小鼠肝癌 H-22 细胞膜相关抗原肽提取物的抑瘤作用及其免疫机制的研究

目的应用小鼠肝癌 H-22 细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物免疫小鼠,观察其对小鼠自身移植肿瘤生长及免疫学参数的影响,为制备肿瘤疫苗提供实验依据.方法采用微酸洗脱法制备相对分子质量≤3×103的细胞膜 TAP 提取物,皮下免疫小鼠,检测胸腺细胞周期时相和T细胞亚组百分数的变化;并检测脾细胞 Con A 反应性、IL-2 和 IFN-γ分泌活性、CTL 杀伤活性的变化,以及脾脏 T 细胞 CD3、CD69 和 TCR 的表达和抑瘤效应.结果TAP 提取物免疫后,移植肿瘤的发生率降低,平均出现时间延迟,生长速度减慢;同时,脾细胞 CD69表达增加,Con A 反应性、IFN-γ和 IL-2 分泌活性和 CTL 杀伤活性不同程度增强;胸腺细胞 CD3 表达显著增高、CD+4 和 CD+8 T 细胞百分数也不同程度增高.结论小鼠肝癌 H-22 细胞膜 TAP 提取物具有免疫原性,能有效激发免疫系统功能,抑制自身移植肿瘤的生长.     

川楝素对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:建立荷瘤小鼠模型,探讨川楝素对肝癌的抑瘤作用及其机制.方法:建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,随机分为0.9%氯化钠溶液对照组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组(20 mg/kg)、川楝素低剂量组(0.173 mg/kg)和川楝素高剂量组(0.690 mg/kg)共4组.各组药物处理后,测量小鼠体内肿瘤大小,观察肿瘤的生长曲线;剥瘤后称重,计算小鼠的肿瘤抑制率;行肿瘤组织病理形态学及HE染色观察,透射电子显微镜观察其超微结构改变;同时,观察川楝素对荷瘤小鼠心、肝、脾、肾、胸腺及睾丸组织的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织内Bcl-2、Bax和Fas蛋白的表达.结果:川楝素可显著抑制小鼠体内肿瘤的生长,川楝素低剂量组(0.173 mg/kg)和高剂量组(0.690 mg/kg)的抑瘤率分别为66.23%和87.01%(P＜0.05);透射电子显微镜观察可见肿瘤组织超微结构中出现凋亡小体;HE染色显示小鼠心、肝、脾、肾及睾丸脏器形态正常,而胸腺组织中可见胸腺小叶的数量及面积减少甚至消失;免疫组织化学检测证实,小鼠肿瘤组织内Bcl-2蛋白表达下调,Bax和Fas蛋白表达上调(P＜0.05).结论:川楝素能够明显抑制小鼠移植瘤的生长,此作用可能与抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡有关.     

瘤内局部注射重组人血管内皮抑制素对小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的研究

目的探讨瘤内直接注射重组人血管内皮抑制素（恩度）联合腹腔注射顺铂对Lewis肺癌的抑制效果。方法成功建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。按体质量将小鼠随机分为生理盐水组、顺铂组、瘤内注射恩度组、顺铂联合腹腔注射恩度组、顺铂联合瘤内注射恩度组5组。治疗后处死小鼠,计算肿瘤体积抑瘤率,用免疫组织化学法测定各组小鼠肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果顺铂组、瘤内注射恩度组、顺铂联合腹腔注射恩度组、顺铂联合瘤内注射恩度组的抑瘤率分别为61.8%、24.9%、70.3%、74.3%。免疫组织化学结果显示,顺铂联合瘤内注射恩度组的VEGF表达及MVD计数在各实验组中均最低,与顺铂联合腹腔注射恩度组比较两者差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论经皮穿刺瘤内注射恩度联合顺铂有协同抗肿瘤作用,能有效抑制肺癌的生长及转移,并且相同剂量的恩度,肿瘤内局部注射效果优于腹腔注射。     

化学诱导小鼠肝癌模型中CD133的动态变化

目的:检测肝癌干细胞标志CD133在化学诱导C57BL/6J小鼠肝癌过程中各时期的动态变化.方法:通过化学法[二乙基亚硝胺(diethylnirtosamine,DEN)/四氯化碳(carbon tetrachloride,CC14)/乙醇]诱发50只C57BL/6J雄性小鼠肝癌,对照组为45只正常C57BL/6J雄性小鼠.观察小鼠成瘤情况和生长状态,对每2周定期处死小鼠获得的组织标本分别进行病理学切片观察,并采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学法、蛋白质印迹法和FCM法分别检测CD133 mRNA和蛋白的表达情况.结果:化学诱导20周后,成功诱发出小鼠肝癌.实时荧光定量PCR和FCM检测结果显示,第8周后诱癌组小鼠肝组织中CD133的表达高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.001);随着诱癌时间的增加,CD133的表达量呈上升趋势,第16周时诱癌组CD133的表达明显高于前期诱癌组(P＜0.001).蛋白质印迹法检测结果显示,诱癌组CD133蛋白从第4周起出现弱表达,随着诱癌时间的递增,CD133蛋白表达量逐渐增多.免疫组织化学检测结果显示,诱癌组第8周CD133出现弱阳性,第16周出现中等阳性,第20周出现强阳性;而正常对照组无表达.结论:肝癌干细胞标志CD133参与了肝癌的发生、发展全过程,随着诱癌进展其表达量逐渐增加.     

PRX2和AKRIBl0在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义

目的：探讨PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义。方法90只C57BL/6J雄性小鼠随机分为实验组（60只）和正常对照组（30只）,用DEN/CCl4/乙醇诱发小鼠肝癌。于第4周、第8周、第12周、第16周和第20周5个时点处死小鼠,观察其肝脏病理组织的改变,应用实时荧光定量PCR法、免疫组化SP法分别检测小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA及蛋白质的表达水平。结果①实验诱发小鼠肝癌过程中的第4周见肝细胞肿胀,炎细胞浸润,肝脏呈炎症病变;第8周见肝组织炎症病变加重,出现纤维组织增生及肝细胞再生;第12周见肝组织呈不典型增生;第16周有典型假小叶形成;第20周可见典型的小鼠肝癌病理改变。②化学诱癌的第4周至第20周实验组小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA和蛋白质的表达均高于正常对照组（P〈0.05）,且两者的表达水平随着时间的延长,均呈逐步升高的趋势;至第20周肝癌形成时,实验组两者的表达均显著高于癌前各时间点（P〈0.05）。③在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中,PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA的表达水平呈正相关（r=0.674,P=0.05）。结论在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中PRX2和AKR1B10的高表达是化学诱发小鼠肝癌形成的早期事件,PRX2和AKR1B10可能在化学诱发小鼠肝癌的发生、发展和促进过程中起重要作用。     

表达sFlt-1的小鼠骨髓间充质干细胞介导的抗肿瘤作用研究

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的一种具有多向分化潜能和很强增殖能力的细胞.经静脉输注的MSCs能特异性地聚集于新生组织,如伤口和肿瘤等,本实验将MSCs作为基因治疗靶向载体,研究其在肿瘤组织内的抗血管作用.方法从雄性小鼠股骨骨髓中分离和培养MSCs,用流式细胞仪检测CD34、CD29、CD44的表达.再用sFlt-1(VEGF-R1)重组腺病毒感染后,给荷瘤小鼠静脉注射.结果间充质干细胞聚集在肿瘤内表达sFlt-1,使得肿瘤血管生成受抑制、肿瘤细胞凋亡增加、肺转移灶减小、生存时间延长.结论本研究表明,MSCs作为基因的运载工具在抗肿瘤领域可能有一定的应用价值.     

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 观察五倍子酸(trihydroxybenzoic acid,TBA)对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法 建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,每组10只,TBA高、中、低剂量组TBA溶液0.50g/kg、0.25g/kg、0.13g/kg灌胃给药;对照组0.5%羧甲基纤维素钠溶液0.2mL/10g灌胃给药;阳性对照组CTX 20mg/kg腹腔注射,每天固定时间给药一次,连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重,计算抑瘤率,HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果 TBA 0.50g/kg、0.25g/kg和0.13g/kg组小鼠平均瘤重不同程度下降,其中TBA 0.25g/kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TBA三组抑瘤率分别为24.83%、45.52%和15.86%。结论 TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。     

雪灵芝提取物对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探讨雪灵芝水提物（arenaria kansuensis aqueous extract, AKAE）对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,将小鼠随机分为5组：对照组、环磷酰胺组、AKAE高、中、低剂量组,各组连续给药10 d。断头处死小鼠,称重胸腺和脾脏并计算胸腺、脾脏指数;MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性及CTL细胞杀伤活性;采用双抗体夹心ELISA法检测H22荷瘤小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。结果 AKAE处理各组小鼠后,AKAE高、中、低剂量组胸腺指数分别为（21.39±14.3）mg/g、（17.52±7.7）mg/g、（30.57±10.2）mg/g;脾脏指数分别为（38.34±12.7）mg/g、（50.38±29.2）mg/g、（61.63±35.2）mg/g,各剂量组与环磷酰胺组比较具有显著差异,AKAE低剂量组与对照组比较差异具有统计学意义（P＝0.013）;AKAE高剂量组脾淋巴细胞增殖刺激指数（SI）与AKAE低剂量组比较差异具有统计学意义（P＝0.019）,而各组CTL杀伤活性无明显差异;AKAE高剂量组IL-2水平较对照组有所升高,而AKAE低剂量组IFN-γ水平明显升高（P＝0.015）。结论 AKAE可以促进H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Th1型细胞因子的表达。     

卡托普利对小鼠在肺部照射后TGF-β1、TNF-α水平的影响

目的：探讨卡托普利在小鼠放射性肺损伤中对血清转化生长因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的干预影响。方法：雄性C57／BL小鼠，设对照组、右肺单次照射10Gy组、右肺单次照射10Gy＋卡托普利组，于照射后36h、7d、15d、30d采集血液标本，ELISA法测血清中TGF-β1及TNF-α；同期取右肺组织以HE染色制成病理学标本。结果：10Gy照射组在照射后不同时段血清中TGF-β1水平及TNF-α水平均较对照组升高；而单次照射10Gy＋卡托普利组则表现为在不同时段均较对照组水平降低。析因分析结果为时间因素间、处理因素间、交互作用间均有统计学差异（P〈0．05）。病理结果显示10Gy照射组出现进行性加重的炎症改变，而单次照射10Gy＋卡托普利组则与对照组比较无明显区别。结论：卡托普利可以减低小鼠肺照射时TGF-β1、TNF-α等细胞因子浓度，并抑制放射性肺损伤的发生。     

Modifying effect of diallyl sulfide on colon carcinogenesis in C57BL/6J-ApcMin/? mice

Diallyl sulfide (DAS), a flavoring compound derived from garlic, is considered to have cancerchemopreventive potential in experimental animals and humans. This study was designated to examinepossible chemopreventive effects of DAS on colon carcinogenesis using genetically engineered transgenicApcMin/+ mice, a well-established animal model for familial adenomatous polyposis (FAP) and sporadiccolorectal cancer. Male C57BL/6J-ApcMin/+ mice were divided into three groups. Animals of group 1 wereplaced on the basal diet (AIN-76A) as non-treated controls. Animals of groups 2 and 3 were given DAScontainingdiets (in doses of 100 and 300 ppm, respectively). All mice were sacrificed at the end of week10 of the experiment. Histopathological investigation revealed that the incidence of colonic polyps wasdecreased dose-dependently by 19% (13/16) in group 2 and by 32% (13/20) in group 3 compared to the100% incidence (10/10) in group 1. The multiplicity of colonic polyps per mouse was also slightly decreasedby DAS treatment (1.88±0.35 in group 2 and 1.63±0.36 in group 3) compared to 2.00±0.39 in group 1. Onthe other hand, there were no significant differences in the numbers of total polyps per mouse in the smallintestine between the groups. Taken together, we suggest that DAS may exert promising inhibitory effectson colon carcinogenesis in the transgenic ApcMin/+ mice.     

shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞小鼠皮下移植瘤的影响

目的 早期恶性黑色素瘤可以通过手术切除的方式得到缓解,发生转移的黑色素瘤由于其耐药性,预后较差.为探索治疗黑色素瘤的新方法,本研究探讨由慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对黑色素瘤细胞B16-F1皮下移植瘤生长的影响.方法 于C57BL/6小鼠右侧腹股沟皮下注射B16-F1细胞建立移植瘤模型,采用癌灶多点注射的方法分为空白对照组、阴性对照组和实验组(n=5).阴性对照组,采用癌灶多点注射的方法将携带NC-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200,μL,隔日1次,共6次,观察18 d;空白对照组,用与阴性对照组相同的方式方法向瘤体注射PBS,观察18 d;实验组,采用癌灶多点注射的方法将携带CDK2-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200 μL,隔日1次,共6次,观察18d.观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,18 d后杀鼠取瘤称瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测肿瘤组织细胞中CDK2蛋白表达情况.结果 C57BL/6小鼠接种瘤细胞3d后均有肿瘤形成.治疗的第6天空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤体积分别为(48.7±8.4)、(50.0±8.9)和(31.4±8.7) mm3,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤生长速度明显降低,差异有统计学意义,F=8.879,P=0.004.空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤重量分别为(0.56±0.10)、(0.55±0.11)和(0.28±0.07)g,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤体质量明显降低,差异有统计学意义(F=13.659,P=0.001),实验组与空白对照组相比肿瘤生长抑制率为50.2％;空白对照组、阴性对照组和实验组的细胞凋亡指数分别为(7.73±1.08)％、(7.87±1.42)％和(32.27±3.62)％,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义,F=189.748,P＜0.001.实验组与空白对照组和阴性对照组相比,组织细胞中CDK2蛋白的表达显著降低,差异有统计学意义(F=293.346,P＜0.001),实验组相对于空白对照组CDK2蛋白表达的抑制率为50.4％.结论 重组慢病毒CDK2-shRNA沉默CDK2基因的表达能有效抑制B16-F1细胞移植瘤的生长,CDK2基因可能成为黑色素瘤基因治疗的有效靶点.     

利用组织芯片技术研究C57BL/6J和C3H/HeN小鼠放射性肺损伤进程差异及其机制

目的建立C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠放射性肺损伤进程相关组织芯片,并应用其研究FN、LN和a-SMA的表达变化及意义。方法采用20Gy60Coγ射线照射C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠复制动物模型,测定肺组织中羟脯氨酸含量,制备组织芯片,应用免疫组织化学(im-munohistochemistry,IHC)染色方法与图像分析技术定量检测纤连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和a-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-SMA)在放射性肺损伤进程中的表达变化。结果组织芯片制备成功,其HE和免疫组织化学染色结果与普通切片具有良好一致性。照射后1~6mC57BL/6J小鼠肺组织病变经历炎症期、增生期和纤维化期,胶原沉积增多,照后1~3mFN表达明显高于正常对照组,照后6m逐渐减少至正常,LN表达在照射后呈渐进性增加,a-SMA表达强于C3H/HeN小鼠;照射后1~6mC3H/HeN小鼠肺组织主要表现为间质性炎症改变,FN表达于照射后1~6m与正常对照组相比无明显变化,LN表达于照射后1~3m明显增强,6m逐渐减少。结论γ射线照...     

DHA复合物对鼠移植瘤细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响

目的研究DHA复合物的抗癌机理.方法用流式细胞术研究了DHA复合物对荷瘤鼠H22细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响.结果 (1)与阴性对照组相比,DHA复合物中、高剂量组G0-G1期H22癌细胞百分比明显增加(P<0.01);DHA复合物低、中、高剂量组G0-G1期T细胞百分比明显减小(P<0.01).(2)与阴性对照组相比, HA复合物低、中、高剂量组S期H22癌细胞百分比明显减小(P<0.01),S期T细胞百分比明显增加(P<0.01).(3)与阴性对照组相比, HA复合物中剂量组G2-M期H22癌细胞百分比显著减少(P<0.01),DHA复合物低、高剂量组G2-M期H22癌细胞以及DHA复合物低、中、高剂量组G2-M期T细胞百分比均显著升高(P<0.01).(4)与阴性对照组相比,DHA复合物低、中、高剂量组H22癌细胞增殖指数(PI)明显下降(P<0.01),T细胞增殖指数明显升高(P<0.01).(5)与阴性对照组相比,DHA复合物低、中、高剂量组H22癌细胞及DHA复合物中、高剂量组T细胞凋亡率明显升高(P<0.01).结论 DHA复合物可抑制H22癌细胞的增殖,促进T淋巴细胞增殖,同时DHA复合物还可促进H22细胞、T淋巴细胞凋亡.     

敲除SLC39A5基因对4-NQO诱发C57BL/6小鼠食管癌模型建立的影响

目的 探索敲除SLC39A5基因对4-NQO诱导的C57BL/6小鼠食管癌模型的影响。方法 选取10只C57BL/6野生型小鼠作为阴性对照组,饮用浓度为100 μg/ml的丙二醇空白溶液;选取140只野生型小鼠与80只SLC39A5基因敲除小鼠,采用饮水法摄入诱癌剂,即浓度为100 μg/ml的4-NQO（4-nitroquinoline 1-oxide）,实验时间为28周,实验结束后处死三组小鼠。结果 阴性对照组小鼠、野生型小鼠和SLC39A5基因敲除小鼠在实验结束时其存活率分别为100%、92.96%、91.25%;三组小鼠食管癌诱癌成功率分别为0、61.36%、28.77%,两实验组小鼠诱癌成功率差异有统计学意义（χ²=19.98, P<0.001）。结论 成功建立了C57BL/6小鼠及SLC39A5基因敲除小鼠的食管癌模型,同时验证了SLC39A5基因在食管癌发生发展中的促进作用。     

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。     

千金子甲醇提取物抗肿瘤作用的实验研究

 目的　观察千金子甲醇提取物体内、外抗肿瘤活性及其量效关系。方法　体外药效试验用MTT法 ,体内用小鼠移植性肿瘤 ,观察千金子甲醇提取物的抑瘤活性。结果　千金子甲醇提取物体外对人宫颈癌细胞 (Hela)、人红白血病细胞 (K562 )、人单核细胞性白血病细胞 (U93 7)、人急性淋巴细胞性白血病细胞 (HL60 )和人肝癌细胞 (HepG2 )的IC50 值分别为 15 .5 μg/ml、13.1μg/ml、10 .5 μg/ml、17.5 μg/ml、2 9 .6 μg/ml;体内对小鼠移植性肿瘤细胞株也显示出较显著抑制作用。 结论　千金子甲醇提取物体外对Hela、K562 、U93 7、HL60 、HepG2 有明显的细胞毒活性 ,体内对小鼠肉瘤 180 (S180 )和艾氏腹水癌 (EAC)也显示出较好的抑制作用     

Involvement of peritoneal macrophages and spleen stromal cells in X-irradiation-induced reticulum cell neoplasms in C57BL/6 mice

Some correlation was observed between the occurrence of FA-positive PE-MO and spleen stromal cells (removed from X-irradiated RCN-bearing old-adult B6 mice) and the generation of RCN. No significant correlation was found between the viral content of lymphoid organs from the same mice and the occurrence of RCN. The main viral particle detected in lymphoid organs from radiation-induced RCN-bearing mice was the xenotropic virus. Ecotropic viruses were detected in a few spleens and Payer patches from such mice. These ecotropic viruses showed very poor lymphomagenic activity and required 400R X-ray as a cofactor. No dualtropic viruses were detected. However, inoculation of ecotropic (SFA2) helper virus to X-irradiated old-adult B6 mice, resulted in an efficient rescue of lymphomagenic viruses, enriched with phenotypically mixed, dualtropic viruses. Some of these DT viral preparations were cloned and seemed to consist mainly of xenotropic sequences. Thus, inoculation of helper viruses influenced the generation and selection of DT viruses. Such viral preparations, enriched with DT viruses, had a better lymphomagenic activity compared to endogenous ecotropic viruses, isolated from radiation-induced RCN-bearing mice. Indirect evidence suggested the involvement of a defective (xenotropic and possibly adjacent cellular genes) particle in lymphoma induction. To conclude, a possible mechanism for the development of radiation-induced RCN is suggested, emphasizing the role of MO in such a process.