莲心碱对豚鼠心室肌细胞动作电位及钠与钙电流的影响

为探讨莲心碱 (liensinine,L ien)对心肌离子流的影响及抗心律失常作用机制。采用全细胞膜片钳技术 ,记录了 L ien对单个豚鼠心肌细胞动作电位 (AP)及纳电流 (INa)与 L -型钙电流 (ICa- L)的影响。 L ien 3～ 30μmol/ L 可剂量依赖性地降低 AP幅度 (APA)、静息电位 (RP) ,延长 AP时程。 L ien10 ,30 μm ol/ L 分别使 INa及 ICa- L从给药前的 (8.6± 2 .3) n A和 (75 8± 177) p A降至 (5 .4± 1.7)、(2 .2± 1.6 ) n A和 (335± 12 2 )、(137±10 0 ) p A。L ine10 μmol/ L 抑制 INa和 ICa- L的 I- V曲线并使后者的峰值电流电位略右移。结果表明 L ien有钠、L -型钙通道阻滞作用 ,这些可部分解释其抗心律失常作用机制     

甲磺酸酚妥拉明抗心律失常的初步研究

目的:通过观察甲磺酸酚妥拉明(PM)对正常大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,以探讨其抗心律失常的作用机制。方法:采用膜片钳全细胞记录技术记录了PM对单个大鼠心室肌细胞钠电流的影响。结果:动物实验表明PM降低正常心室肌细胞INa电流密度峰值,钠离子通道失活加速,失活后再恢复时间延迟。结论:PM对心室肌细胞0相动作电位快钠电流有抑制作用,能使快速性室性心律失常的发生率降低。     

益气升陷复方注射液对大鼠及豚鼠心室肌细胞钠、钾电流的作用

目的:观察益气升陷法对单个心室肌细胞钠电流和钾电流的作用.方法:采用膜片钳技术观察益气升陷法对豚鼠及大鼠单个心室肌细胞钠和钾电流的影响.结果:益气升陷法能够减少内向整流钾电流(Ik1) 、瞬时外向钾电流(Ito)和钠电流(INa)峰值,对延迟整流钾电流没有影响(Ik).结论:益气升陷法抗心律失常的作用可能是通过对INa、Ik1和Ito的抑制而延长动作电位时程来实现的.     

龙芽楤木皂苷对培养心肌细胞钠通道电流的影响

目的:在新生鼠心肌细胞培养液中加入龙芽楤木皂苷(Aralosides As)后,对细胞膜上钠离子流产生的效应进行观察。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的As(1μg/ml,10μg/ml,100μg/ml)对培养大鼠心室肌细胞钠电流(INa)幅值的影响。结果:1)As使培养心室肌细胞的INa电流-电压(I-V)曲线明显下移,原有的(I-V)依赖特征不变。2)As在10μg/ml,100μg/ml浓度时,均明显剂量依赖性增加INa的峰值,分别使峰值增加29%和41%。结论:As增加培养心肌细胞INa幅值,可能是实现其正性肌力的作用机制之一。     

薯蓣皂苷含药血清对大鼠心室肌细胞钠离子通道的影响

目的研究薯蓣皂苷含药血清对正常大鼠心室肌细胞钠离子通道电流(INa)的影响,探讨其保护心肌细胞及抗心律失常的离子机制。方法大鼠ig给予300 mg/kg薯蓣皂苷,2次/d,连续4 d,末次给药后1 h从腹主动脉取血,离心分离得含药血清;采用酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录薯蓣皂苷含药血清低、中、高剂量(1、10、100μL)分别对大鼠正常心室肌细胞INa的影响。结果薯蓣皂苷含药血清1、10、100μL均使I-V曲线下移,内向电流增加;1μL薯蓣皂苷含药血清使INa峰值增大,而10、100μL的薯蓣皂苷含药血清使INa峰值由(-52.10±3.80)pA/pF变为(-76.44±4.09)pA/pF和(-81.96±4.70)pA/pF(P<0.01),呈剂量依赖性。1、10、100μL薯蓣皂苷含药血清剂量依赖性加速钠离子通道激活过程,半数稳态激活电压分别由(-57.69±1.86)mV变为(-59.71±2.57)、(-66.56±1.32)(P<0.01)、(-68.52±3.91)mV(P<0.01),但对失活过程无明显影响。1、10、100μL薯蓣皂苷含药血清剂量依赖性加速钠离子通道的复活过程,拟合复活曲线τ值由(150.73±21.49)ms分别变为(143.19±13.88)、(84.83±18.03)(P<0.01)、(80.63±13.89)ms(P<0.01)。结论薯蓣皂苷含药血清通过加快激活过程及复活过程促进钠离子的内流。     

甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响

目的研究甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型钙通道的影响.方法应用全细胞膜片钳技术观察甘草次酸对豚鼠心室肌单个细胞L型通道的影响.结果 10-6mmol@L-1甘草次酸灌注豚鼠心室肌细胞后可使L型钙通道电流(ICa-L)峰值增加22.51%(P＜0.05);各药物的I-V关系曲线虽有相应的下降,但其峰值电压不变.结论甘草次酸可增加ICa-L,使心肌细胞内钙浓度增加.     

益气通络解毒降浊方结合西医基础疗法治疗早、中期慢性肾功能衰竭疗效观察

目的 观察益气通络解毒降浊方结合西医基础疗法治疗慢性肾功能衰竭（CRF）的临床疗效。方法 选择160例2007年1月—2011年12月河北医科大学中医院门诊及住院中早期CRF患者,按随机数字表法分为治疗组及对照组,每组80例。在西医基础治疗基础上,治疗组予益气通络解毒降浊方,对照组予尿毒清颗粒,治疗12个月后,观察两组疗效,治疗前后中医症状积分、血清肌酐(SCr)、尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量、Hb及终点事件发生率。结果 治疗组总有效率为77.6% （28/76),对照组为58.1% (43/74),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后中医症状积分［（18.3±5.3）分］较本组治疗前［（26.0±4.4）分］及对照组治疗后［（22.4±4.9）分］明显降低(P<0.05,P<0.01)。治疗组治疗后SCr［(169.1±22.6) μmol/L］、BUN［(10.4±2.0) mmol/L］、24 h尿蛋白定量［(861.4±232.7) mg/24 h］均低于治疗前［分别为：(204.1±27.7) μmol/L,(13.2±3.2) mmol/L,(1287.5±442.3) mg/24 h,P<0.01］;对照组治疗后上述指标亦有改善(P<0.05,P<0.01);治疗组治疗后较对照组SCr［(185.8±23.9) μmol/L］、BUN［(11.2±2.5) mmol/L］、24 h尿蛋白定量［(1 014.5±301.7) mg/24 h］降低更明显(P<0.05,P<0.01)。治疗组终点事件发生率(10.53%, 8/76) 低于对照组(13.51%, 10/74),但差异无统计学意义。结论 益气通络解毒降浊方结合西医基础治疗早、中期CRF在改善肾功能、降低尿蛋白方面有较好的疗效。     

金雀花碱对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的研究金雀花碱(Cy)对大鼠心室肌细胞钠离子通道电流(I_(Na))的影响,探索Cy在离子通道水平抗心律失常的作用机制。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置,单酶解法分离SD大鼠心室肌细胞,将心室肌细胞分为对照组、100μmol/L Cy组和300μmol/L Cy组。应用全细胞膜片钳记录技术,观察Cy对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响。结果 Cy(≥100μmol/L)能显著抑制I_(Na),其作用呈浓度依赖性。与对照组比较,100μmol/L和300μmol/L Cy可使I_(Na)Ⅰ～Ⅴ曲线明显上移,I_(Na)峰值由(-32.81±3.93) pA/pF依次降为(-21.77±4.07) pA/pF和(-14.8±2.99) pA/pF (P0.01),但不改变其激活电位、峰电位和反转电位;使稳态失活曲线显著左移,半数失活电压V_(1/2)降低(P0.05,P0.01);失活后恢复曲线显著右移,恢复时间常数γ延长(P0.05,P0.01)。结论 Cy对大鼠心室肌细胞的I_(Na)呈浓度依赖性的抑制作用,并可改变其失活及失活后恢复动力学特征,可能是其抗心律失常的作用机制。     

黄芪对急性心肌梗死心室肌细胞钙电流的影响

目的 :探讨急性心肌梗死 (AMI)后兔心室肌细胞L型钙电流的变化及黄芪的影响。方法 :兔开胸左前降支结扎造成AMI ,腹腔注射黄芪 2ml/只·日共 7天 ,酶解分离心室肌细胞 ,采用全细胞膜片钳记录技术记录左前降支供血区心外膜细胞的ICa L。结果 :①急性心肌梗死 1周时兔梗死周边区心室肌细胞L型钙电流受到抑制 ,电流密度 电压关系曲线 (I V)上移 ,ICa L电流密度峰值由正常状态下的 -5 5 8± 1 5 3 pA/pF(Con ,n =10cells)降至 -3 5 2± 0 93pA/pF(AMI ,n =10cells) ,最大峰电流密度下降了2 9 1% ;其失活曲线左移 ,半数最大失活电位 (V0 .5)由 -13 1± 4 2mV左移至 -2 5 9± 7 0mV ,失活速度加快 ;灭活后恢复减慢。②黄芪可使AMI后心肌细胞受抑制的ICa L有所恢复 ,但对正常心室肌细胞的ICa L无明显影响。结论 :急性心梗后 1周梗死周边带心室肌细胞L型钙通道受抑制 ,可能为急性心梗后室性心律失常发生的机制之一 ;黄芪对缺血引起的ICa L的异常有部分改善作用。     

柴胡三参胶囊对缺血性心律失常大鼠钠通道稳态失活及再恢复的影响

目的观察柴胡三参胶囊对缺血性心律失常大鼠心室肌细胞膜钠通道电流及钠通道稳态失活及再恢复的影响,寻求该药治疗心律失常的分子细胞学机制。方法将所有大鼠随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、胺碘酮组各10只,建立缺血性心律失常动物模型,酶解法分离心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录各组钠通道电流(INa)的变化。结果各组细胞I~V曲线均在-70 m V时激活,-20 m V时出现峰值,+40 m V出现反转,组间比较,以胺碘酮组和中药高剂量组I~V曲线较低;各组INa峰值比较,中药高剂量组和胺碘酮组均较模型组明显下降(P0.01),两组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。中药高剂量组和胺碘酮组INa稳态失活曲线较模型组有明显左移趋势;各组INa半数失活电压V0.5比较,中药高剂量组和胺碘酮组较模型组明显降低(P0.01),两组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。中药高剂量组和胺碘酮组INa灭活后再恢复曲线较模型组有明显下移趋势;各组在时间间隔为45、95、145 ms时INa恢复程度比较,中药高剂量组和胺碘酮组较模型组明显降低(P0.01),两组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论柴胡三参胶囊能够结合钠通道失活态并对其产生抑制作用,延缓钠通道失活后再恢复,这可能是其抗心律失常的机制之一。     

五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(I_(Na))的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上I_(Na)的影响。结果五味子乙素(3μmol/L)对I_(Na)可产生显著抑制作用(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性。五味子乙素(10、30μmol/L)可使钠通道的I-V曲线显著上移,但I-V曲线的激活电位、峰电位及形态未发生改变,使I_(Na)的激活曲线向去极化方向迁移(P0.01),半数激活电位由给药前(-53.90±5.21) mV变为(-43.69±5.34) mV和(-40.80±3.23) mV。五味子乙素能使I_(Na)失活曲线向超级化方向移动(P0.01),半数失活电压(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(-57.80±6.21) mV、(-71.16±6.45) mV和(-81.03±7.53) mV。此外,五味子乙素还能显著延长I_(Na)失活后恢复时间(P0.01),τ(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(16.68±1.72) ms、(25.73±2.93) ms和(43.79±3.87) ms。结论五味子乙素能浓度依赖性阻滞大鼠心室肌细胞I_(Na),对其激活、失活和失活后恢复动力学特征均有影响。     

甘草次酸18位差向异构体对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的 研究甘草次酸18位差向异构体即18α-甘草次酸、18β-甘草次酸对Caco-2细胞上P-糖蛋白功能和表达的影响。方法 建立Caco-2细胞模型,采用罗丹明-123摄取法评价P-糖蛋白的功能;使用荧光定量PCR检测MDR1 mRNA; Western blot分析Caco-2细胞膜上P-糖蛋白的表达。结果 中、高浓度(1, 10 μmol·L)的18α-甘草次酸和高浓度(10 μmol·L)的18β-甘草次酸使细胞内罗丹明-123摄取减少。高浓度(10 μmol·L)的18α-甘草次酸在转录水平上调MDR1 mRNA的表达;实验浓度的18β-甘草次酸未影响MDR1 mRNA的表达;高浓度（10 μmol·L）18α-甘草次酸对P-糖蛋白有诱导作用,实验浓度的18β-甘草次酸没有影响P-糖蛋白表达。结论 18α-甘草次酸对P-糖蛋白功能和表达的影响均表现为诱导作用,而18β-甘草次酸只对P-糖蛋白功能表现出一定的诱导作用。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的 观察单独及联合使用丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响.方法 采用急性酶解分离法获得大鼠的单个心肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录钙通道电流.观察给药前后钙通道电流峰值(钙电流活化后峰值点与完全失活后电流轨迹的垂直距离)的变化.结果 单独使用丹酚酸B(1,10,100 μmol/L)对钙电流峰值的抑制率分别为:(25.3±16.4)％(n=4),(44.6±24.0)％(n=6),(86.0±20.4)％(n=4).单独使用延胡索乙素(10,30,100 μmol/L)对钙电流峰值的抑制率分别为:(22.2±6.4)％(n=5),(27.4±1.6)％(n=3),(51.0±23.0)％(n=9);联合使用丹酚酸B(1μmoL/L)和延胡索乙素(10 μmol/L)对钙通道电流峰值的抑制作用强于单独使用丹酚酸B(1 μmol/L)或延胡索乙素(10μmoL/L),差异有统计学意义(P＜0.05);盐酸阿托品(14 mmoL/L)能够逆转延胡索乙素对L-型钙通道的抑制作用,而加强丹酚酸B的抑制作用.结论 丹酚酸B和延胡索乙素对大鼠心室肌细胞L-型钙通道均有抑制作用,两者之间能够产生协同效应,并且这两种有效成分调控L-型钙通道的作用机制不同.     

六一散配伍规律的药动学研究

目的:研究甘草及六一散在大鼠血浆中甘草次酸药动学参数的差异,以探索六一散配伍的合理性。方法:将甘草及六一散制成水煎液,分别灌胃给予SD大鼠,采用HPLC/MS/MS法测定大鼠血浆中甘草次酸的血药浓度,并计算主要药动学参数。结果:给予六一散或甘草后大鼠血浆中甘草次酸的T_max,C_max,T_1/2,AUC_0-480:给六一散后分别为:(45.0±10.6)min,(532.8±257.7)ng·mL^-1,(72.6±36.5)min,(26568.7±7682.7)ng·mL^-1·min^-1;给甘草后分别为(240.0±30.4)min,(480.7±157.6)ng·mL^-1,(141.4±26.7)min,(100447.4±58896.2)ng·mL^-1·min。结论:相对于单用甘草,给予六一散水煎液后大鼠血浆中的甘草次酸达峰时间提前,达峰浓度提高,有利于复方快速而集中的发挥药效。     

安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钠离子通道的影响

目的:通过观察安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,以探讨其抗早搏的作用机制。方法:采用膜片钳全细胞记录技术记录了安律胶囊对单个豚鼠心室肌细胞钠电流的影响。结果:安律胶囊可剂量依赖性的阻滞钠电流且具有一定的使用依赖性和时间依赖性。结论:安律胶囊对钠电流的阻滞作用是其抗早搏的作用机制之一。     

参附汤有效组分配伍对离体大鼠心肌细胞L型钙通道的影响

目的 观察参附汤有效组分及其配伍对大鼠心室肌细胞L型钙通道电流的作用.方法 采用Langendorff心脏灌流,急性酶解法获得单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录并分析参附汤人参有效组分人参皂苷Re、Rg₁、Rb₁和附子有效组分乌头原碱及其配伍对心肌细胞L型钙通道电流的影响.结果 人参皂苷Re和Rg₁能够可逆性地阻断L型钙通道电流,给予不同浓度人参皂苷Re(3、10、30、100 μmol/L)和Rg₁(10、100 μmol/L)后L型钙通道电流幅度呈现随药物浓度增加逐渐减小的趋势;人参皂苷Rb₁(10、100 μmol/L)对L型钙通道电流幅度变化无明显影响;乌头原碱能够不可逆地增强L型钙通道电流,给予不同浓度乌头原碱(10、100 μmol/L)后L型钙通道电流幅度随药物浓度增加逐渐增大.联合使用人参皂苷Re(20 μmol/L)和Rg₁(80 μmol/L)对L型钙通道的抑制作用强于单独使用人参皂苷Re和Rg₁;而人参皂苷Rg₁(80 μmol/L)、Re(20 μmol/L)和乌头原碱(100 μmol/L)联合应用对人参皂苷Rg₁和Re配伍对L型钙通道电流的抑制作用无明显影响.结论 参附汤有效组分人参皂苷Rg₁、Re抑制L型钙通道电流,而乌头原碱对L型钙通道电流有不可逆的增强作用,人参皂苷Rg₁、Re配伍对L型钙通道电流的抑制作用增强,乌头原碱配伍后对人参皂苷Rg₁、Re的L型钙通道电流抑制作用无明显影响.     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响.结果 ①浓度为1,3,5,10,20,100 μg /g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流;②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;③使激活曲线向正电位方向变化,V_(1/2)从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6,P<0.05);④使失活曲线向负电位方向变化, V_(1/2)从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6,P<0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流,在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

复方葶苈注射液治疗肺动脉高压的内皮依赖性血管舒缩因子的变化

目的探讨内皮素(Endothelin,ET)和一氧化氮(NO)在复方葶苈注射液治疗肺动脉高压中的变化和意义.方法给SD大鼠一次性皮下注射野百合碱60 mg/kg,复制肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)模型.分别用非平衡法及硝酸还原酶法测定大鼠及50例肺心病急性期患者治疗前后血浆ET及血清NO含量及大鼠肺动脉压力的改变.结果中药组大鼠ET为36.36±2.63 pg/ml,较模型组48.05±3.90 pg/ml明显降低,P＜0.001;NO为89.05±6.78 μmol/L,较模型组73.10±5.51 μmol/L明显升高,P＜0.001.中药组大鼠肺动脉平均压(mPAP)为11.00±1.13 mmHg,较模型组14.67±1.96 mmHg明显降低.ET与mPAP呈正相关(r=0.5001,P＜0.05),NO与mPAP呈负相关(R=-0.4256,P＜0.05).中药组患者治疗后ET为45.70±13.26 pg/ml,较治疗前65.58±18.02 pg/ml明显降低,P＜0.001;治疗后NO为67.21±18.54 μmol/L,较治疗前52.40±23.08 μmol/L明显升高,P＜0.01.讨论ET与NO是参与肺动脉高压发病过程中的重要因子,通过观察其含量变化,探讨复方葶苈注射液治疗肺动脉高压的部分作用机理.     

中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对L型钙通道的影响.结果 浓度为3,5,10,20,50 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流,在浓度为10μg/g时,给药后电流密度抑制约为(45.7±3.5)%(n=5,P＜0.01), 可使心肌细胞L型钙电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从(-5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P＜0.05);使失活曲线向负电位方向变化, V1/2从(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P＜0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜L型钙通道电流,使I-V曲线上移;使激活曲线右移,使失活曲线左移.