交沙霉素(86．06％)、强力霉素(72．73％)。对红霉素、氧氟沙星、四环素的耐药率分别为52．42％、48．79％和45．15％。结论 对泌尿生殖道支原体(UU与Mh)感染可首选普那霉素、交沙霉素和强力霉素，不宜选用红霉素、氧氟沙星和四环素治疗。     

阴道毛滴虫病毒介导的EGFP在阴道毛滴虫细胞内的表达

目的研究阴道毛滴虫病毒(Trichomonas vaginalis virus,TVV)介导外源基因进入阴道毛滴虫体内表达的能力,探索TVV作为双链RNA病毒转染载体的可能性。方法根据TVV基因组的序列特征,用绿色荧光蛋白(EG-FP)编码基因替换TVV的全部或部分基因编码区,构建TVV与增强型EGFP编码基因的嵌合体pTVV-EGFP,其体外转录体经电穿孔方法转染携病毒阴道毛滴虫株,RT-PCR及SDS-PAGE方法检测EGFP的表达情况。结果电穿孔转染后培养的虫体在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,且续传15代后仍然存在;RT-PCR检测到EGFP的mRNA,SDS-PAGE检测到转染后虫体及培养上清中有分子质量单位为27 ku的蛋白,与已知EGFP的分子质量相符。结论TVV能成功介导外源性EGFP编码基因在阴道毛滴虫体内表达。     

治糜灵栓体外抗阴道毛滴虫的作用

目的 观察治糜灵栓体外杀灭阴道毛滴虫效果,为临床应用提供依据.方法 以实验药物治糜灵及对照药物甲硝唑配制大豆蛋白胨液体药物培养基,接种临床分离的阴道毛滴虫,培养24 h,观察药物的抗滴虫作用.结果 随着药物作用时间的延长和浓度的增加,滴虫死亡率升高,虫体裂解,密度下降.治糜灵对阴道毛滴虫的最低有效浓度为15 mg/ml.结论 治糜灵对阴道毛滴虫有较强的抑制作用.     

阴道毛滴虫病毒对虫体基因多态性的影响

目的分析阴道毛滴虫病毒对阴道毛滴虫临床分离株基因多态性的影响。方法用MGE-PCR扩增阴道毛滴虫病毒阳性株和病毒阴性株Tvmar1基因位置,应用软件MEGA 5.0构建系统进化树。结果阴道毛滴虫临床分离株之间的遗传差异明显,6株阴道毛滴虫病毒阳性株之间的遗传距离较近,分布在同一分支上。结论阴道毛滴虫病毒会对阴道毛滴虫的基因多态性产生影响。     

阴道毛滴虫标本染色方法的改进

作者在制作阴道毛滴虫染色标本中， 采用盖玻片推片， 在染液的配制、比例、 浓度、 pH值上作了适当的调整， 使虫体各部位着色清晰。此法简便、 快速、 染色效果好， 保存时间长。     

铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响

目的研究铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响。方法在TYM(trypticase-yeast extract-maltose)培养基(pH6.0)中,分别加入100、200、300和400μmol/L铁离子,并设不加铁离子组为对照组,阴道毛滴虫初始浓度为1×105/ml,于37℃定量纯培养。采用台盼蓝染色法镜下观察并计数活滴虫数和死滴虫数,绘制生长曲线和存活率曲线,并计算对数生长期内世代时间。通过连续稀释的方法测定在加入200μmol/L铁离子培养基和对照组培养基中甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度(minimal lethal concentration,MLC)。结果在加入100、200、300和400μmol/L铁离子的培养基中,阴道毛滴虫均于40h达最高密度,分别为2.9×106、3.2×106、3.1×106和2.8×106/ml,对照组阴道毛滴虫于54h达最高密度,为2.5×106/ml。400μmol/L铁离子组阴道毛滴虫的世代时间为(6.8±0.7)h,较100～300μmol/L铁离子组的世代时间[(4.8±0.3)、(4.8±0.2)和(5.0±0.4)h]延长(均P﹤0.05),而100～400μmol/L铁离子组的世代时间均短于对照组[(10.2±3.1)h](均P﹤0.05)。在加入200μmol/L铁离子的培养基中阴道毛滴虫的甲硝唑最小致死浓度为(23.44±11.56)μg/ml,显著低于对照组[(31.25±15.44)μg/ml](均P﹤0.05)。结论阴道毛滴虫在加入100～400μmol/L铁离子的TYM培养基中生长较快,且甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度较小。     

不同地域阴道毛滴虫品系的同工酶电泳分析

目的研究中国大陆不同地域(北京、河北唐山、河北承德、江西九江)阴道毛滴虫7个分离株的生物学类型。方法用聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)、同工酶染色、聚类分析方法进行分析。结果检测MDH、LDH、G-6-PD、PGI、PGM等5种酶的同工酶。在G-6-PD、PGI酶谱中,7株完全相同。在MDH、LDH酶谱中,北京1株、北京2株、九江3株完全相同,而与承德株、唐山株、九江1株、九江2株不同。在PGM酶谱中,北京1株、北京2株完全相同,而与承德株、唐山株、九江1株、九江2株、九江3株不同。并依酶谱绘制系统进化树。承德株、唐山株、九江1株、九江2株与北京1株、北京2株、九江3株大多数同工酶谱存在显著差异,九江3株与北京1株、北京2株在5个同工酶谱中存在微小差异。结论我国阴道毛滴虫虫株可能至少存在3种不同的生物学类型。     

阴道毛滴虫低温保存及其影响因素

观察不同浓度二甲亚砜(DMSO)和甘油、不同密度滴虫及不同冻存时间对阴道毛滴虫在-78℃低温保存的影响。阴道毛滴虫的最适冻存密度为(1～2)×106/ml。10%甘油和10%二甲亚砜的冻存效果最好,复苏存活率分别为38.0%和31.7%,两者差异无统计学意义(P0.05)。短期冻存(1～16周)的效果良好,均可在37℃重悬培养至对数生长期。