探讨罗格列酮对减轻环孢素A所致慢性肾毒性的作用及机制

目的 探讨罗格列酮(RGZ)对减轻环孢素A(CsA)所致慢性肾毒性的作用及机制.方法 选择健康、雄性SD大鼠,给予低盐饮食,饲养1周后,随机分成4组.(1)对照组(6只):除低盐饮食外,不给予任何处理;(2)岁格列酮组(6只):低盐饮食,并给予RGZ 5 mg·kg-1·d-1;(3)肾毒性模型组(8只):低盐饮食,并给予CsA 15 mg·kg-1·d-1;(4)治疗十预组(8只):低盐饮食,并给予CsA15 mg·kg-1·d-1和RGZ 5 mg·kg1·d-1.于实验的第2周,每组随机处死3只大鼠,实验的第5周,处死其余的大鼠.检测各组大鼠处死前的内生肌酐清除率(Ccr)和血清白蛋白(ALB)含量;观察各组肾组织的病理学变化;检测各组肾组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达水平.结果 实验第2周,肾毒性模型组和治疗干预组的Ccr及ALB含量均显著下降,第5周下降更为显著,与对照组和罗格列酮组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗干预组Ccr及ALB下降程度较肾毒性模型组轻,第5周时的Ccr与肾毒性模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05).实验第2周,肾毒性模犁组的肾问质可见大量炎症细胞浸润,第5周时,肾小管明显萎缩,肾小球硬化,问质纤维化程度加重;治疗十预组肾组织的损害程度明显较肾毒性模型组轻.肾毒性模型组和治疗十预组在实验的第2周和第5周MMP-9和TIMP-1的表达水平均较对照组和罗格列酮组明显增加(P<0.05),但治疗干预组MMP-9和TIMP-1的表达水平均显著低于同时段肾毒性模型组(P<0.05).结论 罗格列酮可显著降低CsA所致慢性肾毒性大鼠MMP-9和TIMP-1的表达水平,从而减轻CsA对肾脏的慢性毒性作用.     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白表达及肾纤维化的影响

目的 探讨不同剂量厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白( OPN)表达及小管间质纤维化的影响.方法 将63只8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=14)、30 mg/kg肼屈嗪干预组(DM+ Hyd组,n=12)、25mg·kg-1· d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb25组,n=10)、50 mg·kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb50组,n=9)和200 mg · kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb200组,n=11).糖尿病模型造模成功后4周,灌胃法给予相应剂量的肼屈嗪和厄贝沙坦.第12周末,观察各组大鼠24h尿白蛋白排泄率(UAER)、内生肌酐清除率(Ccr);PAS及Masson染色观察各组大鼠肾脏病理形态和胶原纤维沉积;ELISA法测定各组大鼠肾组织AngⅡ含量;实时定量PCR检测大鼠肾组织转化生长因子(TGF)β1、OPN mRNA的表达.结果 药物干预各组大鼠UAER、Ccr较DM组显著减少(均P＜ 0.05).DM组大鼠肾小球肥大,系膜基质增生,肾小球及小管间质有大量胶原纤维沉积;药物干预后,肾小球及肾小管上述病变减轻.DM组大鼠肾组织AngⅡ水平及TGF-β1、OPN mRNA表达均显著升高(均P＜0.05),给予肼屈嗪及厄贝沙坦干预后,AngⅡ、TGF-β1、OPN mRNA表达显著降低(均P＜0.05),且随着厄贝沙坦剂量的递增而递减.相关分析结果显示,DM组大鼠肾组织AngⅡ水平与OPN mRNA的表达呈正相关(r=0.74,P＜0.01).结论 厄贝沙坦通过减少肾脏局部AngⅡ水平,进而减少肾脏TGF-β1、OPN mRNA的表达,最终减轻小管间质纤维化,发挥肾脏保护作用,且这种保护作用具有剂量依赖性.     

罗格列酮抑制环孢素诱导的大鼠肾脏成纤维细胞基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶1组织抑制剂表达

目的 观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A(CsA)作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性保护作用的分子机制.方法 构建、筛选和扩增PPARγ基因的siRNA载体,并将载体转染至体外培养的NRK细胞.体外培养NRK细胞,随机分组.(1)对照组:不加处理;(2)RGZ组:加RGZ( 10 μmol/L);(3)CsA组:加CsA( 1.0 mg/L);(4)CsA+RGZ 组:同时加CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L);(5)CsA+RGZ+siRNA组:质粒pRNAT- U6.2/LentiPPARγ-236转染NRK细胞,然后同时加入CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L).培养24 h后,用实时荧光定量和RT-PCR法检测各组细胞中PPARγ、MMP-9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1) mRNA表达,用Western印迹法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 CsA明显上调PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达(均P＜0.05);RGZ与CsA合用后,PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达下降(均P＜0.05);应用PPARγ siRNA后,与RGZ+ CsA组相比,PPARγ mRNA表达显著下降(P＜0.05),MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达有所增加(均P＜ 0.05).CsA明显上调FN蛋白表达(P＜0.05);RGZ与CsA合用后,FN蛋白表达下降(P＜0.05);应用含PPARγ siRNA后,FN蛋白表达有所增加(P＜0.05).结论 罗格列酮可以显著减轻CsA诱导NRK细胞分泌的FN蛋白及MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达,构建的siRNA质粒转染NRK细胞,能够有效地阻断NRK中PPARγ mRNA的表达,部分阻断罗格列酮对CsA毒性的改善作用.     

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨缬沙坦在防治糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化( RIF)中的作用及其机制.方法 54只大鼠随机被分为对照组(C组)、DN模型组(D组)和缬沙坦治疗组(T组).D组和T组大鼠分别给予链脲菌素( STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型.造模后T组给予缬沙坦混悬液40 mg· kg-1·d-1,分别于实验第4周、第8周和第12周末测血糖、血浆白蛋白、Scr、尿蛋白.Masson染色观察RIF面积.免疫组化法检查肾组织缺氧诱导因子1α( HIF-1α)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达.实时荧光定量PCR测定其mRNA表达.结果 与C组比较,D组及T组大鼠24 h尿蛋白量、Scr均显著升高,肾组织RIF面积、HIF-1α、TIMP-1蛋白及mRNA表达均显著增加,血清白蛋白及肾组织中MMP-9蛋白及其mRNA表达均明显减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与同时间点D组比较,T组在实验第8周末、第12周末24h尿蛋白、Scr均显著降低,肾组织中RIF面积、HIF-1α、TIMP-1蛋白及其mRNA表达均显著减少,血清白蛋白及肾组织中MMP-9及其mRNA表达均显著增多,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 缬沙坦可能通过下调HIF-1α、TIMP-1表达,上调MMP-9表达,延缓肾间质纤维化.     

罗格列酮对环孢素A急性肾毒性时肾组织中骨调素及RANTES的影响

环孢素A(CsA)的肾毒性主要表现为早期的炎细胞浸润和晚期的肾间质纤维化.罗格列酮(RGZ)是一种噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂,除具有改善机体胰岛素抵抗等代谢调节作用外,还具有抗炎、影响细胞增殖和转型、抗脏器纤维化等作用,与肾脏疾病有着密切的关系~([1]).本实验通过观察RGZ对CsA所致急性肾毒性肾组织中炎性反应趋化因子骨调素(OPN)及调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)的下调作用,进一步证实RGZ在早期肾脏疾病中的抗炎作用.     

安博维对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾间质骨桥蛋白表达及巨噬细胞浸润的影响

目的①观察安博维(厄贝沙坦)干预治疗后环孢素A(CsA)所致慢性肾毒性大鼠肾脏病理变化。②观察安博维对CsA慢性肾毒性大鼠模型肾骨桥蛋白(OPN)表达及间质ED1阳性巨噬细胞浸润的影响,以探讨安博维防护CsA慢性肾毒性的可能机制。方法给进低盐饮食SD大鼠灌胃20mg·(kg·d)-1剂量的CsA制作大鼠CsA肾毒模型,同时以10mg·(kg·d)-1剂量的安博维胃饲以预防肾毒性。于用药后第1、2、4周末时分别处死各组大鼠,免疫组织化学法测定OPN、ED1的表达,用HE染色观察肾脏病理变化。结果安博维能明显改善CsA肾中毒大鼠的一般情况,减少肾小管上皮细胞空泡变性和萎缩,减少间质炎细胞浸润及间质纤维化。免疫组化结果显示模型组肾小管-间质OPN与ED1表达较对照组增加(p<0.05);在试验各时间点,安博维组大鼠肾小管-间质ED-1阳性巨噬细胞数量及OPN表达较模型组显著减少(p<0.05);OPN仍高于对照组((p<0.05),ED-1阳性巨噬细胞数量在第1、2周末与对照组无差异(p>0.05),但在第4周末高于对照组(p<0.05)。结论安博维能减轻CsA慢性肾毒性的肾脏病理损伤,这一防治作用可能与其减少ED-1阳性巨噬细胞浸润及下调OPN表达有关。     

钙离子通道阻滞剂在预防他克莫司肾毒性中的作用

目的 观察他克莫司(FK506)肾毒性模型中钙离子代谢的变化情况,探讨钙离子通道阻滞剂地尔硫草(Dil)对FK506肾毒性的预防作用.方法 按公式将肾移植术后FK506、环孢素(CsA)和Dil的首剂治疗剂量换算成大鼠的治疗剂量.雄性SD大鼠24只随机分成对照组、CsA组(25 mg·kg-1·d-1)、FK506组(0.8 mg·kg-1·d-1)和FK506加Dil组(0.8 mg·kg-1·d-1及8 mg·kg-1·d-1),每组6只,用药4周后建立各组大鼠肾毒性模型.观察各组大鼠SCr、血电解质、肾组织的病理改变(HE染色)、电子显微镜F肾脏细胞内超微结构的改变.结果 CsA组和FK506组大鼠SCr值分别为(36.00±2.61)和(34.17±4.54)μmol/L,均高于FK506加Dil组和对照组[(28.50±2.07)和(29.17±3.43)μmol/L,P＜0.05].CsA组和FK506组大鼠血钙浓度分别为(2.00±0.04)和(2.05_4-0.04)mmol/L,均低于FK506加Dil组和对照组(P＜0.05).CsA组和FK506组均可观察到肾小管细胞轻微肿胀及空泡变性、线粒体肿胀及空泡化等病理改变.与FK506组和CsA组相比,FK506加Dil组上述各项指标的变化明显减轻或接近正常.结论 钙离子代谢紊乱可能介导了FK506引起的肾毒性,Dil可用于预防FK506的肾毒性.     

不同剂量寻骨风致大鼠慢性肾间质纤维化初探

目的:观察马兜铃科中药寻骨风水煎剂引起大鼠慢性肾间质纤维化与剂量的关系并探讨其发病机制。方法:将雌性Wister大鼠随机分5组:(1)正常对照组(NC组,n=8):给予蒸馏水2 ml/d灌胃;(2)马兜铃酸对照组(AA组,n=16):给予马兜铃酸制剂5 mg.kg-1.d-1腹腔注射;(3)寻骨风高剂量组(XGFH组,n=16):给予寻骨风水煎液27 g.kg-1.d-1灌胃;(4)寻骨风中剂量组(XGFM组,n=16):给予寻骨风水煎液13.5 g.kg-1.d-1灌胃;(5)寻骨风低剂量组(XGFL组,n=16):给予寻骨风水煎液2.7 g.kg-1.d-1灌胃。各组在45 d、90 d时分别处死8只大鼠,处死前测体重、采血、留尿,做肾功能,尿潜血、MA/Cr、TF/Cr及尿NAG/Cr检查,处死后测肾重,留取肾组织行HE、PAS染色,做LN、FN、TGF-β1、MMP-2、TIMP-2免疫组化检查。结果:90 d后AA组、XGFH组、XGFM组大鼠体重和肾重较NC组均有下降(P<0.01或P<0.05),AA组、XGFH组、XGFM组MA/Cr、TF/Cr、NAG/Cr、Scr和BUN明显高于NC组(P<0.05或P<0.01)。光镜检查XGFH组用药45 d后,出现肾小管上皮细胞肿胀,管腔缩小,小管间质增生;AA组、XGFM组肾小管上皮细胞发生空泡变性;XGFH组用药90 d后,肾小管上皮细胞坏死,肾小管萎缩,肾间质出现灶性纤维化。AA组、XGFM组肾脏近曲小管上皮细胞明显肿胀,管腔变小,小管间质增生,部分发生纤维化;XGFL组肾组织未见明显损害。免疫组化显示AA组、XGFH组、XGFM组肾小管和间质上MMP-2的表达下调,而TGF-β1、TIMP-2、LN、FN的阳性表达较NC组明显上调(P<0.05)。结论:XGFH组、XGFM组和AA组均导致了实验大鼠肾小管间质的损害,而且病变的程度与用药剂量相关,XGFH组肾小管间质损害程度最严重,90 d内造成了大鼠肾间质纤维化,同时我们证实了慢性马兜铃酸肾病大鼠肾间质纤维化的发生同致纤维化因子TGF-β1和抑制细胞外基质降解因子TIMP-2的过度表达导致FN、LN胶原纤维在肾间质的过度增殖有关。     

粉防己碱和环孢素A在大鼠心脏移植中的协同作用

目的 研究粉防己碱(Tetrandrine,Tet)和低剂量环孢素A(CsA)联合使用对同种异基因大鼠移植心脏存活时间的影响.方法 分别以近交系雄性Lewis(RT11)大鼠和BN(RT1n)大鼠为供、受者,将接受心脏移植后的BN大鼠随机分为5组,术后开始连续每天腹腔注射给药.A组:给予生理盐水1 ml/d;B组:给予CsA 3.2 mg·kg-1·d-1;C组:给予Tet 40 mg·kg-1·d-1;D组:给予Tet 40 mg·kg-1·d-1和CsA 3.2 mg·kg-1·d-1;E组:给予CsA 6 mg·kg-1·d-1.观察移植心存活时间并进行病理检查,测定受者外周血CD3+CD25+ T淋巴细胞数量、体外单向混合淋巴细胞反应以及受者血清白细胞介素2(IL-2)浓度等.结果 A、B、C、D、E组大鼠的移植心平均存活分别为(7.2±0.45)d、(10.8±1.48)d、(9±1.0)d、(15.6±3.05)d和(15.2±2.28)d,D、E组移植心存活时间比A组显著延长(P＜0.05),术后6 d D组外周血CD3+CD25+ T淋巴细胞数量、单向混合淋巴细胞反应刺激指数、血清 IL-2浓度较A组显著降低(P＜0.05),D组移植心排斥反应程度最轻.结论 Tet和低剂量CsA联合应用能显著延长同种异基因大鼠移植心的存活时间,其机理可能与抑制反应性T淋巴细胞活化以及抑制外周血清IL-2产生等有关.     

螺内酯对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的观察螺内酯对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾皮质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)介导的肾间质纤维化的影响。方法UUO大鼠给予螺内酯20mg·kg-1·d-1灌胃,用免疫组化及RT-PCR的方法检测术后7d、14d、21d的TIMP-1表达量并观察肾脏病理改变。结果与假手术组相比,UUO组及螺内酯组的TIMP-1mRNA和TIMP-1蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),且UUO组显著高于螺内酯组(P<0.01)。结论螺内酯可通过下调TIMP-1减轻UUO术后肾组织间质纤维化。     

川芎嗪、泼尼松和贝那普利对马兜铃酸致大鼠急性肾小管坏死的干预作用比较

目的 建立关木通所含马兜铃酸(AA)致大鼠急性肾小管坏死(ATN)实验动物模型，并观察和比较川芎嗪、泼尼松和贝那普利对大鼠肾小管的保护作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为6组，每组12只。正常组予蒸馏水3 ml/d灌胃；模型组、泼尼松组、贝那普利组、川芎嗪Ⅰ组和川芎嗪Ⅱ组均先予关木通水煎剂(含生药2 g/ml、AA 0.54 mg/ml、AA-Ⅰ 0.46 mg/ml)5 g&#8226;kg-1&#8226;d-1 灌胃 60 d，再予10 g&#8226;kg-1&#8226;d-1 灌胃30 d。灌关木通2 h后，正常组与模型组予生理盐水灌胃，其余4组分别予泼尼松5 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1、贝那普利1.7 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1、川芎嗪50 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1和川芎嗪150 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1 灌胃。于90 d后进行肾组织病理检查。 结果 正常组为正常肾组织。模型组光镜可见近曲肾小管上皮细胞成片状空泡变性，刷状缘紊乱、消失，管腔内可见脱落的上皮细胞，肾小管基膜(TBM)裸露、部分断裂、个别增厚及萎缩；肾间质轻度水肿、多灶性炎细胞浸润；肾小球系膜细胞局灶节段性轻、中度增生和系膜基质轻度增多；部分小叶间动脉管壁增厚。其余4组与模型组比较，病变均明显减轻，表现为近曲肾小管上皮细胞空泡变性明显减少，少部分刷状缘紊乱、消失，个别管腔内可见脱落的上皮细胞，个别TBM断裂及增厚减轻；肾间质炎细胞减少或消失。模型组电镜可见近曲小管上皮细胞空泡变性和脂肪变性，线粒体肿胀，细胞器减少，细胞核碎裂，细胞凋亡；间质中可见炎细胞浸润(吞噬细胞与淋巴细胞)和淋巴细胞浸入到上皮细胞中；小叶间动脉管壁增厚、管腔狭窄。 其余4组与模型组比较，近曲小管上皮细胞轻度空泡变性、个别线粒体肿胀，个别细胞核轻度固缩、大部分正常；间质中可见少量吞噬细胞和淋巴细胞。其中以川芎嗪Ⅱ组和泼尼松组病变减轻尤为显著。 结论 (1)模型组光镜和电镜结果主要表现为ATN，表明成功建立了大鼠ATN实验动物模型；(2)川芎嗪、泼尼松和贝那普利对AA致大鼠ATN均具有保护作用，且以川芎嗪和泼尼松的药效尤为明显。     

自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱和氯沙坦治疗效应

目的 分析糖尿病肾病(DN)发病过程中肾小球miRNA表达谱的变化,观察血管紧张素受体拮抗剂(ARB)氯沙坦对DN肾小球miRNA表达谱的影响,确认在DN发病过程中发挥关键作用的miRNA.方法 8周龄KKAy小鼠随机分为氧沙坦治疗组(10 mg·kg-1·d-1)和非治疗组,C57BL/6小鼠作为正常对照组.于20周龄检测体质量、随机血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐,观察肾脏形态改变.应用磁珠灌注法分离肾小球,提取总RNA,应用Affymetrix GeneChip miRNA芯片,分析KKAv小鼠肾小球microRNA表达谱的变化,以及氯沙坦对microRNA表达谱的影响.结果 KKAy小鼠的体质量和血糖较正常对照C57BL/6组小鼠显著升高(均P＜ 0.05),氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠的尿白蛋白/肌酐比值[( 539.71±100.23) mg/g比(728.00±177.19) mg/g,P＜0.05]和肾脏病理损害,而对血糖无影响.miRNA芯片分析结果发现,与正常对照C57BL/6小鼠相比,20周龄KKAy小鼠肾小球内10个miRNA的表达上调;12个miRNA的表达下调.与KKAy非治疗组小鼠相比,20周龄氯沙坦治疗组KKAy小鼠肾小球内共有4个miRNA表达下调,其中miR-503和miR-181d在KKAy非治疗组小鼠肾小球内的表达显著上调,氯沙坦治疗可抑制其过表达.结论 miR-503和miR-181d在糖尿病KKAy小鼠肾小球内的表达显著上调,氯沙坦治疗可抑制其在糖尿病状态下的异常表达,可能为糖尿病肾病新的治疗靶点.     

氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响

目的 利用比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系来观察血管紧张素受体拮抗剂(ARB)氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响.方法 8周龄自发性2型糖尿病KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组(饮用水中喂入氯沙坦粉末10 mg+kg-1·d-1)和非治疗组;8周龄C57BL/6小鼠作为正常对照组.饲养12周后,经胸主动脉磁珠灌流分离肾小球,提取肾小球蛋白.DIGE最小荧光标记法标记,行二维荧光差异凝胶电泳.应用Typhoon多功能成像系统扫描凝胶,DeCyder 2D差异分析软件进行图像分析.采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质.结果 KKAy小鼠的体质量、血糖和尿白蛋白排泄率较正常对照C57BL/6小鼠显著升高(均P＜0.05),氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠尿白蛋白肌酐比[(539.71±100.23)mg/g比(728±177.19) mg/g]、肾小球基底膜增厚和系膜基质增生等肾脏病理损害,而对血糖无影响.通过DeCyder 2D差异分析软件,发现KKAy氯沙坦治疗组与KKAy非治疗组肾小球内表达差异大于1.1倍的蛋白质斑点62个.经肽质量指纹图分析,鉴定出41种蛋白质.其中表达上调的蛋白28种,包括甘油激酶、亚硫酸盐氧化酶、甘氨酸脒基转移酶、腺苷高半胱氨酸酶等;表达下调的蛋白质13种,包括3-巯基丙酮酸硫基转移酶、ATP合酶亚单位d、60 000热休克蛋白、线粒体应激蛋白70(又名75 000葡萄糖调节蛋白,GRP75)等.有6种蛋白在20周龄KKAy小鼠和C57BL/6小鼠肾小球内存在差异表达,氯沙坦治疗抑制了其在糖尿病状态下的表达变化,包括丙酮酸脱氢酶复合物的二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰基转移酶组分、琥珀酰辅酶A连接酶[GDP-形成]亚单位β、ATP合酶亚单位d、GRP75、核苷二磷酸盐结合部分X模体19和硒结合蛋白1.结论 氯沙坦可明显减轻KKAy小鼠尿白蛋白排泄率和肾脏病理损害;可抑制糖尿病状态下肾小球ATP合酶亚单位d、GRP75、硒结合蛋白1等蛋白的表达变化;可能通过减少线粒体活性氧簇产生,抑制氧化应激反应发挥其肾脏保护作用.     

罗格列酮联用维甲酸在体内对直肠癌HCT-15细胞COX-2、MMP-7、TIMP-1表达的影响

目的：研究罗格列酮（ROS）联用全反式维甲酸（ATRA）对直肠癌裸鼠移植瘤HCT-15细胞COX-2、MMP-7、TIMP-1表达的影响,并初步探讨其抗肿瘤的机制。方法：建立直肠癌裸鼠移植瘤模型,荷瘤裸鼠随机分为未用药组、ROS组（ROS 25 mg.kg-1.2d-1）、ATRA组（ATRA 11mg.kg-1.2d-1）、ATRA联用ROS组[（ROS 25 mg＋ATRA 11 mg）.kg-1.2d-1]。灌胃40 d后,观察各组裸鼠移植瘤体积变化;利用免疫组化SP法观察移植瘤细胞中COX-2、MMP-7、TIMP-1的表达。结果：1）用药3组瘤体体积与未用药组比较均缩小,差别有统计学意义（P〈0.05）,ATRA联用ROS组的荷瘤体积缩小更明显（P〈0.05）;ROS组与ATRA组瘤体体积相当（P〉0.05）;2）用药3组移植瘤细胞内COX-2、MMP-7、TIMP-1的表达与未用药组比较均降低（P〈0.05）,且ROS组与ATRA组移植瘤细胞内COX-2、MMP-7、TIMP-1下降更明显（P〈0.01）,ROS组与ATRA组移植瘤细胞内三者的表达相当（P〉0.05）。结论：ROS与ATRA均有一定的抑瘤作用,ROS与ATRA联用可发挥协同抗肿瘤的作用,可能是通过抑制移植瘤细胞内COX-2、MMP-7、TIMP-1的表达而实现。     

核因子κB受体活化因子及其配体在5/6肾切除大鼠肾脏中表达及缬沙坦对其影响

目的 探讨核因子κB受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)在5/6肾切除大鼠(STNx)残肾中表达的意义,以及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)缬沙坦对其表达的影响。方法 制备5/6肾切除的SD大鼠动物模型, 分为未给药组、治疗组及假手术组。治疗组在5/6肾切除后即给予缬沙坦治疗,大鼠分别于第4、8、12 周杀检。第12 周时用ELISA方法检测大鼠血清中骨保护蛋白(OPG)及RANKL水平;显微镜观察肾脏病理变化;免疫组化方法及Western印迹方法分析RANK/RANKL/OPG蛋白表达;RT-PCR检测RANK/RANKL/OPG的mRNA表达。结果 (1)第12周时假手术组尿蛋白量为(6.1±0.6) mg/24 h;未给药组为(19.0±1.5) mg/24 h;治疗组为(13.4±1.2) mg/24 h,3 组间的差异有统计学意义(P均 < 0.01)。(2)第12周时未给药组及治疗组肾脏均有明显硬化,但治疗组硬化程度较未给药组轻。(3)未给药组RANK及RANKL蛋白及mRNA的表达均高于治疗组及假手术组,3 组间的差异有统计学意义(P均 < 0.01)。OPG蛋白及mRNA的表达在3 组间无显著性差异。(4)血清中OPG及RANKL含量在3 组间的差异亦无统计学意义。结论 在5/6肾切除大鼠残肾中表达上调的RANK和RANKL可能参与了肾小球硬化的发生发展。抑制RANK和RANKL的表达可能是缬沙坦延缓肾小球硬化的原因之一。     

The association of serum inflammatory biomarkers with chronic kidney disease in hypertensive patients

A positive association between inflammation and chronic kidney disease (CKD) has been reported but the impact of hypertension on this relation remains unclear. The aim of this study is to investigate the association of various inflammation markers with risk of CKD in hypertensive patients. 387 hypertensive patients (mean age 55.5 years) were recruited. Serum matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), tissue inhibitor of metalloproteinase-1(TIMP-1), high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) and osteopontin (OPN) were measured by ELISA. CKD was diagnosed either as evidence of kidney damage, including microalbuminuria, or by low glomerular filtration rate (GFR) (<60?mL/min/1.73?m²), which was estimated using the Modification of Diet in Renal Disease (MDRD) abbreviated equation. Compared with the reference groups (eGFR?≥?60?mL/min/1.73?m²), the serum levels of TIMP-1, OPN, hsCRP were significantly higher, and the MMP-9/TIMP-1 ratio was lower in the risk group (eGFR?2). Multiple logistic regression analysis showed that TIMP-1, MMP-9/TIMP-1 ratio, OPN and hsCRP were associated with low GFR separately after adjustment, whereas MMP-9/TIMP-1 ratio, OPN and hsCRP were associated with microalbuminuria. The significant association of MMP-9/TIMP-1 ratio and OPN with low GFR and microalbuminuria persisted after additional adjustment for other studied inflammatory biomarkers. Our data suggest that inflammation is strongly and independently associated with renal damage in hypertensive patients. MMP-9/TIMP-1 ratio and OPN may serve as novel risk factors and therapeutic targets for the treatment of CKD in hypertensive patients.