加味当归补血汤对细胞骨架蛋白在阿霉素肾病大鼠表达的影响

目的:利用阿霉素肾病模型(daunomycin-induce nephropathy,DMN)研究加味当归补血汤通过干预细胞骨架蛋白的表达对肾小球滤过作用所产生的影响。方法:SD大鼠分为正常组、模型组、贝那普利组(1 mg·kg-1)和加味当归补血汤组(10 g·kg-1)。其中模型组、贝纳普利组和加味当归补血汤组使用阿霉素一次性尾静脉注射6 mg·kg-1。造模后第2天分别ig给予贝纳普利组和加味当归补血汤组相应的药物,每日1次,共8周。分别在造模第7,28,42,56天留取尿液标本,观察尿白蛋白定量的动态变化;取肾组织进行光镜、免疫组织化学对nephrin,巢蛋白(nestin)和vimentin的表达情况进行分析。结果:尿白蛋白:在28,42,56 d模型组与正常组比较尿蛋白增加均非常明显,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),且加味当归补血汤更显著。肾脏组织:光镜和免疫组织化学结果显示,加味当归补血汤治疗组与贝那普利治疗组和模型组比较系膜细胞增生、肾小管-间质病变情况和肾组织nephrin,nestin和vimentin蛋白的表达情况均减轻,尿白蛋白定量比模型组明显减少,说明肾脏病变程度相比模型组减轻;治疗56 d后肾组织RT-PCR及Wetern blot检测nephrin,nestin和vimentin表达之间存在线性关系;治疗组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味当归补血汤对于阿霉素肾病模型的作用表现为保护足细胞裂孔膜结构的完整性的同时抑制系膜细胞增生和减轻肾小管-间质损伤,上述作用与改善细胞骨架蛋白的表达呈正相关。     

加味当归补血汤通过调控TGF-β_1/Smad/ILK的表达对阿霉素肾病大鼠足细胞的保护作用

目的探讨应用加味当归补血汤对阿霉素肾病模型大鼠足细胞功能保护作用的机制。方法根据随机数字表法将32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、洛汀新组、加味当归补血汤组。分别于造模前和造模后第1、3、5、7周检测24 h尿蛋白定量,实验结束时取肾组织进行光镜、免疫组化检测,用RT-PCR、Wetern blot方法对TGF-β1、ILK等蛋白表达的情况进行分析。结果加味当归补血汤可以明显减少尿蛋白的漏出,而病理学和分子生物学结果均提示加味当归补血汤组、洛汀新组对TGF-β1、ILK的表达具有调控作用,并与肾病蛋白nephrin表达密切相关。组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论加味当归补血汤通过抑制TGF-β1/Smad/ILK信号通路对阿霉素肾病模型大鼠的足细胞有较好的保护作用。     

肾复康Ⅱ号胶囊对阿霉素肾病模型大鼠尿中足细胞计数及骨架蛋白Podocin影响的实验研究

目的:观察肾复康Ⅱ号胶囊对阿霉素肾病模型大鼠尿中足细胞计数及对podocin蛋白表达的影响。方法:采用予大鼠尾静脉注射阿霉素的方法造模,实验分组为空白组、模型组、贝那普利组、百令胶囊及"肾复康Ⅱ号"胶囊组5组,治疗后在荧光显微镜下观察尿沉渣涂片中足细胞数量与对照组比对,结合光学显微镜下观察肾组织病理形态改变,应用透射电子显微镜进行肾脏超微病理学检查,评价肾组织Podocin蛋白的表达。结果:模型组大鼠尿沉渣中可见较多足细胞,对照组与治疗组尿足细胞计数不同程度下降;模型组podocin蛋白药物干预后表达明显增加,以肾复康Ⅱ号胶囊组尤为显著。结论:肾复康Ⅱ号胶囊能明显减少尿中足细胞计数,改善阿霉素肾病模型大鼠Podocin的表达,可能具有一定的足细胞损伤保护作用。     

加味升降散对糖尿病大鼠足细胞nephrin. podocin 蛋白表达的影响

目的:加味升降散对糖尿病大鼠足细胞肾小球细胞黏附分子受体抗原(nephrin)、肾小球足细胞跨膜蛋白(podocin表达的影响,探讨其肾脏保护机制。方法:60只雄性成年SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组、低剂量中药组和高剂量中药组。采用大鼠左侧切除左肾手术+高脂高糖饲料+链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)法制备糖尿病大鼠模型。高剂量中药组大鼠给予27 g/(kg·d)加味升降散灌胃,低量中药组大鼠给予9 g/(kg·d)加味升降散灌胃,培哚普利组大鼠给予0.48 mg/(kg·d)(溶于2 mL的CMC-Na溶液)培哚普利灌胃。空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。观察大鼠一般状况,应用考马斯亮蓝法监测24 h尿蛋白定量,应用全自动生化分析仪检测肾功能、血糖。光镜下观察大鼠肾脏病理学变化,免疫组织化法观察nephrin、podocin蛋白在肾脏组织的分布及表达情况。结果:与空白组比较,模型组血糖、血肌酐(Serum creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白均升高(P 0.01),nephrin、podocin蛋白表达均下降(P 0.01);与模型组比较,培哚普利组及低、高剂量加味升降散血糖、SCr、BUN、24 h尿蛋白均下降(P 0.01);培哚普利组、低剂量中药组、高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平均有不同程度上调(P 0.05),其中高剂量中药组nephrin、podocin蛋白表达水平上调最为显著。结论:加味升降散能有效改善糖尿病大鼠肾功能,减少蛋白尿,改善肾小球硬化等,其途径可能与加味升降散上调大鼠足细胞nephrin、podocin蛋白表达水平,减轻大鼠足细胞损伤有关。     

基于活性氧簇-自噬通路调控的加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞的保护机制研究

目的观察加味黄芪赤风汤基于活性氧簇(ROS)-自噬通路对AngⅡ诱导肾小球足细胞损伤的保护机制。方法制备低、中、高剂量加味黄芪赤风汤(分别应用生药浓度为0.57、1.15、2.29 g/mL的加味黄芪赤风汤灌胃小鼠)含药血清及替米沙坦(0.83 mg/mL灌胃小鼠)含药血清,采用AngⅡ(1×10~(-7)mol/L)诱导足细胞损伤模型,分为空白组,模型组,加味黄芪赤风汤低、中、高剂量组以及替米沙坦组;为验证自噬与模型的关系,设置3MA与氯喹组。采用Western Blot检测足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62表达,溶酶体荧光探针检测自噬流活性,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成,流式细胞仪检测细胞内ROS平均荧光强度(MFI)。结果与空白组比较,模型组足细胞nephrin、podocin、P62表达下调(P0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达上调(P0.01),ROS的MFI增强(P0.01)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示模型组自噬体数量增多,溶酶体表达增强。与模型组比较,加味黄芪赤风汤中、高剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin、P62表达上调(P0.01,P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达下调(P0.01,P0.05);3MA及氯喹组足细胞nephrin、podocin表达下调(P0.01,P0.05);加味黄芪赤风汤低剂量组Beclin-1表达下调(P0.05);各给药组ROS MFI减弱(P0.01,P0.05)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示加味黄芪赤风汤组及替米沙坦组自噬体数量减少,溶酶体表达减弱。结论 AngⅡ通过下调nephrin、podocin表达损伤足细胞;加味黄芪赤风汤可上调AngⅡ诱导的nephrin、podocin表达,缓解足细胞损伤;加味黄芪赤风汤可能基于ROS-自噬通路,下调AngⅡ诱导的自噬流,拮抗肾小球足细胞损伤。     

当归补血汤干预miRNA-21调控自噬保护早期糖尿病肾病大鼠肾功能的研究

目的基于miRNA-21干预Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归补血汤防治早期糖尿病肾病的作用机制。方法制备当归补血汤的醇提取物,在早期糖尿病肾病造模成功后,将SD大鼠随机分为A组:空白组;B组:模型组;C组:当归补血汤高剂量组[7g/(kg·d)];D组:当归补血汤低剂量组[1.75g/(kg·d)];E组:格列奇特组[2mg/(kg·d)]。每组10只,连续灌胃4周后取材。检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿白蛋白排泄率(uAE),并观察一般情况、肾脏组织病理(PAS染色),电镜观察肾足细胞的自噬体情况;Western Blotting法分析Akt(protein kinaseB)、总mTOR(mammalian target of rapamycin)的表达,RT-PCR法检测miR-21以及Akt、mTOR的mRNA表达。结果对比模型组,当归补血汤组均能明显改善糖尿病肾病的大鼠的肾功能指标(P0.05),病理表现上减轻了肾系膜增生,上调了足细胞nephrin蛋白(P0.05),增加了肾足细胞自噬体形成,延缓了肾纤维化。同时当归补血汤组抑制了miR-21表达(P0.05),下调了Akt、总mTOR及其mRNA表达(P0.05),从而增强了肾足细胞的自噬活性,起到延缓肾衰竭的作用。结论当归补血汤能抑制miR-21表达调控肾足细胞自噬活性防治早期糖尿病肾病。     

祛痰通络汤对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin蛋白表达的影响

目的 观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法 制作大鼠糖尿病肾病模型,分为正常对照组、模型组、贝那普利治疗组及祛痰通络汤低、中、高剂量组,干预8周.观察各组24h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化观察肾组织nephrin蛋白表达的变化.结果 经过祛痰通络汤治疗后,24h尿蛋白定量下降;病理改变减轻;nephrin蛋白表达增加.结论 祛痰通络汤对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin蛋白表达有关.     

六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松治疗大鼠IgA肾病的研究

目的:探讨六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松对大鼠IgA肾病的作用及其可能的机理。方法:第12周末造模成功后,随机分为模型对照(M)组、来氟米特和泼尼松(LP)组和中药(C)组、来氟米特、泼尼松联合中药(LPC)组和正常对照(K)组,检测24小时尿蛋白、尿红细胞、肾功、血浆白蛋白。肾组织行HE、PAS、P+M及免疫荧光染色;RT-PCR检测足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin mRNA的表达。结果:与其他组相比,LPC组尿蛋白、尿红细胞明显减少,血清BUN、SCr明显下降,HE、PAS染色、P+M染色提示肾组织病理损害程度相对较轻,免疫荧光提示肾小球系膜区IgA沉积相对明显减少,且肾组织nephrin、podocin mRNA表达上调。结论:六味地黄汤联合来氟米特、泼尼松能够延缓肾脏损害的进展,其作用机制可能与上调Nephrin、Podocin的表达,抑制系膜细胞增生,减少系膜区免疫复合物沉积有关。     

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin与podocin表达的影响

目的观察左归降糖益肾方对MKR转基因2型糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响,探讨其作用机制。方法 8周龄MKR小鼠40只随机分为4组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN+中药组(C组)、DN+糖适平+贝那普利组(D组)。B、C、D组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术4周后,各给药组给予相应药物,4周后处死小鼠。电化学法观察小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),ELISA法测定尿微量白蛋白(UmAlb),RT-PCR法检测nephrin、podocin mRNA表达,Western Blotting法测定nephrin、podocin蛋白表达,电镜观测足细胞形态结构。结果与A组比较,B组小鼠空腹血糖、SCr、BUN及UmAlb均明显升高(P0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显下调(P0.01)。给药后,与B组比较,用药组小鼠血糖、SCr、BUN及UmAlb明显下降(P0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显上调(P0.01,P0.05)。电镜结果显示,给药组小鼠肾小球足细胞较B组明显改善。结论左归降糖益肾方通过恢复2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin和podocin的表达而保护肾脏。     

禾肾丸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin蛋白表达影响

目的:研究禾肾丸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾组织足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,为其治疗肾病蛋白尿提供实验依据。方法:SPF级雄性Wistar大鼠随机分为模型组,禾肾丸组(1.8 g·kg~(-1)),贝那普利组(1 mg·kg~(-1))及空白组。采用一次性尾静脉注射阿霉素6 mg·kg~(-1)复制阿霉素肾病大鼠模型。造模成功后,禾肾丸组及贝那普利组分别给予相应药液,模型组及空白组给予等体积蒸馏水,1次/d,连续28 d。给药结束后,收集24 h尿液,检测尿蛋白,腹主动脉采血,检测血中白蛋白(albumin,Alb),血肌酐(serum creatine,SCr),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)。苏木素-伊红(HE)检查肾脏组织形态变化,透射电镜观察肾小球足细胞足突及基底膜改变,免疫组化及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织nephrin表达。结果:经禾肾丸治疗后,24 h蛋白尿较模型组显著下降(P0.01),血清SCr,BUN显著降低(P0.01),Alb显著升高(P0.01)。组织病理学检查显示,禾肾丸组肾小球上皮细胞肿胀明显减轻,部分肾小球体积略增大,系膜细胞及系膜基质仅见轻微增生,管腔内未见小管有蛋白管型。超微结构研究显示,禾肾丸组肾小球基底膜光滑均匀,略见增厚,足突清晰完整、偶见融合。免疫组化结果显示,禾肾丸组nephrin蛋白阳性面积率显著高于模型组(P0.01)。Western blot结果显示,nephrin蛋白表达量较模型组显著升高(P0.01)。结论:禾肾丸可能通过上调nephrin表达水平,修复受损足细胞而减少蛋白尿、保护肾脏。     

冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病大鼠足细胞影响的实验研究

目的探讨冬虫夏草及雷公藤多甙对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组(A组)、DN模型组(B组)、冬虫夏草治疗组(C组)及雷公藤多甙治疗组(D组)、两药联合治疗组(E组)。12周后观察24h尿蛋白排泄量(24hurinary protein count,24hpro)、血糖(Glu)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、外周血白细胞(WBC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)以及肾重(KW)/体重(BW)等值的变化;HE染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫荧光方法检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达。结果与A组比较,B组SCr、BUN增高(P<0.05);Glu、KW/BW和24hpro明显增高(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达减少。与B组比较,C、D、E组KW/BW和24hpro降低(P<0.01),肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻;肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高。与C组比较,D、E组KW/BW和24hpro降低,肾小球、小管间质及足细胞病变减轻,肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达增高,差异均有统计学意义以E组最为明显(P<0.01)。结论冬虫夏草及雷公藤多甙具有减轻DN蛋白尿,保护及修复DN大鼠足细胞病变的作用。其机制可能与其上调nephrin和podocin蛋白的表达有关。冬虫夏草与雷公藤多甙联合治疗可增加疗效并减轻雷公藤多甙的不良反应。     

雷公藤多甙对抗Thy1.1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子表达的影响

目的 观察雷公藤多甙（multi—glycoside of Tripterygium wilfordii Hook．f．,GTW）对抗Thy1．1抗体肾炎蛋白尿和足细胞裂隙膜相关分子（nephrin、podocin）表达的影响。方法 经尾静脉一次性注射500μg单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）1—22—3建立大鼠抗Thy1．1抗体肾炎模型。14只大鼠随机分为GTW干预组（简称GTW组）和安慰剂干预组（简称造模组）。实验1中,在注射抗体前3天,经灌胃给予GTW[75mg／（kg·d）]或安慰剂,直至造模后第14天,处死大鼠;实验2中,在注射抗体同时,经灌胃给予GTW[100mg／（kg·d）]或安慰剂,直至造模后第7天,处死大鼠。分别观察14天内或7天内模型鼠24h尿蛋白排泄量（urinary protein excretion,Upro）动态变化。在第14天或第7天,处死大鼠后,取出肾脏,分别观察肾小球形态学变化、肾小球内巨噬细胞浸润、肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结果 实验1中,GTW抑制抗Thy1．1抗体肾炎蛋白尿和系膜损伤,在第14天,对肾小球内nephrin、podocin免疫荧光染色强度无影响;实验2中,GTW改善抗Thy1．1抗体肾炎蛋白尿、系膜损伤、肾小球内巨噬细胞浸润,而且,在第7天,显著增强肾小球内nephrin、podocin及其核酸表达。结论 在抗Thy1．1抗体肾炎中,nephrin、podocin表达的减弱可能会促进系膜损伤和蛋白尿。GTW改善系膜损伤和蛋白尿的作用,很可能是通过增强nephrin、podocin表达来实现的。     

嘌呤霉素肾病模型肾组织微小RNA的差异性表达及雷至胶囊的干预作用

目的:观察嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型鼠肾组织微小RNA(microRNAs,miR-NAs)差异性表达的特征及其与足细胞裂隙膜(slid diaphragm,SD)关键结构分子nephrin,podocin和骨架蛋白synaptopodin表达的关系;阐明雷至胶囊(Leizhi capsule,LZC)在体内通过调控模型鼠肾组织miRNAs差异性表达而改善足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,减少蛋白尿的机制.方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、雷至胶囊组(C,5 mL·kg-1·d-1)、雷公藤多苷组(D,10mL·kg-1 ·d-1)和缬沙坦(E,7.5 mL· kg-1·d-1)组.除A组外,其余各组大鼠一次性经颈静脉注射PAN(100 mg·kg-1)而建立PAN肾病模型.造模后第2天灌胃给药,A,B组大鼠用生理盐水干预,共10 d.造模前及造模后第3,9天称量各组大鼠体重,并检测24h尿蛋白排泄量(urinary protein ration,Upro).造模后第11天,处死全部大鼠,采集血液和肾组织,观察血清生化指标血清白蛋白(albumin,Alb),血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肾小球超微结构(足细胞足突形态)以及肾组织dicer酶,nephrin,podocin,synaptopodin表达;同时,借助生物芯片(biochip)技术,分析肾皮质miRNAs差异性表达的特征,并且,借助荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)验证mo-miR-23a,rno-miR-300-3p,rno-miR-24,rno-miR-30c等的差异性表达量.结果:在PAN诱导下,模型鼠出现蛋白尿、肾功能减退、低白蛋白血症、足细胞足突融合;在模型鼠肾组织中,dicer酶影响足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达;上调rno-miR-23a,mo-miR-300-3p表达,下调mo-miR-24,rno-miR-30c表达;差异性表达的miRNAs包括rno-miR-24,rno-miR-30c,rno-miR-23a,rno-miR-300-3p等.雷至胶囊能改善PAN肾病模型鼠的一般情况、蛋白尿、血清BUN、足细胞足突融合;还能减少模型鼠肾组织dicer酶表达,增加足细胞nephrin,podocin和synaptopodin表达;减弱在模型鼠肾组织中上调的rno-miR-23a,rno-miR-300-3p,增强在模型鼠肾组织中下调的rno-miR-24,rno-miR-30c等.结论:PAN在体内通过dicer酶/miRNAs差异性表达途径而影响模型鼠肾组织miRNAs表达,干预足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,破坏足细胞结构和功能,产生蛋白尿;雷至胶囊可以减少PAN肾病模型鼠蛋白尿,其机制可能是干预dicer酶/miRNAs差异性表达途径,调控足细胞nephrin,podocin,synaptopodin表达,改善足细胞的结构与功能.     

复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠肾组织Nephrin和Podocin的调节作用

目的:观察复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠早期足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养法建立实验性代谢综合征大鼠模型,以复方黄芪首乌合剂(高、中、低剂量组)灌胃治疗,8周末收集尿标本检测24 h尿蛋白(24 hPro)、尿微量白蛋白(MA)和尿白蛋白肌酐比值(albumin to creatinine ratio,ACR);免疫组织化学法检测肾皮质Nephrin和Podocin的蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾皮质Nephrin和Podocin mRNA的表达;电镜下观察肾脏基底膜和足细胞的变化。结果:造模大鼠24 hPro、MA和ACR较正常对照组明显增加(P<0.01);肾小球基底膜显著增厚,足细胞与对照组大鼠比较明显减少,足突排列紊乱,足突融合;肾皮质Podocin、Nephrin蛋白和mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.05)。经复方黄芪首乌合剂治疗8周后,24 hPro、MA、ACR均明显减少(P<0.05);肾小球基底膜病变减轻,细胞外基质增多减轻,足细胞数目增多,足细胞融合减轻;肾皮质Podocin、Nephrin蛋白和mRNA表达分别较模型组显著增加(P<0.05)。结论:复方黄芪首乌合剂对代谢综合征大鼠肾脏足细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与其参与调节代谢综合征大鼠肾组织Nephrin和Podocin的蛋白和mRNA表达有关。     

益肾活血汤对5/6肾切除大鼠PCNA表达及细胞外基质的影响

目的探讨益肾活血汤对5／6肾切除肾衰竭大鼠的防治效果及其作用机制。方法采用5／6肾切除大鼠模型,设立正常组、模型组、中药益肾活血汤组与西药苯那普利组。检测各组术后6周、12周末24h尿蛋白,12周末血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）、血清白蛋白（Alb）、血红蛋白（HB）水平,12周末光镜观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾增殖细胞核抗原（PCNA）,纤维连接蛋白（FN）表达,RT—PCR检测肾结缔组织生长因子（CTGF）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）表达。结果（1）模型组较正常组24h尿蛋白,血清BUN、SCr,肾小球系膜区面积、FN聚积、肾小球和小管间质PCNA表达,CTGFmRNA,PAI—1mRNA表达均显著升高（P〈0．05）,中药组较模型组各指标均显著下降（P〈0．05）;（2）正常组、模型组、中药和西药组肾小球PCNA阳性细胞数分别为7．00±2．24,34．78±6．96,15．75±2．61,15．50±2．57。且各组肾小球PCNA表达与CTGF、PAI-1、FN、SCr均呈正相关。结论中药益肾活血汤能够延缓5／6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭进展,其机制主要与抑制肾脏细胞增殖及其诱导的细胞因子过度表达和细胞外基质聚积有关。     

川芎嗪对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及相关蛋白nephrin和podocin表达的影响

目的:研究川芎嗪对高脂高糖饮食与链脲佐菌素(STZ)诱致大鼠肾脏损伤的保护作用及与相关蛋白nephrin,podocin表达的影响。方法 :将50只雄性大鼠随机分为正常组和模型组。除正常组外,其余大鼠均给予高脂-高糖饲料喂养4周,再给予STZ(40 mg/kg,ip)注射,72h后测定空腹血糖,将血糖值大于16.67mmol/L的大鼠随机分为4组:模型组,二甲双胍组(250 mg/kg),川芎嗪低剂量组(80mg/kg)和高剂量组(160mg/kg),连续给药8周。末次给药后,收集24h尿液,测定尿蛋白含量;取血测定血糖、血肌酐、尿素氮变化;光镜下观察肾脏病理学变化;Western Blot方法检测肾组织nephrin、podocin蛋白表达水平。结果:模型大鼠血糖值明显高于正常对照组,尿蛋白含量、血肌酐、尿素氮含量亦明显升高,肾组织nephrin、podocin蛋白表达水平降低。低高剂量川芎嗪治疗8周后,明显改善血糖水平,降低尿蛋白含量、血肌酐和尿素氮含量;肾组织nephrin和podocin蛋白表达增加,肾脏组织病理性损伤明显减轻。结论:川芎嗪对高糖高脂饮食与STZ诱致糖尿病大鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与诱导nephrin,podocin表达增加有关。     

Multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook. f. reduces proteinuria through improving podocyte slit diaphragm dysfunction in anti-Thy1.1 glomerulonephritis

Ethnopharmacological relevance

Multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook. f. (GTW) has been proved clinically effective in reducing proteinuria in chronic kidney disease in China. However, the mechanisms involved are still unclear. In this study we examined the effects of GTW at the different dosages on proteinuria and podocyte slit diaphragm (SD) dysfunction in anti-Thy1.1 glomerulonephritis (GN).

Materials and methods

Rats with anti-Thy1.1 GN were divided into 2 groups, a GTW group and a vehicle group, and sacrificed at 30 min, on day 7, and on day 14 in Experiments 1, 2 and 3, respectively. The administration of GTW at the moderate and high doses was started 3 days before or at the same time of antibody injection till sacrifice. Proteinuria was determined in Experiments 1, 2, and 3. After sacrifice, the staining intensity of SD-associated key functional molecules including nephrin and podocin, podocyte structure, mesangial change, macrophage infiltration, and blood biochemical parameters were examined, respectively. Protein and mRNA expressions of nephrin and podocin in glomeruli were also investigated. Besides, liver histological characteristics were analyzed.

Results

In Experiment 1, GTW pretreatment at the medium dose (75 mg/kg body weight) caused no influence on the induction of anti-Thy1.1 GN and the basal nephrin expression. In Experiment 2, the high dosage (100 mg/kg body weight) of GTW ameliorated proteinuria, the distribution of nephrin and podocin, mesangial proliferation, and the activated macrophage accumulation, as compared with vehicle group (P < 0.05). Additionally, it increased mRNA and protein expressions of nephrin and podocin in glomeruli on day 7, but had no influence on podocyte structure. In Experiment 3, the medium dosage (75 mg/kg body weight) of GTW improved proteinuria, the partial matrix expansion, and the distribution of nephrin and podocin on day 14, as compared with anti-Thy1.1 GN rats (P < 0.05). GTW at the high or moderate dose did not affect hepatic function on day 7 and on day 14.

Conclusions

Podocyte SD dysfunction, such as the disordered distribution and down-regulation of nephrin and podocin expression, is critically involved in the pathogenesis of anti-Thy1.1 GN induced by mAb 1-22-3. The restoration of the distribution and expression of nephrin and podocin by GTW could be an important mechanism by which GTW ameliorates proteinuria and podocyte SD dysfunction.     

六味地黄丸防治大鼠糖尿病肾病的实验研究

目的:观察足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在糖尿病肾病发病机制中的作用,探讨六味地黄丸(LWDHW)保护糖尿病肾病大鼠肾脏的机制。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,1周后,按血糖浓度将成模的糖尿病大鼠随机分为:模型组(STZ,8只)、治疗组(STZ+LWDHW,8只),另设正常组(Control,8只)。治疗组给予六味地黄丸灌胃,模型组、正常组给予等量生理盐水,持续观察8周。治疗第8周末,称大鼠体重,计算肾系数,观察肾脏病理改变;检测24h尿蛋白总量、血尿素氮、血肌酐;免疫印迹检测nephrin和podocin在肾组织中的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血糖,体重明显下降(P<0.01),肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,见蛋白管型;nephrin和podocin蛋白表达减少(P<0.01)。治疗组血糖、体重无明显改变;肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显降低(P<0.05);病理改变明显减轻;大鼠肾组织nephrin和podocin表达明显增加(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过增加足细胞nephrin和podocin表达发挥保护糖尿病肾病大鼠肾脏的作用。     

基于LC-MS细胞代谢组学技术的环黄芪醇对多柔比星诱导足细胞损伤保护作用机制研究

目的 基于LC-MS细胞代谢组学方法研究环黄芪醇(cycloastragenol, CAG)保护多柔比星(doxorubicin, DOX)诱导小鼠足细胞(mouse podocyte clone 5,MPC5)损伤的作用机制。方法 体外培养永生型MPC5,分为空白对照组、DOX诱导MPC5细胞损伤模型组、CAG治疗组。MTT法检测MPC5的存活率;Western blot分析各组MPC5中关键蛋白Nephrin、Podocin的表达;结晶紫法检测MPC5黏附性;通过LC-MS代谢组学技术结合多元统计分析筛选潜在药效标志物和关键代谢通路,阐明其作用机制。结果 各浓度CAG均能有效改善DOX损伤存活率;12.5 μg·mL^-1的CAG能增加MPC5关键蛋白Nephrin、Podocin的表达,可显著改善DOX损伤MPC5黏附性;细胞代谢组学结果显示,DOX损伤的MPC5内共发现22种差异代谢物发生显著性变化,给予CAG干预后,细胞内20种差异代谢物得到了不同程度的回调,这些代谢物主要涉及甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、嘧啶代谢通路。结论 CAG对DOX诱导的MPC5损伤有改善作用,表现在能改善MPC5结构、活性和黏附性,其具体机制可能与甘油磷脂代谢、氨基酸代谢、谷胱甘肽代谢、嘧啶代谢密切相关。