Relationship between carbachol hyperstimulation-induced pancreatic acinar cellular injury and trypsinogen or NF-κB activation in ratsin vitro

Summary The relationship between M3 cholinergic receptor agonist (carbachol) hyperstimulation-induced pancreatic acinar cellular injury and trypsinogen activation or NF-κB activation in rats was studiedin vitro. Rat pancreatic acinar cells were isolated, cultured and treated with carbachol, the active protease inhibitor (pefabloc), and NF-κB inhibitor (PDTC)in vitro. Intracellular trypsin activity was measured by using a fluorogenic substrate. The cellular injury was evaluated by measuring the leakage of LDH from pancreatic acinar cells. The results showed that as compared with control group, 10⁻³ mol/L carbachol induced a significant increase of the intracellular trypsin activity and the leakage of LDH from pancreatic acinar cells. Pretreatment with 2 mmol/L pefabloc could significantly decrease the activity of trypsin and the leakage of LDH from pancreatic acinar cells (P<0.01) following the treatment with a high concentration of carbachol (10⁻³ mol/L)in vitro. The addition of 10⁻² mol/L PDTC didn't result in a significant decrease in the activity of trypsin and the leakage of LDH from pancreatic acinar cells treated with a high concentration of carbachol (10⁻³ mol/L)in vitro (P>0.05). It was concluded that intracellular trypsinogen activation is likely involved in pancreatic acinar cellular injury induced by carbachol hyperstimulationin vitro. NF-κB activation may not be involved in pancreatic acinar cellular injury induced by carbachol hyperstimulationin vitro. Zheng Hai, male, born in 1972, Doctor in Charge, M. D., Ph.D.     

生长抑素及其功能性受体表达与胰腺腺泡细胞外分泌的关系

目的 探讨SD大鼠胰腺腺泡细胞上的生长抑素受体(SSTR)各亚型的分布及生长抑素具体与哪种亚型的SSTR结合发挥作用.方法 急性分离大鼠胰腺腺泡细胞,取得胰腺腺泡细胞悬液.用Trizol法提取各时间段胰腺腺泡细胞的mRNA并在PCR扩增仪上得到产物,使用Labimage图像分析系统对电泳结果 进行量化分析.结果 SSTR1～5在SD大鼠胰腺腺泡细胞上有表达,其表达分别为0.980±0.085;0.766±0.064;0.850±0.078;0;2.010±0.225.生长抑素作用15、30 min后SSTR1～5的表达分别为0.908±0.059;1.142±0.078;0.798±0.030;0;1.852±0.132和0.891±0.049;1.347±0.063;0.764±0.071;0;1.791±0.102.SSTR2表达较对照组明显增高(P＜0.05).结论 SD大鼠胰腺腺泡细胞上存在SSTR1～3、5亚型.生长抑素与SSTR2受体结合后,发挥其抑制胰腺腺泡细胞外分泌的作用.     

阿尔茨海默病大鼠海马组织PI3K—AKt—caspase-9相关蛋白的表达

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-Kinase,PDK）-蛋白激酶B（v-akt routine thymoma viral oncogenehomolog,AKt）-半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9（caspase-9）相关蛋白在阿尔茨海默病大鼠海马表达的动态变化。方法24只SD大鼠随机分为2组：模型组（腹腔注射D-半乳糖60mg／kg）和假手术组,焦油紫染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL法）检测其海马区细胞形态学变化、神经元凋亡;免疫组织化学染色检测p—PI3K、p-AKt和caspase-9P35的表达水平。结果和假手术组相比,模型组大鼠海马区锥体细胞层损伤严重,可见到较多TUNEL阳性神经元;p—P13K和p—AKt的活性明显降低,caspase-9P35的表达明显增加。结论阿尔茨海默病大鼠存在海马区细胞凋亡及P13K—AKt—caspase-9信号转导通路的改变。     

趋化因子Fractalkine通过调控IL-6/STAT3信号通路对人胰腺癌细胞株增殖和侵袭的影响研究

目的 探讨趋化因子Fractalkine(FKN)通过调控白细胞介素(IL)-6/信号传导与转录激活因子(STAT)3信号通路对人胰腺癌细胞株PANC-1和SW-1990增殖、侵袭的影响.方法 以腺病毒为载体构建、合成FKN-小干扰RNA(siRNA)并转染PANC-1和SW-1990.应用CCK-8法和Transwell检测细胞增殖和侵袭力,蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测FKN、IL-6和STAT3蛋白及mRNA的表达.结果 转染FKN-siRNA 24 h时,PANC-1及SW-1990各组细胞吸光度值(A值)无明显变化,在48 h和72 h时,FKN-siRNA组A值明显高于对照组和FKN-siRNA阴性组(P＜0.05).转染FKN-siRNA后,PANC-1及SW-1990 FKN-siRNA组细胞侵袭力明显强于对照组和FKN-siRNA阴性组(P＜0.05).PANC-1及SW-1990转染FKN-siRNA后,与对照组和FKN-siRNA阴性组相比较,FKN-siRNA组细胞FKN蛋白和mRNA的表达明显减少(P＜0.05),IL-6与STAT3蛋白和mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论 趋化因子FKN可能通过IL-6/STAT3信号通路对胰腺癌细胞生物学活性发挥了抑制作用.     

中国人HNPCC家系的临床特征及M3胆碱能受体基因(A)8区突变检测

目的:分析中国人遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC)家系的临床特征并检测这些家系中M3胆碱能受体基因(A)8区的突变情况.方法:根据2003年4月杭州会议制定的中国人HNPCC家系标准收集HNPCC家系共15个,分析其临床特征;提取先证者的外周血基因组DNA,PCR扩增M3胆碱能受体基因第8外显子中一段长153 bp,包含有微卫星位点(A)8的基因片段,直接进行DNA测序.结果:15个家系共有恶性肿瘤患者55例,其中大肠癌患者41例,平均每个家系发生大肠癌2.73例,73%的大肠癌患者发病年龄<50岁,51%的病灶位于近端结肠,40%发生在直肠肛门,同时和异时多原发大肠癌总发生率为12%,2/3的家系属于Lynch Ⅱ型,共发生肠外恶性肿瘤14例(18个),其中胃癌最常见.15例先证者外周血中无1例检测到M3胆碱能受体基因(A)8区的突变.结论:M3胆碱能受体基因与中国人群中HPNCC的发病可能无密切关系.中国人HNPCC家系标准应在临床工作中推广应用,并进一步验证其合理性和科学性.     

整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响

目的 :探讨整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响。方法 :采用DNA序列分析、流式细胞术、RT PCR和Westernblotting等检测细胞中转染cDNA的存在、表达及细胞结合PAC 1、纤维蛋白原 (fibrinogen ,Fb)的能力。结果 :血小板无力症 (GT)患者整合素αⅡbβ3明显低下 ,且血小板在ADP激活后不能结合PAC 1,转染β3和αⅡb(突变αⅡbR995A 或正常αⅡb)cDNA的CHO细胞株分别表达αⅡbR995A β3和αⅡbβ3,并且突变株中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovary ,CHO)细胞αⅡb基因 30外显子上第 30 77和 30 78位碱基由CG突变为GC ,导致第 995位精氨酸被替换为丙氨酸 ;在未活化的情况下 ,αⅡbβ3CHO细胞几乎不结合PAC 1,但能结合Fb ,而αⅡbR995Aβ3CHO细胞能结合PAC 1,且Fb明显增加。结论 :αⅡbR995A 突变能诱导血小板内到外信号传导 ,使αⅡbR995Aβ3表现为激活型受体 ;而GT患者却因整合素αⅡbβ3缺陷使αⅡbβ3介导的血小板由内到外信号传导受阻 ,使该GT患者表现出血小板聚集异常。     

人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的鉴定及相关胞内信号转导通路的研究

目的:鉴定人肝细胞癌Huh7细胞中EP3受体不同亚型的类型及其介导的细胞内信号转导途径,探讨EP3对人肝0细胞癌发生发展的影响及相关分子机制.方法:用RT-PCR实验检测Huh7细胞中EP3亚型的类型,给予EP3受体激动剂 sul-prostone 处理后,用WST-8法检测细胞的增殖活性,用酶联免疫法测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度的变化,用Western blot-ting法检测Akt、Erk等蛋白磷酸化水平的变化.结果:RT-PCR 结果显示人肝细胞癌Huh7细胞中表达的EP3剪接体类型是EP3(5);WST-8实验结果显示,经 10.0 μmol/L EP3受体激动剂sulprostone作用24 h后,细胞增殖率增加 46.2%;酶联免疫法显示sulprostone 可促使细胞内cAMP浓度显著增高;Western blotting 实验显示,sulprostone作用30 min可使 Huh7 细胞中Akt蛋白磷酸化水平增加27%,而Erk蛋白磷酸化水平降低 16.4%.结论:人肝细胞癌 Huh7 细胞中,表达的EP3亚型类型是EP3(S),EP3受体激动剂sulprostone可以促进Huh7细胞的增殖.通过EP3受体的介导促进胞内cAMP表达水平的增加,其机制可能部分涉及到Akt及Erk信号转导通路.     

生长抑素对瘦素诱导肝星状细胞的活化增殖、PTP1 B表达及JAK2-STAT3通路的影响

目的研究生长抑素对瘦素诱导大鼠肝星状细胞(HSC)的活化增殖、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表达及JAK2-STAT3通路的影响,探讨生长抑素抗肝纤维化的相关机制。方法以重组大鼠瘦素作用于HSC-T6细胞(100 ng/ml),同时加入各浓度的生长抑素(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L)。在处理24 h后,采用CCK-8法检测HSC增殖的变化,免疫细胞化学检测 p-JAK2及 p-STAT3蛋白表达, RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和 PTP1B 的mRNA表达。结果 CCK-8法显示生长抑素可通过剂量依赖方式抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖( P<0.05);免疫细胞化学检测显示,生长抑素组HSC-T6细胞质p-JAK2及细胞核内 p-STAT3蛋白表达明显低于瘦素对照组( P <0.05);RT-PCR法检测生长抑素干预组 HSC α-SMA mRNA的表达较瘦素对照组及空白对照组明显降低(P<0.05),而PTP1B的mRNA表达量升高(P<0.05)。结论生长抑素能上调PTP1B的表达,阻断瘦素在HSC内 JAK2-STAT3信号通路的转导,并且抑制瘦素诱导HSC的活化与增殖。     

Dual Effect of 3, 4-Dihydroxyacetophenone on LPS-induced Apoptosis in RAW264.7 Cells by Modulating the Production of TNF-α

To explore the pharmacological effect of 3,4-dihydroxyacetophenone (DHAP) on the apoptosis of RAW264. 7 macrophage cells and the mechanism, RAW264. 7 macrophage cells were treated with 100 or 500 mg/L lipopolysaccharide (LPS), with or without 10^-5 mol/L DHAP for 24 h. Trypan blue dye exclusion assay was used to assess cell viability. Cell apoptosis was morphological studied and flow cytometric assay was used. Tumor necrosis factor-α (TNF-α) level was measured by ELISA methods. IκB protein was determined by Western blotting. Our results showed that in 100 mg/L LPS stimulated macrophages, DHAP enhanced the cell apoptosis while in 500 mg/L LPS-stimulated macrophages, DHAP significantly inhibited the cell apoptosis. In both groups, DHAP increased the level of IκB but decreased the level of TNF-α. It is concluded that DHAP has dual effect on the apoptosis of RAW 264.7 cells treated with different concentrations of LPS. This effect may be due to the inhibition of activation of NF-κB and autocrine production of TNFα. Our study suggests that DHAP may have anti-inflammatory effect on LPS-activated macrophages.     

辛伐他汀对K562细胞PI3K-AKT信号通路分子变化影响的体内外比较

目的通过检测辛伐他汀体外对K562细胞和裸鼠慢性粒细胞白血病组织(CML)K562细胞的影响,同时分别检测辛伐他汀处理后K562细胞PI3K-AKT信号通路中mRNA水平的变化,比较辛伐他汀在体内外所引起PI3K-AKT信号通路的分子变化,以分析辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制。方法体外培养CML细胞株K562细胞,MTT噻唑蓝法检测细胞增殖抑制率。流式细胞术检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化。另外,12只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下接种K562细胞,构建Balb/c-nu/nu裸小鼠的慢性粒细胞白血病动物模型,采用缺口末端标记技术TUNEL(TdT-medi-ated dUTP nick end labe ling)法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化,用RT-PCR检测辛伐他汀在体内外K562细胞后N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的N-ras、PI3K、AKT1、IKK-β、NF-κB1mRNA水平的变化。结果辛伐他汀在体外能抑制K562细胞的增殖,使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,PI3K-AKT信号通路大多数基因出现差异表达。不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P=0.000);不同剂量的辛伐他汀能够引起PI3K、AKT1、NF-κB、IKK-β mRNA的明显差异表达(P=0.000,P=0.003)。但体外实验中的PI3K-AKT信号PI3K、AKT1mRNA水平的变化与体外实验PI3K、AKT1mRNA水平的变化呈现相反的差异表达。结论辛伐他汀体外能够引起参与K562细胞凋亡的N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的基因mR-NA水平的变化,从一定角度说明辛伐他汀能依赖PI3K-AKT信号通路诱导K562细胞及其移植瘤细胞凋亡。但体内外实验存在不同的凋亡诱导机制。     

miRNA-10a对小鼠肝纤维化细胞增殖及TGFβ1/Smads信号转导通路表达的影响

目的 通过观察肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)小鼠肝组织TGFβ1/Smads信号转导通路的表达与HF进展的关系,探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-10a对于HF的作用机制.方法 选用9周龄健康雄性小鼠(C57 BL6/J) 40只,按照数字表法随机分为对照组和HF模型组(观察组),对照组生理盐水5μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周;观察组10％ CCL4橄榄油5 μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周,制作小鼠HF模型.RT-PCR法检测HF细胞中miRNA-10a表达后,将观察组HF细胞进行培养及miRNA-10a模拟物转染(转染组),CCK-8法检测HF细胞增殖能力,Western blotting检测HF细胞中TGFβ1、Smad7的表达水平.结果 与对照组比较,观察组miRNA-10a表达水平明显增加(P＜0.05);与对照组比较,转染组肝细胞miRNA-10a表达水平明显降低(P＜0.05);与对照组相比,低表达miRNA-10a明显降低观察组TGFβ1的表达水平,提高Smad7的表达水平(均P＜0.05).结论 小鼠HF细胞中低表达miRNA-10a,转染miRNA-10a模拟物可明显促进小鼠HF细胞增殖,其作用机制是通过miRNA-10a调控TGFβ1/Smads信号转导通路促进小鼠HF.     

维生素D3对实验性自身免疫性甲状腺炎Th1/Th2细胞平衡和MCP-1/CCR2信号的影响

目的:探讨维生素D3对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠炎症、辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(helper T cell 1/helper T cell 2,Th1/Th2)及单核细胞趋化蛋白1/细胞表面趋化因子受体2(monocyte chemoattractant protein-1/cell surface chemokine receptor 2,MCP-1/CCR2)信号的影响.方法:将Lewis大鼠按随机数字表法分为对照组(n=10)、模型组(n=15)和治疗组(n=15),采用免疫猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin,pTG)诱导建立实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)大鼠模型,治疗组按照每只5 mg/kg的剂量腹腔注射1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3],隔天1次,共用4周,其余2组均给予等体积生理盐水.采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin stain,HE)染色观察大鼠甲状腺组织形态学变化;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测血清中促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、自身抗体抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroid peroxidase antibody,TPOAb)及细胞因子干扰素-γ(interferon,IFN-γy)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、白细胞介素-4 (interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10 (inter-leukin-10,IL-10),逐步线性回归分析TSH与自身抗体、细胞因子的关系;免疫组织化学检测甲状腺组织中的NF-κB p65;Western blot检测甲状腺组织中MCP-1/CCR2信号轴.结果:模型组甲状腺滤泡结构破坏、炎性细胞浸润,治疗组甲状腺病理变化明显改善并趋向于对照组.治疗组TSH、TGAb、TPOAb水平与模型组相比均明显降低(t=4.000、2.603、5.279,P=0.000、0.015、0.000),但仍明显高于对照组(t=2.400、2.216、7.392,P=0.025、0.037、0.000).与模型组相比,治疗组IL-4、IL-10水平明显升高(t=3.522、2.432,P=0.001、0.022),IFN-γ、IL-12水平及IFN-γ/IL-4、IL-12/IL-10比值明显降低(t=2.940、4.700、5.416、8.178,P=0.007、0.000、0.000、0.000),均趋向于对照组水平.逐步回归分析结果显示,TSH与TGAb、TPOAb、IFN-γ、IL-12均呈正相关,与IL-4和IL-10呈负相关(r=0.872、0.868、0.731、0.706、-0.557、-0.236,均P＜0.001),其中TGAb、TPOAb和IL-12对TSH的影响最明显.与模型组比较,治疗组大鼠甲状腺组织中的NF-κB p65、MCP-1及CCR2水平均下降,差异具有统计学意义(t=2.432、2.267、5.143,P=0.000、0.031、0.000).结论:维生素D3可能是通过抑制NF-κB通路以下调Th1型细胞因子、上调Th2型细胞因子进而降低Th1/Th2比值,还可能是通过抑制MCP-1/CCR2信号轴,最终减轻EAT大鼠甲状腺炎,改善甲状腺功能,抑制甲状腺抗体生成,保护甲状腺.     

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的 探究N-myc下游调节基因（NDRG1）对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、pcDNANC组（细胞转染pcDNA-NC）、pcDNA-NDRG1组（细胞转染pcDNA-NDRG1）、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶（PI3K）通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原（PCNA）、E-钙黏附蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果 与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3...     

The Expression of Endothelin Receptor B in Melanoma Cells A375 and Sk-mel-1 and the Proliferative Effects of Endothelin 3 on A375 Cells

In order to investigate the expression of endothelin receptor B （ETR-B） in human malignant melanoma （MM） cells A375 and SK-mel-1 and the proliferative effects of endothelin 3 （ET3） on A375 cells, RT-PCR was applied to detect the expression of ETR-B gene in human MM cells A375 and SK-mel-1. MTT method was used to evaluate the growth enhancing effects of ET3 on A375 cell line in vitro. The results showed that ETR-B gene was expressed in both MM A375 and SK-mel-1 cells. ET3 had stronger ability to enhance the proliferation of A375 cells in vitro in a concentration-dependent manner. It was suggested that ET3/ETR-B might play an important proliferative role in MM.     

Notch1和Notch2对胰腺癌HPAC细胞中Hes家族靶基因的不同调控作用

目的研究Notch1、Notch2受体对胰腺癌HPAC细胞Notch信号通路下游Hes家族靶基因的影响。方法运用siRNA干扰技术分别干扰HPAC细胞中Notch1和Notch2基因,用Western blotting法检测Notch1和Notch2的干扰效率,用real-time PCR检测siRNA干扰后Notch下游靶基因Hes1、Hes2、Hes4和Hes6的mRNA表达水平;同时用Western blotting法检测Hes1的蛋白表达变化。结果与空白对照组(1.000±0.019)和siRNA对照组(0.908±0.039)相比,Notch1-siRNA转染组(0.124±0.005)的Notch1蛋白表达量显著降低。Notch1敲减降低了Hes1和Hes6的mRNA表达,Hes1与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Hes6与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),对Hes2和Hes4的mRNA则没有影响。Hes2与空白对照组siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes4与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组(1.000±0.015)和siRNA对照组(0.990±0.017)相比Notch2-siRNA转染组(0.350±0.009)的Notch2蛋白表达量显著降低。Notch2敲减降低了Hes1的mRNA表达,Hes1与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而对Hes2、Hes4和Hes6的表达没有影响,Hes2与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes4与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes6与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Notch1和Notch2下调均不能引起Hes1蛋白水平变化。结论 HPAC细胞中Notch1的靶基因是Hes1和Hes6,而Notch2的靶基因是Hes1,提示不同Notch家族成员调控的靶基因有交叉但是不同。     

高糖诱导人THP1细胞Toll样受体4信号通路变化及匹伐他汀的拮抗作用

目的探讨高糖刺激下人单核/巨噬细胞系（Thp1）细胞表面Toll样受体4（TLR4）表达和信号通路活性变化,并探讨匹伐他汀对高糖引起该信号通路表达变化的作用及可能的机制。方法体外培养Thp1细胞,分为对照组（0mmol·L~（-1）葡萄糖）、低葡萄糖浓度组（5.5mmol·L~（-1）葡萄糖）、高葡萄糖浓度组（15、25 mmol·L~（-1）葡萄糖）、高糖（15mmol·L~（-1）葡萄糖）＋匹伐他汀组（0.01、0.1、1μmol·L~（-1）匹伐他汀）,各组细胞干预24 h后,Real-TimePCR方法检测各组细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞TLR4、Myd88蛋白表达水平。结果随着葡萄糖浓度从5.5mmol·L~（-1）升高到25 mmol·L~（-1）,Thp1细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达及TLR4、Myd88蛋白水平逐渐增加。Thp1细胞在高糖刺激前给予匹伐他汀预孵1 h,TLR4、MCP1、IL6基因水平及TLR4、Myd88蛋白水平随匹伐他汀浓度的增加逐渐下降。结论高糖能剌激人Thp1细胞TLR4信号通路激活,呈剂量依赖性诱导TLR4、IL6、MCP1表达升高,且高糖激活的信号通路可能为Myd88依赖途径;匹伐他汀可以拮抗高糖诱导的TLR4信号通路激活,抑制炎症反应的放大。     

白细胞介素22经信号转导和转录激活因子3通路对人脐静脉内皮细胞苏氨酸495磷酸化及小鼠内皮功能和血压的影响

目的 探讨白细胞介素22(IL-22)经信号转导和转录激活因子3(Stat3)通路对人脐静脉内皮细胞苏氨酸495(thr495)磷酸化及小鼠内皮功能和血压的影响,为治疗高血压提供新的思路.方法 随机将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分成6组,分别为二甲基亚砜溶剂处理组(对照组),重组人IL-22组,S31-201组,S31-201+IL-22组,Go6976组,Go6976+IL-22组,各组经相应处理后检测Stat3通路活化状态和一氧化氮合酶(eNOS)抑制性位点thr495磷酸化的表达.32只C57BL/6小鼠随机分成4组,均经腹腔注射给药,第一组给予磷酸盐缓冲液(PBS)(对照组),第二组给予15μg/kg IL-22(模型组),第三组给予15μg/kg IL-22+二甲基亚砜溶剂(S31-201对照组),第四组给予15μg/kg IL-22+5 mg/kg S31-201(S31-201模型组).处理14 d后测量尾动脉收缩压、主动脉NO表达、Stat3通路活化状态和thr495磷酸化的表达.结果 HUVECs经过重组人IL-22处理后可以引起Stat3通路活化及eNOS thr495磷酸化增多,这种作用可以被Stat3通路阻断剂S31-201阻断(P<0.05),但蛋白激酶C(PKC)阻断剂Go6976对其没有影响(P>0.05).IL-22组小鼠较对照组收缩压显著升高,主动脉Stat3通路活化及eNOS thr495磷酸化增多,NO的表达下降,这些作用均可被S31-201阻断(均P<0.05).结论 IL-22可以通过激活Stat3通路引起内皮功能障碍和高血压.抑制IL-22的生成或Stat3通路的激活是一个预防或治疗高血压的方法.     

比较电针"合谷""足三里"穴对IBS模型大鼠结肠动力及结肠M3受体表达的影响

目的观察并比较电针"合谷""足三里"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠动力及结肠M_3受体免疫反应物阳性表达的影响,初步探讨电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS的效应差异及结肠动力改变的相关机制。方法选取新生wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、模型对照组、合谷组和足三里组。除空白对照组外,均采用新生期母婴分离、醋酸灌肠及结直肠扩张刺激(CRD)的方法联合制备IBS大鼠模型。大鼠9周龄时,合谷组和足三里组分别给予电针(EA)干预,隔日1次,共5次。空白对照组及模型对照组不予干预。治疗结束后,按照Bristol大便分类法观察电针前后IBS大鼠的便型,采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行肠道敏感性及平滑肌收缩强度评估,观察潜伏期、收缩波个数、起始波压力值;采用免疫组织化学法检测结肠M_3受体的表达。结果与针前相比,针后合谷组及足三里组大鼠的大便评分显著降低(P0.01)。与空白对照组相比,模型对照组大鼠的大便评分显著增高(P0.01),潜伏期明显缩短(P0.01),收缩波个数明显增多(P0.01),起始波压力值明显降低(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平明显增强(P0.01);合谷组结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平增强(P0.05)。与模型对照组相比,合谷组和足三里组大鼠针后的大便评分均显著降低(P0.01),潜伏期均明显延长(P0.01),合谷组和足三里组收缩波个数明显减少(P0.01,P0.05),起始波压力值均明显增高(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平明显下降(P0.01)。与合谷组相比,足三里组大鼠的大便评分降低(P0.05),起始波压力值显著降低(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平下降(P0.05)。结论电针"合谷""足三里"穴均可抑制IBS模型大鼠肠道收缩,改善肠道敏感性,缓解IBS症状。但"合谷"穴缓解腹痛效果更佳,而"足三里"穴减轻腹泻作用更强。说明电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS疗效具有经穴效应特异性。