结肠癌组织中p53和凋亡相关基因bcl-2、bax的表达及其临床意义

组织芯片已广泛应用于恶性肿瘤的相关研究，但用于研究相关癌基因在结肠癌中表达变化的报道尚较少。目的：研究结肠癌、结肠腺瘤和癌旁结肠黏膜组织中p53和凋亡相关基因bcl-2、bax的表达及其临床意义。方法 取85例结肠癌、18例结肠腺瘤和9例癌旁结肠黏膜组织分别制成72点和104点两块组织芯片，以免疫组化方法检测芯片中p53、bel-2和bax的表达。结果：p53、bcl．2和bax在结肠癌、结肠腺瘤和癌旁结肠黏膜组织中的表达有显著差异（P〈0．01），p53、bel-2在结肠癌中的表达高于结肠腺瘤和癌旁结肠黏膜组织，bax在结肠癌中的表达低于结肠腺瘤和癌旁结肠黏膜组织。p53和bax在不同组织学分化程度结肠癌中的表达有显著差异（P〈0．01，P〈0．05），但两者之间无相关性（L=-0．081，P〉0．05），p53与bcl-2的表达呈正相关（rs=0．245，P〈0．01）。bcl-2的表达与结肠癌临床病理参数无关。结论：p53异常表达可能是结肠癌发生中的较晚期事件，bcl-2高表达和bax低表达可能参与了结肠癌的形成过程。bax低表达的结肠癌细胞更具有恶性分化潜能。     

HBV X蛋白对抑癌基因p16的表达和启动子甲基化的影响

目的探讨HBV X蛋白(HBx)对抑癌基因p16的表达、p16启动子甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨HBx参与HBV相关性HCC发生发展的相关机制。方法以人肝母细胞瘤细胞Hep G2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的Hep G2/GFP、稳定表达HBx蛋白的Hep G2/GFP-HBx细胞为实验系统;采用Western Blot法检测Hep G2、Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白的表达水平。以DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-DC)处理Hep G2/GFP-HBx细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Hep G2、Hep G2/GFP细胞及药物处理和未处理的Hep G2/GFP-HBx细胞中抑癌基因p16启动子区域的甲基化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析。结果 Western Blot分析示Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白相对灰度值(23.68±3.93)显著低于Hep G2(91.23±6.87)、Hep G2/GFP(94.55±8.40)细胞,差异均有统计学意义(P值分别为0.0007、0.0014),Hep G2/GFP与Hep G2细胞中p16蛋白相对灰度值差异无统计学意义(P0.05);MSP法检测示Hep G2/GFP-HBx细胞中存在p16基因启动子区域部分Cp G位点甲基化,Hep G2、Hep G2/GFP细胞中未检出其甲基化,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC处理的Hep G2/GFP-HBx细胞却能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态。结论在肝癌细胞系中,HBx通过诱导抑癌基因p16启动子甲基化而下调其表达,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态,这种可逆性修饰可为HBV相关性HCC的治疗、预防提供新思路。     

人结肠癌组织中肿瘤耐药相关基因的表达及其临床意义

背景：人结肠癌对化疗药物的耐药是其化疗失败的主要原因，一些与肿瘤耐药相关的基因从中起着一定作用，有关耐药相关基因在人结肠癌中表达水平的联合检测报道较少。目的：探讨人结肠癌组织中耐药相关基因p21（^WAF1/CIP1）、MRP2、BRCA2、CYP3A5、BCRP和ELK-1转录水平的表达及其临床意义。方法：对30例结肠癌手术标本的癌组织、癌旁组织和正常组织分别以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肿瘤耐药相关基因p21^（WAF1/CIP1）、MRP2、BRCA2、CYP3A5、BCRP和ELK-1转录水平的表达．比较它们存不同组织中表达的差异及其与肿瘤临床特点之间的关系。结果：结肠癌组织中，MRP2转录表达水平显著高于正常组织（P=0．037）；CYP3A5转录表达水平显著低于正常组织（P=0．042）；ELK-1转录表达水平显著高于癌旁组织和正常组织（P=0．016和P=0．022）。在结肠癌组织和正常组织中，肿瘤耐药相关基因转录水平表达两两之间相关性有不同。结肠癌组织中．肿瘤耐药相关基因与结肠癌临床特点之间均无相关性。结论：在结肠癌的发生和耐药过程中，肿瘤耐药相关基因MRP2、CYP3A5和ELK-1起了一定作用．而p21^（WAF1/CIP1）、BRCA2和BCRP基因的作用可能不明显。     

胰腺癌组织中p16基因启动子区5''CpG岛甲基化及其表达研究

在胰腺癌多步骤、多阶段发生过程中有多种肿瘤相关基因参与。p16基因是其中一个重要的抑癌基因，参与细胞周期的调控，控制细胞的生长和分化。大量研究表明，多种肿瘤细胞中p16基因通过突变、缺失、高甲基化等方式失活，造成p16蛋白功能丧失，从而导致肿瘤细胞恶性生长。免疫组化研究发现，胰腺癌组织中p16蛋白失表达的比例很高，而关于胰腺原发瘤中p16基因甲基化改变及其临床病理意义的研究报道少见，本研究旨在探讨胰腺癌组织中p16基因启动子区5’CpG岛甲基化情况及其与P16蛋白表达的关系和临床意义，研究其在胰腺癌发生中的可能机制。     

胃癌形成过程中p16IN4a、Runx3和O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因甲基化及其表达研究

目的 研究胃癌形成过程中p16INK4a、Runx3和O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子区的高甲基化状态,同时检测MGMT的蛋白表达情况.探讨抑癌基因启动子区高甲基化与胃癌发生的关系.方法 选择经透明帽法进行首次黏膜病变切除者43例,其中异型增生27例,早期胃癌16例.选择胃镜活检证实为慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生者14例.另取20例正常胃黏膜活检组织作为对照.采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测每例组织中p16INK4a、Runx3和MGMT基因启动子区的甲基化状态,对所有甲基化p16INK4a产物进行测序,免疫组化检测MGMT蛋白表达情况.结果 肠上皮化生、异型增生和早期胃癌中p16INK4a基因甲基化率依次为14.3%(2/14)、22.2%(6/27)和37.5%(6/16);Runx3基因甲基化率依次为14.3%(2/14)、48.1%(13/27)和50.0%(8/16);MGMT基因甲基化率依次为7.1%(1/14)、48.1%(13/27)和50.0%(8/16).20名正常对照均未检出基因甲基化,与异型增生和早期胃癌相比差异有统计学意义(P＜0.05).Runx3和MGMT两种基因在异型增生和早期胃癌中的甲基化率显著高于肠上皮化生组(P＜0.05).各组病变中三种基因甲基化联合分析发现,异型增生和早期胃癌中甲基化的基因种类高于肠上皮化生组.差异有统计学意义(P＜0.01).基因甲基化与息者年龄、性别、幽门螺杆菌感染以及病变部位无相关性,但p16INK4a和MGMT基因甲基化与血清癌胚抗原水平升高显著相关(P值分别为0.003和0.039).MGMT基因启动子区高甲基化与其蛋白失表达密切相关(χ2=12.821,P=0.001).结论 抑癌基因启动子区高甲基化是基因失活的主要机制,可能是胃癌发生的早期分子事件.p16INK4a、Runx3和MGMT基因启动子区高甲基化在胃癌形成过程中起着重要的作用.     

胃癌组织中p16基因的甲基化

运用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对30例胃癌组织中p16基因的甲基化状况进行检测.发现胃癌组织中p16基因甲基化率为40.0%(12/30),而正常胃组织中未检测到该基因的甲基化;p16基因甲基化与患者年龄和性别无相关性,但与肿瘤的浸润和转移有关(P＜0.05).认为p16基因甲基化是胃癌组织中常见的分子生物学事件,可能参与了胃癌的发生、发展过程.     

P^16和PCNA产物在结肠癌中的表达及临床意义

结肠癌的发病机制目前尚未完全清楚。我们采用免疫组化ＬＳＡＢ法对６４例结肠癌标本进行检测，以探讨抑癌基因Ｐ１６及增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ在结肠癌发生发展的作用，以及临床病理特征的关系。１资料与方法１．１临床资料选择我院近年收治的结肠癌患者６４例，男３７例...     

大肠癌及癌旁组织中p73基因的表达

大肠癌是常见的消化道肿瘤,是多因素、多阶段、多基因共同作用的结果。目前已证实关系密切的有K-ras,C-myc,p53,APC,DCC等。p73是新近发现的基因,与大肠癌关系尚不明确,我们通过检测大肠癌及癌旁组织中的P73表达,以期探讨p73基因在大肠癌发生发展中的作用。 1 材料和方法 1.1 材料大肠癌组织40例及相应远离癌灶5cm的非癌组织     

乳腺癌组织中p16基因甲基化与p16、ER蛋白表达的相关性及意义

目的探讨p16基因甲基化在乳腺癌发生、发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）联合测序检测58份乳腺癌及其癌旁组织中p16基因甲基化状态,应用免疫组化sP法检测p16及ER蛋白表达情况,对各指标间关系行Spearman相关分析。结果p16基因在乳腺癌中甲基化率为29,3％（17／58）,有淋巴结及远处转移者显著高于无转移者（P〈0．05）;p16甲基化及非甲基化者p16蛋白表达阻性（失表达）率分别为82．4％（14／17）、43．9％（18／41）,ER蛋白失表达率分别为76．5％（13／17）、24．4％（10／41）,P均〈0．05。结论p16基因甲基化在乳腺癌发生、发展中具有重要作用,机制可能与调节p16和ER蛋白表达有关。     

肺癌组织p16基因启动子区甲基化的研究

DNA甲基化可以引起染色体结构、DNA构型和稳定性及DNA与蛋白质分子相互作用方式的改变，从而控制基因表达。研究发现，基因缺失和启动子区异常甲基化是p16基因失活的主要原因。我们联合应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR，MSPCR)、逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化方法检测肺癌组织中p16基因的异常改变，以了解p16基因在肺癌发生发展中的作用。     

初诊和复发急性髓性白血病p15、p16基因甲基化研究

目的探讨急性髓性白血病(AL)p15、p16、p18、p19基因失活的发生率及与疾病发生、发展、预后的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增46例患者的p15、p16、p18、p19基因外显子1和外显子2。再用限制性内切酶一PCR方法检测基因甲基化。结果46例患者中。急性淋巴细胞白血病(ALL)19例．11例p15基因失活,10例p16基因失活;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)27例．9例p15基因失活,18例P16基因失活;均以甲基化失活为主。所有病例均无p18、p19基因失活。结论在AL发生、发展过程中。p15、p16基因失活主要是由于P15、p16基因甲基化所致。     

表型遗传修饰对人结肠癌细胞周期和抑癌基因表达的调控

目的：分析和探讨同一结肠癌细胞系DNA甲基化和组蛋白乙酰化对抑癌基因表达和细胞周期的影响。方法：培养结肠癌细胞HT－29、SW1116和Colo-320，分别以去甲基化制剂5－氮脱氧胞苷（5－aza-dC）和（或）组蛋白脱乙酰化酶（HDAC）抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取基因组DNA和RNA，部分行甲基化特异性PCR（MSP）检测p16^INK4A基因启动子区甲基化情况；以RTPCR研究p16^INK4A和p^21WAF1 mRNA表达水平；同时以流式细胞仪分析SW1116和Colo-320细胞周期。结果：干预前，HT－29、SW1116和Colo-320三种结肠癌细胞系中均有较弱的p16^INK4A表达；SW1116和Colo-320细胞的p21^WAF1表达缺如，对于HT－29细胞，1μmol/L的5－aza-dC干预时则无显著改变。在SW1116和Colo-320细胞中，5－aza-dC干预后p16^INK4A表达增强，且以10μmol/L或5μmol/L浓度干预24h者为最明显，相反p21^WAF1仍无明显表达，该两个细胞系经TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1期。结论：三种人结肠癌细胞中，p16^INK4A基因的表达均受甲基化调节。SW1116和Colo-320细胞中p21^WAF1基因表达主要受乙酰化调节，在该两个细胞系中，乙酰化使细胞周期停滞于G1期。     

非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液和肿瘤组织中p16基因突变的研究

目的 研究呼出气冷凝液(EBC)和肺癌组织中p16基因突变,探讨EBC中检测的可行性和临床意义.方法 收集30例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肺癌组织和EBC标本,同期20名健康体检者的EBC标本作为对照.提取NSCLC患者手术切除的肺癌组织中的DNA,对β-actin基因片段扩增阳性的EBC标本和已提取的肺癌组织DNA进行p16基因1、2、3号外显子PCR扩增,并进行DNA基因测序,用DNASTAR软件进行突变比对,结果进行统计学分析.结果 ①30例NSCLC患者的EBC中β-actin基因片段扩增阳性26例,26例中有9例检出p16基因突变,突变率为34.6％;EBC中检出p16基因突变患者,其肺癌组织中均发现p16基因突变.②30例NSCLC癌组织中检测到p16基因突变15例,突变率为50.0％;癌旁组织均未检测到p16基因突变.③9例NSCLC患者EBC中p16基因突变的外显子为1号外显子3例,2号外显子5例,3号外显子1例;15例NSCLC患者肿瘤组织中p16基因突变的外显子为1号外显子4例,2号外显子8例,3号外显子3例.④26例NSCLC患者EBC中β-actin基因扩增阳性,Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期患者p16基因突变率分别为25.0％(3/12)、28.6％(2/7)和57.1％(4/7)( P＞0.05);鳞癌和腺癌患者的p16基因突变率分别为42.9％(6/14)和25.0％(3/12)(P＞0.05).⑤同一患者EBC与肺癌组织中p16基因突变的外显子种类、突变方式、突变类型和密码子均相同.结论 肺癌患者EBC和癌组织中均能检测到p16基因突变,并有高度的一致性.EBC中p16基因突变检测可作为一种简便、快速的肺癌诊断方法.     

应用芯片技术筛查人结肠癌羟基喜树碱多药耐药相关微RNA的研究

目的 探讨新一类调控分子微RNA(miRNA)在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的作用,为逆转肿瘤化学治疗的多药耐药性提供新的靶点.方法 运用miRCURYTM LNA Array V8.1版芯片检测人结肠癌细胞SW1116和人结肠癌羟基喜树碱多药耐药细胞SW1116/HCPT的miRNA表达谱,筛选出具有表达差异的miRNA(2倍以上).通过PiTcar,Targetscan,MIRanda等算法在线搜寻差异表达miRNA的靶基因.利用茎环特异miRNA引物反转录特异的miRNA,并采用荧光定量PCR法对个别差异表达的miRNA进行验证.结果 用于芯片分析的总RNA的吸光度比值分别为1.93(SW1116)和1.94(SW1116/HCPT).琼脂糖变性凝胶电泳进一步验证总RNA质量符合芯片要求.通过芯片检测后发现SW1116/HCPT相比SW1116表达下调的miRNA共有28条,表达上调的有36条.根据靶基因预测结果,我们选取其中2条表达下调hsa-miR-452,hsa-miR-373*和1条表达上调hsa-miR-506进行荧光定量PCR验证,hsa-miR-452和hsa-miR-506的结果与芯片相符合,但hsa-miR-373*表达量不足以由荧光定量PCR检测出.结论 miRNA表达量的改变可能在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中起有关键作用.     

Runx3基因甲基化及Runx3蛋白表达在结肠癌发生中的意义

目的:评价Runx3 基因启动子区CpG 岛甲基化状态及Runx3 蛋白表达在结肠癌发生中的作用及临床意义.方法:应用DNA 甲基化特异性PCR(MSP) 技术检测结肠癌、结肠腺瘤、正常结肠黏膜Runx3 基因CpG 岛甲基化状态,应用免疫组织化学发法检测Runx3 蛋白的表达.结果:MSP 方法检测发现Runx3 基...     

原发胃癌中p16基因及其甲基化状态、表达异常的研究

目的：检测胃癌组织中p16基因及启动了甲基化状态和p16蛋白表达情况。方法：选择p16基因及启动子区域,用PCR－SSCP、MSP（甲基化特异的PCR）法、测序和免疫组化等方法对100例胃癌患者的癌组织和癌旁组织进行检测。结果：71％的病例p16表达阴性,54％的病例具有p16基因启动子区的高甲基化,50％的病例同时有p16表达阴性和p16基因启动子区的高甲基化,无突变和纯合缺失检出。结论：提示p16基因启动子区域高甲基化是胃癌中p16基因失活的主要原因。     

5-Aza-CdR对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响

目的:研究抑癌基因RUNX3在人结肠癌细胞中的表达情况,探讨5-氮-2′-脱氧胞苷 (5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及 RUNX3表达的影响．方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR 0．4,4,40μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3 d,继续常规培养5d后,采用四唑盐(MTT) 比色观察细胞经药物处理前后的生长活性．以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因 RUNX3 mRNA的表达,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测结果:人结肠癌细胞Lovo经处理后,与对照组比较,5-Aza-CdR 0．4,4,40 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速率下降;对照组Lovo细胞未见 RUNX3 mRNA表达．经药物处理后的细胞均检出该种mRNA的重新表达,其mRNA的表达相对量分别为0．46±0．06,0．71±0．06,0．84 ±0．07,与药物存在剂量依赖性(F=168．4, P<0．01):对照组细胞凋亡率为2．92％±0．93％, 5-Aza-CdR 0．4,4,40 μmol／L处理后Lovo细胞凋亡率分别为10．95％±2．09％,17．61％± 1．51％,26．60％±1．89％,与对照组相比较均有统计学意义(P<0．01),且凋亡率与5-Aza-CdR 剂量呈正相关(F=145．7,P<0．01)．结论:在人结肠癌细胞株Lovo中,基因 RUNX3可能因过甲基化而导致转录失活, RUNX3基因重新表达能抑制细胞生长,并能诱导部分细胞凋亡．     

p16、p53、p21基因对肺癌细胞增殖的影响

目的 观察肿瘤抑制基因ｐ１６,ｐ５３及细胞周期信赖激酶抑制物ｐ２１基因单独或联合应用时对肺癌细胞增殖的影响。方法 应用十八酰基胺阳离子脂质体介导ｐ１６,ｐ５３,ｐ２１基因单独或共转染到非小细胞肺癌细胞系Ａ５４９和小细胞肺癌细胞系ＳＨ７７,观察转染后１,３,５日该细胞增殖的活力。采用四甲基偶氮唑 盐微量酶反应比色法（ＭＴＴ法）测定吸光度（Ａ）,以检测细胞增殖活力,结果 Ａ５４９细胞系：Ａ均值分别为：     

塞莱昔布对结肠癌细胞生长及肝转移瘤血管生长因子表达的影响

目的:探讨塞莱昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及肝转移瘤模型血管生长因子(VEGF)表达的影响.方法:以人结肠癌细胞株HT-29,HCT-116为对象,体外药物敏感实验(MTT)法检测塞莱昔布对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞各细胞周期分布变化情况,肿瘤细胞接种裸鼠,观察肝转移瘤VEGF表达情况.结果:塞莱昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞(P<0.01);塞莱昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数(P<0.05).塞莱昔布具有明显的抑制肝转移瘤VEGF表达的作用(P=0.00).结论:塞莱昔布可通过抑制COX-2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,并抑制肿瘤血管生成,干预结肠癌的转移与复发.     

p16基因启动子区甲基化在人嗜铬细胞瘤和副神经节瘤中的变化

目的 检测嗜铬细胞瘤(PHEO)和副神经节瘤(PGL)中p16基因突变和启动子区DNA甲基化改变,分析其与患者临床特征之间的关系.方法收集34例(PHEO 20例、PGL14例)组织标本及患者临床资料,通过甲基化特异性PCR(MSP)测定p16基因启动子区甲基化状态,DNA测序检测基因序列以及RT-PCR方法测定其mRNA表达.结果 (1)34例肿瘤组织中未发现p16基因纯合缺失及点突变;(2)35.3%(12/34)的患者存在p16基因高甲基化,p16基因甲基化阳性标本中,PHEO和PGL分别占25%和75%,两者差异有统计学意义(P=0.005);p16基因甲基化在恶性、单发肿瘤、发病年龄早的亚组中有增高趋势(P＞0.05);(3)甲基化与非甲基化肿瘤组织之间p16 mRNA表达无统计学差异;不同特点的肿瘤中其mRNA表达亦无统计学差异,但恶性肿瘤p16 mRNA表达与良性肿瘤相比有下降的趋势(0.83±0.65对1.12±0.81,P=0.278).结论人PHEO和PGL中,p16基因纯合缺失和突变并不常见,但p16基因启动子区甲基化是其失活的主要形式.