高效液相色谱法测定高山红景天超微粉中红景天苷和苷元的含量

目的:考察超声波法提取高山红景天超微粉中红景天苷和苷元的方法,并建立测定高山红景天超微粉中其含量的HPLC方法。方法:采用全自动激光粒度测试仪测定高山红景天超微粉的粒径,采用超声波法提取高山红景天超微粉中红景天苷和苷元,并采用HPLC分析法测定其含量。结果:红景天苷与红景天苷元的质量浓度在1～50 mg.L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,其线性方程分别为Y=2 793.7C–2 340.3(r=0.999 8)、Y=6 460.7 C-1 072.2(r=0.999 9)。当信噪比S/N≥3时,红景天苷与红景天苷元的最低检测质量浓度分别为0.25,0.12 mg.L-1。高山红景天超微粉的平均粒径为(46.0±3.6)μm;超声时间为60min时红景天苷和苷元的释放量达到最高值,且红景天苷与苷元的平均百分含量分别为0.516%,0.075%。结论:所采用的HPLC分析方法简便易行、准确,适合用于高山红景超微粉中红景天苷和苷元含量测定。     

高山红景天细胞悬浮培养生长和产物积累动力学

目的研究高山红景天悬浮细胞生长、红景天多糖和红景天苷合成动力学特征,为培养过程的优化控制提供理论依据。方法考察1个培养周期内高山红景天细胞的鲜重、干重和红景天苷、红景天多糖的含量,绘制生长曲线、生长速率曲线和比生长速率曲线。结果高山红景天细胞悬浮培养的生长周期约为16 d,0~4 d为细胞的延滞期,4~12 d为对数期,13~15 d为稳定期,在第14天时细胞鲜、干质量达到最大,分别为266.13 g.L-1和13.41 g.L-1;红景天苷在培养的第12天达到最大,其质量分数为0.585%;第10天时红景天多糖的含量达到最大,其(质量分数为13.824%)。结论确定细胞生长和产物积累的变化规律,可以提高生产效率,为培养过程的优化控制提供理论依据。     

RP-HPLC法测定大花红景天和长鞭红景天中红景天苷的含量

目的:建立测定大花红景天和长鞭红景天中红景天苷含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为OPH RP-ODS C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为50mmol·L-1磷酸盐缓冲液(以氢氧化钠调pH值在7.0左右)-甲醇(90∶10),流速为1.0mL·min-1,柱温为室温,检测波长为253nm,进样量为10μL。结果:红景天苷的检测浓度在62.5～1000.0μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9997);平均加样回收率为97.59%,RSD=1.71(n=6)。大花红景天中含有红景天苷,含量与等级呈线性关系;长鞭红景天含红景天苷较少或没有,不可作为其替代品。结论:本方法准确、灵敏、专属性强,可作为红景天药材中红景天苷的含量测定方法。     

HPLC法测定复方红景天胶囊中红景天苷的含量

目的建立复方红景天胶囊中红景天苷的含量测定方法。方法样品采用甲醇超声提取的方法制备。色谱条件采用Shim-Pack ODS柱(150 mm×4.6 mm5,μm),甲醇-水(10∶90)为流动相,检测波长为223 nm。结果红景天苷浓度在9.61～96.08 mg.L-1范围内与峰面积值呈良好的线性关系(r=0.999 9)。回收率为97.34%,RSD=1.02%(n=6)。结论该法准确、可靠、稳定,可作为复方红景天胶囊的定量分析方法。     

合成红景天苷对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的：研究合成红景天苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：体外培养H9c2细胞,分为正常对照组、模型组、提取红景天苷（10-4 mol·L-1）组和合成红景天苷（10-6、10-5、10-4mol·L-1）组,药物孵育24 h后,加入过氧化氢终浓度400μmol·L-1损伤4h,检测各组细胞活力和培养液上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、SOD活性显著降低,LDH、CK活性和MDA含量显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,红景天苷预处理组能明显提高细胞活力和SOD活性（P〈0.05）,明显降低LDH、CK活性及MDA含量（P〈0.05）,并与浓度呈正相关。结论：红景天苷对过氧化氢造成的心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,且合成红景天苷效果优于提取红景天苷。     

不同采收月份和不同炮制方法对女贞子中红景天苷和酪醇含量的影响

目的探讨不同月份不同炮制方法对长沙地区女贞子中活性成分红景天苷及其苷元酪醇含量的影响。方法采收长沙岳麓山上8、10、12月份产女贞子,去杂质洗净。一部分直接晾干生制;另一部分晾干后用黄酒蒸制。用HPLC法测定不同月份红景天苷及酪醇的含量。色谱柱：Hydro-RP80A,C18（4.6×250mm,5μm）、流动相为甲醇-水（26∶74,V/V）;流速1mL·min-1;检测波长278nm;柱温20℃;进样量10μL。评价月份及炮制方法对女贞子的影响。结果 8、10、12月份生品与制品中红景天苷的含量分别为3.213±2.235mg·g-1、2.784±0.719mg·g-1、0.941±0.510mg·g-1和4.159±2.042mg·g-1、3.596±1.773mg·g-1、2.164±0.986mg·g-1。酪醇的含量分别为0.457±0.323mg·g-1、0.828±0.549mg·g-1、0.414±0.348mg·g-1和0.505±0.298mg·g-1、1.954±1.218mg·g-1、0.702±0.690mg·g-1。结论月份及炮制方法对女贞子活性成分含量有影响,故在实际应用时应根据不同需要适时采收并加以炮制。     

HPLC法同时测定大株红景天中红景天苷、酪醇和没食子酸的含量

目的建立同时测定大株红景天中红景天苷、酪醇和没食子酸含量的方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Inertsil ODS-SP柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-体积分数0.03%磷酸水溶液(体积比7∶93);检测波长为220 nm;流速为1.0 mL.min-1。结果红景天苷、酪醇和没食子酸质量浓度分别在4.100~121.9 mg.L-1(r=0.999 9,n=6)、1.10~31.9 mg.L-1(r=0.999 8,n=6)、2.00~60.7 mg.L-1(r=0.999 9,n=6)内与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率(n=9)分别为99.1%、98.9%和103.0%,RSD分别为3.0%、2.1%和0.8%。结论本方法快捷、简便,结果准确、可靠、重复性好,可作为大株红景天药材中红景天苷、酪醇和没食子酸的测定方法。     

不同粒径高山红景天超微粉在大鼠体内的吸收

目的:考察不同粒径高山红景天超微粉在大鼠体内的吸收。方法:健康雄性Wistar大鼠18只,随机分为静脉注射红景天苷组(50 mg·kg-1)、灌服高山红景天超微粉1组[平均粒径为(45.96±3.57)μm,8 g·kg-1]和灌服高山红景天超微粉2组[平均粒径为(83.27±0.58)μm,8 g·kg-1],每组各6只。分别于给药前和给药后5、10、15、30、45、60、90、120、180 min股动脉取血0.5 mL,并采用HPLC法测定大鼠血浆中红景天苷浓度。利用Phenix WinNonlin 6.1药动学软件中非房室模型分析方法计算药动学参数,并计算生物利用度。结果:给大鼠灌服高山红景天超微粉2后,在大鼠血浆中未能检测出红景天苷浓度。灌服等剂量高山红景天超微粉1后,在大鼠血浆中能够检测出红景天苷浓度,并且其绝对生物利用度为29.66%。结论:当高山红景天超微粉的粒径小于50μm时才具有细胞破壁效果和良好的吸收。     

红景天苷在大鼠体内的药物动力学考察

目的建立测定大鼠血浆中红景天苷质量浓度的方法,并探讨在大鼠体内红景天苷的药物动力学过程,为红景天的新药设计、剂型评价和临床应用提供科学依据。方法采用HPLC法。色谱柱:Alltima C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);内标物:茶碱;流动相:甲醇-水(体积比20∶80);柱温:室温;流速:1.0 mL.min-1;检测波长:275 nm。应用WinNolin药物动力学软件对实验数据处理。结果红景天苷质量浓度在5~300 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为A=7.600×10-3ρ+1.568×10-2(r=0.999 0)。当信噪比S/N≥3时,在血浆中红景天苷的最低检测质量浓度为0.25 mg.L-1。大鼠静脉注射红景天苷100 mg.kg-1,其主要药动学参数t1/2为(0.37±0.15)h,CL为(1.32±0.37)L.h-1,V为(0.69±0.33)L,AUC0→∞为(81.65±24.57)mg.h.L-1。结论本方法可用于红景天苷血药浓度测定及其药物动力学考察。     

HPLC法测定大血藤中红景天苷的含量

目的 建立中药大血藤中的红景天苷含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法(HPLC)测定.色谱柱:Phenomenex C18,流动相:乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(12:88),流速:1.0 ml·min-1,柱温:30℃,检测波长:275 nm.结果 红景天苷在57～912 mg·L-1线性关系良好,...     

高山红景天黄酮类化合物的分离与鉴定

目的对高山红景天药材的化学成分进行研究。方法采用反复硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半微量制备高效液相色谱分离纯化,根据ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR等谱学数据进行结构鉴定。结果从高山红景天根和根茎的乙醇提取物中分离得到8个单体化合物,分别鉴定为黄酮类化合物herbacetin 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-7-O-α-L-rhamnopyranoside(1)、三叶豆苷(trifolin,2)、草质素苷(rhodionin,3)、山奈酚(kaempferol,4)、山奈酚7-O-α-L-鼠李糖苷(kaempferol7-O-α-L-rhamnopyranoside,5)、小麦黄素(tricin,6)和大花红景天素(rhodiolinin,7);另外还得到2(3H)-苯并噻唑硫酮(2(3H)-benzothiazolethione,8)。结论化合物1为新化合物,化合物2和8为首次从景天科植物中分离得到。     

反相高效液相色谱法测定大花红景天及其混淆品中红景天苷的含量

目的建立RP-HPLC测定市场上大花红景天及其混淆品中红景天苷含量的方法。方法色谱柱为Phe-nomenex C18（250 mm×4.60 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（15∶85）,等度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为223 nm,柱温为25℃。结果红景天苷在62.5～1 000μg.mL-1与峰面积线性关系良好（r=0.999 7,n=5）,平均加样回收率为100.1%,RSD为0.40%（n=6）。结论本方法简便、准确、重复性强,可用于市面上大花红景天及其混淆品中红景天苷的含量测定。     

唐古特红景天的脯氨酰寡肽酶抑制活性成分研究

目的研究唐古特红景天的脯氨酰寡肽酶抑制作用及其活性成分。方法采用改进的Kato法测定唐古特红景天水提物和从中分离得到的10个化合物的脯氨酰寡肽酶抑制作用,并采用RP-HPLC法对水提物的活性成分进行分析和指认。结果水提物的脯氨酰寡肽酶抑制活性显著(质量浓度为100 mg.L-1,抑制率为91.7%),其中,apigenin 7-O-β-D-apiofuranosyl(1→2)-β-D-glucopyr-anoside(IC50=30.4μmol.L-1)和isolariciresinol 9-O-β-D-xylopyranoside(IC50=25.2μmol.L-1)显示出较强的活性。结论唐古特红景天水提物具有显著的脯氨酰寡肽酶抑制作用,从中发现了2个主要活性成分。     

凹叶厚朴愈伤组织的诱导及其有效成分含量的比较

目的:研究凹叶厚朴愈伤组织的诱导、生长情况并比较愈伤组织内有效成分的含量。方法:采用单因素比较、正交设计试验,研究影响凹叶厚朴愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用高效液相色谱法测定不同来源愈伤组织内有效成分的含量。结果:外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以顶芽及茎段最好,雌蕊次之;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+NAA0.1mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1,而B5+NAA0.5mg.L-1+6-BA4.0mg.L-1对愈伤组织生长促进作用明显。以WPM为基本培养基诱导愈伤组织,继代后厚朴酚与和厚朴酚含量的总和可达0.1679%~0.2344%,但愈伤组织诱导率低,为33.08%~48.65%;培养条件为MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1时,愈伤组织诱导率为62.12%,继代后2酚总量为0.1686%。结论:本试验结果对凹叶厚朴愈伤组织的诱导及高产细胞系的筛选具有一定的参考价值。     

RP-HPLC法测定5种红景天中红景天苷的含量

目的比较不同种及不同产地野生和种植的红景天中红景天苷和出膏率。方法采用Kro-masil C18色谱柱(5.0μm,4.6 mm×150.0 mm);以水-乙腈-磷酸(体积比为93.0∶7.0∶0.2)为流动相,流速为1.20 mL.min-1,柱温为30℃,检测波长为223 nm,进样10μL。结果红景天苷在12~60 mg.L-1内峰面积与对照品的质量浓度呈良好线性关系,回归方程为A=1.2 850ρ×104+7.648×103,r=0.999 8,其平均回收率为98.2%,RSD为2.4%(n=6)。结论为红景天药材的质量控制提供理论依据,红景天药材的质量与红景天种类、产地及野生或种植有一定关系。     

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷和酪醇的浓度及其药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷及其代谢物酪醇的浓度,并应用于药动学研究。方法:血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合溶剂萃取,Shimadzu Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,以水(A相)-含20%乙腈的甲醇溶液(B相)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,12%B;1~2.5 min,12%~85%B;2.5~3.5 min,85%B;3.5~3.6 min,85%~12%B;3.6~5 min,12%B)5 min,流速为0.3 ml/min,柱温40℃。采用电喷雾离子源(ESI),负离子多反应监测模式(MRM)进行质谱监测,离子对:红景天苷m/z 299.1→118.9、酪醇m/z 137.0→105.9、内标天麻素m/z 285.1→122.9。测定比格犬口服和静脉注射红景天苷后的主要药动学参数。结果:红景天苷在10~10000 ng/ml,酪醇在1~1000 ng/ml范围内线性良好,日内和日间精密度RSD均<12.9%。口服给药后,红景天苷和酪醇的AUC0~t分别为(19600±4870)和(946±188)ng·h·ml^-1,AUC_0~∞分别为(19700±4880)和(2280±1780)ng·h·ml^-1,c_max分别为(8890±2650)和(132±44.3)ng/ml,t_1/2分别为(1.85±0.69)和(40.3±45.1)h;静脉注射给药后,红景天苷和酪醇的AUC0~t分别为(5960±882)和(127.0±32.4)ng·h·ml^-1,AUC_0~∞分别为(6000±887)和(157.0±31.6)ng·h·ml^-1,c_max分别为(9210±1900)和(42.0±12.3)ng/ml,t_1/2分别为(0.976±0.156)和(4.46±2.42)h。结论:本方法简单、高效,专属性好,灵敏度高,可用于红景天苷及其代谢物酪醇在比格犬体内的药动学研究。     

东北红豆杉愈伤组织中紫杉烷类化合物的分离与鉴定

目的明确东北红豆杉(Taxus cuspidata)愈伤组织中的化学成分,为开发可持续利用的红豆杉资源提供理论依据。方法采用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等手段对愈伤组织的正己烷和乙酸乙酯提取物进行分离和纯化;根据化合物的理化性质和波谱数据并结合相关文献对化合物结构进行鉴定。结果从东北红豆杉愈伤组织中分离得到11个紫杉烷类化合物,分别鉴定为tax-uyunnanine C(1)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-propionyloxy-4(20),11-taxadiene(2)、2α,5α,10β-tri-acetoxy-14β-isobutyryloxy-4(20),11-taxadiene(3)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2′-methyl)butyrylo-xy-4(20),11-taxadiene(4)、云南红豆杉甲素(yunnanxane,5)、紫杉醇(paclitaxel,6)、taxol C(7)、baccatin VI(8)、1β-deoxybaccatin VI(9)、taxayuntin C(10)、baccatin I(11)。结论化合物9、11为首次从东北红豆杉愈伤组织中分离得到,化合物1-4、8-10尚未在东北红豆杉中发现。     

大鼠在体单向灌流法研究莪术油磷脂复合物的肠吸收

目的研究莪术油磷脂复合物在大鼠肠内的吸收情况。方法选用大鼠在体单向灌流模型,以莪术油为对照组,采用HPLC法,以莪术油中主要活性成分呋喃二烯和牻牛儿酮为检测指标,同时测定复合物在大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠的吸收。结果莪术油磷脂复合物中的呋喃二烯和牻牛儿酮的有效渗透系数(Peff)分别约为6×10-5 cm.s-1和1×10-4 cm.s-1,莪术油中的呋喃二烯和牻牛儿酮的有效渗透系数分别约为1×10-5 cm.s-1和2×10-5 cm.s-1,说明莪术油磷脂复合物在大鼠肠内的吸收比莪术油提高了5倍。结论应用磷脂复合物技术可显著改善莪术油的两亲性,提高莪术油在大鼠肠内的吸收。莪术油磷脂复合物的吸收无自身浓度抑制作用,在肠黏膜的转运为被动扩散过程;呋喃二烯和牻牛儿酮均无特殊的吸收窗;在各个肠段均属于高渗透性药物。本实验为莪术油口服剂型的研究提供了有效数据。