灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达.分别以20 μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100 μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡.结果 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05).100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05).20 μmol/L XAV-939干预能抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05),20 mmol/L LiCl则能在一定程度上减弱灵芝三萜对HepG2细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用(P<0.05).结论 灵芝三萜能够通过Wnt/[β-catenin信号通路调节c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8蛋白表达,抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

脊髓康通过IRE1-XBP1通路抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡

目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制内质网应激(ERS)诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定;诱导后细胞分为空白组(无干预措施)、模型组[2μmol/L毒胡萝卜素(TG)]、脊髓康组(2μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物冻干粉,合生药0.625 g/mL);CCK8法检测各组细胞24、48、72 h增殖活性,流式细胞技术检测各组细胞凋亡状态,Western Blot与q-PCR检测1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白及mRNA表达情况,透射电镜扫描各组细胞观察细胞及内质网形态学特征。结果与空白组比较,模型组NGF诱导的神经元样PC12细胞增殖活性显著降低(P0.05),晚期凋亡明显增高(P0.01),电镜扫描显示其细胞粗面内质网结构肿胀,囊泡化,呈典型的细胞凋亡形态;Grp78、CHOP蛋白表达显著升高(P0.05),XBP1及IRE1蛋白表达也有微微上调,但差异无统计学意义(P0.05);Grp78、CHOP、XBP1及IRE1 mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,JSK组24、48、72 h PC12细胞增殖活性升高(P0.05),晚期凋亡及早期凋亡均明显降低(P0.05,P0.01);Grp78、CHOP的蛋白及mRNA表达均降低(P0.05),XBP1及IRE1蛋白及mRNA表达明显上调(P0.05)。透射电镜观察JSK组内质网结构仍存在,存在完整的外膜,内质网膜破损较轻,可见部分凋亡形态学改变。结论 JSK可能通过活化IRE1-XBP1途径改善TG诱导的内质网应激状态,从而抑制ERS导致的神经元样PC12细胞凋亡,这可能是其有效改善脊髓损伤后神经元功能修复的机制。     

柯里拉京对BV2细胞感染HSV-1后TLR9、MyD88mRNA表达的影响

目的:在1型单纯疱疹病毒侵袭感染BV2细胞后进行分子检测,分析柯里拉京对感染后BV2细胞后TLR9、My D88mRNA在BV2细胞的表达情况。方法:建立细胞模型(BV2细胞系)柯里拉京的用药浓度及干预时间。而且经过MTT法进行核实,TCID50病毒滴度计算,需要采用Reed-Muench法。细胞随机分为6组:HSV-1+柯里拉京组、HSV-1+无菌PBS组、CPG-ODN+柯里拉京组、CPG-ODG+无菌PBS组、无菌PBS+柯里拉京组、无菌PBS+无菌PBS组(空白对照组)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)对上述每组TLR9mRNA以及My D88mRNA表达进行检测。结果:HSV-1+柯里拉京组与HSV-1+PBS组相比TLR9、My D88mRNA的表达降低有统计学差异(P0.05);CPG-ODN+柯里拉京组与CPG-ODN+PBS组相比TLR9、My D88mRNA的表达降低有统计学差异(P0.05)。结论:在BV2细胞接受感染HSV-1后,柯里拉京降低TLR9/My D88mRNA的表达,以此来上调免疫应答。     

肉苁蓉多糖对肺癌细胞A549生物学行为的影响

目的 探讨肉苁蓉多糖对肺癌细胞A549生物学行为的影响。方法 将肺癌细胞A549分为对照组,肉苁蓉多糖100、200、400 ng/mL组,si-NC组,si-LINC01410组,肉苁蓉多糖400 ng/mL+pcDNA组,肉苁蓉多糖400 ng/mL+pcDNA-LINC01410组。MTT法检测A549细胞增殖率,克隆形成实验检测A549细胞克隆能力,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Transwell法检测A549细胞迁移及侵袭能力,RT-qPCR法检测A549细胞中LINC01410 mRNA表达。结果 肉苁蓉多糖可以抑制A549细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力、LINC01410 mRNA表达(P<0.05),促进细胞凋亡,并呈剂量依赖性。抑制LINC01410表达后,A549细胞生长、迁移和侵袭能力受到抑制(P<0.05)。过表达LINC01410可以逆转肉苁蓉肉多糖对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论 肉苁蓉多糖可能通过降低LINC01410表达从而抑制肺癌细胞活性、克隆形成、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。     

川芎嗪对人肝星状细胞凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1 mRNA表达的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对人肝星状细胞(HSC)凋亡与基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法:采用人肝星状细胞株LX-2作为理想的肝星状细胞研究模型,LX-2细胞经不同剂量TMP(终浓度为50、100、200、400mg/L)作用48h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测TMP对LX-2细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测TMP对LX-2细胞TIMP-1 mRNA表达的影响。结果:TMP可显著促进LX-2细胞凋亡,细胞早期凋亡率随TMP浓度增加而提高,与空白对照组相比凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05);同时TMP可显著降低LX-2细胞TIMP-1mRNA的表达,与空白对照组相比差异显著(P<0.01)。结论:促进HSC凋亡,抑制其TIMP-1 mR-NA的表达是TMP抗肝纤维化的部分机制。     

板蓝根活性部位体外抗单纯疱疹病毒1型的作用研究

目的:探讨板蓝根活性部位抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用和对Hep-2、Hela、U937细胞表达干扰素(IFN)的影响。方法:MTT法检测Hep-2细胞中药物对HSV-1的抑制作用。实时定量RT-PCR检测Hep-2、Hela、U937细胞各组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的mRNA,ELISA检测各组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达。结果:MTT结果显示板蓝根活性部位为0.5 mg/mL时其8 h预防治疗的病毒抑制率为13.96%。Hep-2、Hela、U937细胞药物组IFN-α、IFN-β、IFN-γ的mRNA较正常细胞组均有增高,且U937细胞的IFN-α、12 h的IFN-βmRNA显著升高(P0.05)。Hep-2细胞药物组24 h IFN-γ表达量较正常组显著升高(P0.05)。结论:板蓝根活性部位可能通过诱导细胞产生IFN发挥抗HSV-1作用。     

氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路的研究

目的 探究氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路。方法 采取MTT法对不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱对HEC-1B细胞抑制率;氧化苦参碱+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、氧化苦参碱+pcDNA3.1-SIRT1-TSC2组(转染pcDNA3.1-SIRT1)均用脂质体法转染,加入氧化苦参碱(200μmol/L)处理;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、Western blotting法对细胞内信息调节因子1(SIRT1)、TSC2、β-catenin、c-Myc的mRNA水平与蛋白表达分别进行检测和评估,予以流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果 相比对照组,予以不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱各组的细胞增殖抑制率与凋亡率均呈增高趋势(P<0.05),氧化苦参碱(200μmol/L)组细胞内SIRT1、TSC2的mRNA和蛋白水平均呈显著降低趋势(P<0.05);过表达SIRT1-TSC2可逆转氧化苦参碱对HEC-1B细胞增殖、Wnt信号通路失活效...     

参芪扶正注射液对肺癌细胞凋亡及NCR1/NKp46 通路的影响

目的:探讨参芪扶正注射液对肺癌细胞凋亡及负性调节区域因子1/自然杀伤因子蛋白46 (NCR1/NKp46)通路的影响。方法:将人肺癌LEWIS细胞分为LEWIS组、顺铂组、参芪扶正注射液低、高剂量组(低、高剂量组),以上各组每孔设6个平行样。LEWIS组取10 mL肺癌LEWIS细胞液(细胞浓度为5×106/mL)于10%胎牛血清的DMEM培养液中;顺铂组细胞培养方法同LEWIS组,加入顺铂使终浓度为50.0μg/mL;低、高剂量组细胞培养方法同LEWIS组,分别加入参芪扶正注射液,使终浓度为50.0μg/mL、100.0μg/mL,培养72 h。培养结束后,MTT法测定各组细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡水平,RT-PCR法及Western blot法测定NCR1、NKp46基因与蛋白表达水平。结果:与LEWIS组比较,顺铂组与低、高剂量组细胞OD值、存活率、克隆形成数目降低,凋亡率、G1期水平及NCR1、NKp46 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与顺铂组比较,低剂量组细胞OD值、存活率、克隆形成数目升高,凋亡率、G1期水平及NCR1、NKp46 mRNA和蛋白表达降低(P0.05);高剂量组细胞OD值、存活率、克隆形成数目降低,凋亡率、G1期水平及NCR1、NKp46 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与低剂量组比较,高剂量组OD值、存活率、细胞克隆形成数目降低(P0.05),凋亡率、G1期水平及细胞NCR1、NKp46 mRNA和蛋白表达均升高(P0.05)。结论:参芪扶正注射液能抑制人肺癌LEWIS细胞增殖,促进其凋亡;其机制与参芪扶正注射液可促进肺癌LEWIS细胞NCR1、NKp46 mRNA与蛋白高表达,进而介导NK细胞杀伤肺癌细胞有关。     

壮骨方对高糖培养下血管内皮细胞增殖及Notch1、Noggin表达的影响

目的 通过体外细胞实验，探讨壮骨方对高糖培养下血管内皮细胞增殖及Notch1、Noggin表达的影响。方法 采用人脐静脉内皮细胞原代培养，待细胞生长至合适浓度后将细胞随机分为阴性对照组、高糖组、高糖+20%壮骨方组、高糖+血小板衍化生长因子BB(PDGF-BB)组、20%壮骨方组、PDGF-BB组。干预后采用MTT法检测血管内皮细胞增殖水平，使用流式细胞术检测细胞凋亡水平，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组血管内皮细胞Notch1、Noggin的表达水平。结果 与阴性对照组比较，高糖培养下血管内皮细胞增殖受到显著抑制(P<0.01)、凋亡率显著增加(P<0.01),Notch1、Noggin蛋白及mRNA水平显著降低(P<0.01);与高糖组比较，高糖+20%壮骨方组、高糖+PDGF-BB组血管内皮细胞增殖抑制明显改善(P<0.05)、凋亡率显著下降(P<0.01),Notch1、Noggin蛋白及mRNA水平明显上调(P<0.01)。结论 壮骨方能促进血管内皮细胞增殖、抑...     

三七总皂苷对H2O2诱导BMSCs 凋亡的保护作用及机制研究

目的：体外观察三七总皂苷（tPNS） 对过氧化氢（H2O2） 诱导的骨髓间充质干细胞（BMSCs） 凋亡的影响,并通过ERK1/2 通路初步探讨tPNS 的作用分子机制。方法：全骨髓贴壁法体外分离、培养SD 大鼠BMSCs。不同浓度tPNS （25、50、100 和200 μg/mL） 处理BMSCs 24 h 后,用500 μmol/L H2O2 孵育细胞24 h 诱导凋亡,后行MTT 实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期。100 μg/mL tPNS 预处理24 h 后,加ERK1/2 抑制剂PD98059（25 μmol/L） 1 h,后用500 μmol/L H2O2 孵育细胞24 h 诱导凋亡,用Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western Blot 检测细胞ERK1/2 及其蛋白磷酸化的表达。结果：与对照组比较,其他各组存活率均显著降低（P＜0.01）;与H2O2 组比较,100 μg/mL 和200 μg/mL tPNS 组均能显著提高BMSCs 的存活率（P＜0.01,P＜0.05）,其中100 μg/mL 效果更佳,所以采用最佳浓度组100 μg/mL tPNS 组进行后期研究。BMSCs 经tPNS干预24 h 后,100 μg/mL 和200 μg/mL tPNS 组细胞周期中G2+S 期细胞数的比例较H2O2组明显增加（P＜0.05）,其中100 μg/mLtPNS 组较200 μg/mL tPNS 组更多;其他浓度tPNS 组与H2O2 组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,其他各组凋亡率均升高（P＜0.01）;与H2O2 组比较,tPNS 组能显著降低BMSCs 的凋亡率（P＜0.01）;与tPNS 组比较,tPNS+PD98059 组能显著升高BMSCs 的凋亡率（P＜0.05）。与对照组比较,H2O2 组、tPNS+PD98059 组能显著下调ERK1/2 蛋白的磷酸化表达（P＜0.01）;与H2O2 组比较,tPNS 组、tPNS+PD98059 组能显著上调ERK1/2 蛋白的磷酸化表达（P＜0.01）;tPNS 组与tPNS+PD98059 组之间并没有显著差异。结论：tPNS 对H2O2 诱导的BMSCs 凋亡有保护作用,其机制可能与促进ERK1/2 蛋白的磷酸化表达有关。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对受损神经元的影响

目的:从内质网应激的角度观察淫羊藿苷对受损神经元的影响,并探究其修复受损神经元的部分机制。方法:采用神经生长因子(NGF)将PC12细胞诱导分化为神经元,并使用流式细胞术测定微管相关蛋白2(MAP2)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性率进行鉴定。实验分为4组,空白组为PC12诱导分化的神经元细胞;溶剂组为PC12诱导分化的神经元+0.1%二甲基亚砜(DMSO);毒胡萝卜素组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素;淫羊藿苷组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素+0.1μmol·L^-1淫羊藿苷,使用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),葡萄糖调节蛋白78(Grp78)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CHOP,Grp78 mRNA表达。结果:与溶剂组比较,毒胡萝卜素组可抑制经NGF诱导的神经元样PC12细胞的增殖活性,可促使细胞凋亡,并能够上调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01);与毒胡萝卜素组比较,淫羊藿苷组可缓解毒胡萝卜素对神经元增殖活性的抑制,减少神经元凋亡,并能够下调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿苷可通过下调CHOP和Grp78的表达抑制内质网应激,促进受损神经元的修复。     

补肾醒脑解毒方对培养神经元单纯疱疹病毒感染后NGF和BDNF表达的影响

观察补肾醒脑解毒中药复方对HSV-1感染后神经元内NGF、BDNF表达的调节作用.用HSV-1感染原代培养大鼠海马神经元造成急性感染与潜伏感染,然后运用Northern杂交方法检测中药煎液对感染神经元NGF和mRNA表达水平的影响.结果显示(1)正常培养海马神经元内有微量NGF和BDNF表达,加入中药煎液后NGF和BDNF表达明显提高;(2)感染0.1MOI HSV-1后6-12h出现BDNF与NGF表达增加,24h后下降,48h后显著低于正常水平,4d后表达消失.加中药煎液后NGF和BDNF表达时间延长;(3)补肾醒脑解毒方能使潜伏感染神经元NGF和BDNF表达持续增加,并维持潜伏感染神经元存活达10周以上.结果表明补肾醒脑解毒方对HSV-1感染神经元NGF和BDNF表达具有上增性调节作用.     

木犀草素含药血清对高糖诱导肾小球系膜细胞AMPK/SIRT-1/PGC-1α信号通路及凋亡的影响

目的:探讨木犀草素(Luteolin)含药血清对高糖诱导下肾小球系膜细胞(GMCs)凋亡及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)信号通路的影响。方法:将健康SPF级SD雄性大鼠分为正常组、Luteolin低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组、罗格列酮阳性组(0.36 mg/kg),每组10只,均灌胃给予相应剂量药物,1次/d,连续7 d后,经腹主动脉取血制备含药血清。取SV40 MES13型小鼠GMCs将其分为正常组、高糖模型组、Luteolin含药血清低、中、高剂量组、阳性含药血清组,各组细胞按相应剂量药物处理并培养24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测各组GMCs存活率及凋亡率;以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞通路蛋白AMPK/SIRT-1/PGC-1α及凋亡相关蛋白脂肪酸合酶(Fas)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达。结果:与正常组相比,模型组GMCs细胞密度、胞质微丝样结构、胞核颗粒沉积等HE染色病理形态、存活率、Bcl-2蛋白表达均升高(P<0.05),凋亡率、pAMPK/AMPK、SIRT-1、PGC-1α、Fas蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组相比,Luteolin含药血清低、中、高剂量组及阳性对照组细胞密度、胞质微丝样结构、胞核颗粒沉积等HE染色病理形态、存活率、Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、pAMPK/AMPK、SIRT-1、PGC-1α、Fas蛋白表达均升高(P<0.05),且Luteolin各剂量组呈剂量依赖性。阳性对照组与Luteolin含药血清高剂量组相比,上述指标无差异(P>0.05)。结论:Luteolin血清可能通过激活AMPK/SIRT-1/PGC-1α蛋白表达,抑制高糖诱导下GMCs过度增生,促进其凋亡。     

新风胶囊含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡和炎症的影响

观察新风胶囊(XFC)含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡和炎症的影响,探讨XFC治疗RA的作用机制。建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,用cell counting kit-8(CCK-8)、酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫荧光、原位末端转移酶标记(TUNEL)法观察XFC含药血清对RA-FLS凋亡和炎症指标的影响。CCK-8结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为10 ng·mL-1和48 h,XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为6.48 mg·g^-1和72 h。ELISA结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组TNF-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-6,IL-8的表达均显著升高,IL-4和IL-10的表达均显著降低(P<0.01);经XFC含药血清干预后,TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8的表达均显著下降,IL-4和IL-10的表达均显著升高(P<0.01)。RT-qPCR结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组Fas、FasL、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8、Bax、Bcl-X1 mRNA的表达均显著降低,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达显著升高(P<0.001);经XFC含药血清干预后,Fas,FasL,caspase-3,caspase-8,Bax,Bcl-X1 mRNA的表达均显著升高,Bcl-2 mRNA的表达显著下降(P<0.01)。免疫荧光结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组caspase-3和Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);经XFC含药血清干预后,caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。TUNEL结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组细胞凋亡减少(P<0.05);经XFC含药血清干预后,细胞凋亡显著增多(P<0.05)。促进RA-FLS凋亡、抑制其炎症反应是XFC治疗RA的作用机制之一。     

鸦胆子油乳对HPV16亚型感染细胞的作用及机制研究

目的研究鸦胆子油乳（bruceajavanicaoilemulsion,BJOE）在体外对人乳头瘤病毒（hu-manpapillomavirus,HPV）16亚型感染细胞的抑制作用及其可能作用机制。方法选择人宫颈鳞状上皮永生化细胞系（Ectl／E6E7）与人宫颈癌CaSki细胞系作为HPV16亚型感染的宫颈癌前病变与宫颈癌体外实验模型。采用MTT法检测5、10、20及40#g／mLBJOE体外分别作用24、48及72h对HPV16感染细胞增殖活性的影响;Hoechst33258细胞核染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化;AnnexinV-FITC／Pl双染色法检测细胞凋亡率;半定量RT．PCR法检测HPV16E6、E7基因mRNA的表达;免疫细胞化学染色（Elivison二步法）检测HPV16E6、E7、p53及Rb基因蛋白的表达。结果（1）5、10、20及40μg,mLBJOE体外分别作用24、48及72h对HPV16感染细胞的增殖具有明显抑制作用,且表现为浓度与时间的依赖性（P〈0．05）。（2）HPV16阳性细胞在BJOE作用后发生了细胞凋亡形态学变化,5、10及20μg／mLBJOE体外作用48h后细胞凋亡率逐渐升高（P〈0．05）。（3）5、10及20μg／mLBJOE体外作用HPV16阳性细胞48h后E6与E7基因mRNA的相对表达量逐渐降低（P〈0．05）。（4）5、10及20μg,mLBJOE作用后,HPV16E6、E7及突变型P53蛋白的表达逐渐减弱（P〈0．05）,而Rb蛋白的表达逐渐增强（P〈0．05）。结论BJOE在体外对HPV16亚型感染细胞具有明显的抑制作用,其作用机制可能与药物下调病毒癌基因E6、E7表达相关。     

补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1/Jagged1信号通路的影响

目的:通过体外细胞实验研究补肾抑瘤汤对前列腺癌细胞增殖的干预作用及其机制。方法:首先按照血清药理学方法,给予SD大鼠连续灌胃用药7 d,取血制备空白血清和补肾抑瘤汤含药血清;然后以人前列腺癌细胞PC-3为模型研究补肾抑瘤汤含药血清对前列腺癌细胞增殖及Notch1/Jagged1信号通路的影响,噻唑蓝(MTT)比色法检测补肾抑瘤汤含药血清(2.5%,5%,10%,15%)处理PC-3细胞后不同时间点(12,24,36 h)的细胞增殖情况,分别应用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1,Jagged1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,经补肾抑瘤汤含药血清处理12,24,36 h后,PC-3细胞增殖受到了不同程度的抑制,其中以36 h的抑制作用最为显著(P0.01);补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1,Jagged1 mRNA和蛋白表达均有抑制作用,尤其是补肾抑瘤汤10%,15%含药血清组抑制效果明显(P0.05,P0.01)。结论:补肾抑瘤汤含药血清能明显抑制PC-3细胞增殖,作用可能与调控Notch1/Jagged1表达有一定相关性。     

冠心平片含药血清对（H2）（O2）诱导人血管内皮细胞凋亡及NF-κB蛋白表达的影响

目的 探讨冠心平片含药血清抗H2O2诱导血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VEC)凋亡作用及对核因子 κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)蛋白表达的影响。方法 将大白兔随机分为正常组(生理盐水,10 mL/kg)、维拉帕米组(0.02 g/kg,10 mL/kg)、冠心平小剂量组(2.8 g/kg,10 mL/kg)、冠心平中剂量组(5.6 g/kg,10mL/kg)、冠心平大剂量组(11.2 g/kg,10 mL/kg),每组3只。灌胃给药,连续3天,最后1天灌胃2次,间隔2 h,末次给药后1 h,耳缘静脉采血,放置1 h,2 500 r/min离心30 min,吸取血清,56 ℃、30 min灭活,制备含药血清。采用100 μmol/L H2O2作用于对数生长期的VEC建立细胞凋亡损伤模型。造模后分为6组,每组5个样本：正常组(10%空白血清培养液)、模型组(10%空白血清培养液+100 μmol/L H2O2)、维拉帕米组(10%维拉帕米血清培养液+100 μmol/L H2O2)、冠心平低剂量组(10%低剂量冠心平血清培养液+100 μmol/L H2O2)、冠心平中剂量组(10%中剂量冠心平血清培养液+100 μmol/L H2O2)、冠心平高剂量组(10%高剂量冠心平血清培养液+100 μmol/L H2O2)。采用流式细胞术检测VEC凋亡率,采用Western blot检测NF-κB蛋白表达。结果 模型组VEC凋亡率(9.00%±1.18%)、NF κB蛋白表达(0.39%±0.06%)较正常组升高(P<0.01);与模型组比较,维拉帕米组(6.00%±0.18%)及冠心平高剂量组(5.30%±0.08%)、中剂量组(6.83%±0.51%)VEC凋亡率明显降低,各给药组NF-κB蛋白表达显著降低(维拉帕米组：0.28%±0.03%,冠心平低剂量组：0.33%±0.03%,冠心平中剂量组：0.30%±0.03%,冠心平高剂量组：0.28%±0.04%, P<0.01, P<0.05)。结论 冠心平片可以拮抗H2O2诱导VEC的凋亡效应,其机制可能与调节NF-κB有关。     

柴苓汤对慢性环孢素A肾损伤的防护作用及其机制研究

目的 观察柴苓汤对慢性环孢素A肾病(chronic cyclosporine A nephropathy,CCN)大鼠肾脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）表达及细胞凋亡、增殖的影响,探讨其拮抗肾纤维化的可能作用机制。方法 采用经口灌服环孢素A［cyclosporine A, CsA,30mg/(kg·d）］的方法复制慢性环孢素A肾病大鼠模型,同时灌胃给予中药柴苓汤［3g／（kg·d）］治疗。测定大鼠肾功能指标血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）及肌酐清除率（CCr）;Masson染色观察肾小管间质纤维化程度;免疫组化、RT PCR观察TGF-β1、CTGF蛋白及基因表达;流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率、增殖指数。结果与对照组［BUN（mmol/L）：6.123±0.588;SCr(μmol/L)：75.654±8.196;CCr(mL/min)：0.539±0.169］比较,模型组大鼠肾功能（BUN：11.600±1.437;SCr：101.985±10.809;CCr：0.272±0.060）明显降低（P<0.01）;肾间质区胶原成分明显增多;肾小管上皮细胞及间质细胞TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01）;肾脏细胞增殖指数及凋亡率均有所上升,但凋亡/增殖的比值（0.317±0.059）较对照组（0.680±0.150）下降（P<0.01）。经中药柴苓汤治疗,大鼠肾功能（BUN：7.340±0.857;SCr：84.923±10.627;CCr：0.405±0.081）显著提高（P<0.05,P<0.01）,间质区胶原成分沉积减少;TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA高表达下调（P<0.01）,肾脏细胞凋亡/增殖的比值（0.650±0.092）提高（P<0.01）。结论 柴苓汤能够改善CCN模型大鼠肾功能,抑制TGF-β1、CTGF表达,并通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,恢复细胞凋亡与增殖的平衡,从而延缓肾间质纤维化进程。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷体外诱导NB4-R1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨葛根总黄酮联合三氧化二砷(As2O3)对维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖及凋亡的影响。方法:采用葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)联合As2O3(1μmol/L)处理NB4-R1细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果:(1)一定浓度葛根总黄酮对NB4-R1细胞生长有抑制效应,呈剂量和时间依赖性,相同条件下,葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3对NB-R1细胞抗增殖作用强于单用葛根总黄酮,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)及葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3处理NB4-R1细胞48 h后,早期凋亡率呈浓度依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)瑞氏染色,在光镜下观察到葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,且联用组较单药组明显。(4)流式细胞术检测细胞周期变化发现葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用可影响细胞进程,表现为S期细胞增多,葛根总黄酮+As2O3联用组比各单用葛根总黄酮组Sub-G1增加更为明显。(5)Western blottimg结果显示葛根总黄酮可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2表达。结论:低浓度葛根总黄酮体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μmol/L As2O3具有协同作用;其诱导凋亡作用机制可能为阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK通路。     

Ginsenoside Rb1 regulates the expressions of brain-derived neurotrophic factor and caspase-3 and induces neurogenesis in rats with experimental cerebral ischemia

Aim of the study

Recent studies have revealed that ginsenoside Rb1 (GRb1) is neuroprotective for cerebral ischemia. However, the mechanism underlying of this function is unclear. We assessed whether this neuroprotective effect of GRb1 was mediated by the levels of brain-derived neurotrophic factor (BDNF), by the levels of caspase-3 proteins and by induced neurogenesis in rats following transient cerebral ischemia or not.

Materials and methods

Cerebral ischemia was prepared by a 2 h occlusion of the middle cerebral artery and reperfusion, followed by infusion of GRb1 (40 mg/kg) and saline (GRb1 and ischemia groups, respectively). All rats were sacrificed at 3 and 12 h, 1, 2, 3, 5, and 10 days after reperfusion. Normal and sham-operated rats were used in control group. Modified Neurological Severity Scores (mNSS) test and hematoxylin and eosin staining were respectively performed to evaluate neurological function and histological feature. Immunohistochemistry was used to identify intrinsic neurogenesis by nestin antibody. Western blotting was used to detect BDNF and caspase-3 protein content.

Results

GRb1 infusion after cerebral ischemia significantly promoted recoveries of neurological functions at 3 and 5 days after reperfusion compared to ischemic rats. The number of nestin-positive cells was apparently increased after GRb1 infusion compared to ischemia rats at given time. Moreover, BDNF was significantly increased in GRb1-treated rats compared to ischemia rats at different time points. In contrast, GRb1 infusion after the onset of reperfusion, caspase-3 at a given time was significantly reduced compared to ischemia rats, but still significantly increased compared to control rats.

Conclusions

Promotion of the neurogenesis and regulation of the expressions of BDNF and caspase-3 may be involved in GRb1-induced neuroprotection against cerebral ischemia.