灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达。结果 灯盏花随浓度（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低（P〈0.05）;MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加（P〈0.05）,但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加（P〈0.05）。1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低（P〈0.05）、RANKL蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）。结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用。     

关节炎疗效及对患者血清MMP-3及RANK/RANKL/OPG表达的影响

目的观察和痹方联合甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）对肝脾失调型早期类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）疗效及患者血清基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3,MMP-3）及核因子-κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB,RANK）/核因子-κB受体活化因子受体（RANKL）/骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法采用随机数字表法将72例肝脾失调型早期RA患者分为治疗组及对照组,每组36例,对照组采用MTX治疗,治疗组在此基础上联合和痹方治疗,两组MTX从7.5 mg逐渐加至12.5 mg,每周1次,疗程24周。观察两组ACR20改善率、中医证候疗效、类风湿因子（rheumatoid factor,RF）、血沉（ESR）、C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、抗环瓜氨酸肽抗体（anti-cyclic citrullinated peptide antibody,CCP）及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平,并观察不良反应。结果治疗组ACR20达标率为82.86%（29/ 35）,中医证候疗效有效率为85.7% （30/ 35）,均明显高于对照组的51.52%（17/ 33）和 63.6%（21/ 33）,两组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。与本组治疗前比较,两组治疗后RF、ESR、CRP、MMP-3及RANKL水平降低,OPG水平升高（P<0.05, P<0.01）。与对照组比较,治疗组治疗后RF、ESR、CRP及RANKL均降低,差异均有统计学意义（P<0.01, P<0.05）。治疗组1例出现肝功能异常,对照组1例出现白细胞减低,2例出现肝功能异常。结论和痹方联合MTX可改善肝脾失调型早期RA患者的症状,调控RANK/RANKL/OPG系统诱导的骨质破坏。     

丹参注射液对人血清培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 探讨丹参注射液对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者血清培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA FLSs）增殖的影响。方法 常规培养良好的RA FLSs,传代时用10%未灭活人血清（健康人血清和RA患者血清）作用24 h后,加入终浓度为0.4 mg/mL 丹参注射液,继续培养24 h。以10%胎牛血清作对照,光学显微镜观察人血清培养后和丹参注射液作用后的细胞形态变化;采用MTT法分析其增殖变化;流式细胞仪检测其凋亡;提取各组总RNA并逆转录,荧光定量PCR检测Bax mRNA表达。结果 （1） 无论是加入健康人血清还是RA患者血清后,细胞均能贴壁生长。相比而言胎牛血清组细胞背景较为干净,而人血清组细胞密度较胎牛血清组高,细胞形态无明显改变。（2）与胎牛血清组比较, MTT增殖实验显示, 健康人血清组和RA患者血清组的吸光度（OD）值均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）;加终浓度为0.4 mg/mL丹参注射液后,3组不同来源血清作用的细胞均受到不同程度的抑制（OD值显著降低,P<0.05）,且健康人血清组和RA患者血清组与胎牛血清组比较,OD值显著增加,差异有统计学意义（P<0.01）,健康人血清组与RA患者血清组比较,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（3） 与胎牛血清组比较,RA血清组凋亡率明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）;胎牛血清组和RA患者血清组,经0.4 mg/mL丹参作用后,与相应未加丹参组比较,凋亡率均显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）; FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,与胎牛血清组比较,健康人血清组和RA患者血清组的凋亡率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（4） FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,RA血清组和胎牛血清组Bax mRNA表达均增加,差异有统计学意义（P<0.01）; 与胎牛血清组比较,健康人血清组及RA患者血清组,Bax mRNA的表达变化明显,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 （1）虽然健康人血清能更好的利于RA FLSs的生长,但对于特定疾病的细胞生物学研究,如无相应疾病患者血清前提下,胎牛血清更能反映真实结果;（2）丹参注射液可通过促进RA FLSs凋亡而抑制其增殖。     

绿原酸对高糖环境介导的人牙周膜细胞生物活性的影响

目的：以体外培养的人牙周膜细胞（hPDLCs） 为研究对象,探讨绿原酸对高糖环境培养下hPDLCs 生物活性的影响。方法：原代培养hPDLCs,分别用正常葡萄糖（5.5 mmol/L） 或高糖（25 mmol/L） 加上绿原酸（0.5 mg/mL、1 mg/mL） 处理hPDLCs。CCK-8 法检测不同浓度绿原酸对高糖环境下hPDLCs 增殖能力的影响,同时实时荧光定量PCR （RT-qPCR） 法检测hPDLCs 中核因子κB 受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）mRNA 的表达水平。酶联免疫吸附法（ELISA）测定hPDLCs中白细胞介素-6（IL-6） 的表达水平。结果：高糖（25 mmol/L） 可显著抑制hPDLCs 的增殖,促进IL-6 的表达,上调hPDLCs 中RANKL mRNA 的表达且下调OPG mRNA 的表达（P＜0.05）。而绿原酸能抑制高糖环境下hPDLCs 中IL-6 的表达（P＜0.05）,下调高糖环境下hPDLCs 中RANKL mRNA 表达,同时上调OPG mRNA 的表达（P＜0.05）,改善高糖对hPDLCs 增殖的抑制作用（P＜0.05）。结论：绿原酸能抑制hPDLCs 中IL-6 的分泌,调节hPDLCs 中OPG 及RANKL mRNA 的表达以及拮抗高糖对hPDLCs 增殖的抑制作用。     

正清风痛宁片联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠血清OPG/RANKL、IL-17的影响

目的探讨正清风痛宁片联合甲氨蝶呤(MTX)对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠血清骨保护素(OPG)、核周因子κB受体活化因子配体(RANKL)、白细胞介素17(IL-17)的作用,了解其联合治疗的骨保护作用。方法于大鼠背部皮内、尾根注射Ⅱ型胶原乳剂建立CIA大鼠模型,选取造模成功且关节炎指数(AI)>2分的大鼠28只,随机分为模型组、中药组、MTX组、联合组,每组7只,另选取7只作为正常对照组。造模后7天开始灌胃给药,MTX组予MTX(3.8mg/kg)每周1次;中药组予正清风痛宁片[130mg/(kg·d)];联合组予正清风痛宁片[130mg/(kg·d)]和MTX(3.8mg/kg)每周1次;模型组与正常对照组予等体积生理盐水灌胃,各组均干预26天。采用X线摄片观察大鼠四肢关节破坏情况,记录大鼠AI评分,实验结束后检测各组大鼠血清OPG、RANKL、IL-17表达水平。结果实验过程中,除模型组外,其余大鼠状态良好。造模第21天,各组大鼠AI评分均达到峰值,干预后各组AI评分均降低,与模型组比较,干预第26天中药组、MTX组、联合组AI评分降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,MTX组干预后OPG、RANKL降低,中药组OPG升高,OPG/RANKL升高,联合组OPG、RANKL及OPG/RANKL升高,IL-17降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MTX及中药组比较,联合组OPG/RANKL升高(P<0.05),IL-17降低(P<0.05)。结论正清风痛宁片联合MTX能够协同提高CIA模型大鼠外周血OPG/RANKL,下调IL-17。     

青藤碱对 FLS增殖及α7nAChR、TLR2和TLR4表达的影响

摘要：目的 探讨青藤碱(sinomenine, SIN)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes , FLS）增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptors, α7nAChR）、Toll样受体2(toll-like receptor 2, TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响。 方法 组织块法分离培养原代FLS,流式细胞术检测FLS表面标志物CD90。FLS设对照组、TNF-α组、SIN组（剂量分别为100,200,400μmol·L-1）,SIN组给予SIN干预30min后,TNF-α组、SIN组均给予20ng·mL-1 TNF-α刺激24h,采用MTT法检测各组 FLS增殖,酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6)分泌量,RT-PCR检测α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA表达、Western bolt检测α7nAChR、TLR2和TLR4蛋白表达。 结果 TNF-α刺激FLS后,细胞明显增殖,分泌IL-6明显增加,α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA及蛋白表达增加,SIN（200,400μmol·L-1）能抑制FLS增殖,抑制IL-6分泌,并且下调α7nAChR、TLR2和TLR4 mRNA及蛋白表达。 结论 FLS增殖与α7nAChR、TLR2和TLR4表达相关,且SIN能抑制FLS增殖,并下调α7nAChR、TLR2和TLR4表达。     

左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠骨密度、骨保护素mRNA及核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响

目的探讨左归丸联合温和灸治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法 40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组10只。模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组采用手术完整摘除双侧卵巢法制造骨质疏松症模型。造模3个月后左归丸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃+长强穴艾灸治疗,空白组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组均干预6周。干预前后测定大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度,干预后通过PCR法检测大鼠骨组织骨保护素(OPG)mRNA和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL降低,RANKL mRNA表达上升(P0.05或P0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均升高,RANKL mRNA表达降低(P0.05或P0.01),且左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均较左归丸组升高,RANKL mRNA表达较左归丸组降低(P0.05)。结论左归丸联合温和灸能明显升高骨质疏松症大鼠的骨密度,上调OPG mRNA表达、下调RANKL mRNA表达可能是其作用机制之一。     

正清风痛宁联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响

目的:通过观察青藤碱(SN)联合甲氨蝶呤(MTX)对胶原诱导的关节炎大鼠模型血清OPG/RANKL的表达影响,探讨其防治类风湿关节炎(RA)骨质破坏的作用机制.方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型.将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、MTX组和联合组(SN+MTX组).采用关节评分法评估关节炎症程度,并用...     

中药痹愈汤对类风湿关节炎骨破坏和修复的实验研究

目的:探讨痹愈汤、甲氨蝶呤(MTX)对SD大鼠类风湿关节炎(RA)骨破坏、修复的作用机制和疗效。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型,将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,大剂量、中剂量痹愈汤组,MTX组,造模后10天,开始给药,30天后取双侧踝关节切片进行骨保护素(OPG)mRNA和核刺激因子-KB受体配体(RANKL)mRNA原位杂交实验。结果:大、中剂量痹愈汤组和MTX组比模型组和正常组明显上调OPG的平均光密度和计数。其中大剂量痹愈汤组优于MTX组和中剂量痹愈汤组。大、中剂量痹愈汤组,MTX组和模型组均比正常组上调RANKL的平均光密度和计数。结论:中药痹愈汤、MTX通过上调OPG的表达,提高了OPG/RANKL的比例,从而竞争性抑制RANK和RANKL的结合,最终抑制了破骨细胞生成和活化,延缓关节周围的骨的破坏。     

和痹方联合MTX治疗肝脾失调型早期类风湿关节炎疗效及对患者血清MMP-3及RANK/RANKL/OPG表达的影响

目的观察和痹方联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对肝脾失调型早期类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疗效及患者血清基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)及核因子-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)/核因子-κB受体活化因子受体(RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法采用随机数字表法将72例肝脾失调型早期RA患者分为治疗组及对照组,每组36例,对照组采用MTX治疗,治疗组在此基础上联合和痹方治疗,两组MTX从7.5 mg逐渐加至12.5mg,每周1次,疗程24周。观察两组ACR20改善率、中医证候疗效、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,CCP)及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平,并观察不良反应。结果治疗组ACR20达标率为82.86%(29/35),中医证候疗效有效率为85.7%(30/35),均明显高于对照组的51.52%(17/33)和63.6%(21/33),两组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。与本组治疗前比较,两组治疗后RF、ESR、CRP、MMP-3及RANKL水平降低,OPG水平升高(P0.05,P0.01)。与对照组比较,治疗组治疗后RF、ESR、CRP及RANKL均降低,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05)。治疗组1例出现肝功能异常,对照组1例出现白细胞减低,2例出现肝功能异常。结论和痹方联合MTX可改善肝脾失调型早期RA患者的症状,调控RANK/RANKL/OPG系统诱导的骨质破坏。     

仙灵骨葆胶囊对去卵巢骨折大鼠骨折端骨微结构的影响及OPG/RANKL信号调控机制

目的研究仙灵骨葆胶囊对去卵巢大鼠骨折端骨微结构的影响及骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配基(RANKL)信号调控机制。方法从48只Sprague-Dawley雌鼠中随机挑出40只切除双侧卵巢,恢复性饲养6周后建立股骨骨折内固定模型,建模大鼠随机分为模型组,阳性对照组及仙灵骨葆胶囊高、中、低剂量组,余下8只作为正常组。模型组和正常组大鼠灌胃给予2 mL生理盐水,每天1次;阳性对照组大鼠灌胃给予0.018 mg/mL戊酸雌二醇(10 mL/kg),每天1次,连续6 d后停药1 d;仙灵骨葆胶囊高、中、低剂量组分别将100、50、25 mg/kg药物溶于生理盐水中灌胃,每天1次。连续治疗10周后,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原交联c-末端肽(s-CTX)水平;双能X线扫描仪对大鼠骨折愈合时间情况进行观察,并测定大鼠骨折处骨密度;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠骨折端骨微结构愈合情况;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测大鼠骨折处股骨组织中OPG、RANKL mRNA表达;蛋白免疫印记法(WB)检测大鼠骨折处骨组织中OPG、RANKL蛋白表达。结果仙灵骨葆胶囊干预组骨折愈合时间低于模型组(P<0.05);仙灵骨葆胶囊干预组大鼠血清BALP、OC水平高于模型组(P<0.05),血清s-CTX水平低于模型组(P<0.05);仙灵骨葆胶囊干预组大鼠股骨骨折处骨密度高于模型组(P<0.05),骨小梁结构多于模型组(P<0.05)。仙灵骨葆胶囊干预组OPG mRNA、蛋白表达比模型组高(P<0.05),RANKL mRNA和蛋白表达量比模型组低(P<0.05)。结论仙灵骨葆胶囊能减少去卵巢骨折大鼠骨折愈合时间,增加骨折处骨密度,升高血清BALP和OC水平,降低s-CTX水平,减轻股骨骨折端微结构断裂缺损状况,促进去卵巢骨折大鼠断骨愈合,其作用机制可能与上调OPG mRNA和蛋白表达,下调RANKL mRNA和蛋白表达有关。     

清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者RANKL表达的影响

目的:观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响。方法:原代培养RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),取3-5代FLS分组加药,收集上清及细胞;分离RA患者外周血淋巴细胞(PBL),分组加药,收集上清及细胞。运用ELISA法检测上清中RANKL的表达及运用实时定量RT-PCR检测细胞RANKL的表达。结果:ELISA检测结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞上清中RANKL含量降低。实时定量RT-PCR结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞RANKL表达降低。结论:QLT含药血清可抑制RA患者RANKL的表达,并减少RANKL的分泌,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一。     

新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞RANKL/OPGmRNA表达的影响

目的 研究新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞核因子-kβ受体活化因子配体(RANKL)/护骨素(OPG)mRNA表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含不同剂量新疆马鹿角提取物的培养液,72 h后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测RANKL/OPG mRNA表达.结果 培养72 h后RANKL/OPG mRNA表达的灰度值(0.312±0.0710),与对照组(2.017±0.1320)比较,新疆马鹿角提取物呈浓度依赖性降低RANKL mRNA的表达,增加OPG mRNA的表达,各剂量组RANKL/OPG mRNA吸光度比值降低.结论 新疆马鹿角提取物可能通过调节成骨细胞RANKL/OPG的基因表达,而抑制破骨细胞介导的骨吸收.     

补肾强督方含药血清对强直性脊柱炎OPG/RANKL通路的作用

目的探讨补肾强督方对强直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)骨保护素和核转录因子-κB受体活化因子配基(osteoprotegerin receptor activator for nuclear factorκB ligand,OPG/RANKL)通路的作用机制。方法选取2009年1-5月卫生部中日友好医院中医风湿病科门诊和住院活动期AS患者30例,予补肾强督方,每天1剂,早晚分两次口服,连续3个月;另选取健康志愿者30名。采集治疗前后患者血清及健康人血清。将成骨细胞hFOB1.19分为患者治疗前组、治疗后组及健康人组(对照组)。各组细胞分别于含相应血清的基础培养基中进行培养。取成骨细胞培养上清液,采用ELISA法检测成骨细胞OPG/RANKL含量及mRNA表达,采用RT-PCR检测OPG/RANKL蛋白表达。结果与对照组比较,治疗前组成骨细胞OPG含量、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达均降低,RANKL mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与治疗前组比较,治疗后组OPG含量、OPGmRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 AS患者血清能直接抑制成骨细胞OPG表达、促进RANKL表达、下调OPG与RANKL比率,补肾强督方治疗后的血清能直接促进成骨细胞表达OPG,抑制表达RANKL,上调OPG与RANKL比率,补肾强督方可能是通过直接上调成骨细胞OPG/RANKL而抑制破骨细胞分化和功能,达到促进骨生成,抑制骨吸收。     

去卵巢骨质疏松大鼠骨组织OPG/RANKLmRNA动态表达研究

目的:建立去卵巢大鼠骨质疏松症动物模型,检测造模成功后不同时期大鼠胫骨OPG/RANKLmRNA表达量及血清雌二醇水平,分析OPG/RANKLmRNA表达变化规律。方法:选取3月龄雌性SD大鼠60只随机分为2组即去卵巢组与对照组,每组30只。去卵巢组去除双侧卵巢,对照组仅去除腹腔少许脂肪。分别在造模12周后0个月、6个月、12个月每组随机处死10只,检测不同时期大鼠胫骨OPG/RANKLmRNA表达量及血清雌二醇水平。采用SPSS 17.0软件进行统计,分析数据,得出结论。结果:与对照组相比,去卵巢组胫骨OPGmRNA表达量、血清雌二醇浓度在各时间点上均显著降低(P<0.05),RANKLmRNA表达量则显著增高(P<0.05);去卵巢组0个月与6个月、6个月与12个月比较,胫骨OPGmRNA表达量及血清雌二醇浓度下降,差异具有统计学意义(P<0.05),RANKLmRNA表达量增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:造模成功后12个月内,去卵巢大鼠胫骨骨组织OPGmRNA表达量持续减少,血清雌二醇浓度均持续降低,RANKLmRNA持续高表达,OPG/RANKL比值缩小。     

昆山合剂对类风湿关节炎合并贫血患者滑膜成纤维细胞增殖及MyD88、IL-6 表达的研究

探讨昆山合剂（昆明山海棠、山血丹组成）对体外培养的类风湿关节炎（RA）致慢性病贫血患者滑膜成纤维细胞（FLS）增殖以及人类髓样分化蛋白88（MyD88）mRNA 及其下游因子IL-6 表达的影响和机制。方法：制备甲氨蝶呤和昆山合剂高、中、低剂量组的家兔含药血清;离体培养RA-FLS,取第3 至5 代细胞加入各组含药血清干预,MTT 法检测各含药血清组和对照组RA-FLS 的增殖情况,RT-PCR 检测含药血清对该细胞MyD88 mRNA 表达的影响。结果：干预24、48、72 h 之后,与空白组比较,各浓度组的昆山合剂组和甲氨蝶呤含药血清作用均能明显抑制RA-FLS 增殖（P＜0.05）,对脂多糖诱导的MyD88 mRNA 高表达也有明显抑制作用（P＜0.05）,与脂多糖诱导组比较,48 h 后昆山合剂高剂量组细胞培养上清的IL-6 含量明显降低（P＜0.05）。结论：昆山合剂含药血清能显著抑制RA-FLS 增殖,并可下调脂多糖诱导的TLR4mRNA 及其下游炎症因子IL-6 的表达,这可能为该方治疗RA 的机制之一。     

青藤碱联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎有效性和安全性的Meta分析

为系统评价青藤碱联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)有效性和安全性,该研究利用计算机全面检索万方医药期刊数据库(Wanfang)、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、PubMed、Cochrance Library和Web of Science等数据库建库至2020年2月4日所有关于青藤碱联合甲氨蝶呤治疗RA的研究型文献。并基于Cochrane协作网偏倚风险评价标准,运用RevMan 5.3软件对文献进行Meta分析。该研究纳入文献20篇,大多数文献具有不明确的偏倚风险。Meta分析结果显示,青藤碱联合甲氨蝶呤可显著降低DAS28评分(MD=-0.85,95%CI[-1.03,-0.67],P<0.00001);提高临床总有效率(P<0.00001);并可抑制关节肿胀数(MD=-1.19,95%CI[-1.75,-0.63],P<0.0001)、关节压痛数(MD=-1.58,95%CI[-2.89,-0.28],P=0.02),减少晨僵时间(MD=-8.44,95%CI[-11.82,-5.07],P<0.00001),但不能有效改善握力(SMD=0.20,95%CI[-1.11,1.51],P=0.77);在改善ESR(MD=-9.87,95%CI[-14.52,-5.22],P<0.0001),CRP(SMD=-0.30,95%CI[-0.51,-0.09],P=0.005),RF(MD=-11.23,95%CI[-13.81,-8.65],P<0.00001)方面均优于对照组。青藤碱联合甲氨蝶呤能明显降低不良反应发生率(P<0.00001)。结果表明,青藤碱联合甲氨蝶呤治疗RA不仅能有效改善临床症状及实验室检测指标,而且能有效降低不良反应发生率。由于纳入文献质量、数量的限制,建议增加更多高质量随机对照试验,提升其临床循证证据。     

淫羊藿苷对IL-1β刺激RA滑膜成纤维细胞增殖及TNF-α和RANKL分泌的影响

目的观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对IL-1β刺激类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖及培养上清TNF-α和RANKL含量的影响。方法体外分离培养RA患者来源滑膜成纤维细胞,取第二代细胞分别接种于96孔板和6孔板,除正常对照组(N组)外其余各组均以终浓度为5μg/L的IL-1β刺激24 h后加入不同药物干预,分别设置空白对照组(C组)、MTX组(50 mg/L)、淫羊藿高剂量组(IH组,50μmol/L)和淫羊藿低剂量组(IL组,5μmol/L);继续培养72 h后,以WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测各组细胞增殖情况,以ELISA法检测各组培养上清中TNF-α和RANKL含量。结果 C组以IL-1β连续刺激RASFs 96 h后,细胞增殖率为17.9%,培养上清中TNF-α、RANKL含量分别为(361.542±7.178)ng/L和(428.468±11.118)ng/L,与N组[TNF-α、RANKL含量分别为(346.458±3.329)ng/L和(400.630±7.007)ng/L]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。以不同药物干预后,与C组比较,MTX组细胞增殖率为-34.70%(P<0.05);IH组培养上清中RANKL含量降低,为(375.766±7.806)ng/L(P<0.05);IL组细胞增殖率为-31.90%,培养上清中TNF-α、RANKL含量分别为(334.542±6.691)ng/L和(365.495±5.280)ng/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-1β能促进RA滑膜成纤维细胞增殖和分泌细胞因子TNF-α、RANKL;淫羊藿苷能抑制IL-1β刺激RA滑膜成纤维细胞的增殖及TNF-α、RANKL的分泌。     

薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎大鼠血清OPG/RANKL水平表达的干预作用

目的观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎模型大鼠血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法 SD大鼠,随机分为6组,每组10只,其中选取10只作为正常组,其余大鼠采用弗氏完全佐剂复制类风湿性关节炎动物模型,并将造模成功的类风湿性关节炎大鼠随机分为模型组、阳性组(甲氨蝶呤组,3.8mg·kg~(-1))、薯蓣皂苷片高、中、低剂量组(10 mg·mL~(-1)、20 mg·mL~(-1)、30mg·mL~(-1)),连续灌胃给药治疗24 d后处死,采用ELISA法检测血清OPG、RANKL水平。结果薯蓣皂苷片各剂量组大鼠血清OPG、RANKL水平分别为(95.27±4.24)、(76.44±4.09)、(69.26±5.63)pmol·L~(-1)和(96.07±4.94)、(85.41±3.75)、(67.53±2.23)pmol·L~(-1),与模型组((53.92±2.83)pmol·L~(-1)和(116.18±3.02)pmol·L~(-1))相比均有显著性差异(P0.05);OPG/RANKL比值显著高于模型组。结论薯蓣皂苷片可能通过调整OPG/RANKL动态平衡而对破骨细胞功能产生影响,从而防止骨破坏。