小鼠IgG类单克隆抗体三种纯化方法的比较

单克隆抗体纯化技术目前仍在发展中,为适应其在临床诊断、治疗等方面日益广泛的应用,本文详细介绍了辛酸硫酸铵二步沉淀、羟基磷灰石层析和葡萄球菌A蛋白亲和层析纯化小鼠IgG类单克隆抗体的技术及其重要改进,为规模性制备纯化单克隆抗体制剂提供了经验。     

两种不同方法纯化抗血清IgG的效果比较

为寻找一种操作简便、效率高、纯度好的纯化抗体的方法,比较了辛酸法和离子交换葡聚糖凝胶法,通过纯化兔抗ＨＣＧ抗血清和羊抗ＨＢＳＡｇ抗血清,结果显示辛酸法纯化血清中ＩｇＧ有以下优点：纯度高,用ＰＡＧＥ方法鉴定可显示两条带。收率高,辛酸法纯化兔抗ＨＣＧＩｇＧ,每毫升抗血清最高可得２５．５６ｍｇＩｇＧ。效率高,辛酸法纯化血清中ＩｇＧ的整个过程可在１ｄ内完成。操作方法简便,不需上柱,不需昂贵仪器和试剂。适于大批量纯化,适于基层实验室推广使用。     

腹水型单克隆抗体纯化方法的研究

目的：比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的 IgG1单克隆抗体腹水（4-D10）分别利用两步硫酸铵沉淀法（AS 法）、辛酸-硫酸铵沉淀法（CA-AS法）、辛酸-硫酸铵沉淀法联合 DEAE 阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白 G 亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果① AS 法的蛋白纯度为25%,低于 CA-AS 法（44%）;AS 法回收率为63%,高于 CA-AS 法（41.8%）;比较抗体效价表明,AS 法（1.024×106）与 CA-AS 法（1.024×106）两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白 G亲和层析法回收率明显降低,DEAE 纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价（5.12×105）高于蛋白 G 亲和层析法（1.28×105）。结论 CA-AS 联合 DEAE 离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。     

鼠源性IgM类单克隆抗体的纯化方法

本文综述了鼠源性IgM类单克隆抗体(McAb)的纯化方法,并对其进行了比较。(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法具有操作简便,适于大批量生产的特点。(2)免疫亲和层析法纯化的单克隆抗体具有良好的免疫活性,其纯度较高。(3)高效液相色谱法(HPLC)具有纯化条件温和,操作时间短,样品纯度高,且对单克隆抗体活性无不良影响的优点;但其设备昂贵,样品处理量相对较少。在实际应用中,可根据不同用途来选择纯化方法,获得理想的单克隆抗体。     

两种简易高效的单克隆抗体提纯方法

本文介绍两种纯化单克隆抗体的方法，即用聚乙二醇（ＰＥＧ，Ｍｒ＝６０００）沉淀法提纯ＩｇＭ和辛酸－硫酸铵沉淀法纯化ＩｇＧ。用这两种方法成功地从小鼠腹水型单克隆抗体中得到了较纯净的、活性损失较少的抗体制剂。经多次使用，证实它们是两种简易、高效的单克隆抗体提纯方法，适于推广应用。     

FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法．     

两种简易高效的单克隆抗体提纯方法

本文介绍两种纯化单克隆抗体的方法，即用聚乙二醇（ＰＥＧ，Ｍｒ＝６０００）沉淀法提纯ＩｇＭ和辛酸—硫酸铵沉淀法纯化ＩｇＧ。用这两种方法成功地从小鼠腹水型单克隆抗体中得到了较纯净的、活性损失较少的抗体制剂。经多次使用，证实它们是两种简易、高效的单克隆抗体提纯方法，适于推广应用。     

光敏生物素标记胃癌单克隆抗体MG_7的制备

本文介绍一种新的蛋白质标记技术，即用光源照射光敏生物素对本室制备的胃癌单克隆抗体ＭＧ_７进行标记。以亲和素－碱性磷酸酶检测，标记的单抗最低值达０．７５ｐｇ。免疫组化研究显示标记抗体对胃癌组织有很强的亲和力和特异性。上述结果表明这种标记技术具有操作简单，对蛋白质的生物活性影响小等特点。     

两种纯化二抗IgG方法的比较

两种纯化二抗ＩｇＧ方法的比较汪保安，汪寅章，黄兆坚（解放军总医院，北京１００８５３）近年来，我国固相放免技术已有了很大进展，其中重要的一步是必须使用纯化的抗体，以保证有足量的ＩｇＧ固定在塑料管壁上。本文介绍Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ３００与正兔ＩｇＧ共价结...     

阴离子交换FPLC制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换柱。在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了ＩｇＧ类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经５０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用阴离子交换色谱纯化，一次上样量相当于８０～１００ｍｌ腹水。可得纯化ＭｃＡｂ５００～６００ｍｇ，得率为６～７ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为５７～６７％．一次纯化周期仅需４５ｍｉｎ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＭｃＡｂ纯度为９５％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为１：２００００（３．１３×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ）．     

辛酸-低温乙醇沉淀法纯化小鼠腹水IgM类单克隆抗体

目的:为建立一种简便的,仪器要求不高的,从小鼠腹水中获得高纯度IgM类抗体的纯化方法。方法:先用辛酸在酸性条件下沉淀腹水中的杂蛋白,再在冰浴条件下用-20℃预冷乙醇沉淀IgM。结果:用辛酸-低温乙醇沉淀法纯化的IgM抗体纯度>85%,收率>80%,而且对抗体活性几乎无影响。结论:辛酸-低温乙醇沉淀法是一种方便获得高纯度IgM抗体的方法。     

小鼠IgG2b单克隆抗体Fab、Fc和Fab／c片段的制备和纯化（文摘）

本文报道了用小鼠IgG2b单克隆抗体制备和纯化Fab、Fc和Fab／c片段。由于IgG2b抗体具有对蛋白酶敏感的特性，用胃蛋白酶在酶与抗体之比为1：30，pH4．8的条件下消化抗体．可获得的Fab／c片段产量高达30％。消化液经DEAE—纤维素初步层析，可以含有Fc片段的混合液中分离出Fab片段。     

抗宋内氏志贺菌脂多糖单克隆抗体对小鼠免疫保护作用的初步研究

本文用宋内氏志贺菌加热致死后的菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以纯化脂多糖筛选，获得２株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并以小鼠腹腔感染作为实验动物模型，进行单克隆抗体被动保护实验。结果表明，在攻击前输入单克隆抗体，对同型菌感染有显著保护作用，保护率随抗体剂量增加而增高。提示识别脂多糖分子上某一抗原决定簇的抗体，能够对感染起到良好的保护作用。脂多糖是志贺菌毒力相关因子之一。     

单克隆抗体治疗小鼠宫颈癌

本文探讨小鼠宫颈癌单克隆抗体（ＡＴ１４－１）对带瘤动物的疗效。动物经不同途径接种不同数量的可移植性宫颈癌（Ｕ１４）细胞；然后给治疗组的动物从腹腔注入不同剂量的ＡＵ１４－１。结果表明，ＡＵ１４－１可延长带有腹水型或实体型肿瘤小鼠的存活期，且可治愈其中某些动物；但其功效受不列条件的制约：接种的肿瘤细胞数量，治疗的肿瘤类型，所用的单克隆抗体剂量，以及单克隆抗体与肿瘤细胞的结合程度。本研究提示，ＡＵ１４－１在特定条件下有可能应用于人体宫颈癌的免疫治疗。     

凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＳｅＰｌｌａｃｙｌＳ－２００凝胶色谱柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经４０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用凝胶色谱纯化，一次上样量相当于５～１０ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ３０～６０ｍｇ，得率为６～６．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为６３％，一次色谱纯化周期２ｈ，整个分离纬化可在３ｈ内完成。经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＤＥＡＥ离子交换色谱法检测ＭｃＡｂ纯度大于８０％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为，１：４００００（１．５６×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ），是一般实验室纯化ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用方法。     

三株抗rhIL－6单克隆抗体识别表位的鉴定及IL－6的双单克隆抗体夹心RIA检测方法的建立

采用放射免疫标记抗体竞争结合法，对３株抗ｒｈＩＬ－６单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同，将３株单克隆抗体分为两组：一组ＳＩ８，ＳＩ９识别相同或相近的表位，另一组ＳＩ７。在表位鉴定的基础上，选择识别不同表位的单克隆抗体，由此获得最佳组合，灵敏度为８０ｐｇ／ｍｌ。通过对肾脏病人血清ＩＬ－６水平检测，所得结果与以ＩＬ－６依赖株Ｂ９生物学检测结果一致，且重复性好，特异性强。     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

单克隆抗体间接荧光法分型检测单纯疱疹病毒的实验研究

本文选择３株抗单纯疱疹病毒型共同性和型特异性单克隆抗体，建立了分型检测单纯疱疹病毒的单克隆抗体间接荧光法（ＭｃＡｂ－１ＦＡ）．特异性试验和重复性试验证实，ＭｃＡｂ－ＩＦＡ特异性强、重复性好．用此法检测了不同部位来源的５１份临床分离株，分型检测结果与ＥＬＩＳＡ法检测结果一致．提示ＭｃＡｂ－ＩＦＡ有可能成为实验室分型检测单纯疱疹病毒可靠的方法．