他克莫司对糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞浸润、增殖及活化的影响

目的探讨他克莫司对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制与肾脏内巨噬细胞浸润、增殖及活化的关系。方法应用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型，随机分为对照组、模型组、他克莫司0．5及1．0mg-1·kg-1·d-1给药组（模型组＋他克莫司0．5、1．0），4周后观察大鼠相对。肾质量、尿白蛋白排泄率，应用免疫组化方法，检测肾组织巨噬细胞表面标志、增殖细胞核抗原及诱生性一氧化氮合酶的表达。结果模型组＋他克莫司0．5、1．0组大鼠尿白蛋白排泄率水平明显低于模型组。免疫组化显示模型组大鼠肾组织巨噬细胞表面标志阳性、巨噬细胞表面标志阳性增殖细胞核抗原阳性及巨噬细胞表面标志阳性诱生性一氧化氮合酶细胞数阳性明显高于对照组，模型组＋他克莫司0．5、1．0组巨噬细胞表面标志阳性细胞数与模型组比较无明显差异，巨噬细胞表面标志阳性增殖细胞核抗原阳性及巨噬细胞表面标志阳性诱生性一氧化氮合酶细胞数明显低于模型组。结论他克莫司肾脏保护作用的机制可能部分与抑制肾组织中巨噬细胞增殖及活化有关。     

免疫抑制剂对大鼠慢性移植肾肾病中转化生长因子β1/Smads通路的影响及意义

目的 探讨不同免疫抑制剂对慢性移植肾肾病(CAN)中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响及意义.方法 采用SD大鼠到Wistar大鼠的强化CAN模型,然后将模型大鼠随机分为对照组(不行处理)、环孢素A组(给予环孢素A 6 mg·kg-1·d-1)、他克莫司组(给予他克莫司0.15 mg·kg-1·d-1)、霉酚酸酯组(给予霉酚酸酯20 mg·kg-1·d-1)和西罗莫司组(给予西罗莫司0.8mg·kg-1·d-1).分别于术后4、8、12周处死动物,观察移植肾组织的病理变化,用免疫组织化学法和时荧光定量聚合酶链反应测定肾组织中TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白及其基因的表达.结果 术后各组均呈现CAN的病理改变,环孢素A组和他克莫司组的病变程度较对照组重,而霉酚酸酯组和西罗莫司组的病变轻于对照组.术后各时间段,环孢素A组和他克莫司组TGF-β1和Smad2蛋白及其Mrna的表达明显高于对照组(P＜0.05),而Smad7蛋白及其Mrna的表达明显低于对照组(P＜0.05);霉酚酸酯组和西罗莫司组TGF-β1和Smad2蛋白及其Mrna的表达明显低于对照组(P＜0.05),而Smad7蛋白及其Mrna的表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 发生CAN时,环孢素A和他克莫司可上调TGF-β1的表达,影响TGF-β1/Smads通路,加重其病理损害,而霉酚酸酯和西罗莫司的作用与之相反.     

骨碎补类黄酮对系膜增殖性肾小球肾炎大鼠模型的抑制作用

目的:探讨骨碎补类黄酮提取物(flavonoid fraction,FF)对单克隆抗体OX-7诱导的系膜增殖性肾小球肾炎大鼠模型(anti-Thy 1.1 GN)的作用.方法:利用单克隆抗体OX-7诱导的anti-Thy 1.1 GN动物模型,将大鼠随机分成正常对照组、模型组(Thy 1.1 GN)、Thy 1.1 GN FF组、FF组.检测尿蛋白,三色染色评估肾小球细胞外基质改变,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)、ED-1及α-SMA在肾小球的表达,同时检测肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:Thy 1.1 GN FF组尿蛋白量及三色染色面积均比Thy 1.1 GN组减少(分别P＜0.05和P＜0.01);免疫组化显示PCNA、ED-1阳性细胞数及α-SMA在肾小球表达下调,均与Thy 1.1 GN组有统计学差异(P＜0.01);FF还可加快anti-Thy 1.1 GN模型肾皮质SOD活性的恢复(P＜0.01).结论:FF通过抗氧化活性,抑制大鼠系膜增殖性肾小球肾炎系膜细胞的增殖及基质的增加.     

益肾解毒汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织纤维化的影响

目的:研究益肾解毒汤在巨噬细胞增殖活化方面对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织纤维化的影响。方法:将健康成年雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、模型组、益肾解毒汤组和氯沙坦钾组,每组12只。假手术组大鼠游离左输尿管后,不结扎,分层缝合;其余3组大鼠均行UUO模型制备。益肾解毒汤组和氯沙坦钾组分别采用益肾解毒汤和氯沙坦钾每日灌胃1 mL,假手术组和模型组均予0.9%氯化钠溶液1 mL每日灌胃。2周后采用免疫组化染色检测大鼠肾组织中巨噬细胞表面标志物(-ED1)、增殖细胞核抗原(PCNA)以及诱生性一氧化氮合酶(iNOS)的表达,同时观察24 h尿蛋白定量。结果:模型组、益肾解毒汤组和氯沙坦钾组大鼠24 h尿蛋白定量分别为(10.70±1.02)mg、(7.52±0.78)mg、(8.32±0.57)mg,ED1的阳性表达面积分别为(65.25±12.05)μm2、(40.72±8.09)μm2、(51.76±7.85)μm2,PCNA的阳性表达面积分别为(73.2±9.43)μm2、(42.83±8.20)μm2、(53.49±8.27)μm2,iNOS的阳性表达面积分别为(74.4±9.10)μm2、(52.87±6.77)μm2、(67.50±8.13)μm2,均明显高于假手术组(P0.05),益肾解毒汤组与模型组比较,24 h尿蛋白定量及ED1、PCNA、iNOS阳性表达面积均显著减少(P0.05);而益肾解毒汤组大鼠24 h尿蛋白定量及ED1、PCNA、iNOS阳性表达面积均显著少于氯沙坦钾组。结论:益肾解毒汤能明显抑制ED1、PCNA、iNOS的表达,抑制巨噬细胞的增殖活化,有抗肾组织纤维化的作用。     

他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响

目的 探讨他克莫司对移植肝脏再灌注损伤的影响.方法 建立大鼠肝移植模型,实验组(40只)和对照组(40只)分别注射他克莫司和生理盐水,检测再灌注24、48和96 h后TNF-α、IL-1、ALT、AST、LDH、内皮素(endothelin,ET)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,观察肝脏超微结构和细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Fas、Bcl-2的mRNA水平.依据免疫抑制方案,将112例终末期肝硬化患者分为他克莫司组(63例)和环孢素A组(49例),比较临床肝移植使用环孢素A和他克莫司患者肝酶指标及急性排斥反应的发生.结果 实验组TNF-α、IL-1、ALT、AST、LDH、ET和MDA显著低于对照组(P＜0.05),肝脏超微结构受损和细胞凋亡较轻,Fas mRNA合成减少.患者使用他克莫司后急性排斥反应发生率较环孢素A低(x2=39.0,P＜0.05).结论 他克莫司可通过抑制细胞凋亡来减轻大鼠移植肝脏再灌注损伤,临床使用他克莫司能减少急性排斥反应的发生.     

脂联素基因重组慢病毒对早期糖尿病肾病小鼠肾脏的保护作用

目的 探讨静脉注射小鼠脂联素基因重组慢病毒对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的肾脏保护作用及其机制.方法 40只C57BL/6小鼠按数字随机法分为正常对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DN组)、阴性对照病毒(Lenti-IRES-EGFP)治疗组(DL组)、脂联素基因重组慢病毒( Lenti-Acdc-IRES-EGFP)治疗组(DA组),每组10只.应用链脲菌素(SFZ)结合高脂饮食诱导建立DN模型.重组慢病毒注射8周后,检测各组小鼠血浆脂联素水平、肾功能、尿白蛋白排泄率、肾组织病理改变.用免疫组织化学法原位检测肾组织增殖细胞核抗原( PCNA)表达.用Western印迹检测肾组织腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)水平.结果 成功构建脂联素超表达DN动物模型.与NC组比较,第12周末DA组小鼠肾质量指数(肾质量/体质量,KWI)、平均肾小球体积(MGV)、系膜面积比(FMA)、24h尿蛋白(UTP)均明显升高(P＜0.05),但低于DN组、DL组(P＜0.05).DA组肾组织PCNA阳性细胞数显著低于DN组、DL组(P＜0.01).与DN组、DL组相比,DA组小鼠肾组织AMPKα磷酸化水平显著升高(P＜0.01),mTOR磷酸化水平降低(P＜0.01).结论 脂联素通过激活AMPK信号通路,抑制mTOR信号活化,进而抑制早期DN时肾组织异常增殖.     

骨碎补类黄酮对氯化汞所致的急性肾衰竭大鼠模型的保护作用

目的:探讨骨碎补类黄酮提取物(flavonoid fraction,FF)对氯化汞(HgCI2)所致的急性肾衰竭(ARF)大鼠模型的保护作用.方法:利用HgCI2诱导的ARF动物模型,将大鼠随机分成正常对照组、HgCI2(模型组)、HgCI2 FF组、FF组.在实验第24、48、72 h检测血生化指标,光镜观察肾组织改变,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)、ED-1在肾组织的表达,同时检测肾组织MDA及GSH含量.结果:HgCI2 FF组肾脏病理改变比HgCI2组减轻,同时血肌酐下降(P<0.05);免疫组化显示PCNA、ED-1在肾间质表达下调,均与HgCI2组有统计学差异(分别P<0.01及P<0.05);FF还可预防肾组织因HgCI2毒性所致的MDA含量升高,GSH下降(P<0.05).结论:FF通过抗氧化作用,减轻HgCI2诱导的急性肾衰竭.     

0.1％他克莫司软膏联合二硫化硒洗剂治疗头部脂溢性皮炎的疗效观察

目的:探讨外用0.03％他克莫司软膏治疗治疗头部脂溢性皮炎临床疗效.方法:随机将105例患者分为两组:在二硫化硒洗剂外洗的基础上,治疗组(53例)予外用0.03％他克莫司软膏,对照组52例外用地奈德乳膏.共治疗4周.结果:第2、3、4周后治疗组症状积分明显低于对照组(P＜0.05);治疗第2、4周后治疗组马拉色菌检测数量明显低于对照组(P＜0.05).治疗组的总有效率显著优于对照组(P＜0.05).治疗组复发率22.6％,明显低于对照组51.9％(P＜0.05).结论:他克莫司治疗头部脂溢性皮炎疗效好,复发率低,临床值得推广.     

蛋白激酶Cβ抑制剂对肾缺血-再灌注损伤模型及其巨噬细胞亚型表达的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)β抑制剂对大鼠肾缺血-再灌注损伤(RIRI)模型的影响并检测巨噬细胞亚型的表达情况。方法健康SD雄性大鼠18只,按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、RIRI组、PKCβ抑制剂+RIRI组(Inhibitor+RIRI组),每组6只。术后24 h取血清、左肾组织标本,用全自动生化仪检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织内炎症细胞浸润和病理损伤情况,用免疫组织化学法和Western Blot法检测各组大鼠肾组织CD68、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)及CD206蛋白表达情况。结果 RIRI组大鼠血清Scr、BUN含量明显高于Sham组(均为P0.05),Inhibitor+RIRI组大鼠血清Scr、BUN含量明显低于RIRI组(均为P0.05)。Sham组肾脏无明显损伤,RIRI组肾脏炎症细胞浸润及肾小管结构损伤明显,Inhibitor+RIRI组肾脏炎症细胞浸润及肾小管结构损伤轻于RIRI组。RIRI组大鼠肾组织中CD68、iNOS及CD206的蛋白表达量均明显高于Sham组(均为P0.05);Inhibitor+RIRI组CD68、iNOS的蛋白表达量均明显低于RIRI组(均为P0.05);Inhibitor+RIRI组CD206的蛋白表达量明显高于RIRI组(P0.05)。结论 PKCβ抑制剂可在一定程度上减轻大鼠RIRI,这可能与PKCβ抑制剂改善缺血肾组织中炎症细胞浸润、促进巨噬细胞向M2表达有关。     

骨髓间质干细胞对大鼠急性肾小管损伤修复的促进作用

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)对氯化汞(HgCl2)导致的急性肾小管损伤有无治疗作用，并探讨其可能的机制。 方法 建立HgCl2腹腔注射导致大鼠急性肾衰竭模型。SD大鼠分为MSCs组(HgCl2+MSCs)、生理盐水组(HgCl2+生理盐水)及正常对照组。7 d后，观察体重、生存率、肾功能、肾脏病理改变，进行增殖细胞核抗原(PCNA)、巨噬细胞标志物ED-1和增强绿色荧光融合蛋白(EGFP)免疫组织化学染色，用RT-PCR技术检测肾组织内细胞因子的表达情况，并观察EGFP转基因的MSCs在肾脏的分布情况。 结果 MSCs组在体重、生存率、肾功能、肾脏病理改变上，均明显好于生理盐水组；肾组织内PCNA+及ED-1+细胞数明显少于生理盐水组；促进肾小管损伤修复的生长因子表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子(HGF)在肾组织内表达明显高于生理盐水组，而促炎症因子TNF-α则明显低于生理盐水组。7 d时，间质干细胞在肾间质中偶尔可见到，而肾小管中未见。 结论 MSCs输注可促进HgCl2所致的急性肾小管损伤的修复，其作用机制可能是通过调节肾组织中细胞因子的分泌起作用，而非完全依靠转分化成肾小管上皮细胞。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白表达及肾纤维化的影响

目的 探讨不同剂量厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白( OPN)表达及小管间质纤维化的影响.方法 将63只8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=14)、30 mg/kg肼屈嗪干预组(DM+ Hyd组,n=12)、25mg·kg-1· d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb25组,n=10)、50 mg·kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb50组,n=9)和200 mg · kg-1·d-1厄贝沙坦干预组(DM+Irb200组,n=11).糖尿病模型造模成功后4周,灌胃法给予相应剂量的肼屈嗪和厄贝沙坦.第12周末,观察各组大鼠24h尿白蛋白排泄率(UAER)、内生肌酐清除率(Ccr);PAS及Masson染色观察各组大鼠肾脏病理形态和胶原纤维沉积;ELISA法测定各组大鼠肾组织AngⅡ含量;实时定量PCR检测大鼠肾组织转化生长因子(TGF)β1、OPN mRNA的表达.结果 药物干预各组大鼠UAER、Ccr较DM组显著减少(均P＜ 0.05).DM组大鼠肾小球肥大,系膜基质增生,肾小球及小管间质有大量胶原纤维沉积;药物干预后,肾小球及肾小管上述病变减轻.DM组大鼠肾组织AngⅡ水平及TGF-β1、OPN mRNA表达均显著升高(均P＜0.05),给予肼屈嗪及厄贝沙坦干预后,AngⅡ、TGF-β1、OPN mRNA表达显著降低(均P＜0.05),且随着厄贝沙坦剂量的递增而递减.相关分析结果显示,DM组大鼠肾组织AngⅡ水平与OPN mRNA的表达呈正相关(r=0.74,P＜0.01).结论 厄贝沙坦通过减少肾脏局部AngⅡ水平,进而减少肾脏TGF-β1、OPN mRNA的表达,最终减轻小管间质纤维化,发挥肾脏保护作用,且这种保护作用具有剂量依赖性.     

霉酚酸酯及缬沙坦对糖尿病大鼠足细胞的保护机制研究

目的探讨霉酚酸酯、缬沙坦及2者联合应用对糖尿病。肾病（DN）大鼠足细胞损伤的保护作用。方法雄性Wistar大鼠行右肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，65mg／kg）建立糖尿病模型。将实验动物随机分为右。肾切除对照组（NC）、糖尿病组（DM）、霉酚酸酯治疗组（M）、缬沙坦治疗组（V）、缬沙坦和霉酚酸酯联合治疗组（V＋M）。治疗组分别给予霉酚酸酯15mg·kg^-1·d^-1，缬沙坦40mg·kg^-1·d^-1；联合治疗组为上述两组之和。检测各组8周末的左肾质量／体质量比值、尿蛋白量（24h）、血糖（Glu）、Scr。光镜及电镜观察肾组织形态学变化。免疫组化检测肾组织中nephrin、结蛋白（desmin）及单核细胞趋化因子1（MCP-1）蛋白表达。实时PCR测定肾组织中nephrin及MCP-1mRNA表达。结果与NC组相比，DM组大鼠血糖、尿蛋白量及左肾质量／体质量比值均显著上升（P〈0．01）；肾小球硬化指数（GSI）及肾间质损害加重（P〈0．01）；肾组织内MCP-1、desmin蛋白表达均显著上调（P〈0．01）。与DM组比较，M组、V组及V＋M组上述指标除Glu、Scr外，均明显改善（P〈0．05或P〈0．01）。与NC组（100％）相比，DM组nephrinmRNA表达下调（78％，P〈0.05）；各治疗组nephrinmRNA表达增加，以M组增加最明显（134％，P〈0．01）。与NC组（100％）相比，DM组MCP-1mRNA表达明显上调（251％，P〈0.05）；各治疗组明显降低，以M组最显著（126％，P〈0．01）。nephrinmRNA与MCP-1mRNA表达呈负相关（r=-0，86。P〈0．01）。尿蛋白量（24h）与MCP-1mRNA呈正相关fr=0．82，P〈0．01）；与nephrinmRNA呈负相关（r=-0．78，P〈0．01）。结论霉酚酸酯及缬沙坦均能下调糖尿病大鼠肾组织中desmin及MCP-1基因及蛋白的表达，上调nephrin基因及蛋白表达，降低尿蛋白量，预防肾损伤。联合治疗不优于单一治疗。霉酚酸酯可能通过抗炎性反应减轻足细胞损伤，减少蛋白尿，对早期DN大鼠具有明显的肾保护作用。     

蛋白质摄入水平对腹膜透析患者早期营养状况的影响

目的 观察每日蛋白质摄入(DPI)分别为0.8≤DPI≤1.0 g&#8226;kg-1&#8226;d-1和1.0<DPI≤1.2 g g&#8226;kg-1&#8226;d-1对新进入腹膜透析患者的营养状况的影响。 方法 选取2004年6月至2005年6个月期间进入腹膜透析且透析后1个月DPI 水平在0.8≤DPI≤1.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1范围的腹膜透析患者进入研究。分别于透析后1、3、6个月分别评估患者营养状况。血生化测定仪检测血红蛋白(Hb)、血白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平。人体测量法测量上臂围(AC)、三头肌皮褶厚度(TSF)和上臂肌围(AMC)。肌酐动力学方法测定瘦体质量。同时监测影响营养状况的一些重要因素并进行评价，包括DPI和每日能量摄入（DEI）水平、透析充分性[总的和残肾尿素清除指数（tKt/V和rKt/V）; 总的和残肾的标准化肌酐清除率,（tCcr和rCcr）]、代谢性酸中毒（血CO2CP）、炎性反应状态[血C反应蛋白（CRP）]、容量指标[生物电阻抗法测定并计算细胞外液/总体水（ECW/TBW）；身高标化的细胞外液（nECW）]。 结果 82例腹透患者进入本研究，其中39例为0.8≤DPI≤1.0 g&#8226;kg-1&#8226;d-1， DEI（108.24±17.99） kJ&#8226;kg-1&#8226;d-1； 43例为1.0<DPI≤1.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1，DEI（126.82±19.92） kJ&#8226;kg-1&#8226;d-1。两组患者基础的DPI和DEI水平，3个月时DPI，6个月时DPI和DEI值差异有统计学意义(P < 0.01或0.05)。透析后半年内两组平均tKt/V和rKt/V、tCcr和rCcr、CRP、CO2CP、ECW/TBW、nECW差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。两组患者透析半年内均保持营养状况稳定，分别于1、3及6个月时比较各项营养指标，两组患者血Alb、BUN、Scr、Hb、AC、AMC、TSF和LBM水平差异均无统计学意义(P ＞ 0.05)。 结论 新入的腹透患者不论其0.8≤DPI≤1.0 g&#8226;kg-1&#8226;d-1或1.0<DPI≤1.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1，均可保持透析早期的营养状况稳定，且不同DPI水平的患者透析半年内各项营养指标差异均无统计学意义。     

大剂量螺内酯对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响

目的 观察大剂量螺内酯对自发性高血压大鼠（SHR）肾脏纤维化的影响。 方法 8周龄的雄性SHR 24只随机分为低剂量和大剂量螺内酯干预组[分别为20和100 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1螺内酯灌胃]和高血压对照组，同时设同源正常对照组京都大鼠（WKY）8只。干预8周，检测收缩压、尿蛋白、血白蛋白、钾、钠、Scr和肾组织及血浆醛固酮水平。肾组织切片分别行HE和Masson染色，以评价肾小球损伤及肾小球内胶原沉积情况。免疫组化SABC法检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体蛋白表达。RT-PCR检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体mRNA水平。 结果 与高血压组大鼠相比，低剂量螺内酯干预后，尿蛋白减少（P < 0.05），血白蛋白升高（P < 0.05），血浆和肾组织醛固酮水平降低，但差异无统计学意义；大剂量螺内酯干预后，血压没有显著改变，尿蛋白显著升高[（27.3±4.5）比（24.5±3.2） mg/d， P < 0.05]，血白蛋白显著减少[（20.2±4.2）比（22.7±3.5） g/L, P < 0.05]，血浆和肾组织醛固酮水平显著升高[肾组织（28.3±1.5）比（22.2±0.6） ng/g， P < 0.05]。与高血压组比较，低剂量螺内酯干预后，蛋白管型增多、管周炎性细胞浸润均减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，蛋白管型、小管扩张加重，管周炎性细胞浸润明显增多（P < 0.05），肾小球内胶原形成亦明显增多（P < 0.05）。与高血压组大鼠比较，低剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体mRNA和蛋白表达均无显著改变，TGF-β1 mRNA和蛋白的表达显著减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体及TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均显著升高(P < 0.05)。 结论 大剂量螺内酯可以加重高血压肾脏纤维化，可能是通过上调醛固酮及其受体表达实现的。     

血管紧张素Ⅱ对足细胞nephrin 磷酸化水平的影响

目的 通过建立血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)输注大鼠模型及体外足细胞培养,观察AngⅡ刺激对足细胞nephrin磷酸化水平的影响.方法 30只SPF级Wistar大鼠皮下埋置渗透性微泵,随机分为AngⅡ组(AngⅡ400 ng· kg-1·min-1,n=12)、替米沙坦(Tel)组(AngⅡ+Tel 3 mg· kg-1·d-1,n=12)和正常对照组(生理盐水代替AngⅡ,n=6),于实验0、7、14、21、28 d测量大鼠尾动脉收缩压,收集24 h尿液,检测尿白蛋白.分别在14、28 d处死动物,收集血液标本,检测血肌酐;收集肾脏标本,透射电镜观察肾小球足细胞形态,放免法检测血浆及肾组织AngⅡ水平;Western印迹检测nephrin表达及其磷酸化水平.体外培养小鼠永生化足细胞,AngⅡ (10-6 mol/L)刺激不同时间,并行洛沙坦(10-5 mol/L)干预,Western印迹法检测足细胞nephrin 表达及其磷酸化水平.异硫氰酸荧光素( FITC)-鬼笔毒环肽(phalloidin)染色标记足细胞F-actin,用外周F-actin环评分系统(CFS)半定量分析足细胞骨架运动.结果 (1)与正常对照组同时间点相比,AngⅡ组大鼠自7d起尾动脉收缩压开始升高(P＜0.05),随着作用时间的延长,血压持续升高.AngⅡ输注7d大鼠开始出现蛋白尿,并持续增加.各组大鼠血肌酐、尿肌酐及内生肌酐清除率无明显变化.AngⅡ输注大鼠血浆及肾组织AngⅡ浓度明显增高(均P＜0.05).(2)与正常对照组相比,AngⅡ输注组大鼠肾小球足细胞nephrin表达明显减少,其磷酸化水平亦显著下降(P＜0.05).(3)与正常对照组相比,AngⅡ刺激早期(3～6 h),足细胞nephrin磷酸化表达即明显下调(P＜0.05),刺激12～24 h维持低水平表达.(4)AngⅡ刺激后,F-actin排列紊乱,逐渐向细胞外周分布形成F-actin环,CFS评分显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 正常状态下足细胞nephrin维持一定水平磷酸化状态,AngⅡ可以诱导足细胞nephrin磷酸化水平下调.nephrin磷酸化水平改变可能是AngⅡ诱导足细胞骨架重排、足突融合的重要分子机制.     

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨缬沙坦在防治糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化( RIF)中的作用及其机制.方法 54只大鼠随机被分为对照组(C组)、DN模型组(D组)和缬沙坦治疗组(T组).D组和T组大鼠分别给予链脲菌素( STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型.造模后T组给予缬沙坦混悬液40 mg· kg-1·d-1,分别于实验第4周、第8周和第12周末测血糖、血浆白蛋白、Scr、尿蛋白.Masson染色观察RIF面积.免疫组化法检查肾组织缺氧诱导因子1α( HIF-1α)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达.实时荧光定量PCR测定其mRNA表达.结果 与C组比较,D组及T组大鼠24 h尿蛋白量、Scr均显著升高,肾组织RIF面积、HIF-1α、TIMP-1蛋白及mRNA表达均显著增加,血清白蛋白及肾组织中MMP-9蛋白及其mRNA表达均明显减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与同时间点D组比较,T组在实验第8周末、第12周末24h尿蛋白、Scr均显著降低,肾组织中RIF面积、HIF-1α、TIMP-1蛋白及其mRNA表达均显著减少,血清白蛋白及肾组织中MMP-9及其mRNA表达均显著增多,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 缬沙坦可能通过下调HIF-1α、TIMP-1表达,上调MMP-9表达,延缓肾间质纤维化.     

罗格列酮对慢性环孢素肾病大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的 探讨罗格列酮(RGZ)对环孢素A(CsA)所致慢性环孢素肾病(CCN)大鼠肾间质纤维化的保护作用.方法 28只健康雄性SD大鼠被随机分成4组:(1)对照组(n=6):低盐饮食(LSD); (2)RGZ组(n=6):LSD+RGZ(5 mg·kg-1·d-1);(3)CsA组(n=8):LSD+CsA(15 mg·kg-1·d-1),(4)RGZ+CsA组(n=8):LSD +CsA(15 mg·kg-1·d-1)+RGZ(5 mg·kg-1 ·d-1).实时荧光定量PCR观察骨调素(OPN)及RANTES表达量;RT-PCR法检测MMP-9和TIMP-1的表达量;常规染色观察肾脏病理改变.结果 RGZ可改善CsA所致大鼠肌酐清除率的降低[(0.253±0.027)比(0.133±0.018) ml/min,P＜0.05];降低CCN大鼠肾间质单个核细胞浸润[(22.50±2.71)比(30.38±3.11),P＜0.05];减轻肾间质纤维化程度[(1.707±0.019)比(2.335±0.022),P＜0.05].与CsA组比较,RGZ+CsA组大鼠肾组织中OPN和RANTES mRNA表达量和MMP-9、TIMP-1 mRNA表达量降低(均P＜0.05).结论 RGZ可能通过下调趋化因子OPN、RANTES及MMP-9、TIMP-1的表达,改善CCN大鼠肾间质纤维化.     

慢性马兜铃酸肾病血小板反应因子1高表达与肾间质纤维化及微血管丢失的关系

目的 探讨血小板反应因子1（TSP-1）与慢性马兜铃酸肾病（CAAN）肾间质纤维化及肾小管周围毛细血管（PTC）丢失的关系。方法 36只SD大鼠被随机分为CAAN模型组（用关木通浸膏水溶液间断灌胃）及对照组（仅自来水灌胃），每组18只。分别于第4、8和12周处死6只大鼠，用肾组织切片做免疫组化染色。对TSP-1、转化生长因子-β1（TGF-β1）、氨基肽酶P（APP）、血管内皮生长因子（VEGF）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达进行半定量分析。结果 与对照组比较，模型组大鼠肾间质TSP-1、肾小管TGF-β1及肾间质Col Ⅰ表达均显著上调（P均〈0．01）。3者间表达量呈显著正相关（r=0．925、0．910、0．857，P均〈0．01）。模型组大鼠肾间质APP表达明显下调（P〈0．01），与TSP-1、Col Ⅰ表达量呈显著负相关（r=-0．945、-0．883，P均〈0．01）。模型组肾小管VEGF表达上调（P〈0．01），其表达量与APP呈显著负相关（r=-0．607，P〈0．01），而与TGF-β1星显著正相关（r=0．625，P〈0．01）。结论 TSP-1-TGF-β轴表达增强及与TSP-1相关的PTC丢失均可能参与CAAN肾间质纤维化，而VEGF表达上调为代偿表现。     

舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏病变的影响

目的:探讨2种剂量舒洛地特对糖尿病大鼠肾脏病变的影响。方法:采用STZ(链尿佐霉素,60mg/kg)腹腔注射法构建1型糖尿病大鼠模型,随机分为4组:糖尿病组(DM组)、舒洛地特10mg·kg-1·d-1组(S10组)、舒洛地特20mg·kg-1·d-1组(S20组)、氯沙坦30mg·kg-1·d-1组(L组),每组各10只。另取10只未造模大鼠作正常对照组(N组)。干预12周后测体重、24h尿白蛋白定量、血糖、血肌酐、尿素氮及肾重,光镜、电镜观察肾组织形态、结构的变化。结果:同N组相比,DM组大鼠24h尿白蛋白定量、血肌酐及尿素氮显著增加(P<0.01),病理改变较明显。同DM组相比,治疗组(S10、S20及L组)大鼠24h尿白蛋白定量减少(P<0.05或P<0.01),但血肌酐及尿素氮下降差异无统计学意义(P>0.05);同S10组相比,S20及L组大鼠24h尿白蛋白定量减少(P<0.05)。光镜及电镜显示治疗组较DM组病理变化减轻,尤以S20及L组病变减轻明显。结论:舒洛地特可对糖尿病大鼠有肾脏保护作用,而20mg·kg-1·d-1较10mg·kg-1·d-1的剂量效果更好。