乙、丙型肝炎病毒在慢性肝炎、肝硬化患者胃黏膜表达的临床研究

目的:探讨乙、丙型肝炎病毒(HBV、HCV)的泛嗜性.方法:选择慢性乙、丙型肝炎(慢肝组)28例、肝炎肝硬化(肝硬化组)44例,共72例作为研究对象.受检者常规胃镜检查,取胃窦幽门周围3cm以内活体组织两块,除普通病理检查外,分别做乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)、丙型肝炎病毒抗原(HCVAg)免疫组化法检测.结果:慢肝组有不同程度的胃黏膜慢性炎症者达92.9%(26/28)、肝硬化组达95.5%(42/44),排除年龄影响因素外,慢肝组以单纯慢性炎症为多,而肝硬化组以伴萎缩和肠化者为多.慢肝组与肝硬化组患者分别有53.6%(15/28)、81.8%(36/44)胃黏膜HBVAg阳性,其中HBsAg、HBcAg双阳性31例.在51例患者胃黏膜HCVAg检测中有33例(占64.7%)阳性表达、66.7%(22/33)与HBcAg同时表达.肝硬化组HBVAg及HBsAg、HBcAg双阳性者均高于慢肝组(P值均＜0.05).结论:HBV、HCV在慢性及肝硬化患者胃黏膜表达明显,应重视其在胃黏膜病变发病中的作用,并加强防护措施.     

乙、丙型肝炎病毒及幽门螺杆菌在慢性肝炎、肝硬化患者胃黏膜的表达

目的 探讨乙、丙型肝炎病毒(HBV、HCV)的泛嗜性及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染的关系。方法 选择慢性乙型肝炎(慢肝)28例、乙型肝炎后肝硬化(肝硬化)44例,共72例作为观察组,无肝病的胃病患者30例作为对照组。受检者常规胃镜检查,取胃窦幽门周围3cm以内活体组织3块,除普通病理检查外,分别做乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)、丙型肝炎病毒抗原(HCVAg)检测及快速尿素酶、品红染色和免疫组化法检测H.pylori抗原(HPAg)。结果 慢肝组有不同程度的胃黏膜慢性炎症者达92.9％(26/28)、肝硬化组为95.5％(42/44)。排除年龄影响因素外,慢肝组以单纯慢性炎症为多,而肝硬化组以伴萎缩和肠化者多。72例慢性肝病者中有51例胃黏膜HBVAg阳性,其中HBsAg、HBcAg双阳性31例。肝硬化组HBsAg或HBcAg表达及HBsAg、HBcAg双阳性者均高于慢肝组(P均<0.05)。51例慢性肝病胃黏膜中有33例占64.7％有HCVAg表达;其中22例占52.4％与HBsAg或(和)HBcAg同时表达。在慢肝和肝硬化组有炎症的胃黏膜中H.pylori阳性率分别为67.9％(20/26)、69.0％(29/42),与对照组相比无显著差别。慢性肝病H.Pylori阳性、阴性者胃黏膜HBV抗原表达率分别为69.8％(37/53)、73.7％(14/19),亦无统计学差异(P>0.05)。结论 (1)HBV、H     

慢性乙肝、肝硬化患者胃黏膜病变发病机制的研究进展

目前研究发现,慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者胃黏膜病变发生率较高,病变呈多样性,病变组织细胞内可检测出乙肝病毒HBsAg、HBcAg、HBV DNA[1,2].本文就慢性乙肝、肝硬化患者胃黏膜发病特点以及发病机制综述如下.     

隐匿性乙型肝炎病毒感染者临床特点和肝组织病理学检查

目的了解血清肝炎病毒标志物阴性、肝功能反复异常患者中HBV隐匿性感染的比例及其临床和病理学特点。方法对27例血清肝炎病毒标志物阴性、肝功能反复异常患者采用免疫组化法检测肝组织HBsAg、HBcAg和HCVAg，并进行常规的病理学检查。结果肝组织HBsAg和（或）HBcAg阳性9例（33．3％）；HBsAg和（或）HBcAg及HCVAg阳性10例（37．0％）；全阴性8例（29．6％）。在HBV隐匿性感染的19例患者中，慢性肝炎8例，肝硬化11例。结论HBV和HCV感染为血清肝炎病毒标志物阴性患者肝功能反复异常的主要原因之一，尤其是HBV感染。这种HBV隐匿性感染与慢性肝炎、肝硬化的发生关系密切，应引起重视。     

肝移植术后肝组织中HBV cccDNA的表达及临床意义

目的探讨肝移植术后患者肝组织内乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的表达及其临床意义。方法应用原位聚合酶链反应及免疫组织化学法检测2004年4月至2007年4月在北京地坛医院肝移植术后出现HBV再感染的25例患者及10例肝移植术后未出现HBV再感染者肝组织中HBV cccDNA及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、前-S1的表达。结果在35例标本中检测到cccDNA阳性的有22例(62.9%),阳性信号为紫蓝色呈块状或颗粒状,定位于细胞核。25例术后出现HBV再感染的患者其HBV cccDNA阳性率显著高于未出现HBV再感染者(84%对10%,P<0.01)。HBV cccDNA和HBcAg均为阳性的有20例,有2例患者肝组织中HBcAg阴性,但HBV cccDNA检测为阳性。肝组织中HBV cccDNA的表达阳性率与HBcAg具有高度一致性(Kappa=0.755,P<0.01)。结论肝移植患者肝组织中HBV cccDNA阳性表达可能与乙型肝炎再感染具有密切关系。     

31例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者的临床及病理分析

目的了解HBsAg阴性慢性乙型肝炎(隐匿性乙型肝炎)患者的发病情况、临床和病理特点以及可能的发病机制。方法对31例反复肝功能异常、HBsAg阴性HBV感染患者进行临床、肝组织病理及免疫组化分析;采用荧光定量PCR方法对血清HBVDNA进行定量分析,以免疫组化法检测肝组织内HbsAg和HBcAg的表达,按慢性肝炎病理诊断标准进行分级(G)及分期(S)。结果31例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者中,18例肝组织病理和免疫组化检测证实为慢性乙型肝炎,其中7例诊断为肝炎后肝硬化;18例肝组织学检查HBsAg阳性2例,HBcAg阳性16例;病理分级、分期G4S4有7例,G1-3、S2-3有11例。结论HBsAg阴性HBV感染仍是我国原因不明肝病的主要原因之一,低水平HBV感染可导致慢性肝炎,甚至肝硬化或肝癌。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化关系探讨

目的:探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化的关系。方法:随机选择98例慢性乙型肝炎患者,行肝活检术取肝组织病理诊断,采用免疫组织化学法,检测其中的HBsAg和HBcAg。结果:随着慢性乙型肝炎患者肝组织炎症活动度和纤维化程度的加重,血清HBV DNA水平呈中、高量分布,明显高于低水平组,两组间差异有显著性意义(P<0.01)。血清HBV DNA呈现高水平复制时,肝组织中HBsAg和HBcAg亦呈现显著表达,有较好的一致性。结论:慢性乙型肝炎患者肝组织中有较高的HBV复制率,其肝组织中HBsAg和HBcAg的分布类型与HBV复制状况和肝组织病变活动性有相关性。     

45例HBsAg阴性乙型肝炎的临床分析

目的研究HBsAg阴性乙型肝炎的临床特点、血清HBV标志物、HBVDNA水平、肝脏病理变化及肝组织HBsAg和HBcAg的表达情况。方法回顾性分析45例HBsAg阴性乙型肝炎患者的临床资料,所有患者均进行了肝组织活检和病理免疫组化检测。结果在45例患者中,23例(51.1%)感染途径不明,25例(55.5%)无任何自觉症状,肝功能异常和病理损害均为轻度,但8例(17.8%)肝脏病理诊断为早期肝硬化;45例患者肝组织HBsAg和(或)HB-cAg均有至少一项阳性;43例(95.6%)患者血清抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc出现单独或联合阳性,而仅4例(8.9%)血清HBVDNA阳性。结论HBsAg阴性乙型肝炎起病隐匿,临床症状、肝功能变化和病理损害相对较轻,但其危害不容忽视,明确诊断需检测血清HBVDNA和(或)肝组织HBsAg和HBcAg。     

隐匿性乙型肝炎病毒感染

随着分子生物学技术在病毒检测技术中的应用,近年来发现部分复制水平较低的乙型肝炎病毒携带者血清中检测不到HBV表面抗原（HBsAg）,这种感染状态可发生于抗-HBs或抗-HBc阳性的患者,也可见于HBV标志物全阴性的患者;部分HBsAg阴转的急性或慢性乙肝患者,其血清中仍可检测出低水平HBVDNA或肝组织中检测出HBsAg或HBcAg,这种患者被称为HBV隐匿感染。     

隐匿性HBV感染者血清HBV M和肝组织病理学特点分析

目的：观察隐匿性HBV感染（OBI）者血清HBV M和肝组织病理学特点。方法在临床表现为OBI的慢性乙型肝炎（CHB）患者36例、肝硬化（LC）患者29例和原发性肝癌（PLC）患者22例,常规检测血清HBV M和HBV DNA,对CHB患者行肝活检,采用免疫组化法检测HBsAg和HBcAg。结果在CHB、LC和PLC患者,血清HBV DNA分别为（4.26±1.82）lgcopies/ml （P＆lt;0.05）、（3.13±1.43）lgcopies/ml和（2.78±1.26）lgcopies/ml;在36例CHB患者,肝组织HBsAg阳性8例（22.2%）,HBcAg阳性15例（41.7%）,HBsAg/HBcAg同时阳性9例（25.0%）;在三组患者中,血清HBV M以抗-HBc阳性最多见,分别为15例（41.7%）、12例（41.4%）和12例（54.5%）;在36例CHB患者,肝组织呈 G1、G2、G3和G4构成比分别为16.7%（6/36）、30.5%（11/36）、33.3%（12/36）和19.4%（7/36）,S1、S2、S3和S4构成比分别为11.1%（4/36）、22.2%（8/36）、50%（18/36）和16.7%（6/36）;在本组87例患者中有HBV感染家族史者57例（65.5%）。结论 OBI可引起慢性肝病病变进展,甚至导致肝硬化和肝癌的发生。血清抗-HBc阳性和HBV感染家族史是OBI发生的高危指标。单纯检测血清HBV DNA易造成OBI漏诊,及时行肝组织学检查可提高OBI诊断率。     

HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎肝细胞内的表达及临床意义

目的 探讨HBsAg、HBcAg在慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞内的表达,及其与血浆HBVDNA定量、肝组织病理和临床间的关系。 方法 采用PCR检测351例CHB患者血浆HBV DNA定量,肝穿刺活检,采用免疫组织化学技术观察肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达。 结果 在CHB患者肝细胞内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为92.3％和76.9％。HBcAg浆膜型(75.6％)和胞核型(24.4％)分别见于肝组织炎症较活跃和较静止期CHB。HBsAg表达强度与血浆HBV DNA定量呈较低正向关联(rp=0.24,P=0.0129)、与肝组织炎症和纤维化呈较低负向关联(rp=-0.22,P=0.0279和rp=-0.23,P=0.0186)。HBcAg的表达强度随着血浆HBV DNA定量的增加而增加,呈较强正向关联(rp=0.52,P<0.0001),随着肝组织炎症和纤维化程度的加重而减弱,呈较强的负向关联(rp=-0.33,P<0.0001和rp=-0.34,P<0.0001)。 结论 在CHB肝组织免疫损伤的免疫应答中,HBcAg是靶抗原,HBsAg不一定是靶抗原。HBsAg是筛查HBV感染的较敏感指标,HBcAg是评价HBV复制程度的较可靠指标。     

The conditions of HBV infection in myeloid cells in patients with hepatitis

In this study, HBsAg, HBcAg and HBV DNA in myeloid cells of 57 patients with hepatitis have been examined by using ABC staining method. The results show that in the myeloid cells of 54 patients with positive HBVM in serum, there are 4 cases with HBV positive antigen, HBcAg has been found in a case of acute hepatitis and HBsAg in a case of chronic hepatitis and a case of liver cirrhosis respectively, HBsAg and HBcAg were found simultaneously in another case of liver cirrhosis. Nothing has been found the myeloid cells of 3 cases with negative HBVM in serum. All these findings suggest that myeloid cells are probably another breeding ground for duplicating HBV.     

慢性乙型肝炎患者肝胃不和证与胃粘膜HBsAg和HBcAg相关性研究

目的：探讨慢性乙型肝炎患者肝胃不和证与胃粘膜乙型肝炎病毒标志物（HBsAg，HBcAg）免疫组化之间的相关性，为规范慢性乙型肝炎肝胃不和证提供依据。方法：选择符合条件患者60例。空腹采集血液标本，检测肝功能。HBV DNA定量；并进行电子胃镜检查，取胃窦、胃体、胃底粘膜各1块，活检胃粘膜HBsAg和HBcAg，免疫组化SP法检测阳性率，综合分析各检测值对肝胃不和证积分的意义。结果：60例患者胃粘膜HBsAg、HBcAg检出阳性率分别为55％和90％。胃粘膜HBsAg、HBcAg表达水平与肝胃不和证症候总分呈显著正相关（r=0.702、0．428，均P〈0．01）。通过直线相关分析，ALT、TBil与中医症候积分呈正相关（r=0，293、0.324，均P〈0．05）；AST、A／G与之相关性不强（r=0．204、-0．039，P〉0．05）。血清HBV DNA（Copies／m1）时数值与中医症候积分呈正相关（r=0.390，P〈0.01）。经过比较，胃粘膜HBsAg、HBcAg免疫组化表达水平与肝胃不和症候总分相关性最强。结论：慢性乙型肝炎患者肝胃不和证与其胃粘膜HBsAg、HBcAg免疫组化表达水平有关。     

慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV cccDNA定量与病情的相关性分析

目的探讨肝组织HBV cccDNA定量对慢性乙型肝炎（乙肝）患者病情的影响。方法应用FQ—PRC法检测42例乙肝患者肝组织HBVcecDNA、肝组织和血清HBV—DNA水平,同时对肝组织行常规病理染色判断肝组织炎症及纤维化程度;SP法检测肝组织中HBsAg、HBcAg表达,化学发光法检测HBV标志物。分析肝组织HBVceeDNA与组织和血清HBV-DNA、肝细胞内HBsAg、HBcAg水平及肝脏炎症、纤维化程度的关系。结果肝组织HBVeecDNA定量与组织及血清HBV—DNA定量呈正相关（r=0．807,P〈0．001;r=0．627,P〈0．001）;与肝组织炎症活动度及纤维化程度无明显相关性：肝组织HBVcccDNA定量与肝细胞内HBsAg表达无明显相关性,而与HB—cAg表达呈正相关（r=0．486,P〈0．05）。结论检测肝组织内HBVceeDNA可更精确反映HBV复制程度;对乙肝诊断、抗病毒治疗及选择停药时机具有重要价值。肝组织HBV cccDNA与血清HBV-DNA定量及HBcAg联合检测可指导抗病毒治疗。     

丙氨酸转氨酶正常的慢性乙型肝炎病毒感染者的肝脏病理学分析

目的 了解ALT正常的慢性HBV感染者的肝脏病理学改变及其影响因素.方法 观察632例ALT正常的慢性HBV感染者,采用超声定位穿刺取肝组织,行HE染色、纤维Masson染色,HBsAg和HBcAg免疫组织化学染色,观察Knodell坏死炎症评分和Ishak纤维化评分,并分析它们与年龄、ALT水平、血清HBV DNA载量、HBsAg和HBcAg肝组织表达的关系.两均数比较采用t检验,多均数比较采用单因素方差分析及q检验,计数资料采用x2检验.结果 632例ALT正常的HBV感染者中,中度炎症坏死167例,占26.4%,重度炎症坏死26例,占4.1%,中度纤维化217例,占34.3%,重度纤维化(肝硬化)52例,占8.2%.Knodell坏死炎症评分和Ishak纤维化评分在高ALT层次组比低ALT层次组高,在女性高ALT层次组比男性高ALT层次组高,在年龄＞40岁组比年龄≤20岁组高(q=19.63,P＜0.05).肝组织损伤程度在HBV DNA载量≤5×105拷贝/L组明显轻于HBV DNA 5×105～1×107拷贝/L、1×107～1×109拷贝/L和＞1×109拷贝/L组(Knodell评分,q=3.87、2.87、6.34;Ishak评分,q=2.64、2.64、5.54;均P＜0.05),在不同HBV DNA载量复制组之间差异无统计学意义(F=1.35,P＞0.05).HBsAg(F=1.65、0.73,均P＞0.05)和HBcAg(F=0.17、1.29,均P＞0.05)肝组织表达与Knodell坏死炎症评分和Ishak纤维化评分差异均无统计学意义.结论 可检测到HBV DNA的ALT持续正常的慢性HBV感染患者应考虑进行肝组织活检,特别是年龄＞40岁且ALT在(0.75～1.00)×正常值上限者.     

丁型肝炎患者肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA相关性研究

目的探讨丁型肝炎患者肝组织中HDAg与HBsAg,HBcAg和HBV DNA表达及相关性.方法应用免疫组化双重染色及连续切片技术和原位杂交,检测了79例丁型肝炎患者肝组织HDAg,HBsAg,HBcAg和HBVDNA表达,以52例乙型肝炎作对照.结果丁型肝炎HBsAg,HBcAg检出率为81%,71%,乙型肝炎为94%,92%,两组比较有显著性差异(P＜0.05或0.01).HDAg以肝细胞核表达为主,其次是胞质表达,HBsAg以肝细胞浆表达为主,HDAg和HBsAg表达强度及阳性细胞分布呈一致性,两种抗原的表达程度与肝组织的炎症活动和病理损害相关(P＜0.01).HBcAg以以肝细胞核表达为主,阳性细胞主要呈单个细胞或点状分布,且HBcAg阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞.HDAg表达强度与HBV DNA表达呈负相关(P＜0.05).结论HDV感染会抑制HBV DNA复制或病毒抗原表达;在HDV致病机制中HDV的直接细胞毒性可能起主要作用,也有HBV的协同作用.     

Evaluation of the in situ assay for HBV DNA: An observational real-world study in chronic hepatitis B

The visualization of intrahepatic hepatitis B virus (HBV) DNA by in situ hybridization (ISH) has uncovered some interesting aspects of HBV life cycle at the single-cell level. In the current study, we intend to evaluate the reliability and robustness of this assay in the real-world clinical scenario and its relationship with currently available clinical biomarkers in chronic hepatitis B (CHB) patients.In this cross-sectional study, 94 CHB patients and 10 patients with non-HBV related liver diseases were enrolled. Liver biopsies and routine histopathology analysis were performed. Intrahepatic HBV DNA and viral antigens (HBsAg and HBcAg) were detected by ISH and immunohistochemistry (IHC), respectively. The basic biochemical and virological parameters such as alanine transaminase, serum HBV DNA, and serum HBsAg were measured.The HBV DNA-ISH assay showed 55.8% (53/94 cases) positive rate in CHB patients, no false positive was found in non-HBV related hepatitis. The IHC of HBsAg and HBcAg showed a positive rate of 94.7% (89/94 cases) and 19.5% (17/87 cases), respectively. Quantification of HBV DNA-ISH signal showed a significant correlation with serum HBV DNA (r_s = 0.6223, P < .0001). In addition, the staining pattern of HBV DNA in situ in the context of collagen deposition informed the histopathological progression of chronic liver disease.The application of this ISH assay in evaluating intrahepatic viral replication in real-world CHB patients showed favorable performance. It can be a complementation to conventional liver histopathology examination and IHC detection of viral antigens. This methodology provides an intuitive assessment of virological and pathological state of CHB patients, and further supports clinical diagnosis and management.     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织病理改变的相关因素分析

目的 分析HBeAg阴性慢性HBV感染者肝组织病理改变的相关因素.方法 对288例不同年龄、性别、ALT水平、肝组织HBsAg和HBcAg免疫组织化学结果的HBeAg阴性HBV感染者的HBV DNA载量、肝组织病理变化进行相关分析,采用Bivariate Pearson法.结果 男性组肝组织炎症分级和纤维化分期分别为1.721.23和1.71±1.24,女性组分别为1.25±1.39和1.21±1.40,两组差异有统计学意义(t=2.398,t=2.551;均P＜0.05)}男性HBV DNA载量高于女性,但差异无统计学意义.40岁以上HBeAg阴性HBV感染者HBV DNA载量、肝组织炎症分级和纤维化分期显著高于40岁以下者(t=2.060,t=2.536,t=2.808;均P＜0.05).ALT正常的HBeAg阴性乙型肝炎患者中,75例(52.03%)血清HBVDNA≤1×103拷贝/mL,肝组织炎症活动度≥G2的56例,占38.89%,血清ALT水平与肝组织炎症活动度相关(r=0.244,P=0.004).ALT异常的慢性HBV感染者中,42例(31.57%)血清HBV DNA≤1×103拷贝/mL,肝组织炎症活动度≥G2的89例,占66.92%.血清ALT水平与肝组织炎症程度无相关(r=0.007,P=0.939).肝组织免疫组织化学HBsAg及HBcAg双阳性组肝组织炎症/纤维化、HBV DNA滴度显著高于HBsAg、HBcAg双阴性组和HBsAg阳性、HBcAg阴性组,差异有统计学意义.血清HBV DNA与肝组织炎症程度相关(r=0.349,P＜0.05).结论 性别、年龄、血清HBV DNA水平及HBsAg、HBcAg免疫组织化学结果可作为判断HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝组织炎症损伤程度的相关指标,男性、年龄越大、血清HBV DNA水平越高、肝组织免疫组织化学HBsAg及HBcAg双阳性,肝组织炎性反应损伤越严重.HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者即使ALT正常、血清HBV DNA≤1×100拷贝/mL,仍约1/3患者的肝组织存在明显的炎性反应损伤,需定期追踪,最好行肝组织活检,以早期发现适宜治疗者而避免延误病情.