肾小管上皮细胞间充质转分化的调控机制及中药的干预作用

肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的重要发病机制,其关键步骤包括“肾小管上皮细胞黏附性消失、间充质细胞标志性蛋白表达和细胞骨架蛋白重组、肾小管基底膜破坏、细胞迁移能力增强”等.这些关键步骤不仅与多条细胞信号通路的调控作用有关,而且,在体内外可被一些单味中药(黄芪、冬虫夏草、丹参等)及其提取物以及中药复方(黄芪当归合剂、益气活血方等)所干预.中药通过干预肾小管EMT病变过程而改善肾间质纤维化.     

红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织补体C3及肾小管上皮间充质转分化的影响

 目的 探讨红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的影响及其机制。方法 建立单侧输尿管梗阻大鼠模型,并把实验动物分成假手术组（对照组）、单侧输尿管梗阻组、单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素小剂量治疗组（100 u·kg^-1·d^-1红细胞生成素,小剂量组）和单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素大剂量治疗组（1 000 u·kg^-1·d^-1红细胞生成素,大剂量组）。在单侧输尿管梗阻术后第3~14天隔天腹膜内注射红细胞生成素,所有大鼠在第14天处死;观察肾组织病理变化;免疫组化检测各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白、上皮细胞钙黏蛋白和补体C3的表达。结果 与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏胶原纤维含量明显减少,且大剂量红细胞生成素治疗组减少更明显。与对照组比较,单侧输尿管梗阻组大鼠梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白大量表达,肾小管上皮细胞钙黏蛋白表达明显减弱,并可见肾小管上皮细胞大量表达C3。与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞C3和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减弱,上皮细胞钙黏蛋白表达明显增强,以上改变在大剂量红细胞生成素治疗组更加明显。结论 红细胞生成素可抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮间充质转分化,减轻肾间质纤维化,这种作用可能与其抑制肾小管上皮细胞补体C3的表达有关。     

镰形棘豆提取物对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:本实验通过观察镰形棘豆提取物含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其在肾间质纤维化方面的作用及机制。方法:采用镰形棘豆提取物(300mg/kg)给大鼠灌胃,每天2次,连续3天。3天后大鼠股动脉采血,分离血清,即得镰形棘豆提取物含药血清。体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1);细胞分为4组:空白对照组、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/ml+10%空白血清)、镰形棘豆提取物组(TGF-β1 10 ng/ml+10%镰形棘豆提取物含药血清)、转化生长因子-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/ml)。药物干预细胞后,采用免疫组化技术测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA技术测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量,荧光定量PCR检测转化生长因子-β受体I(TβRI)、受体II(TβRII)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、smad 3的蛋白表达。结果:正常的HK-2细胞只表达E-cadherin,不表达α-SMA。但经TGF-β1诱导后细胞转分化,E-cadherin的表达开始减弱,α-SMA表达逐渐增强,药物干预后,α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达增强。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组ColⅠ、ColⅢ、FN的含量显著增加,在24h时分别为(197.4±0.7)、(32.7±0.2)、(754.5±4.1),72h时分别为(216.4±0.8)、(38.3±0.1)(995.4±1.5),P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌显著下降,72h时作用更为显著,含量分别为(205.5±0.7)、(35.0±0.3)、(892.4±0.9),P﹤0.05。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组TβRI(11.08±0.10)、TβRII(11.57±0.12)的mRNA表达和Smad 2(0.971±0.017)、smad 3(0.972±0.011)的蛋白表达显著上升,P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组TβRI(9.788±0.379)、TβRII(8.452±0.250)mRNA表达和Smad 2(0.536±0.013)、Smad3(0.530±0.035)蛋白表达也减少,P﹤0.05。空白血清则无此作用。结论:镰形棘豆提取物能够减少细胞外基质成分分泌,调控Smads信号通路,抑制肾小管上皮细胞转分化,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

MicroRNA在丹酚酸B逆转肾小管上皮细胞转分化时的表达变化

目的:研究丹酚酸B逆转转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化时microRNA(miRNA)表达谱的变化。方法:将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:①对照组:未加入丹酚酸B或者TGF-β1;②TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5ng/mL);③丹酚酸B逆转组:在细胞培养基中先TGF-β1(浓度为5ng/mL),48h后HK-2细胞成功诱导EMT后形成的间充质细胞,再更换为TGF-β1(浓度为5ng/mL)和丹酚酸B(50μmol/L)继续培养72h,采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;免疫细胞化学染色检测细胞E-cadherin的表达情况;基因芯片检测各组细胞miRNA的表达变化。结果:①丹酚酸B具有逆转HK-2细胞EMT的作用;②与正常HK-2细胞比较,TGF-β1组有25种miRNA的表达出现显著改变,其中15种表达下调2倍以上,10种表达上调2倍以上。③与TGF-β1组比较,丹酚酸B逆转组,有44种miRNA的表达出现显著改变,其中24种表达下调2倍以上,20种表达上调2倍以上。④有10种miRNA表达在两组同时出现显著改变,其中8种在TGF-β1组明显下调,而在丹酚酸B逆转组明显上调,1种在TGF-β1组明显上调,而在丹酚酸B逆转组则明显下调。结论:丹酚酸B具有阻止慢性肾脏疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效调控miRNA的表达有关。     

骨形态发生蛋白-7对马兜铃酸诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7, BMP-7)对马兜铃酸（Aristolchic acid, AA）诱导的肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用,以期为马兜铃酸肾病(Aristolchic acid nephropathy,AAN)寻找治疗新措施。方法 应用不同浓度BMP-7(75 ng/mL、150 ng/mL、300 ng/mL)处理经AA(10 μg/mL)诱导转分化的体外培养人近端肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）,然后应用逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting 技术分别检测α-SMA mRNA及蛋白的表达水平。结果 BMP-7呈剂量依赖方式逆转AA诱导的HK-2细胞α-SMA基因及蛋白的表达。结论 BMP-7可以通过抑制马兜铃酸诱导的人肾小管上皮细胞转分化从而可能成为AAN的防治潜在新药。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

栀子苷对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中TGF-β/Smad通路的影响

[目的] 探究栀子苷（GE）对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中转化生长因子-β和Smad相关蛋白（TGF-β/Smad）通路的影响。[方法] 实验分为对照组、高糖组、GE 1、10、50、100 μmol/L组。对照组HK2细胞在5.5 mmol/L低糖DMEM培养液中培养,除对照组外,其余各组均于25 mmol/L高糖DMEM培养液中培养,GE 1、10、50、100 μmol/L组同时添加GE,使GE终浓度分别为1、10、50、100 μmol/L,干预48 h。显微镜下观察HK2细胞形态;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中纤连蛋白（FN）、E-钙黏素（E-cad）、Ⅳ型胶原（COLⅣ）mRNA水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3、磷酸化Smad3 （p-Smad3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白水平。[结果] 对照组细胞呈多边形或卵圆形,分布均匀;高糖组细胞部分呈现长梭形、胞核呈梭形变;随着GE剂量的升高,细胞形态逐渐恢复正常。与对照组相比,高糖组细胞中FN、COLⅣ mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,细胞中E-cad mRNA水平降低（P＜0.05）;与高糖组相比,GE 1 μmol/L组细胞中FN mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低（P＜0.05）,GE 10、50、100 μmol/L组细胞中FN、COLⅣ mRNA水平,TGF-β1、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白水平,上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低,细胞中E-cad mRNA水平升高（P＜0.05）。[结论] GE可以抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中TGF-β/Smad通路。     

丹参酚酸B盐对TGF-β1诱导的HK-2上皮-间充质转分化的影响

目的:研究丹参酚酸B盐(salvianolic-acid B,SA-B)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human human renal proximal tubular cells)转分化的影响。方法:复苏并传代培养HK2细胞,应用不同剂量的TGF-β1或同一剂量作用不同时间诱导HK2细胞发生上皮-间充质转分化(epithelia-mesenchymal transition,EMT),同时给予骨形成蛋白7(BMP-7,阳性对照)(50μg.L-1)和SA-B(1×10-5mol.L-1)干预观察二者对EMT的影响。应用Western印迹法和免疫荧光法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果:BMP-7显著抑制了TGF-β1诱导的E-cadherin下调(P0.05)和α-SMA上调(P0.05);而SA-B显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达增加(P0.05),未见其抑制TGF-β1诱导的E-钙黏蛋白下调。结论:SA-B和BMP-7能够抑制TGF-β1诱导的HK2上皮-间充质转分化,其共同的作用是抑制了TGF-β1诱导的α-SMA上调,而SA-B对E-钙黏蛋白的调控作用有待进一步的研究。     

白藜芦醇通过激活PI3K/Akt通路抑制高糖致肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的:白藜芦醇对高糖作用下肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激介导的凋亡影响及作用机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞,高糖作用于肾小管上皮细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组(30 mmol·L~(-1)高糖处理)、不同浓度(5、10μmol·L~(-1))白藜芦醇组,LY294002(PI3K抑制剂)组(10μmol·L~(-1))。使用MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1检测线粒体膜电位(MMP);DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western-blot法检测各组细胞色素C(CYT-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及Akt的磷酸化情况。结果:与空白对照组相比高糖损伤组能够显著降低肾小管上皮细胞的活力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,LDH(细胞外)、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低线粒体膜电位,增加了CYT-C、Caspase-3的表达,而p-Akt/Akt表达降低(P0.01)。不同浓度白藜芦醇(起效剂量5μmol·L~(-1),高剂量10μmol·L~(-1))和高糖同时作用肾小管上皮细胞时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,线粒体膜电位提升,CYT-C、Caspase-3表达显著下降,p-Akt/Akt表达增加(P0.01)。LY294002(PI3K抑制剂)组上述指标的检测结果与白藜芦醇组相反。结论:白藜芦醇可能部分通过激活PI3K/Akt通路抑制氧化应激及其诱导的凋亡,从而对肾小管上皮细胞发挥保护作用。     

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2?EMT的机制.方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2?EMT模型,Western?blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ER...     

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞损伤及机制的研究

目的:观察高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤及机制。方法:细胞生长融合至约80%时,用DMEM低糖培养基无血清同步化48 h,然后分为以下7组。①正常糖对照组(5.5 mM低糖DMEM培养基,NG);②高糖1组(15 mM高糖DMEM培养基,HG1);③高糖2组(30 mM高糖DMEM培养基,HG2);④高糖3组(45 mM高糖DMEM培养基,HG3);⑤高糖4组(60 mM高糖DMEM培养基,HG4);⑥等渗1组(30 mM甘露醇DMEM培养基,HM1);⑦等渗2组(45 mM甘露醇DMEM培养基,HM2)。观察不同糖浓度(5.5~45 mM)刺激HK-2细胞24 h,观察IκBα和p65蛋白表达规律。MTT比色法检测细胞活力。Western blot法检测IκBα和p65蛋白表达。结果:高糖2组、高糖3组、高糖4组浓度呈依赖性对HK-2活力存在显著的抑制作用(P0.05,P0.01);高糖2组、高糖3组浓度的甘露醇对HK-2活力没有明显的抑制作用(P0.05)。IκBα蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而依次降低,而p65蛋白表达呈浓度依赖性升高,高糖2组、高糖3组的葡萄糖与正常糖对照组比较,差异有显著性或非常显著性意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖诱导的HK-2毒性损伤呈一定的浓度依赖关系,其机制与NF-κB通路的激活有关,与渗透压作用无明显关联。     

四妙散对尿酸诱导人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子及骨形成蛋白-7表达的影响

目的探讨四妙散药物血清防治肾间质纤维化的作用机制。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、模型组、对照组及药物血清高、中、低剂量组。实时荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、骨形成蛋白-7(BMP-7),免疫组织化学检测CTGF、BMP-7蛋白的表达。结果尿酸诱导后CTGF的m RNA和蛋白表达量明显增加(P0.05),BMP-7的m RNA和蛋白表达量明显降低(P0.05);经药物血清干预后,随剂量增加CTGF的表达逐步下降(P0.05),BMP-7的表达逐步上升(P0.05),呈现一定剂量依赖性。结论四妙散抗肾间质纤维化的机制可能是通过下调CTGF的表达和上调BMP-7的表达抑制上皮细胞转分化完成的。     

盐酸小檗碱对大鼠肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察盐酸小檗碱(berberine,BBR)对缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)活性的影响。方法:应用化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)在NRK-52E细胞建立化学性缺氧再给氧损伤模型,模拟在体的缺血再灌注模型。以不同浓度(1×10-6,1×10-5,1×10-4 mol.L-1)的BBR处理NRK-52E细胞。应用四甲基偶氮唑法(MTT)检测BBR对各组细胞活性的影响;检测各组细胞上清液中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Hoechst33258染色观察各组凋亡细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:MTT结果显示1×10-4 mol.L-1 BBR对细胞毒性作用明显,而1×10-6,1×10-5 mol.L-1BBR明显提高缺氧再给氧组细胞存活率,尤以1×10-5 mol.L-1为高;Hoechst33258显示正常组基本无凋亡细胞,模型组出现核大深染的凋亡细胞,而BBR(1×10-5 mol.L-1)预处理组凋亡细胞明显减少;与正常对照组相比,缺氧再给氧组细胞上清液中MDA含量明显升高(P<0.05),SOD活力显著降低(P<0.05)。而用BBR预处理后缺氧再给氧组的MDA显著低于用药前(P<0.05),SOD则高于缺氧再给氧组(P<0.05),上述作用在BBR浓度为1×10-6～1×10-5 mol.L-1呈浓度依赖性。流式细胞仪结果显示1×10-5,1×10-6 mol.L-1 BBR预处理后缺氧再给氧各组细胞凋亡率分别为11.1%,32.2%与用药前56.2%相比较有显著性差异(P<0.05)。结论:BBR对缺血再灌注的肾小管上皮细胞具有保护作用,尤以1×10-5 mol.L-1作用最为明显。     

糖肾康对高糖诱导人肾小管上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1的影响

目的探讨糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）分为空白组、高糖诱导组（30 mmol/L D-葡萄糖）、对照组（30 mmol/L D-葡萄糖＋10%空白血清）和糖肾康低（30 mmol/L D-葡萄糖＋5%糖肾康药物血清）、中（30 mmol/L D-葡萄糖＋10%糖肾康药物血清）、高剂量组（30 mmol/L D-葡萄糖＋20%糖肾康药物血清）。药物干预24、48 h后,ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）的含量。结果 HK-2经高糖诱导后,MMP-9分泌显著减少,TIMP-1分泌显著增加,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;经糖肾康干预后,MMP-9含量显著上升,TIMP-1含量显著下降,与高糖诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论糖肾康通过调控高糖诱导人肾HK-2纤维化因子的分泌,达到防治糖尿病肾病的目的。     

人肾小管上皮细胞HK-2的培养及生长曲线测定

目的 :通过细胞计数法绘制人肾小管上皮细胞株HK-2细胞的生长曲线,了解HK-2细胞的生长特性,为相关实验研究提供参考。 方法 :将HK-2 细胞用含 10 % 胎牛血清的 DMEM / F12(1 ∶1)培养基培养,每隔24 h在倒置显微镜下观察细胞生长范围,并进行计数,连续观察7 d后,以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图,即得生长曲线。 结果 :细胞呈立方形铺路石样贴壁生长,细胞间连接紧密。细胞数目在培养第2 d开始增加,但在第1~3 d增加缓慢,第3~6 d 细胞数目急剧增加,并进入指数生长期,在第6 d时细胞达到饱和密度(100%),在第7 d时细胞数目显著下降。 结论 :在1~3 d细胞生长处在潜伏期,3~6 d细胞进入大量分裂的指数生长期,第6 d达到饱和后,细胞生长则进入衰退期。     

肾茶黄酮对急性肾衰中肾小管上皮细胞保护作用的研究＊

目的 探究肾茶黄酮对急性肾衰中肾小管上皮细胞保护作用。方法 甘油制备大鼠急性肾衰模型，检测成功后提取肾小管上皮细胞，分为模型组、（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组，其中（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组分别添加对应剂量肾茶黄酮，对照组未经处理的正常肾小管上皮细胞，对照组和模型组正常培养。分别在培养（0、3、6、12、24、36） h Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力；各组细胞处理24h流式细胞术检测细胞凋亡能力，超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒、丙二醛（MDA）检测试剂盒分别检测SOD活性、MDA水平，蛋白免疫印迹（WB）检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3、caspase9、B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、Bcl-2相关X蛋白（BAX）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Sma和Mad相关蛋白3（Smad3）蛋白水平。结果 与对照组相比，模型组在细胞培养（3、6、12、24、36）h OD₄₅₀降低（P < 0.05）；与模型组相比，（200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组在细胞培养6h OD₄₅₀升高（P < 0.05）；（300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组在细胞培养（12、24、36）h OD₄₅₀升高（P < 0.05）。各组细胞处理24h，与对照组相比，模型组SOD活性、细胞凋亡率，caspase3、caspase9、BAX、TGF-β1、Smad3蛋白水平升高（P < 0.05），MDA活性、BCL2蛋白水平降低（P < 0.05），随着剂量的升高，各组呈剂量依赖性变化。与模型组相比，（100、200、300、400）μg·mL^-1肾茶黄酮组细胞凋亡率，SOD活性，BCL2、TGF-β1、Smad3蛋白水平降低（P < 0.05），MDA活性、caspase3、caspase9、BAX蛋白水平升高（P < 0.05），呈剂量依赖效应。结论 肾茶黄酮可促进急性肾衰中肾小管上皮细胞增殖、抑制凋亡，抑制氧化应激，抑制促凋亡蛋白的表达从而减缓急性肾衰肾小管上皮细胞的损伤。     

黄芪注射液对新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞损伤信号机制的影响

目的从细胞蛋白水平和分子水平研究黄芪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2细胞株)损伤的信号传导机制的影响〔是否通过激活核因子κB(NF-κB)信号途径〕。方法以HK-2细胞株为研究对象,以20%窒息血清作为攻击因素,攻击前分为空白对照组和黄芪预处理组,在攻击后15min,1、2 h分为相应时间的血清攻击组和黄芪预处理组后攻击组。通过激光共聚焦显微镜观察间接免疫荧光染色后NF-κB核转位以及免疫印迹(Western blot)观测NF-κB抑制亚基I-κBα量的变化。结果攻击前与空白对照组比较,黄芪预处理组NF-κB核转位和I-κBα量无改变;而攻击后各组与空白组对照组比较,NF-κB核转位显著增加和I-κBα量显著减少,以攻击后1 h最明显;各时点黄芪预处理组后攻击组与空白攻击组比较,NF-κB核转位显著减少和I-κBα量显著增加。结论黄芪预处理能够抑制窒息后血清所致后续NF-κB激活。