依贝沙坦对阿霉素肾病大鼠肾小管间质的保护作用

目的 探讨依贝沙坦（irbesartan)对阿霉素诱导重复单肾大鼠肾小管及间质的保护作用及其可能的调节机制。方法 将诱导的肾病大鼠分为肾病组和依贝沙坦治疗组，并设假手术组为正常对照。检测依贝沙坦治疗4周后，3组大鼠肾功能和组织病理改变，并用免疫组织化学（组化）或原位杂交的方法检测肾小管间质中转化生长因子β1(TGF-β1），基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的表达。结果 治疗组大鼠24h尿蛋白，肾重/体重，肾小球截面积以及病理改变与对照组相比明显减轻，肾小管间质中TGF-β1，MMP-9，TIMP-1表达均有不同程度的减少。结论 通过调节细胞外基质降解作用。依贝沙坦能延缓单侧肾切除加重复阿霉素注射诱导的肾病大鼠肾小管间质的病变。     

缺氧诱导因子1α介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导肾间质纤维化中的作用

目的 探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导肾间质纤维化（RIF）中的作用。 方法 体外培养肾小管上皮细胞,以不同浓度（10-9~10-6 mol/L）的AngⅡ分别处理24 h、48 h时,用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测肾小管上皮细胞中HIF-1α、脯氨酸羟化酶2（PHD2）及基质金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）mRNA和蛋白的表达变化情况。 结果 随AngⅡ刺激浓度的增加,HIF-1α mRNA的表达水平也增加,呈浓度依赖性。当AngⅡ浓度在10-7 mol/L,并且干预时间为24 h时,HIF-1α mRNA的表达水平增加了166%。实时荧光定量PCR和Western印迹分析显示,相对于空白对照组,在AngⅡ干预的肾小管上皮细胞中HIF-1α、TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平均升高 （P < 0.05）,而PHD2的mRNA和蛋白表达水平均下降（P < 0.05）。 结论 AngⅡ可能通过下调PHD2的表达而减少肾小管上皮细胞中HIF-1α的降解,从而上调HIF-1α及TIMP-1的表达,参与RIF。     

黄芪对肾间质纤维化模型大鼠肾组织MMP-9／TIMP-1表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）在肾间质纤维化中的表达及黄芪抗纤维化的分子作用机制。方法采用单侧输尿管结扎（UUO组）造模。将24只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（UUO组）、厄贝沙坦治疗组（Irbesartan组）和黄芪治疗组（AM组）4组,每组6只。造模14d后抽血检测肾功能,取结扎侧肾组织观察肾间质病变,免疫组织化学染色法检测肾组织MMP-9和TIMP-1表达。结果①AM组血肌酐和尿素氮水平较UUO组低（P〈0．05）,肾纤维化程度较UUO组有明显改善（P〈0．01）。②肾组织TIMP-1表达,UUO组较Sham组显著升高（P〈0．01）,AM组较UUO组明显降低（P〈0．01）;肾组织MMP-9表达,UUO组与Sham组差异无统计学意义（P〉0．05）,AM组较UUO组显著升高（P〈0．01）。结论黄芪可改善UUO大鼠肾功能,并可通过抑制TIMP-1表达,调节MMP-9／TIMP-1平衡来发挥其抗纤维化的作用。     

伊贝沙坦对胰岛素抵抗大鼠肾间质纤维化的影响

目的：观察伊贝沙坦对胰岛素抵抗大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、天然抑制物金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响与肾间质纤维化的关系。评价伊贝沙坦对肾间质纤维化的治疗作用。方法：将大鼠随机分为对照组、高果糖喂养组和伊贝沙坦干预组,每组8只。每周测血压1次,喂养18周后处死取血检测空腹血糖（FBG）、胰岛素（FINS）,并取肾组织进行常规肾脏病理检查,肾组织免疫组织化学染色对肾组织MMP-2、TIMP-1图像分析定量测定。结果：各组大鼠血糖之间无统计学差异（P〉0.05）。对照组与伊贝沙坦组空腹胰岛素无差异（P〉0.05）,而高果糖喂养组胰岛素水平显著高于其他两组（P〈0.05）。高果糖喂养组胰岛素敏感性明显低于对照组和伊贝沙坦组（P〈0.01）。伊贝沙坦组较高果糖喂养大鼠肾组织MMP-2明显升高、TIMP-1明显降低和MMP-2/TIMP-1明显升高（P〈0.01）。结论：伊贝沙坦可改善高果糖喂养大鼠的胰岛素抵抗。高果糖喂养可以降低肾组织MMP-2,提高TIMP-1,降低MMP-2/TIMP-1,而伊贝沙坦可逆转这种改变。     

硝苯地平对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制的探讨

探讨血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）在糖尿病肾病（DN）发病中的作用以及钙离子拮抗剂硝苯地平对肾脏保护作用的机制。 方法 大鼠随机分为3组：健康对照（N）组、DN组和硝苯地平治疗（T）组，每组10只。采用链脲菌素诱发DN大鼠模型，治疗组以硝苯地平控释片15 mg•kg-1•d-1干预治疗，治疗第2周和4周，检测大鼠平均动脉压（MAP）、尿蛋白量（24 h）、Scr水平；用免疫组化和Western印迹方法检测大鼠肾脏VEGF、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达水平；RT-PCR法检测VEGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达。 结果 与N组比较，DN组大鼠尿蛋白量、Scr水平和MAP均显著上升[分别为(78.87±17.62)比(6.30±1.91) mg/24 h、(203.88±18.08)比(84.98±10.09) μmol/L、(141.1±8.7)比(99.8±3.8) mm Hg， P均 < 0.05]；肾组织VEGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达增强（P < 0.05），且MMP-9/TIMP-1比值明显下降（P < 0.05）。与DN组比较，T组尿蛋白量（24 h）[（58.35±10.48） mg]、Scr水平[（165.81±15.86） μmol/L]和MAP[（102.6±4.4） mm Hg]均显著下降（P均 < 0.05）；肾组织VEGF表达下调（P < 0.05），MMP-9、TIMP-1 mRNA和其蛋白表达水平显著增高（分别P < 0.05和P < 0.01），MMP-9/TIMP-1比值显著升高（P < 0.05）。DN大鼠肾组织VEGF mRNA水平与尿蛋白量（24 h）呈正相关（r = 0.748，P < 0.05），与MMP-9/TIMP-1的比值呈负相关（r = -0.711, P < 0.05）。 结论 VEGF、MMP-9和TIMP-1可能参与了DN的发病过程，硝苯地平可能通过影响VEGF、MMP-9及TIMP-1的表达而实现对肾脏的保护作用。     

雌激素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的探讨雌激素对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的作用。方法雌性SD大鼠30只，随机分为4组：Ⅰ组对照组；Ⅱ组生理雌激素组；Ⅲ组低雌激素组；Ⅳ组高雌激素组。UUO术后21d处死各组大鼠，光镜观察梗阻肾组织病理变化，并分别用免疫组化和RT-PCR方法检测各组肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）的表达。结果低雌激素组间质纤维化病变最明显，高雌激素组病变显著减轻（P〈0．01）。与生理雌激素组相比，低雌激素组α—SMA和TIMP-1蛋白和基因的表达增加（P〈0．05）；高雌激素组上述物质表达则减少（P〈0．05）。结论雌激素可能通过抑制α-SMA和TIMP-1的表达进而减少细胞外基质的沉积而发挥肾保护作用。     

Valsartan对糖尿病肾病肾保护作用的实验研究

目的 :探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 (AT1RA)Valsartan对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶 - 2 (MMP- 2 )及其抑制物 (TIMP - 2 )表达的影响。方法 :大鼠随机分为正常对照组 (A组 )、糖尿病组 (B组 )及治疗组 (C组 ) ,大鼠腹腔单剂量注射链脲佐菌素 (streptozotocin ,STZ) 6 5mg/kg建立糖尿病动物模型。治疗组给予Valsartan(缬沙坦 ) 10mg·kg-1·d-1灌胃。第 3周、第 6周各组分别宰杀 6只 ,检测肌酐清除率、尿白蛋白排泄率及肾重 /体重 ,免疫组织化学染色检测肾小球MMP - 2、TIMP - 2、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原表达。结果 :治疗组肌酐清除率 (P <0 .0 5 )、尿白蛋白排泄率 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)及肾重 /体重 (P <0 .0 5 )均低于糖尿病组。免疫组织化学染色可见糖尿病大鼠肾小球TIMP - 2、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原表达明显增加 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。在治疗组 ,上述明显增加的表达均受到明显抑制 (P <0 .0 5 )。MMP - 2在糖尿病大鼠肾小球的表达明显被抑制 (P <0 .0 1) ,治疗组其表达明显增加 (P <0 .0 5 )。结论 :Valsartan通过上调糖尿病大鼠肾小球MMP - 2表达、下调TIMP - 2表达 ,对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用。     

基质金属蛋白酶-9及组织抑制剂-1与肾间质纤维化

肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）几乎是所有肾脏疾病发展的最终结果，其形成涉及到细胞、细胞因子和细胞外基质（ECM）等多种因素、多个环节相互作用和相互调节的复杂过程，最终结局是大量ECM的过度积聚。近年来对肾间质纤维化研究转向ECM的降解方面，其中基质金属蛋白酶（matrix metallopmteinases，MMPs）是最重要的一种，它是一组结构及功能同源的Zn^2＋依赖型肽链内切酶的总称，现已发现的MMPs有20多种，可分为几大类。基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases，TIMPs）是其内源性的一组特异性抑制因子肾小管间质纤维化主要是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型间质胶原及Ⅳ型膜胶原、糖蛋白和蛋白多糖的堆积,MMPs／TIMPs平衡失调肾间质纤维化发病的关键，而MMP-9及TIMP-1为最重要的一对。     

参芪降糖颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的：本研究拟通过糖尿病肾病动物模型,探索参芪降糖颗粒对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及其对肾组织HIF-1α和HO-1表达的影响。方法：以链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病肾病大鼠模型。随机分为对照组、糖尿病肾病组（模型组）和糖尿病肾病参芪降糖颗粒治疗组（治疗组）。给药8周后检测各组生化指标,采用免疫组化方法分析肾组织HIF-1α和HO-1的表达情况。结果：与对照组相比,模型组肾脏肥大指数、24h尿蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐明显升高（P〈0.01）;肾组织HIF-1α和HO-1蛋白表达明显升高（P〈0.01）。与模型组相比,参芪降糖颗粒治疗组肾脏肥大指数降低,24h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐降低（P〈0.05,P〈0,01）;肾组织HIF-1α和HO-1蛋白表达明显降低（P〈0.01）。结论：参芪降糖颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能与影响肾组织HIF-1α和HO-1的表达有关。     

罗格列酮抑制环孢素诱导的大鼠肾脏成纤维细胞基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶1组织抑制剂表达

目的 观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A(CsA)作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性保护作用的分子机制.方法 构建、筛选和扩增PPARγ基因的siRNA载体,并将载体转染至体外培养的NRK细胞.体外培养NRK细胞,随机分组.(1)对照组:不加处理;(2)RGZ组:加RGZ( 10 μmol/L);(3)CsA组:加CsA( 1.0 mg/L);(4)CsA+RGZ 组:同时加CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L);(5)CsA+RGZ+siRNA组:质粒pRNAT- U6.2/LentiPPARγ-236转染NRK细胞,然后同时加入CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L).培养24 h后,用实时荧光定量和RT-PCR法检测各组细胞中PPARγ、MMP-9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1) mRNA表达,用Western印迹法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 CsA明显上调PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达(均P＜0.05);RGZ与CsA合用后,PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达下降(均P＜0.05);应用PPARγ siRNA后,与RGZ+ CsA组相比,PPARγ mRNA表达显著下降(P＜0.05),MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达有所增加(均P＜ 0.05).CsA明显上调FN蛋白表达(P＜0.05);RGZ与CsA合用后,FN蛋白表达下降(P＜0.05);应用含PPARγ siRNA后,FN蛋白表达有所增加(P＜0.05).结论 罗格列酮可以显著减轻CsA诱导NRK细胞分泌的FN蛋白及MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达,构建的siRNA质粒转染NRK细胞,能够有效地阻断NRK中PPARγ mRNA的表达,部分阻断罗格列酮对CsA毒性的改善作用.     

Fluorofenidone reduces renal fibrosis in diabetic kidney disease mice

Objective To investigate the effects of fluorofenidone (AKF-PD) on diabetic kidney disease in db/db mice and its possible mechanisms. Methods (1) Fifty-six mice aged 8 weeks (half male and half female), including 42 db/db mice and 14 wild-type mice were studied. Forty-two db/db mice randomly were divided into model group (mock-treated diabetic db/db mice), AKF-PD (250 mg?kg-1?d-1) treatment group and losartan (20 mg?kg-1?d-1) treatment group. Wild-type mice and model mice were treated with vehicle (0.5% sodium carboxymethylcellulose), while the treatment groups received either AKF-PD or losartan. After 18 weeks, the blood glucose and urinary albumin were measured, the pathological changes of kidney were observed by PAS staining. The protein expressions of type Ⅳ collagen and fibronectin (FN) in kidney tissue were detected by immunohistochemistry. (2) Mouse glomerular mesangial cells (MES-13 cells) were divided into six groups: normal glucose group (5.5 mmol/L glucose), hypertonic group (5.5 mmol/L glucose+19.5 mmol/L mannitol), high glucose group (25.0 mmol/L glucose), AKF-PD group (25.0 mmol/L glucose+400 mg/L AKF-PD) and losartan group (25.0 mmol/L glucose+2 μmol/L losartan). After 72 h treatment, the expressions of type Ⅰ collagen, type Ⅳ collagen and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) mRNA were detected by real-time PCR, and the content of TGF-β1 protein in the culture supernatant was detected by ELISA. Results (1) Compared with the wild type mice, model mice had increased weight, blood glucose and glomerulosclerosis index (all P＜0.01), accompanied with heavy albuminuria, glomerular hypertrophy, mesangial area expansion and deposition of collagen type Ⅳ and FN (all P＜0.01). Compared with model mice, in AKF-PD and losartan groups 24 h urinary albumin and glomerulosclerosis index decreased (all P＜0.01), glomerular hypertrophy and mesangial area expansion alleviated, and the protein expressions of collagen type Ⅳ and FN were inhibited (all P＜0.01). (2) Compared with the normal glucose group, the mRNA expressions of type Ⅰ collagen and type Ⅳ collagen increased in high glucose group, meanwhile the mRNA and protein expressions of TGF-β1 increased (all P＜0.01). In AKF-PD and losartan groups the expressions of type Ⅰ collagen, type Ⅳ collagen and TGF-β1 were inhibited as compared with high glucose group (all P＜0.05). Conclusion Fluorofenidone may play an anti-fibrotic effect in db/db mice by reducing the expression of TGF-β1 and inhibiting collagen synthesis in glomerular mesangial cells.     

intermedin对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察intermedin( IMD)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组(n=10,行左输尿管分离术)、模型组(UUO,n=10)、氯沙坦组(n=10)和IMD组(n=10),后3组行左输尿管结扎术.各组大鼠分别于术后第14、21天随机选取5只,腹主动脉采血并留取梗阻侧肾组织之后处死.HE、Masson染色观察肾组织病理变化;比色法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及新鲜肾组织羟脯氨酸(Pro)含量;免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、IMD的表达水平,并进行半定量分析.结果 与假手术组相比,不同时间点UUO组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD的阳性表达均显著升高(P＜0.05);与UUO组相比,氯沙坦组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD表达均降低(P＜0.05),IMD组除IMD表达增加外,其余均降低(P＜0.05).结论 IMD可减轻UUO肾间质纤维化,改善肾功能,其机制可能与拮抗纤维化炎性介质TGF-β1有关.     

肾清饮对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的观察肾清饮对大鼠肾问质纤维化的影响,并探讨其机制。方法将56只大鼠随机分为正常对照组（C组）、模型组（M组）和药物干预组,药物干预组包括肾清饮预防组（S组）、肾清饮低剂量组（SL组）、肾清饮高剂量组（SH组）、苯那普利组（B组）、肾清饮＋苯那普利组（S＋B组）,每组8只。对M组和药物干预组大鼠采用腺嘌呤灌胃法建立肾间质纤维化动物模型。M组给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予蒸馏水灌胃;S组前3周同时给予腺嘌呤及肾清饮（0．4ml／d）灌胃,每毫升肾清饮含生药2．4g,第4～6周给予肾清饮（0．4ml／d）灌胃;SL组和SH组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予肾清饮灌胃,剂量分别为0．4ml／d和1．2ml／d;B组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周给予盐酸苯那普利灌胃,剂量为10mg·kg^-1·d^-1;S＋B组前3周给予腺嘌呤灌胃,第4～6周同时给予盐酸贝那普利（10mg·kg^-1·d^-1）及肾清饮（0．4ml／d）灌胃。比较各组大鼠血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、24h尿蛋白定量、血浆内皮素1（ET-1）水平、肾组织病理学表现、问质纤维化指数评分及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达。结果与C组相比,M组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子B1（TGF-β1）mRNA表达显著升高（P〈0．01）;与M组相比,各药物干预组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-β1 mRNA表达显著降低（P〈0．01）,肾间质纤维化程度减轻（P〈0．05）;各药物干预组之间相比,s组SCr、BUN、24h尿蛋白定量和血浆ET-1水平及肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-131mRNA表达降低最显著（P〈0．01）。结论肾清饮可延缓肾间质纤维化,减少尿蛋白,改善肾功能。     

基质金属蛋白酶9及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1在大鼠外伤性脑水肿中的表达及意义

目的 探讨大鼠脑损伤中基质金属蛋白酶9(MMP9)及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达变化规律及意义.方法 采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑损伤模型,采用干湿重法测定脑组织含水量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对大鼠脑损伤模型中MMP9及TIMP1 mRNA进行检测并分析两者比值.结果 实验组脑组织含水量(BWC),MMP9mRNA及TIMP1 mRNA表达量及两者比值均明显高于对照组,P值分别为0.013、0.000、0.000及0.011,差异有统计学意义(P<0.05),MMP9 mRNA与TIMP1mRNA表达量及两者比值与BWC均呈正相关,r值分别为0.654、0.355(P<0.05).结论 MMP9/TIMP1的比例失衡可能在外伤性脑水肿的发生发展过程中起重要作用.     

MMP-9及TIMP-1在甲状腺癌组织及外周血中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达,以及血清中MMP-9和TIMP-1浓度与肿瘤浸润、转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法测定32例甲状腺癌组织、23例癌旁组织及30例良性甲状腺病变组织标本中MMP-9和TIMP-1的表达,并应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测MMP-9和TIMP-1在其中21例甲状腺癌和19例良性甲状腺病变患者外周血清中的浓度。结果MMP-9及TIMP-1在甲状腺癌组织中呈高表达（75.0%、56.3%）,在癌旁组织及良性病变组织中呈低表达（30.4%、21.7%,26.7%、23.3%）,P〈0.05。MMP-9和TIMP-1蛋白的表达与肿瘤浸润程度、淋巴结转移和TNM分期有关（P〈0.05）,MMP-9蛋白表达与TIMP-1蛋白表达呈负相关（r=-0.509,P=0.003）。甲状腺癌组MMP-9和TIMP-1的血清浓度明显高于甲状腺良性疾病组（P=0.000,P=0.037）。甲状腺癌组织中MMP-9和TIMP-1蛋白表达高者相应血清中的MMP-9和TIMP-1浓度也较高（P〈0.05）。结论检测甲状腺肿瘤患者病变组织中MMP-9和TIMP-1的表达情况及外周血中MMP-9和TIMP-1浓度有助于甲状腺良、恶性病变的鉴别诊断,并可作为甲状腺癌预后评估的依据之一。