补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2 EMT的机制。方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2 EMT模型,Western blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号蛋白的影响。予不同剂量补肾化瘀泄浊方进行干预,Real-Time PCR检测EMT相关基因mRNA的表达,Western blot检测EMT相关蛋白、Smad2/3及ERK的表达;与ERK通路抑制剂PD98059作比较,观察补肾化瘀泄浊方通过ERK信号通路干预HK-2 EMT的作用。结果:与空白组比较,模型组HK-2细胞出现EMT特有的“纺锤形”结构,EMT标记α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),且磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化瘀泄浊方各剂量组HK-2细胞EMT样形态改善,α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),磷酸化ERK及Smad2/3蛋白水平下降(P<0.05),且剂量越高作用越明显。与模型组比较,ERK通路抑制剂能显著下调α-SMA、Vimentin、磷酸化Smad2/3蛋白水平(P<0.05);补肾化瘀泄浊方高剂量具有与ERK通路抑制剂类似的作用。结论:TGF-β1可诱导HK-2 EMT,上调ERK及Smad2/3磷酸化水平,补肾化瘀泄浊方很可能通过抑制ERK通路活化,下调Smad2/3磷酸化水平,阻抑HK-2 EMT。     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

三七总皂苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的研究

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及机制.方法 体外培养人HK-2细胞并分为3组:正常对照组(含5.5 mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(含25 mmol/L D-葡萄糖)和高糖+PNS组;48h后细胞免疫化学方法测定各组HK-2细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),用ELISA法检测细胞培养上清中纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达.结果 对照组HK-2细胞形态为立方形铺路石样,未见α-SMA阳性表达;高糖组细胞变为梭形长条样,α-SMA的表达也明显增多(P＜0.05);治疗组细胞大部分仍呈立方形铺路石样,α-SMA的表达明显下降(P＜0.05).高糖组TGF-β1与FN浓度显著高于对照组(均P＜0.01),治疗组TGF-β11与FN的表达明显低于高糖组(均P＜0.01).α-SMA的表达与TGF-β1、FN的表达呈正相关.结论 PNS可能通过抑制肾小管上皮细胞α-SMA的表达和细胞外基质分泌,从而抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,对糖尿病肾病有一定防治作用.     

三七皂苷对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:研究三七皂苷(PNS)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的大鼠肾小管细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用,并从沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/TGF-β_1/Smad通路分析其可能机制。方法:在DMEM培养基中,用10%胎牛血清培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常组,TGF-β_1组(5μg·L~(-1)),白藜芦醇组(50 mg·L~(-1)),SIRT1阻断剂EX527组(10μmol·L~(-1)),PNS组(100 mg·L~(-1)),EX527+PNS组(EX527 10μmol·L~(-1),PNS 100 mg·L~(-1)),48 h后收集细胞;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测SIRT1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏附蛋白(E-cadherin),TGF-β_1,Smad3,Smad4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1,α-SMA,E-cadherin,TGF-β_1蛋白表达。结果:与正常组比较,TGF-β_1组α-SMA mRNA及蛋白表达明显增多(P 0. 05),E-cadherin表达显著减少(P 0. 01);与TGF-β_1组比较,PNS,白藜芦醇组,E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著增加(P 0. 01),α-SMA表达显著减少(P 0. 01),EMT发生被抑制,同时,SIRT1表达显著增加(P 0. 01),TGF-β_1,Smad3,Smad4表达显著降低(P 0. 01)。在SIRT1阻断剂EX527的干预下,PNS则不能发挥明显抑制作用。结论:PNS可以阻止TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞EMT的发生,其机制可能是通过激活SIRT1进而抑制TGF-β_1/Smad通路实现的。     

丹酚酸B对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制研究

观察丹参的主要成分丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的可能机制。采用体外培养大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞,随机分为对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+10μmol·L~(-1) Sal B组(Sal B),上述3组分别设6,12,24,48 h 4个时间点进行动态观察;高糖+Sal B不同浓度(1,5,10μmol·L~(-1))组、高糖+5.0μmol·L~(-1)吡格列酮对照组(pioglitazone,PIO)、高糖+10μmol·L~(-1) Sal B+5.0μmol·L~(-1) GW9662对照组(Sal B+GW9662)。采用Western blot法检测PPARγ,PTEN,α-SMA,E-cadherin的表达变化以及PI3K/Akt通路的变化;Real-time PCR法检测PPARγ,PTEN mRNA的表达水平。结果显示,与NG组相比,HG组PPARγ,PTEN mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,α-SMA,p-Akt~((Thr308))蛋白表达水平逐渐增高,E-cadherin蛋白表达水平逐渐降低,呈时间依赖性;与HG组相比,高糖+Sal B不同浓度组随Sal B剂量增加,PPARγ,PTEN mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,α-SMA,p-Akt~((Thr308))蛋白表达水平逐渐降低,E-cadherin蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性(P0.05),但1μmol·L~(-1)浓度的Sal B对PPARγ mRNA和蛋白、PTEN mRNA表达的影响没有显著性差异;与HG组相比,Sal B动态观察组PPARγ mRNA(除6 h)和蛋白(除6 h),PTEN mRNA(除6 h)和蛋白(除6,12 h)表达水平明显增高,α-SMA,p-Akt~((Thr308))(除6 h)蛋白表达水平明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显增高(P0.05);与HG组相比,Sal B和PIO显著增强PPARγ,PTEN mRNA和蛋白表达水平,增高E-cadherin蛋白表达水平,降低α-SMA,p-Akt~((Thr308))蛋白表达水平(P0.05),各用药组之间差异无统计学意义;而Sal B+GW9662对照组PPARγ和PTEN的mRNA和蛋白,E-cadherin、α-SMA和p-Akt~((Thr308))蛋白表达水平与高糖组比较没有统计学意义,Sal B的作用效应被PPARγ拮抗剂GW9662阻断。结果表明,丹酚酸B可抑制高糖诱导的NRK-52E细胞发生EMT,其机制可能为Sal B通过激活PPARγ的活性,上调PTEN表达,进而抑制PI3K/Akt信号通路的致纤维化效应有关。     

人参皂苷Rg1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2中炎症反应和纤维化的影响及可能的机制。方法 细胞计数法(CCK-8)检测不同浓度人参皂苷Rg1对细胞活性的影响。HK-2细胞随机分为正常对照组、高糖组、低、高人参皂苷Rg1组。ELISA检测TNF-α和IL-1β,Western blot分析α-SMA、E-cadherin、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达情况。结果人参皂苷Rg1对HK-2细胞无明显毒性作用。与正常对照组相比,高糖组TNF-α和IL-1β含量升高(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平上调(P 0.05),E-cadherin的表达水平下调(P 0.05);与高糖组相比,低、高人参皂苷Rg1组TNF-α和IL-1β含量降低(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平下调(P 0.05),E-cadherin的表达水平上调(P 0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制HG诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和EMT来阻碍肾纤维化进展,其机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。     

肾复康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的影响及其机制研究

目的:探讨肾复康含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞株HK-2间质转化的影响及其分子机制。方法:以HK-2细胞作为研究对象,常规培养后将细胞进行如下分组及刺激处理:空白对照组、模型对照组(10 ng/ml TGF-β1刺激)、32 g/kg尿毒清30%含药血清组(30%尿毒清含药血清+TGF-β1刺激)、18.32 g/kg肾复康10%、30%含药血清组(10%或30%肾复康含药血清+TGF-β1刺激)。MTT法检测肾复康含药血清对HK-2细胞活力的影响;显微镜下观察各组细胞间形态学的差异;ELISA法检测各组细胞上清液中I型胶原(collagen I)和纤维连接蛋白(fibronectin)的水平;q-PCR法检测各组细胞内E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和整联蛋白连接激酶(ILK)基因的表达水平;蛋白免疫印迹法检测Smad2/3总蛋白、核蛋白表达及其磷酸化水平;蛋白免疫印迹法检测下游的ILK蛋白表达水平。结果:肾复康含药血清对HK-2细胞的存活率无抑制作用;与空白对照组比较,模型对照组细胞形态由上皮样的铺路石状变成间质样的长梭形,E-cadherin的mRNA水平显著下调(P0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著上调(P0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平显著上调(P0.01);与模型对照组比较,肾复康各含药血清组E-cadherin的mRNA水平显著上调(P0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著下调(P0.05或P0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平明显下调(P0.05或P0.01)。结论:肾复康能逆转TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的上皮间质转化,其作用机制可能与其抑制胞内Smad2/3-ILK信号通路的活化有关。     

补体C3a及其受体在马兜铃酸Ⅰ致人源性肾小管上皮细胞损伤中的表达分析

目的研究补体C3a(Complement 3a)及其受体C3aR(Complement 3a receptor)在马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAⅠ)诱导的人源性肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法将不同浓度的AAⅠ作用于HK-2细胞后,收集细胞上清以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C3a含量;免疫荧光观察AAⅠ作用后HK-2细胞C3aR蛋白表达变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测AAⅠ作用后HK-2细胞中C3aR表达情况;RT-PCR法检测细胞内C3a、C3aR mRNA的表达。结果AAⅠ可致HK-2细胞上清中IL-6、TNF-α、C3a含量显著升高,且呈剂量依赖性;AAⅠ可增加HK-2细胞中C3aR蛋白表达及C3a、C3aR mRNA表达。结论补体C3a及其受体C3aR参与了AAⅠ致人源性肾小管上皮细胞的损伤过程,补体系统可能通过诱导炎症损伤促进马兜铃酸肾病的发生发展。     

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^-1)和BLC+ChR(100 mg·kg^-1)剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^-1)诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^-1)组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^-1)组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。     

EGCG对HK-2细胞CTGF表达的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响并探讨其可能的机制。方法:体外培养HK-2细胞,EGCG分别以25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L作用于体外培养的HK-2细胞48h。用ELISA法和RT-PCR检测HK-2细胞CTGF蛋白含量及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,EGCG组HK-2细胞CTGF表达显著下降(P<0.01),且呈浓度依赖关系。结论:EGCG能抑制HK-2细胞CTGF的表达。     

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smads信号转导途径的影响

目的 观察姜黄素对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾小管上皮细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及TGF-β/Smads信号转导途径的影响。     

骨形态发生蛋白-7对马兜铃酸诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7, BMP-7)对马兜铃酸（Aristolchic acid, AA）诱导的肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用,以期为马兜铃酸肾病(Aristolchic acid nephropathy,AAN)寻找治疗新措施。方法 应用不同浓度BMP-7(75 ng/mL、150 ng/mL、300 ng/mL)处理经AA(10 μg/mL)诱导转分化的体外培养人近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）,然后应用逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting 技术分别检测α-SMA mRNA及蛋白的表达水平。结果 BMP-7呈剂量依赖方式逆转AA诱导的HK-2细胞α-SMA基因及蛋白的表达。结论 BMP-7可以通过抑制马兜铃酸诱导的人肾小管上皮细胞转分化从而可能成为AAN的防治潜在新药。     

益糖康对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨益糖康是否通过抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)进而减轻糖尿病对肾脏的早期损伤。方法:40只SD雄性大鼠随机分成生理盐水组(1mL/100g)、益糖康组(2.10g/100g)、二甲双胍组(9.11g/100g)、二甲双胍+益糖康组(4.55g/100g二甲双胍+1.05g/100g益糖康煎剂),每组10只,分别给予相应药物灌胃,连续5d,腹主动脉取血,分离上清液。体外实验分组:NS组(10%生理盐水组血清)、YTK组(10%益糖康组血清)、Metformin组(10%二甲双胍组血清)和M+YTK组(10%二甲双胍+益糖康组血清)。高糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞24h后,分别采用划痕实验、Transwell实验、Real-time PCR和Western Blot法检测细胞迁移力、体外侵袭力以及EMT相关基因表达水平的改变。结果:YTK组细胞划痕区的未汇合率显著高于NS组(P<0.05);YTK组穿膜细胞数显著低于NS组(P<0.05);M+YTK组穿膜细胞数显著低于Metformin组(P<0.05);与NS组比较,YTK、Metformin及M+YTK组细胞中E-cadherin mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);而Vimentin和α-SMA mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),其中YTK组和Metformin组水平相当,而M+YTK组中Vimentin和α-SMA mRNA表达水平显著低于Metformin组(P<0.05)。结论:益糖康可能是通过抑制肾小管细胞发生EMT进而减轻糖尿病对肾脏的早期损伤,且中药复方益糖康联合西药二甲双胍对肾小管上皮细胞的EMT抑制效果较单独使用二甲双胍更为显著。     

益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的:研究益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织E-cadherin,α-SMA蛋白表达情况,观察本方对肾小管上皮细胞转分化的影响,进一步探讨其抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:132只雄性SD大鼠以单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型,造模成功后大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,西药组,益气活血降浊复方大、中、小剂量组。根据大鼠体重确定具体给药剂量,益气活血降浊复方大剂量组34.6g.kg-1,中剂量组17.3g.kg-1,小剂量组8.6g.kg-1(分别为人服用量的20,10,5倍)ig给药,1次/天,模型组和假手术组、正常组灌入相应生理盐水。蒙诺10mg.kg-1(相当于成人用量的20倍)。考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白定量;检测血清Scr、BUN水平;采用免疫组化方法检测肾组织中E-cadherin,α-SMA蛋白表达。结果:与正常组、假手术组相比,模型组大鼠在第1、2、3周E-cadherin蛋白表达明显减少(P0.01),益气活血降浊复方大、中、小剂量组较正常组、假手术组在各个时间点E-cadherin蛋白表达有所减少,但与模型组比较显著增加(P0.01),福辛普利钠组较模型组表达也显著增加(P0.01),具有统计学意义。中药大剂量组在各个时间点增加E-cadherin蛋白效果最好且与西药组相当,中、小剂量组虽然能增加E-cadherin蛋白表达,但效果逊于大剂量组和西药组。而模型组大鼠第1、2、3周肾间质α-SMA蛋白较正常组、假手术组表达明显增加(P0.01),益气活血降浊复方大、中、小剂量组较正常组、假手术组在各个时间点α-SMA蛋白表达有所增加,但与模型组比较显著减少(P0.01),西药组较模型组表达也显著减少(P0.01),具有统计学意义。中药大剂量组在各个时间点降低α-SMA蛋白效果最好且与西药组相当,中、小剂量组虽然能降低α-SMA蛋白表达,但和大剂量组及西药组存在差异。结论:益气活血降浊复方可能通过抑制α-SMA蛋白表达,上调E-cadherin表达,影响肾小管上皮细胞转分化,减少细胞外基质蛋白的合成,增加其降解,从而减缓肾间质纤维化的发展。     

Ginsenoside Rg1, a major active component isolated from Panax notoginseng, restrains tubular epithelial to myofibroblast transition in vitro

The medicinal herb, Panax notoginseng, has been used for thousands of years in traditional Chinese medicine and possesses anti-fibrosis properties. Epithelial-myofibroblast transition (EMT) plays an important role in renal tubulointerstitial fibrosis. The present study was designed to examine whether ginsenoside Rg1, a major active component isolated from Panax notoginseng, has an ability to block this phenotypic transition in rat renal tubular epithelial cells (NRK-52E) induced by transforming growth factor-β1 (TGF-β1). The morphology of tubular epithelial-myofibroblast transition was observed through light microscope and transmission electron microscopy. α-SMA and E-cadherin are two markers of tubular epithelial-myofibroblast transition, their protein expressions were assessed by immunohistochemistry and western blot analysis. Gene expression of α-SMA as well as the two major extracellular matrix components collagen I and fibronectin was measured by real-time PCR analysis. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to quantitatively detect collagen I and fibronectin in the supernatant. Our results revealed that ginsenoside Rg1 obviously blocked morphologic transformation in NRK-52E induced by TGF-β1. Meanwhile, ginsenoside Rg1 inhibited the expression of α-SMA and the loss of E-cadherin, subsequently decreased the levels of collagen I and fibronectin in a dose-dependent manner. In addition, western blot analysis indicated that ginsenoside Rg1 inhibited the expression of P-ERK1/2 in NRK-52E induced by TGF-β1. These results suggest that ginsenoside Rg1 can restrain the process of EMT maybe via suppressing the expression of P-ERK1/2 in vitro.     

Fuzheng Huayu recipe and vitamin E reverse renal interstitial fibrosis through counteracting TGF-β1-induced epithelial-to-mesenchymal transition

Aim

To investigate the mechanism of action of Fuzheng Huayu recipe (FZHY) and vitamin E (Vit E) against renal interstitial fibrosis related to transforming growth factor-beta1 (TGF-β1) mediated tubular epithelial-to-mesenchymal transition.

Materials and methods

Renal interstitial fibrosis was induced by administration of HgCl₂ at a dose of 8 mg/kg body weight once a day for 9 weeks. Rats were randomly divided into four groups: normal, model, FZHY, and Vit E group. Rats in the latter two groups were treated with the FZHY recipe and Vit E respectively. HK-2 cells were treated with TGF-β1 for 24 h, followed by incubation with either SB-431542 (a potent and specific inhibitor of TβR-I kinase) or FZHY drug-containing serum for another 24 h. Hyp content in rat kidney tissue was assayed with Jamall's method and collagen deposition in kidney was visualized using Masson stain. Protein expression of TGF-β1, TβR-I, Smad2, p-Smad2, Smad3, and p-Smad3 was analyzed by Western blotting. Protein expression and the location of Smad3 in kidney was assayed by immunohistochemistry, E-cadherin, cytokeratin 18 (CK-18), α-SMA and TGF-β1 by immunofluorescent stain.

Results

FZHY and Vit E inhibited renal collagen deposition and reduced Hyp content significantly. They upregulated E-cadherin protein expression and down-regulated the protein expression of α-SMA, TGF-β1, p-Smad2, p-Smad3, and TβR-I. Lastly, they inhibited the nuclear translocation of Smad3 in fibrotic kidney tissue. FZHY drug-containing serum significantly upregulated the expression of CK-18 and down-regulated the expression of α-SMA, TβR-I, p-Smad2/3 in TGF-β1 stimulated HK-2 cells.

Conclusion

The mechanism of action of FZHY and Vit E against renal interstitial fibrosis is related to the reversal of tubular EMT induced by TGF-β1.     

Effect of Tangnaikang on TGF-β1-induced transdifferentiation of human renal tubular epithelial HK-2 cells

Objective

To explore the function of Tangnaikang (TNK) in the prevention and treatment of renal interstitial fibrosis through transdifferentiation of the human renal tubular epithelial cell line HK-2 induced by transforming growth factor-β₁ (TGF-β₁).

Methods

HK-2 cells cultured in dulbecco's modified eagle medium/F12 (1:1) with 10% fetal calf serum were divided into six groups: blank control group, TGF-β₁ group (TGF-β₁ 10 ng/mL), serum control group (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% serum), treatment group 1 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 5% TNK serum), treatment group 2 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% TNK serum), and treatment group 3 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 20% TNK serum). Cell proliferation was detected by 4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin were observed by immunohistochemical assay. The contents of collagen I (Col I), collagen III (Col III), and fibronectin (FN) in the culture medium supernatant were detected by ELISA.

Results

E-cadherin was expressed and α-SMA was not expressed in normal HK-2 cells. In HK-2 cells cultured with TGF-β₁ α-SMA expression significantly increased, HK-2 cells significantly proliferated, and secretion of Col I, Col III, and FN significantly increased compared with the blank control group (all P<0.05). In the HK-2 cells cultured with TGF-β₁ and TNK serum, the expression of α-SMA significantly decreased, the expression of E-cadherin significantly increased, and the cell proliferation and the secretion of Col I, Col III and FN were significantly inhibited compared with the TGF-β₁ group (all P<0.05).

Conclusion

TNK can inhibit cell proliferation and reduce secretion of Col I, Col III, and FN. This indicates that TNK can inhibit transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells induced by TGF-β₁, with the effect of preventing and treating renal interstitial fibrosis.     

重楼皂苷Ⅰ对结肠癌HCT116细胞FOXQ1及上皮间质转化的影响

目的:观察重楼皂苷Ⅰ对转录因子叉头框Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)及上皮间质转化相关因子表达的影响,探讨重楼皂苷Ⅰ抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:用1.25,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ作用于结直肠癌HCT116细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测FOXQ1,E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)蛋白和mRNA表达情况。结果:与空白组比较,1.25μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组FOXQ1蛋白和mRNA相对表达量降低,E-cadherin mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低(P<0.05);E-cadherin蛋白相对表达显著升高(P<0.01)。与空白组比较,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组中的FOXQ1,Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低,E-cadherin蛋白和mRNA相对表达量升高(P<0.05,P<0.01)。与1.25μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组比较,2.50μmol·L^-1重楼皂苷Ⅰ组中的Vimentin蛋白和mRNA相对表达量降低,但差异无统计学意义;E-cadherin蛋白和mRNA相对表达量升高,FOXQ1蛋白和mRNA相对表达量降低(P<0.05,P<0.01)。结论:重楼皂苷Ⅰ抑制结肠癌的转移,可能与抑制FOXQ1的表达,上调E-cadherin的表达,降低Vimentin的表达相关。