大肠癌患者淋巴结微转移与肿瘤复发转移和预后

淋巴转移是人肠癌术后复发的主要原因，早期判断大肠癌有无淋巴结受累，尤其是对常规病理无法检出的Dukes B期大肠癌是否存在淋巴结微转移非常重要。本组以细胞角蛋白20（cylokeratin 20,CK20）为肿瘤微转移标志，应用免疫组化技术检测大肠癌淋巴结微转移（lymph node micrometastases,LNMM），并探讨其临床意义。     

结直肠癌淋巴结微转移分子诊断的初步研究

目的 探讨淋巴结微转移的分子诊断方法及其预后意义.方法 使用RT-PCR方法来检测45例Ⅰ～Ⅱ期结直肠癌患者277枚区域淋巴结CEA、CK20和MUC2表达情况,三者同时阳性表达定义为淋巴结微转移.结果 本组45例患者277枚受检淋巴结中,32枚淋巴结（11.6%）CEA、CK20和MUC2均呈阳性表达（微转移）,分别来自10例患者（22.2%）.经38个月的中位随访后,10例淋巴结微转移患者中6例（6/10）复发,而35例无淋巴结微转移患者中2例（5.7%）复发,差异有统计学意义（P＜0.05）：两组3年无瘤生存率分别为60%和100%,差异亦有统计学意义（P＜0.01）.结论 CEA、CK20和MUC2的联合检测可用于结直肠癌淋巴结微转移的分子诊断 淋巴结微转移患者预后较差.     

结肠直肠癌淋巴结微转移及其I临床意义

结肠直肠癌是欧美国家最常见的恶性肿瘤．位居全球恶性肿瘤死亡原因第三位。随着饮食方式逐渐西化,我国结肠直肠癌发病率和死亡率呈逐年递增趋势。接受根治性手术的病人中仍有40％～50％死于术后肿瘤复发与转移。淋巴结转移是其最主要的转移途径,苏木精。伊红（HE）染色病理检查未发现有淋巴结转移的Dukes A和Dukes B期病人中仍有10％～25％于术后5年内复发目,提示存在着一种常规手段不易发现的肿瘤“微转移”。随着分子生物学、免疫学及相关实验技术的发展,使这部分“微转移肿瘤”的检出逐渐成为可能。本文就结肠直肠癌淋巴结微转移的研究现状作一综述。     

结肠直肠癌淋巴结微转移及其临床意义

结肠直肠癌是欧美国家最常见的恶性肿瘤．位居全球恶性肿瘤死亡原因第三位。随着饮食方式逐渐西化,我国结肠直肠癌发病率和死亡率呈逐年递增趋势。接受根治性手术的病人中仍有40％～50％死于术后肿瘤复发与转移。淋巴结转移是其最主要的转移途径,苏木精。伊红（HE）染色病理检查未发现有淋巴结转移的Dukes A和Dukes B期病人中仍有10％～25％于术后5年内复发目,提示存在着一种常规手段不易发现的肿瘤“微转移”。随着分子生物学、免疫学及相关实验技术的发展,使这部分“微转移肿瘤”的检出逐渐成为可能。本文就结肠直肠癌淋巴结微转移的研究现状作一综述。     

CD4+、CD8+和NK在结直肠癌中的表达及其与淋巴结微转移的关系

目的 检测不同Dukes分期结直肠癌患者淋巴结细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与NK细胞活性表达,探讨两者间关系.方法 采用常规苏木素.伊红(HE)染色病理切片检测21例结直肠癌患者281枚淋巴结转移癌灶及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者淋巴结CK20 mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞活性表达.结果 HE染色法检出有淋巴结转移者为16枚(6%,16/281),RT-PCR法检出有淋巴结转移者140枚(50%,140/281);按有淋巴结微转移重新Dukes分期后,手术前,A、B期患者血CD4+、CD4+/CD8+高于c期(P<0.05);A期患者血CD8+低于C期(P<0.05);B期患者血NK细胞活性高于C期(P<0.05).新Dukes分期与血CD4+呈负相关(r=-0.497,P<0.01);与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.714,P<0.01);与CD8+呈正相关(r=0.945,P<0.01).结论 RT-PCR方法对淋巴结微转移的检出率明显优于HE染色切片法,结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能明显低下密切相关.     

Dukes‘B期大肠癌淋巴结微转移的检测及其临床意义

目的探讨免疫组化测定CEA检测Dukes'B期大肠癌淋巴结微转移的可行性及其临床意义.方法应用以CEA为目标抗原的免疫组化技术来检测42例Dukes'B期大肠癌的淋巴结微转移;并分析其对术后3年肿瘤复发转移的影响.结果在42例(330枚淋巴结)中;共有10例(16枚淋巴结)为微转移阳性,阳性率23.81%(10/42);微转移阳性组的3年肿瘤复发转移率为40%(4/10),明显高于阴性组的9.4%(3/32)(P=0.032).结论通过免疫组化测定CEA可以检测到Dukes'B期大肠癌淋巴结的微转移;微转移阳性者肿瘤容易复发转移;预后不良,应加强术后辅助治疗和随访.     

CK18和PNA受体在大肠癌淋巴结微转移中的表达及其意义

为探讨CK 18和PNA受体在大肠癌淋巴结微转移中的表达及其意义 ,笔者检测了CK 18和PNA受体在大肠癌患者淋巴结微转移灶中的表达。结果 :(1) 60例大肠癌患者的 2 3 4枚淋巴结中 ,共有 2 2例 (3 6.67% ) 3 9枚 (16.67% )淋巴结存在微转移 ,主要以单个散在和小团状分布于淋巴结的边缘窦内。 (2 )CK 18蛋白表达阳性率为 14 .10 % (3 3 / 2 3 4) ,除 1枚淋巴结外 ,HE染色阳性者CK 18染色均阳性 ;PNA受体表达阳性率为 13 .2 5 % (3 1/ 2 3 4) ,HE染色阳性者PNA染色均阳性。CK 18蛋白和PNA受体阳性表达率明显高于HE染色阳性者 (P <0 .0 1)。 (3 )CK 18和PNA受体共同表达阳性率为 10 .68% (2 5 / 2 3 4) ;CK 18表达阳性而PNA受体阴性的淋巴结 8枚 ,占 3 .42 % ;PNA受体表达阳性而CK 18表达阴性的淋巴结 6枚 ,占 2 .5 6% ;但差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 (4 )淋巴结微转移灶的检出率与患者年龄、性别、病理类型、分化程度无关 (P >0 .0 5 ) ,而与Dukes分期有关 ,C期明显高于A和B期 (P <0 .0 1)。提示CK 18和PNA联合应用可提高微转移的检出率     

荧光定量PCR检测pNo期结直肠癌淋巴结中CK20mRNA的表达及其临床意义

目的 探讨N0期大肠癌淋巴结微转移的检测及其临床意义.方法 采用荧光定量PCR方法 检测62例行根治术的N0期大肠癌患者的548枚淋巴结中细胞角蛋白20(cytokeratin,CK20)mRNA的表达.结果 本组62例N0期大肠癌患者的548枚淋巴结中,有24例(39%)共55枚(10.0%)淋巴结中检出微转移.其中第Ⅰ、第Ⅱ、第Ⅲ组淋巴结微转移率分别是15.8%、5.0%和3.3%.微转移与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和分化程度等尤关,但与肿瘤浸润深度相关(x2=5.462,P<0.05).结论 检测N0期大肠癌淋巴结中CK20mRNA的表达可对精确临床分期、了解淋巴结微转移分布及制定合理的治疗方案提供一定的理论依据.     

中低位直肠癌区域淋巴结微转移

目的：观察中低位直肠癌区域淋巴结的微转移。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,扩增角蛋白19（K19）,对15例Duke B期中低位直肠癌患者的癌组织样本和127枚组织学阴性淋巴结进行检测,藉此了解区域淋巴结的微转移状态。结果：15例癌组织均有K19 mRNA表达,127枚病理检查未发现转移的淋巴结中,经RT-PCR检测有13枚存在微转移。另送8枚淋巴结病理组织学阳性,K19 mRNA均表达阳性,良性病人送检11枚淋巴结均不表达K19。结论：中低位Duke B期直肠癌区域淋巴结常规病理学检查阴性,存在10.2%（13/127）微转移。为患者术后辅助治疗及预后判断提供资料。     

术中美蓝染色及抗细胞角蛋白20检测淋巴结及其微转移在直肠癌患者中的临床应用

目的探讨术中经直肠上动脉注射美蓝行直肠系膜及淋巴结染色检测淋巴结及其微转移方法的临床意义。方法对30例行根治性手术治疗的直肠癌患者,术中经直肠上动脉插管注射美蓝6ml(美蓝染色组),使直肠系膜及各组淋巴结染色以统计淋巴结数目,同时行抗细胞角蛋白20(CK20)免疫组织化学(免疫组化)染色,检测其微转移情况;并与同期32例行直肠癌根治术患者术中常规手检法(常规手检组)检出的淋巴结数目进行对比。结果美蓝染色组肠旁淋巴结、肠系膜淋巴结、肠系膜根部淋巴结检出数目均明显多于常规手检组(P均=0.000)。美蓝染色组淋巴结常规病理检查阴性者,经CK20免疫组化染色,其转移阳性率增加17.7%;14例DukesB期患者(46.7%)经淋巴结CK20免疫组化染色需重新确定为DukesC期,11例患者(36.7%)出现跳跃淋巴结微转移现象。结论术中经直肠上动脉注射美蓝行淋巴结染色能提高淋巴结检出率。对常规病理检查阴性的淋巴结行CK20免疫组化染色检查其微转移灶,能提高淋巴结阳性检出率,使病理分期更准确。     

结直肠癌淋巴结微转移病灶中CK20检测方法的比较

目的 比较免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对结直肠癌淋巴结微转移病灶中CK20的检测价值.方法 对40例结直肠癌患者共326例经HE染色证实无转移的淋巴结,使用RT-PCR技术检测CK20 mRNA,并与免疫组织化学染色检测方法进行比较,以寻找更为敏感的淋巴结微转移检测方法.结果 免疫组织化学法和RT-PCR分别发现41枚和105枚微转移淋巴结,两种方法发现的微转移阳性率分别为12.8%和32.2%,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 RT-PCR法是比免疫组织化学染色法更为敏感的检测结直肠癌淋巴结微转移的方法.     

实时荧光定量PCR检测胃癌淋巴结微转移及其临床意义

目的使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胃癌淋巴结的微转移情况,并探讨微转移的临床意义。方法收集我院2010年1～6月期间40例行胃癌根治术切除的281枚和10例行胃十二指肠溃疡手术切除的39枚,共计320枚淋巴结标本,以CEA、CK-19和CK-20为引物进行qRT-PCR检测其微转移情况,并分析微转移的临床病理特点。结果 40例胃癌患者中有28例(70.00%)、31枚(15.35%,31/202)淋巴结检测出有微转移。10例胃溃疡的39枚淋巴结标本,HE染色检测和qRT-PCR检测均为阴性。淋巴结微转移的阳性率与肿瘤分化程度、浸润深度和临床分期有关(P<0.05)。结论 qRT-PCR是检测胃癌淋巴结微转移敏感且特异的方法,对胃癌临床分期、判断预后以及治疗方案选择具有重要意义。     

Micrometastasis in regional lymph nodes of extirpated colorectal carcinoma: immunohistochemical study using anti-cytokeratin antibodies AE1/AE3

Objective The main objectives of this study were to identify, by immunohistochemistry, possible micrometastasis in the regional lymph nodes previously considered free by conventional histopathological examination, and to assess their influence on the survival of patients with colorectal cancer that had been extirpated in a radical manner. Patients and methods From 38 patients with Dukes B staging (Colorectal Carcinoma Stage II (T3 N0 M0 or T4 N0 M0)) colorectal carcinoma, 383 lymph nodes were studied in paraffin blocks that had previously been considered free by conventional histopathological examination. These were submitted to immunohistochemical study using AE1/AE3 anti‐cytokeratin monoclonal antibodies to identify neoplastic epithelial cells. Results Seven lymph nodes (1.82%) in six patients (15.78%) contained micrometastasis. The survival of the patients with extirpated colorectal carcinoma staged as Dukes B who had lymph node metastasis was less than in the group of patients without micrometastasis, although these values were not statistically significant. Conclusion This immunohistochemical method can be employed successfully in the detection of neoplastic cells in lymph nodes previously considered free. In this study, there was a trend towards lower survival in node‐positive patients but this did not reach statistical significance.     

细胞角蛋白20在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌淋巴结微转移患者中的表达及意义

目的通过免疫组化方法检测Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者细胞角蛋白20（CK20）的表达对淋巴结微转移及预后的影响。 方法选择2010年1月至2011年12月中山市人民医院收治的137例Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者,获取根治性手术切除的淋巴结组织学标本945枚,采用免疫组织化学SP法和单克隆抗体检测淋巴结标本中CK20表达情况,结合临床和随访资料进行生存分析。 结果（1）10例（7.3%）结直肠癌的15枚（1.6%）淋巴结出现微转移,CK20表达阳性。（2）淋巴结CK20的表达情况与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、手术方式、原发灶CEA表达情况、组织学类型、有无脉管神经浸润无相关性。（3）5年内复发转移的患者淋巴结CK20的阳性率为16.7%（4/24）,远高于未发生复发转移患者的5.3%（6/113）,但差异无统计学意义（χ²=2.282,P=0.131）。生存分析发现,CK20表达阴性组5年生存率高于表达阳性组（84.3% vs 60.0%,P=0.025）。（4）COX回归分析结果显示性别（P=0.359）、年龄（P=0.917）、肿瘤大小（P=0.547）、组织学类型（P=0.106）、原发灶CEA表达情况（P=0.069）、肿瘤位置（P=0.760）、分期（P=0.069）、手术方式（P=0.350）与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者预后无明显的相关性;而CK20表达与患者预后密切相关（P=0.033）,存在淋巴结微转移的患者死亡的风险是无转移的3.224倍（95% CI=1.100~9.451）。 结论CK20检测结直肠癌淋巴结微转移可以改善结直肠癌患者的临床分期,影响治疗方案,且与患者预后相关。     

大肠癌前哨淋巴结微转移的检测及其临床意义

为探讨大肠癌前哨淋巴结（SLN）微转移（MM）的检测方法及其临床意义,我们对64例行根治性手术的DukesB期大肠癌患者SLN进行定位;应用常规HE染色联合免疫组化SIP法染色,对定位成功的122枚SLN中细胞角蛋白20（CK20）及端粒酶进行检测,并分析其表达与I临床病理因素的相关性。结果显示：（1）SLN定位成功61例（95．3％）,共获取SLN122枚。（2）定位成功的61例中,有6例9枚SLN常规HE染色阳性;余55例113枚SLNHE染色阴性,其中免疫组化染色CK20阳性15例（27．3％）,端粒酶阳性12例（21．8％）,两者联合检测SLNMM阳性21例（38．2％）。（3）DukesB期大肠癌患者SLNMM（＋）组癌的复发转移率明显高于同期SLNMM（-）组（P〈0．05）,生存率明显降低（P〈0．05）;而与DukesC期复发转移率及生存率比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）SLNMM（-）组患者的复发转移率、生存率与同期DukesC期患者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）DukesB期大肠癌患者SLNMM的发生与患者年龄、性别及肿瘤侵犯肠管周径、生长方式、生长部位均无显著相关,而与肿瘤分化程度及大小、外周血癌胚抗原（CEA）值显著相关。结果表明,应用免疫组化法联合检测CK20和端粒酶,可提高大肠癌SLNMM的检出率;大肠癌SLNMM的检出能精确大肠癌的Dukes分期,有助于指导术后的辅助治疗和预后判断。     

Detection of disseminated tumor cells in the lymph nodes of colorectal cancer patients using a real-time polymerase chain reaction assay

Introduction Postoperative treatment for colorectal cancer depends on tumor stage as defined by the International Union Against Cancer (UICC). Adjuvant chemotherapy is not recommended in patients without lymph node involvement (UICC stages I and II). As many as 20–30% of these patients, however, will develop recurrence. Aims and objectives We conducted this study to determine the presence of disseminated tumor cells in the lymph nodes by quantitative real-time polymerase chain reaction (QRT-PCR) for cytokeratin 20 (CK20) in an attempt to provide supplementary information compared to histopathological findings. Materials and methods Using a standard QRT-PCR assay, we examined primary tumors and 391 lymph nodes from 31 patients with completely resected colorectal cancer. Results Of the 31 primary tumors, 29 were positive for CK20 by QRT-PCR. Discussion An examination of the lymph nodes from the 29 patients with CK20-positive primary tumors revealed that 35 (92.1% sensitivity) of the 38 histopathologically positive lymph nodes and 54 (16.7%) of the 324 histopathologically negative lymph nodes were positive by molecular analysis. CK20 expression was detected in 10 (100%) of 10 patients with a histopathologically positive lymph node status (pN1). In 9 (47.4%) of 19 patients with negative histopathological results (pN0), we detected a CK20 mRNA signal in at least one lymph node. Whereas eight patients with histopathologically negative lymph nodes could be upstaged on the basis of the molecular findings, no patient would be downstaged. Conclusion Our results suggest that QRT-PCR for CK20 is a useful tool for the quantitative detection of micrometastases in the regional lymph nodes. We introduce a standardized procedure that integrates a molecular diagnostic technique in the clinical staging.